巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶来源的 N O

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诱导型一氧化氮合酶

诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与寄生虫感染转载自中国科技信息网一氧化氮(NO)在体内由L－精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)的催化下生成。

它是一种重要的信使分子, 参与血管、气道平滑肌的调节,神经递质的传递,细胞杀伤, 肿瘤细胞的溶解及内分泌激素的释放过程, 与许多疾病的发生、发展密切相关; 既在机体多个系统多种细胞中具有广泛的生理功能，又可能参与多种疾病的发生过程。

NOS是合成NO的唯一限速酶，寄生虫感染时，动物机体内由其诱发产生各种细胞因子，细胞因子激发一氧化氮合酶基因,其转录产生iNOS (inducible nitricoxide synthase)mRNA,由iNOSmRNA指导一氧化氮合酶生成。

本文就NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成和NO对寄生虫的作用以及影响NO抗寄生虫感染的因素做一简要综述。

1 NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成许多研究表明,NO 是一种重要的细胞内信使和新的神经递质, 又是效应分子[1]。

它介导并调节多种生理机制, 在呼吸系统、神经系统、炎症和免疫反应中起着重要的作用, 但也导致病理生理状态。

由于NO 可在数种哺乳动物细胞内产生, 在体内又具有广泛的生理作用, 因而这种化学结构如此简单的小分子被美国《Science》杂志评为1992 年年度分子[2]。

NOS 根据所在组织类型，在细胞中的分布，效应方式，组织表达，对Ca 2＋/钙调蛋白的依赖性及对不同激动剂的反应，可分为以下3种类型[3]: I型:神经型NOS （ncNOS )，首先于脑组织中发现，所产生的NO为神经递质，也可能作为神经和血管之间的间介物。

为结构表达。

Ⅱ型:可诱导型NOS (iNOS)，主要存在于单核/巨噬细胞系统、肝脏、平滑肌、神经胶质细胞中，另外在内皮细胞、神经元中也有分布。

为非结构表达。

Ⅲ型:上皮型NOS(ecNOS)，存在于血管内皮细胞，与ncNOS类似，为结构表达，对Ca2＋/钙调蛋白依赖，分布于胞浆中。

抗病毒蛋白

抗病毒蛋白（12种）(Antiviral protein)摘要：病毒进入机体后，能刺激人体的巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生干扰素。

干扰素具有广谱抗病毒作用，是抗病毒免疫中重要的蛋白质，它能诱生抗病毒白蛋白来阻止新病毒的产生。

但在机体内还存在着其它很多种具有抗病毒作用的的蛋白质，在抗病毒免疫中发挥重要的作用。

本文就主要介绍了其它种类的抗病毒蛋白。

关键字：抗病毒蛋白;作用机制Abstract: After the virus enters the body, wich can stimulate macrophages, lymphocytes and cells to produce interferon.which is the important proteins that can induce an antiviral albumin to prevent the generation of new viruses with broad-spectrum antiviral activity. However, in vivo there is a w variety of other proteins that having antiviral activity and play an important role in anti-viral immunity.This article introduces the other types of anti-viral proteins.Key Word: antiviral protein; mechanism of action一、干扰素（Interferon,IFN）1、干扰素的分类病毒进入机体后，能刺激人体的巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生干扰素。

干扰素具有广谱抗病毒作用。

根据干扰素产生的来源和结构不同，分为I型干扰素（IFN-α和IFN-β）和II型干扰素（IFN-γ）。

白芍总苷对巨噬细胞一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶生成的影响及其机制研究

［ｂｔｃ］Ｏｊｃｖ：ｏｎｅｉａｅｅｅｔｏｔａｇｃｓｅａｏｙ（Ｇ）ｏｉｉｏｉｒｕｔｎ（ＯｎｐｅｓｎｏＡｓａｔｒｂｅｔｅＴｖｓｇｔｔｆｃｆｏｌｌｏｉｓｆｅｎＴＰｎｎｔｃｘｅｐｄｃｏＮ）ａｄｅｒｉｉｉｔｅｈｓｔｕｄｏｐｒｄｏｉｘｓｏｆｉｄｃｌｎｒｘｅｓｎａｉＯ）ｉｍｃｐａｅｃｖｔｙｌｏｏｓｃａｄｓ（Ｐ）ａｄｔｅｍｈｎｓｎｏｖｄＭｅｏｓＲｔｎｕｉｅｉｉｏｄｔｓＮＳｎａｒｈｇｓａｔａｄｂｐｐｌａｈｒｅＬＳｎｅａｉｉｌ．ｔｄ：ａｂｔｃｉｙｈｅ（ｏｉｅｉｙｃｉｈｃｍｖｅｈ
ｗｓｐｅａｅｒｅｄｔｍｎｔｎｏＯｒｕｌｃｒｏ（Ｆｔ）ｉｉｔｙｔ（ｘ）ｂｓห้องสมุดไป่ตู้ｍｌｎｌｉ．ｕｔｅ，ＮｉｄｇａｒｒｆｅｒｉａｏｉＳｏｎｃａｆｔ－ＢＮ－ＢｎｂｏＢＩｐｄｏｔｈｅｉｆＮｅａｏｒｒｃｈｉｒｃＢｙＷｅｅｂｔａｓＦｒｒＤＡｂｉｔｏａｙｓｈｎｎ
Ｅｆｅｔｆｔｔｌｇｕｏｉｓｏａｏｙｏｎｔｉｘｄｎｄｉｕｉｌｔｃｏｉｅｓｎ－ｆｃｓｏｏａｌｃｓｄｅｆｐｅｎｎｉｒｃｏｉｅａｎｄｃｂｅｎｒｘｄｙｉｉ
ｔｓｒｄｃｉｎｉａｒｐａｅｎｔｅｈｎｓｈａｅｐｏｕｔｏｎｍｃｏｈｇｓａｄｉｍｃａｍｓｉＣＥａｇ，ＵｉｉＤＮｉ — ｏ，Ｉｈｎ－ｉＪＧＪ —ｉＲｓｒｅｔＨＮＧｎＧＯＬ— ａ，ＥＧＸａＨｎＹＮＺｏＹ，ＩｉＪＸｏｇｇＮａａ．ｅａｃＣｎｒｆＭｅｉｌｈｍｉｒｎｅｈｅｏｄａｅｓｙａｄｃＣｔ

