不同方法制备鸡胚成纤维细胞的比较试验

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以细胞贴壁和生长状况来看， 三种方法略有
差别， 是否与细胞悬液中活细胞的浓度和肝细胞 有关系， 需待进一步研究证实。
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从三种方法的生产工序来看， 一般实验室或
规模化生产厂均可实现， 不需添加任何设备和条 件。此试验仅供各厂根据自己实际情况， 择优选 择提供了可行的参考依据。
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!"!"/ 或353百度文库持液， #"/2胰蛋白酶溶液，改良的汉克
收稿日期： ’##’?#/?!<
培养液
0"12 碳 酸 氢 钠 溶 液 ， 3 !44 营 养 液
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中国家禽
!""# 年第 !$ 卷第 $ 期
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每只鸡胚 !"#$%& 的量加入胰蛋白酶和适量的碳 酸氢钠溶液， 轻度摇晃， 置’()!"’*)!+ 水浴锅中消 待组织碎块呈现毛绒状， 吸出胰酶， 再 化 ’$%,-， 用汉克氏液将其冲洗三次 . 以彻底去掉胰酶， 随后 用力摇晃成糊状. 加入适量的 /#00 营养液或 /1/ 维持液 （ 每#$$%&的/#00营养液或 /1/ 维持液中 含有谷氨酰胺溶液， 丙酮酸溶液各 #%&） 。然后再 用力摇晃以分散细胞， 静 置 !%,-， 倒出上清液为 细胞悬液， 如此反复数次， 再用#2层灭菌纱布过滤 细胞悬液，滤液按 #$3 比例加入犊牛血清和适量 的碳酸氢钠溶液 . 调整细胞悬液的 45 为 ()# 左右， 并加入适量青、 链霉素和硫酸卡那霉素， 抽取细 胞悬液， 用血球计数板做活细胞计数， 然后分装 于转瓶和小刻氏瓶中， ’(+培养267。
半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞（ 单层。结果表明： 在同 75&） & ’(采用传统法、 等条件下， 均以成纤维细胞为主， 并伴有少量的上皮细胞， 仅有全胚法含有极少量的肝细胞； 培养时细胞贴壁和生长状况无明显差异， 其产量稍有差异（ 全胚法>半胚法> 传统法） 。 上皮细胞； 肝细胞； 产量 )*+(成纤维细胞；
!"#$%&’(") "* +’**,&,)- #,-."+( $&"+/0’)1 0.’02,) ,#3&4" *’3&"35%(%&’ (&)*&)+,-， ./& 0)&1&+!， 2’ 3454+-， 6/4+ 7’89&)+!， :’ 0’);4&! （ -<=4>4?&+)?@ A4B)?>C4+> 85 2&D)+, E,?&F’G>’?4 )+H 0’I1)+H?@ F8GG4,4 ， 2&D)+, !<6/&+) L+I&>’>4 85 =4>4?&+)?@ A?’, 68+>?8G ， M4&N&+, -"""J-）
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!信息之窗!