诱导型一氧化氮合酶的调控机制及其抑制剂的进展

IFN-γ 或 TNF-α + 白介素（IL）-1 β 联合刺激 p44ERK1 和
p42ERK2 双重特异性磷酸化 ERK，激活 iNOS 并在各种组织中
广泛表达。JNK/应激活化蛋白激酶（SAPK）信号通路可被应
激激酶、生长因子（EGF）、细胞因子（如 TNF-α、IL-1）及某些 G
的神经型一氧化氮合酶（nNOS）和病理状态下表达于多种细
胞（如巨噬细胞、小神经胶质细胞、角质化细胞、肝细胞、星形
细胞及血管内皮上皮细胞）的 iNOS[1]。近年来，线粒体一氧化
氮合酶（mtNOS）与炎症的作用也是研究热点 [2]。哺乳动物的
NOS 为内源性生物合成酶，包含 N 末端的氧化酶区和 C 末端
[3]
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中国药房
2011 年第 22 卷第 39 期
NF-κB 在转录及转录后水平调控 iNOS，在哺乳动物中发
现 5 个 NF-κB/Rel 家族成员，包括 NF-κB1（p50/p105）、NF-κB2
（p52/p100）、RelA（p65）、RelB 和 c-Rel，形成同源二聚体或异源
二聚体。细胞因子（如 TNF、IL-1 等）与其特异性跨膜受体结
经末梢调节剂[3]等。并且，少量的 NO 可通过抗氧化作用而发

精氨酸酶Ⅰ及诱生性一氧化氮合酶在巨噬细胞中的分子表达调控

ｔｎ ” ２型巨噬细胞是一种抑制性的巨噬细胞，ｉ）０Ｍｏ其
ｉ，Ｐ）刺激时即被诱导合成，而催化合成非生ｄＬＳｅ进
理浓度的大量Ｎ产生一系列病理／Ｏ，应激反应。在
小鼠中，Ｐ、Ｆ一、－￣Ｉ、Ｎ－、Ｌ２ＧＣＦＬＳＩＮＩＩ、Ｌｂ６ＴＦａＩ－、Ｍ．Ｓ、
细胞存在不同类型的ＮＳ通过不同的信号转导机Ｏ，
成熟的巨噬细胞，建立起机体单核吞噬细胞系并
统＿。根据周围环境细胞因子的不同，１Ｊ单核细胞可被诱导分化为具有不同表型、同功能的巨噬细胞。不经Ｔｌｈ细胞因子（Ｉ．）如Ｆ７激活的巨噬细胞被称为Ｎ
朱琳楠侯玉柱赵勇（中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室移植生物学研究组，北京１００）０１１
中国图书分类号０９２１文献标识码Ａ文章编号１０－８Ｘ（０００．７８０００４４２１）８０４．６
巨噬细胞作为先天免疫系统的重要组成部分，在清除衰老和感染细胞、体损伤后的组织重塑中机
作者简介：朱琳楠（９６年一）女，１８，在读硕士，主要从事巨噬细胞免疫耐受机制研究；通讯作者及指导教师：赵勇（９４年一）男，１６，医学博士，研究员，博士生导师，主要从事移植免疫耐受及免疫应答
起重要作用。巨噬细胞起源于骨髓的单核母细胞，经分化形成血液的单核细胞，最终迁移至组织成为

[综述]一氧化氮的生理病理作用及其检测方法

[综述]一氧化氮的生理病理作用及其检测方法［摘要］一氧化氮(Nitrico某ide,NO)是一种由内皮细胞释放的血管活性物质,在生物体内具有广泛而多样的生物学效应。

近年来,人们对其进行了许多广泛而深入的研究,发现其与多个系统疾病都存在着密切的关系。

并阐述了血清NO的各种测定方法。

［关键词］NO;生理功能；疾病；检测NO作为2次获得诺贝尔奖的明星分子,长期以来一直得到科学家的广泛关注。

而自从[1]1992年NO被《Science》杂志评为该年度的“明星分子”以来,关于NO文章就层出不穷,现今许多国家投入大量的人力物力研究NO的生理作用。

在国外每月约有50篇关于NO在各种生理途径中的论文发表,其所涉及的领域很广,从药物、生理到生化各个领域,因此可以说NO已成为生命科学界研究的热点之一。

一氧化氮(Nitrico某ide,NO)是一种由内皮细胞释放的血管活性物质,可介导血管的舒张反应,在生物体内具有广泛而多样的生物学效应。

体内血管内皮细胞、血小板、中性粒细胞、巨噬细胞、神经组织在一定刺激下均可产生NO。

近年来,人们对NO进行了许多研究,本文就NO在人体多个系统疾病发病过程中的作用机制进行分析。

1NO的合成及代谢NO是一种亲脂性的小分子化合物,分子量为30,难溶于水,因此NO在细胞内产生后,可以透过生物膜自由扩散进入周围的靶细胞,进而执行信号分子的功能。

在生物体内左旋精氨酸(L-Arg)在NO合酶(NOS)作用下与O2结合生成左旋胍氨酸(L-Cit)及NO。

生物体内许多细胞是通过此途径来合成NO的,如中枢神经元、内皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、血小板、肝细胞及肿瘤细胞等。