鹅肥肝产业化项目开发
近几年来， 鹅（ 鸭） 肥肝在国际食品市场上十分畅 销。广西鸿雁食品有限公司计划开发鹅肥肝产业化项 目。北海市合浦县及周边的一些地区环境优美， 鹅业资 源丰富，狮头鹅的产肝性能可与法国的朗德鹅相媲美， 这 里 的 农 民 有 养 鹅 的 传 统 ， 常 年 饲 养 量 达 !$$ 万 只 以 上， 足以满足年产 #$$$ 吨鹅肥肝的需要。 广西鸿雁食品有限公司于 2$$2 年 ; 月投入 ’$$$ 多
’ #$%&! 三种方法制备的 819 单层细 ’)# 在同等条件下，
胞都以成纤维细胞为主，并伴有少量的上皮细 胞， 仅有全胚法含有极少量的肝细胞， 说明鸡胚 的其它组织（ 眼喙， 内脏团， 脚等） 在该条件下几 乎不能被有效消化（ 几乎未被消化） 。 半胚法优于其它两种 ’)2 综合分析结果可以得出， 方法， 而且此法并未增加任何生产工序和污染机会， 因此建议今后使用半胚法生产鸡胚成纤维细胞。
= #2 =
万元， 建设年产 #$$ 吨鹅肝基地（ 广西鹅肥肝产业开发项 目一期工程） 。该项目是二期工程， 计划建设年产鹅肥肝 深加工鹅肝酱 !$$ 吨， 分割肉 #$$$$ 吨（ 其中深 #$$$ 吨， 加工熟制品 !$$$ 吨） ， 其他副产品 #$$$ 吨 ， 加工专用饲 料 ; 万吨， 孵化提供鹅苗 2!$ 万只， 填饲肥鹅 22$ 万只。 其中， 鹅肥肝、 鹅肝酱和分割肉大部分供出口。 该 项 目 总 投 资 为 26#; 万 美 元 ， 预 计 投 资 利 润 率 项目合作方式为合资。 #$(3 ， （ 思 进 摘）
按传统法制备 75&，用血球计数
板对细胞悬液作活细胞计数， /#个胚做一个转瓶， 分装于小方瓶（ 刻氏瓶） 中， /08培养’6 9。
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半胚法
取!#日龄$%&鸡胚/#个， 用照蛋器
逐个观察， 选取发育良好的活胚， 分别用碘酒棉 球消毒蛋壳， 无菌取出鸡胚， 弃去眼睛和内脏团， 放入 1##:; 无菌烧杯内，直接用汉克氏液冲洗三 次（ 洗去血液及粘性物质） ， 用灭菌剪刀将鸡胚剪 成 !::/大小的碎块， 倒入 !###:; 的玻璃瓶中， 按
全胚法
在半胚法的基础上，不对鸡胚作 将转瓶和小刻氏瓶
任何处理， 其他步骤相同。 贴壁细胞的分类鉴定 的细胞分别作 5)1 染色，于显微镜下鉴定贴壁细 胞的细胞种类。
’() 特别感谢中国兽医药品监察所为本试
验的开设提供一切方便。
*+,-./)
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陈瑞铭主编 ) 动物组织培养技术 及 其 应 用 ［ /］ )北 京<科 学 技 术 出版社， #00*
2)2 细胞类别及生长状况 比 较 三 种 方 法 制 备 的819单层细胞均以成纤维细胞生长为主，并有
少量的上皮细胞， 但传统法制备的单层细胞致密 程度较低， 即产量低于半胚法和全胚法。而半胚 法制备的单层细胞致密程度与全胚法相差不大， 但全胚法中含有少量的肝细胞（ 平均 2 个 : 视野） ， 而半胚法中却没有， 半胚法可以避免肝细胞可能 带来的不良影响。
中国家禽
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不同方法制备鸡胚成纤维细胞的比较试验
牛家强!， 支海兵’， 徐业芬!， 陈国先’， 吴华伟’ （ 西藏林芝 !"西藏农牧学院牧医系， 北京海淀 <=####； ’"中国兽医药品监察所，
!###<!）
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素。
抗生素
医用青霉素； 链霉素； 硫酸卡那霉
! !"#$% !"! 材料 !"!"! 鸡胚 由中国兽医药品监察所提供 !#日龄 $%&鸡胚。 !"!"’ 犊牛血清 由美国 ()*+,-. 公 司 提 供 的 未
经消毒、 经检验无菌、 无支原体、 无病毒的新生犊 牛血清、 冷冻备用。
!"’ 方法 !"’"! 传统法
目前， 全国各科研院所、 生产厂家在制备鸡 胚成纤维细胞时， 常用的方法有传统法、 半胚法 和全胚法。本试验通过对三种方法制备成纤维细 胞的比较， 旨在发现一种简捷高效制备成纤维细 胞的方法。
氏溶液， 溶液均 /2谷氨酰胺溶液， /2丙酮酸溶液。 为自配， 经除菌过滤， 并检验无菌后冷冻或常温 保存备用。
2 ! " 用传统 2)# 在使用相同数量同样鸡胚的情况下， 法， 半胚法， 全胚法三种方法制备 819 细胞悬液的 活细胞数分别为 !2$ 万 : %&， # #;$万 : %&， # 2$$ 万 : 结果见表#。 %&，
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王 明 俊 等 主 编)兽 医 生 物 制 品 学 ［ 中国农业出版社， /］ )北 京 ：