催化此反应的NOS有三种同功酶:主要存在于内皮细胞中的eNOS(endothelialnitrico某ideyn2thae),存在于神经细胞中的nNOS(neuronalnitrico某ideyn2thae),以及存在于巨噬细胞、胶质细胞中的iNOS(induciblenitrico某ideynthae)eNOS和nNOS均为构成型酶,统称为cNOS(contitutivenitrico某ideynthae)前2种催化生成的NO量较少,仅在10-12mol/L水平,主要调节细胞的信息[2]传递;iNOS催化生成的NO约在10-6mol/L水平,具有细胞毒素或细胞防护功能此外,临床上应用的硝基扩血管物质(如硝酸甘油)进入机体后,也可以通过一系列生化反应释[3]放NO,是局部产生NO的化合物生成的NO在生物体液中的半衰期很短,很快就转变为硝酸盐/亚硝酸盐的代谢产物。

巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的表达调节机制

维普资讯
Ｓ１６５
免疫学杂志
第１８卷
第３期２Ｏ６月Ｏ２年
ＩＵＯＯＩＡＯＲＡｄ８Ｎｕｅ２ｔＭＭＮＬＧＣＬＪＵＮＬＶ）３Ｓ－１－４１－６（２０（）５００８００６
幽Ｉｅ；Ｉ眦００ａｏｅｎｅｕｌａｅ．ＩｔｒｕｇｈＫｆｉｓｈｓｎｔｂｅｌｅｄ￣ｄｙｔＮ
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ｌｍ血０ａｌｎ
氧化氮（ｉｃｏｄ．Ｏ是第一个与经典信ｎｒｘｅＮ）ｔｉｉ号介质定义不同的信号分子．其广泛的生物学功能包括：舒张血管．抑制血小板凝聚，作为神经介质，杀伤肿瘤和教生物、免疫调节等。它的作用十分迅速，半衰期在０．～３之间，５０ｓ因此尽管许多学者致力于ＮＯ的研究，们对它的认识仍较局限。催化Ｎ我ＪＯ生物合成的酶称为一氧化氮合酶（ｉｃｏｄｙ．ｎｒｘｅｓｔｉｉｎｔｓ，Ｏ）ＮＳ以Ｌ精氨酸和分子氧为底物，ｈｅＮＳ．Ｏａ催化隋氨酸的２个等价胍基氮之一经５电子氧化反应生成ＮＯ和Ｌ胍氨酸。目前已经确定的ＮＳＯ亚型有３，种基于原型酶的细胞、组织来源及表达方式的描述性命名分别称之为神经元型一氧化氮合酶（ｌ Ⅻ ｎｒｘｅｉｉｏｉｔｃｄｓｔｓ，ＮＳ、ｙｈｅｎＯ）诱导型一氧化氮合酶（ｄｃｌｎｎａｉｕｉｅｉｎｂ — ｔｃｘｅｙｔｓ，Ｎｓ和内皮型一氧化氮合酶（ｎｒｉｎａｉｏ）ｉｏｄｓｈｅｅ—

一氧化氮及诱导型一氧化氮合酶的研究进展

关键词：一氧化氮；诱导型一氧化氮合酶
中图分类号：２５５Ｒ８．
文献标识码：Ｂ
Байду номын сангаас
文章编号：０８ＩＯ（０７ｏ－９ＯＩ１０－８５２０）４Ｉ８－２）））
１８９０年Ｆｈｏ￣ｇＲ等 … 发现血管内皮细胞能合成和分泌血管确知会释放出不同浓度的Ｎ且浓度的变化与机体生理机能紧Ｏ，内皮舒张因子（ＤＦ，９７年ＰｌＩ等证实ＥＲＥＲ）１８ａＴｒＩｅＤＦ的化学本密相关。免疫功能、血流量、小板凝集反应、血神经传递和记忆等质为ＮＯ。大量研究表明，Ｏ在心血管、Ｎ免疫、神经、消化等系统内环境稳定作用都普遍伴随有低水平的Ｎ。而过多的ＮＯＯ通常中具有重要的调节作用。一氧化氮合酶（Ｏ）ＮＮＳ是Ｏ合成的催伴随有炎症和免疫紊乱、疼痛、神经疾病、动脉粥样硬化和癌症化酶，由于ＮＯ具有广泛而重要的生理和病理学功能，得Ｎ等。不同类型ＮＳ使Ｏ，Ｏ催化合成的ＮＯ也会产生不同的生理病理ＮＳ的研究已经成为现今生命科学研究的热点之一。Ｏ作用，构成型ＮＳ产生小量的Ｎ皮摩尔级）参与信号传递，ＯＯ（，产１ＮＯ的产生及生物特性生生理效应，而细胞因子或内毒素刺激细胞释放的大量的ＮＯＮＯ是一种气体自由基，分子中有一未配对电子，可形成自（纳摩尔级）是由诱导亚型的ＮＳ合成的，，Ｏ介导免疫系统的细胞由基，和其它分子如氧分子、超氧自由基，或过渡金属（如与ｈｅ毒和细胞生长抑制。尽管Ｎａ— Ｏ维持黏膜的血管舒张和血管通透ｍｐｔｉ血红蛋白结合的铁）ｏｍｅｎｓ反应。在体内极不稳定，Ｊ是一性，是过多的Ｎ但Ｏ也可直接引起细胞毒性作用，过氧化物一与短寿分子，衰期仅为３－。Ｎ半５ｓＯ具有脂溶性，以快速透过生起导致过氧化，而引起组织损伤】可从。物膜扩散，在体内迅速被血红蛋白、自由基或氢醌等灭活。氧３ＮＮＳ作用机制Ｏ。ＯＮＯ由一氧化氮合酶（Ｏ）ＮＳ催化Ｌ一精氨酸与氧分子经多步ＮＯ在体内主要参与以下３个反应【：激活鸟苷酸环化７ ① ］氧化还原反应生成。不同类型的细胞中，在不同类型的ＮＳ酶，存Ｏ，发挥信号传导功能。Ｎ－ＭＰ信号通路广泛存在于人类和ＯＣＧ通过不同的信号转导机制产生Ｎ。ＮＳ是ＮＯＯＯ合成过程中的关动物的多种组织和细胞中，它代表一种新的细胞间信息传递和细键酶，由于ＮＯ性质活泼，半衰期短，因此许多关于ＮＯ的研究都胞功能调节的信号传导系统。Ｎ可激活ｓＣ，细胞内ＯＧ使集中在ＮＳ的研究上。现已知ＮＳ有３种类型，以广义的将ｃＭＰ增加，动一系列蛋白磷酸化反应，而发挥不同的生理ＯＯ可Ｇ启从其分为两种，即构成型一氧化氮合酶（ＮＳ和细胞因子诱导型功能。②与红细胞中的血红蛋白结合生成亚硝酸血红蛋白而失ｃＯ）（ＮＳＮｓ）ＮＳ包括内皮组织（ＮＳ或ＮＳ）ｉＯ或Ｏ２。ｃＯｅＯＯ３和神经去活性。扩散对于ＮＯ的局部调节作用非常重要，而且是其生物系统（ＮＳ或ＮＳ）ｎＯＯ１。它们在组织分布、调节方式、物活性和半衰期的决定因素，Ｏ极易与血管腔中红细胞的氧合血红蛋白生ＮＮＯ产生量方面都有区别。ｃＯＮＳ主要分布在内皮组织（ＮＳ和结合而被灭活，ｅＯ）使其在血管腔中形成一个极陡的扩散梯度，挥发神经系统（ＮＳ，．Ｏ）主要负责基础Ｎ的合成，Ｏ调节各种生理功局部调节作用。③ 与超氧阴离子反应，生毒性很强的过氧产能。它们依赖ｃ２ａ的存在，当细胞内Ｃ２ａ浓度升高时被激活。化亚硝酸。ＮＯ极易与Ｏ；反应不可逆地生成ＯＯ一病理条件ＮＯ，ｃＯ合成小量的、期的Ｎ引起ＮＮＳ短Ｏ，Ｏ浓度的快速增加，当而下ＮＯ是体内产生的唯一能与ＳＤ竞争ＯＯｉ的生物分子，细胞当Ｃ２ａ浓度减小时，Ｏ量迅速下降，成一个博动性的ＮＮ形Ｏ释放，同时产生大量的Ｎ和时，成有毒的强氧化剂 — — ０Ｏ。Ｏ生ＮＯ一这是生理调节所必须的Ｎ。ｅＯＯＮＳ是膜结合型的，血管紧张度在Ｏｏ ’ ＮＮｏ是Ｏ的主要毒性作用形式】。控制和血小板凝集中有一定的作用，Ｎｓ是细胞溶质的，ｎＯ发挥三种亚型的ＮＳ都是二聚体型的，个硫醇盐协调的亚铁Ｏ一神经递质作用，人的骨骼肌里已经发现了它的ｍＲＡ。ｉＯ在ＮＳＮ血红素环，一个四氢生物喋呤（辅助因子和一个Ｌ一精氨酸ＨＢ）在多种细胞中均有表达，ＯｉＳ不仅在免疫反应细胞如巨噬细胞ＮＬ— ｒ）Ｎ一羟精氨酸底物结合部位组成ＮＳ的催化中心。ｇＯ和中性粒细胞中表达，而且在多种哺乳动物细胞，括成纤维细（Ａ；／包ＮＳ二聚体的每一个亚基均包含两个区域：个结合ＦＯ一ＭＮ，ＡＦＤ胞、角质化细胞、内皮和血管平滑肌细胞，以及非哺乳动物，包括ＡＰ昆虫和植物中均有表达。ｉＯＪＮＳ是非ｃ “依赖型，ａ其激活不需和ＮＤＨ的还原区和～个含有亚铁血红素和四氢生物喋呤的氧化区。电子从还原区转移到氧化区是酶活性所必需的，由钙一要ｃ “浓度升高。ｉＯａＮＳ在静息细胞内是不表达的，当细胞受到钙调蛋白复合物调节。当钙一钙调蛋白复合物存在时，电子从一细胞因子或免疫微生物刺激，革兰氏阴性杆菌的脂多糖ＬＳ如ＰＡＰＭＮ和ＦＤ传递到另一个亚基的氧Ａ强烈诱导，ＯｉＳ催化合成非生理浓度的大量Ｎ产生一系列病个亚基的ＮＤＨ通过ＦＮＯ，

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉安对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

中国当代医药２０１４年３月第２１卷第８期
论
著・
ｓ一亚硝基一Ｎ一乙酰一现一青霉胺对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响
胡旭堂胡海英王志禄
１．兰州大学第．兰州大学第一医院心内科，兰州７３００００
ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＳ－ｎｉｔｒｏｓｏ－Ｎ－ａｃｅｔｙｌ —ＤＬ－ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅｏｎｍａｃｒｏｐｈａｇｅ
ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆＮＯｄｕｒｉｎｇｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｂｙｏｂｓｅｒｖｉｎｇｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＳ — ｎｉｔｒｏｓｏ — Ｎ— ａｃｅｔｙｌ — ＤＬ — ｐｅｎｉｃｉｌｌａｍｉｎｅ（ＳＮＡＰ）ｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ｉＮＯＳ）ｉｎＲＡＷ２６４．７
ＨＵＸｕ — ｔ０ｎＨＵＨａｉ－ｙｉｎｆＷＡＮＧＺｈｉ — ｌｕ２

二、一氧化氮(NO) - 陕西师范大学网络教育学院首页

二、一氧化氮（NO）一氧化氮（NO）是一种简单的气体分子，可在哺乳类神经细胞内经一氧化氮合酶（NOS）作用产生。

它兼有第二信使和神经递质的功能，是一种新的细胞间信息传递的重要载体，广泛参与了生理的调节，并在中枢与周围神经系统中发挥神经传导作用。

NO 是一种极不稳定的生物自由基，分子小，结构简单，常温下为气体，微溶于水，具有脂溶性，可快速透过生物膜扩散，生物半衰期只有3－5s，其生成依赖于一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase, NOS ）。

前体：L-精氨酸合成：在NOS的作用下，精氨酸首先水解，再氧化生成瓜氨酸和NO。

瓜氨酸再通过精氨酸代琥珀酸重新合成精氨酸。

失活：NO在体内可被氧自由基、血红蛋白、氢醌迅速灭活，极易与氧反应生成NO2 ，在中性体液中转化为NO3-而丧失生物活性。

（一）、NOS有两型3种：一型为依赖于 Ca2+ 和钙调蛋白（CAM）的结构型NOS（cNOS），包括神经元型NOS （nNOS ）和内皮细胞型NOS（eNOS ）；二型是不依赖于Ca2+和CAM的诱导型NOS （iNOS ）。

通过定量PCR测定，证实了大鼠 NOS mRNA广泛分布于中枢和外周组织中，其中以小脑的含量为最高；在外周组织中，以肾脏含量为最高，其次为心脏和肺。

（二）、NOS抑制剂：L-Nω-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）NG-甲基-L-精氨酸（L-NMMA）N-硝基-L-精氨酸（L-NNA ）氨基胍（AG）选择性抑制 iNOS硝基吲唑（7-NI）选择性抑制 nNOS非对称性二甲基精氨酸（ADMA）和L-单甲基精氨酸（L-MMA）选择性抑制内源性NOS 作用方式：一是通过扩散进入靶细胞，与细胞内特殊的靶分子相互作用，当NO与鸟甘酸环化酶（GC）作用而激活后者，产生环磷酸鸟苷（cGMP），随着细胞内cGMP水平的升高而激活一系列生理和生化过程。

另一个途径是激活二磷酸腺苷（ADP），促进ADP-核糖基直接与受体分子结合。

诱导型一氧化氮合酶作用机理

诱导型一氧化氮合酶作用机理英文回答：The mechanism of action of inducible nitric oxide synthase (iNOS) involves the production of nitric oxide (NO) through the conversion of L-arginine to L-citrulline. iNOSis an enzyme that is expressed in response to various stimuli, such as inflammation or infection. It is different from the other isoforms of nitric oxide synthase (NOS) in terms of its expression pattern and regulation.When iNOS is activated, it undergoes a process called dimerization, where two iNOS molecules come together toform a functional enzyme. This dimerization is crucial for the catalytic activity of iNOS. Once the dimer is formed, each iNOS monomer binds to a molecule of L-arginine and oxygen. The binding of L-arginine and oxygen induces a conformational change in the enzyme, leading to the formation of a heme-iron intermediate.The heme-iron intermediate then reacts with NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate) and oxygen to produce a highly reactive intermediate called a superoxide radical. This superoxide radical rapidly reacts withanother superoxide radical to form hydrogen peroxide (H2O2). The hydrogen peroxide then reacts with a second molecule of iNOS-bound L-arginine, resulting in the release of nitric oxide (NO) and L-citrulline.Nitric oxide is a highly reactive molecule that plays a crucial role in various physiological and pathological processes. It acts as a signaling molecule in the immune system, regulating inflammation and immune responses. Italso plays a role in the relaxation of smooth muscles, such as those found in blood vessels, leading to vasodilationand increased blood flow.One example of the role of iNOS and nitric oxide is in the immune response to bacterial infection. When bacteria invade the body, immune cells, such as macrophages, are activated and produce nitric oxide through iNOS. The nitric oxide helps to kill the bacteria by damaging their DNA andproteins. Additionally, nitric oxide also acts as asignaling molecule to recruit other immune cells to thesite of infection.中文回答：诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的作用机制涉及通过将L-精氨酸转化为L-瓜氨酸来产生一氧化氮（NO）。

NO的生理作用

是血压调节的主要因子。在生理状态下，当血管受到（一）在心血管系统中的作用
现已发现
NO 的代谢异常与心血管疾病关系密切，参与了动脉粥样硬化（ AS ）和冠心病的发生、发展。 NO 很可能通过 cGMP 诱导机制，抑制 SMC 的分裂和增殖，通过抑制其增殖、减少胶原纤维、弹力纤维的产生，从而进一步防止动脉粥样斑块和硬化的形成和发展。 NO 也可抑制血小板的活化和聚集，被称为内源性血小板聚集和粘附抑制物，其作用机制与扩血管作用相似。
（二）在神经系统中的作用

NO 作为一种特殊的气体生物信使分子，是重要的神经递质。在中枢神经系统内， NO 通过扩散，作用于相邻的周围神经元如突触前神经末梢和星状胶质细胞，激活 GC ，从而提高水平 cGMP 水平，产生生理效应。如 NO 可诱导与学习、记忆有关的长时程增强效应（ Long-term potentiation ， LTP ），并在其 LTP 中起逆信使作用。作为外周神经递质， NO 主要在支配消化、生殖、呼吸、循环等系统的植物神经中起作用。当神经受刺激时即可产生 NO 。它从非肾上腺素能非胆碱能神经（ nonadrenergic-non-cholinerrgic ， NANC ）末梢即突触前释放，通过扩散作用于内脏平滑肌靶细胞上，能使胃肠道、盆腔内脏、气管和心血管的平滑肌松弛，也能使阴茎海绵体血管、括约肌松弛，实现阴茎勃起。美国辉瑞制药公司研制生产的“ Viagra ”（中文名“伟哥”）就是通过此作用机理而发挥疗效。 NO 还可参与神经系统形态的发育，并可影响其它神经递质的释放。
NO的生
理作用
NO 在体内经一氧化氮合酶（ nitric oxide synthase ， NOS ）的催化下生成。 NOS 是 NO 生成的最主要的限速因子。 NOS 由 1025 个氨基酸残基组成，分子量为 13.3kD ，广泛分布于机体内。按其存在的细胞类型不同， NOS 可以为三种类型，即神经型 NOS （ nNOS ）、内皮型 NOS （ eNOS ）和诱导型 NOS （ iNOS ）。 nNOS 主要存在于视网膜、植物神经纤维、大脑皮层、海马、垂体后叶、丘脑、嗅球区粒细胞层、骨骼肌细胞和平滑肌细胞。 eNOS 主要存在于血管内皮细胞、支气管内皮细胞和海马锥体细胞层。 iNOS 则主要存在于肝细胞、单核巨噬细胞、内皮细胞和成纤维细胞。

inos的基因表达及其产物no在抗日本血吸虫感染免疫中的作用

华中科技大学博士学位论文iNOS的基因表达及其产物NO在抗日本血吸虫感染免疫中的作用姓名：***申请学位级别：博士专业：病原生物学指导教师：***2003.4.1２００３羁华中科技大学固济医学院蹲＋学位论文ｉＮＯＳ的基因表达及其产物ＮＯ在抗日本血吸虫感染免疫中的作用华中科技大学同济医学院病原生物学系博士研究生龙小纯导师李雍龙全文摘要ＮＯ的合成有赖于一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的催化作用，机体内的ＮＯＳ，有结构型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）和诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）两类。

滇中，｛ｉＮＯＳ在机体的免疫系统中具有重要的作用。

在感染性疾病的发生、发展过程中，ｉＮＯＳ催化生成的ＮＯ既可通过杀伤、抑制病原体发挥抗感染的作用，同时也参与对宿主免疫病理的调节。

因此，ＮＯ是当今生物学和医学领域中最热门的研究课题之一。

在寄生虫学领域，ＮＯ的研究也十分活跃。

不少资料表明，ＮＯ介导的细胞毒作用是机体抗寄生虫感染的重要方式，如ＮＯ可对刚地弓形虫、疟原虫和利什曼原虫产生杀灭作用，从而减轻或消除感染。

血吸虫病是一种严重威胁人类健康的寄生虫病，传统观念认为，抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）是机体抗血吸虫感染的主要效应机制。

但近年来不少资料证明，在宿主抗曼氏血吸虫的免疫过程中，非特异性免疫效应也具有重要的作用。

体外试验证实ＮＯ对曼氏血吸虫童虫具有杀灭作用，而一些高效疫苗如’ｒ射线照射尾蚴疫苗、需钙蛋白酶疫苗等对宿主保护力的产生与免疫后宿主肺部ｉＮＯＳ的高表达有关，提示ＮＯ介导的细胞毒作用也是机体的一种重要的抗感染方式。

因此，研究ＮＯ在机体抗血吸虫感染中的作用具有重要意义。

血吸虫引起的病理变化主要发生在肝脏。

沉积在肝脏中的虫卵引起肉芽肿反应，虫卵肉芽肿与纤维化的形成是肝脏病理变化的基础。

肝脏急性病变过程中局部升高的ＮＯ能通过多种途径对肝脏发挥保护作用，其中包括减轻由氧自由基引起的肝脏损伤，抑制由ＴＮＦ一Ⅱ引起的肝细胞的坏死和凋亡，抑制血栓形成等。

m1型巨噬细胞指标

m1型巨噬细胞指标
M1型巨噬细胞具有一系列特定的表型特征，这些特征可以通过检测特定的标记物来鉴定巨噬细胞的亚型。

以下是M1型巨噬细胞的表型特征：
1.CD11c：M1型巨噬细胞通常表达CD11c，这是一种巨噬细胞的表面标记物，
用于区分巨噬细胞和其他免疫细胞。

2.CD86：M1型巨噬细胞表达高水平的CD86，这是一种共刺激分子，参与T
细胞的活化和免疫应答的调节。

3.iNOS：M1型巨噬细胞表达高水平的iNOS（一氧化氮合酶），这是一种产生
一氧化氮的酶，对于抗菌和抗肿瘤具有重要作用。

4.IL-12：M1型巨噬细胞产生高水平的IL-12（白细胞介素-12），这是一种重
要的炎症介质，能够促进Th1细胞的发育和活化。

此外，M1型巨噬细胞还可以分泌大量促炎因子，包括IL-1、IL-6、TNF-α等，主要起到促进炎症发生发展、杀菌及吞噬等作用。

同时，能产生趋化因子，通过趋化性吸引Th1细胞，促进强烈的Th1免疫反应。

并且，M1巨噬细胞可通过增加细胞表面MHC-II和共刺激分子CD80和CD86标记，提升抗原的提呈能力。

一氧化氮及诱导型一氧化氮合酶的研究进展

(文献综述(收稿日期:2006-08-07; 修订日期:2006-11-27作者简介:廖润玲(1978-),女(汉族),广西柳江人,现为广西医科大学在读硕士研究生,学士学位,主要从事生化药理工作.*通讯作者简介:杨斌(1964-),男(汉族),广西玉林人,现任广西医科大学副教授,博士学位,主要从事生化药理工作.一氧化氮及诱导型一氧化氮合酶的研究进展廖润玲,杨斌*(广西医科大学,广西南宁 530021)摘要:一氧化氮(N itr ic O x i de ,NO )是一个普遍存在的第二信使,具有广泛的生理病理作用,其在呼吸、消化、循环、免疫、神经等全身多系统的生理、病理生理及有关临床疾病中起着重要作用。

由于其独特的理化性质和生物学活性,使得对于NO 的研究主要集中在其合成的关键酶一氧化氮合酶(NOS)上,特别是对于诱导型一氧化氮合酶(i N O S)的研究更是成为近年的研究热点。

本文将对NO 及i N O S 作用机制、调节及在部分临床疾病中的作用研究作一综述。

关键词:一氧化氮; 诱导型一氧化氮合酶中图分类号:R285.5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2007)04-0980-021980年Furchgott 等[1]发现血管内皮细胞能合成和分泌血管内皮舒张因子(EDRF ),1987年P al m er 等[2]证实EDR F 的化学本质为NO 。

大量研究表明,NO 在心血管、免疫、神经、消化等系统中具有重要的调节作用。

一氧化氮合酶(NO S)是NO 合成的催化酶,由于NO 具有广泛而重要的生理和病理学功能,使得NO,NO S 的研究已经成为现今生命科学研究的热点之一。

1 NO 的产生及生物特性NO 是一种气体自由基,分子中有一未配对电子,可形成自由基,和其它分子如氧分子、超氧自由基,或过渡金属(如与hae -m oprote i ns 血红蛋白结合的铁)反应[3]。

在体内极不稳定,是一短寿分子,半衰期仅为3~5s 。

一氧化氮合酶在大鼠肾脏不同部位的表达及意义

（００ＭＢ配制，１羊血清，ＮＯＳ、ＮＯＳ以．１ＰＳ含ｂｅ
小球和出入球动脉中。本实验的结果表明，近端肾在小管、升支粗段和皮质中、收集管偶有表达。髓本研究应用ＮＯＳ、ＮＯＳ和ＮＯＳ三种特异性ｓ抗体研究了ＮＯＳ各亚型（ＮＯＳｅｂ、ＮＯＳｉ、ＮＯＳ在肾）
布作一研究，探讨其参与肾血管张力及血压调节并的机制。
１．资料与方法
致肾血管收缩，减低ＧＦ在分离的人球小动脉上的Ｒ。研究表明Ｌ— ＮＭＡ能降低动脉直径，强血管紧张增
素 Ⅱ的收缩作用。还有报道认为ＮＯ能抑制肾素释放。应用免疫组织化学方法研究发现，ＮＯＳ存在于ｂ球旁斑中，然而应用ＲＴ— Ｃ方法表明ＰＲｂＮＯＳｍＲＮＡ亦存在于大鼠肾脏微管部分，内髓收在
４０ＦＡＳ，速取出肾脏置ＦＡＳ中固定４ＰＳ０ｍｌＰ快Ｐｈ；Ｂ
集管有高水平ｂＮＯＳｍＲＮＡ表达。其余在内髓收集
管、内髓粗上升支、肾小球和血管均有表达。但在近
肾小球旁细胞未发现ｂＮＯＳｍＲＮＡ。与之相反，位原杂交研究发现ｂＮＯＳｍＲＮＡ仅存在于球旁斑细胞
１１实验动物雌性Ｓ大鼠７只，洁级，重．Ｄ清体２０３０。购自中国医学科学院动物繁殖中心。２￣０ｇ１２实验方法．在戊巴比妥钠（０５ｍｇ・ｇ麻醉下ｋ）开胸，经左心室插管至升主动脉，开右心室，后剪快速灌流１０ＰＳ（．Ｍ，Ｈ７４５ｍｌＢ０１ｐ．）后，慢灌流缓

一氧化氮在急性肺损伤炎症反应中的双向调节作用

垦堡哩堡盘查；！！！至箜！！鲞箜！塑！璺！』垦望￡ｉ！！坚！！：！！！！！Ｙ！！：；！：堕！！！一氧化氮在急性肺损伤炎症反应中的双向调节作用李娜邱海波【摘要】炎症反应在急性肺损伤中发挥了重要作用，一氧化氮通过核因子途径以及一氧化氮合酶途径参与炎症反应的调节，但不同剂量的一氧化氮对炎症反应产生不同的作用。

高浓度的一氧化氮可以抑制急性肺损伤时的炎症反应，减轻组织的损伤。

而低浓度的一氧化氮则促进炎症反应的发展，加重组织的损伤。

【关键词】一氧化氮；急性肺损伤；炎症反应感染、创伤等多种原因均可导致急性肺损伤（ＡＬＩ），治疗不当则可进一步发展，导致急性呼吸窘迫综合征（ＡＲＤＳ）。

炎症反应在ＡＬＩ的发生发展中起重要作用，其中一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）对炎症反应发挥重要的调节作用。

但不同剂量的ＮＯ作用不同。

本文对ＮＯ在ＡＬＩ炎症反应中的双向调节作用作一综述。

１Ｎｏ的生成与生物学作用ＮＯ是一种结构简单的小分子化合物，在体内半衰期很短。

哺乳动物肺的毛细血管内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞、肥大细胞、成纤维细胞等都能产生ＮＯ。

Ｎｏ由一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯｓ）催化Ｌ一精氨酸产生，体内共有三种ＮＯＳ同工酶，包括诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯｓ）、内皮细胞型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）及神经细胞型一氧化氮合酶（ｎＮＯＳ）。

其中，ｉＮＯＳ多存在于巨噬细胞、肺内皮细胞中，在炎症刺激下，催化产生过量ＮＯ，参与炎症反应；而ｅＮＯｓ、ｎＮＯＳ多参与生理状态下ＮＯ的生成，维持机体正常的生理功能。

Ｎｏ可介导多种生物学作用，主要包括：①扩张血管，产生舒血管效应；②作为抑制型非胆碱能非肾上腺素能神经的递质，舒张气道平滑肌，扩张气道；③促进纤维蛋白溶解，抑制血小板的聚集，产生抗凝作用；④参与全身血流分布的调节，增加肾脏灌注；⑤介导炎症细胞凋亡及促炎细胞因子的产生，调节炎症反应的方向。

２Ｎｏ对ＡＬＩ炎症反应的调节机制目前认为，ＡＬＩ是感染、创伤导致机体炎症反应失控的结果。

一氧化氮合酶的合成

一氧化氮合酶的合成一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）是一种能够催化一氧化氮（NO）的合成酶。

一氧化氮在生物体内具有重要的生理功能，参与多种生物过程的调控和调节。

本文将从一氧化氮合酶的结构、功能以及合成机制等方面进行介绍。

一氧化氮合酶通常被分为三种亚型：内皮型NOS（eNOS）、神经型NOS（nNOS）和诱导型NOS（iNOS）。

这些亚型在不同的细胞和组织中表达，并且具有不同的调控和功能。

eNOS主要存在于内皮细胞中，参与血管舒张、抑制血小板聚集和细胞增殖等功能；nNOS主要存在于神经系统中，参与神经传递和调节；iNOS主要在炎症和病理状态下被诱导表达，产生大量的一氧化氮，参与免疫和炎症反应。

一氧化氮合酶的基本结构为二聚体，每个亚基由多个结构域组成。

其中，还原酶结构域（reductase domain）和氧化酶结构域（oxygenase domain）是合成反应的关键部位。

还原酶结构域含有辅因子四羟基四硫腺嘌呤亚甲四氢叶酸（Tetrahydrobiopterin，BH4）和还原剂NADPH，氧化酶结构域含有一氧化氮合成的催化位点。

这两个结构域之间通过连接肽链相互作用，实现催化反应的协同。

一氧化氮的合成是一个复杂的过程，包括多个步骤和中间产物。

首先，NOS通过氧化酶结构域中的催化位点将L-精氨酸氧化生成L-鸟氨酸和一氧化氮。

这一步骤需要氧气和NADPH作为辅助因子。

其次，一氧化氮在细胞内迅速与其他分子反应，生成一系列的活性中间产物，如亚硝酸、亚硝酸盐和S-亚硝基化合物等。

这些中间产物在生物体内参与多种生理和病理过程的调控。

一氧化氮合酶的合成受到多种调控机制的影响。

在正常情况下，酶的合成和活性受到多种信号通路的调节，包括钙离子和蛋白激酶等。

此外，一氧化氮合酶的合成也受到细胞内环境的影响，如氧分压、pH值和氧化还原状态等。

这些调控机制保证了一氧化氮的合成和释放在生理条件下的平衡。

诱导型一氧化氮合酶

诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与寄生虫感染转载自中国科技信息网一氧化氮(NO)在体内由L－精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)的催化下生成。

本文就NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成和NO对寄生虫的作用以及影响NO抗寄生虫感染的因素做一简要综述。

1 NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成许多研究表明,NO 是一种重要的细胞内信使和新的神经递质, 又是效应分子[1]。

它介导并调节多种生理机制, 在呼吸系统、神经系统、炎症和免疫反应中起着重要的作用, 但也导致病理生理状态。

由于NO 可在数种哺乳动物细胞内产生, 在体内又具有广泛的生理作用, 因而这种化学结构如此简单的小分子被美国《Science》杂志评为1992 年年度分子[2]。

为结构表达。

Ⅱ型:可诱导型NOS (iNOS)，主要存在于单核/巨噬细胞系统、肝脏、平滑肌、神经胶质细胞中，另外在内皮细胞、神经元中也有分布。

为非结构表达。

Ⅲ型:上皮型NOS(ecNOS)，存在于血管内皮细胞，与ncNOS类似，为结构表达，对Ca2＋/钙调蛋白依赖，分布于胞浆中。

诱导型一氧化氮合酶与疾病

诱导型一氧化氮合酶与疾病关键词：一氧化氮；疾病Inducible nitric oxide synthase in diseases【A Review】Nitric oxide(NO) is a biologically active molecule in vivo，it has been found to play an important role not only as a cytotoxic effector but also an immune regulatory mediator and a signal molecule of message transmission．The inducible NO synthase (iNOS) produces NO after cells were activated and play a rather complicated pathophysiological action in a variety of human diseases or disorders. The molecular biological character of iNOS，its expression in human diseases and probable significance were reviewed.［MeSH］ Nitric Oxide; Disease迟至20世纪80年代末，一氧化氮(nitric oxide， NO)才被认识到是人体内一种生物学活性分子。

人体内的NO有两个来源。

一为非酶生(non-enzymstigenese)，来自体表或者摄入的无机氮的化学降解/转化；一为酶生(enzymstigenese)，由NO合酶(NO synthase NOS)所合成。

现已认识到NO既是一个有细胞毒性效应器作用的分子，是组织损伤的诱发因子和各种病变的增强因子，有其病理上不好的一面；又是生物体许多部分的信号(signal)分子，是先天性免疫应答的调节性效应分子，作为一种信息传递物质维持正常的生理功能，有其生理性好的一面。

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PEG 10mRNA 的抑制作用最强,表明靶mRNA 的二级结构对siRNA 的功能有很大影响。

本研究中我们构建针对PEG 10基因的siRNA 真核表达载体,并通过酶切鉴定和测序鉴定,说明我们构建的针对PEG 10的真核表达载体是正确有效的,可以用于后续PEG 10基因功能的研究,以及沉默PEG 10后抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,从而为肝癌的基因治疗提供理论依据和实验工具。

参考文献:[1]　Ryuichi Ono ,Shin K obayashi ,Hirotaka Wagat suma ,et al.Aretrotransposon 2derived gene ,PEG 10,is a novel imprinted gene located on human chromosome 7q 21[J ].Genomics ,2001,73(2):2322237.[2]　Noble A ,Towne C ,Chopin L ,et al.Insulin 2like growt h fac 2tor 2Ⅱbound to vitronectin enhances MCF 27breast cancer cellmigration[J ].Endocrinology ,2003,144(6):241722424.[3]　Moorehead RA ,Sanchez O H ,Baldwin RM ,et al.Transgenicoverexpression of IGF 2Ⅱindues spontaneous lung tumors :a model for human lung adenocarcinoma [J ].Oncogene ,2003,22(6):8532857.[4]　Vella V ,Sciacca L ,Pandini G ,et al.The IGF system in t hy 2roid cancer :new concept s[J ].Mol Pat hol ,2001,54(3):1212124.[5]　Tsou AP ,Chuang YC ,Su J Y ,et al.Overexpression of a no 2vel imprinted gene ,PEG 10,in human hepatocellular carcino 2ma and in regenerating mouse livers [J ].J Biomed Sci ,2003,10(6Pt 1):6252635.[6]　Hiroshi Okabe ,Seiji Satoh ,Y oichi Furukawa ,et al.Involve 2ment of PEG 10in human hepatocellular carcinogenesis t hrough interaction wit h SIA H 1[J ].Cancer Research ,2003,63(12):304323048.[7]　常莹,陶璐薇,陈孝平,等.肝癌组织中遗传印记基因PEG 10表达的特异性及其意义[J ].世界华人消化杂志,2005,13(12):140821411.[8]　Naito Y ,Yamada T ,Ui 2Tei K ,et al.siDirect :highly effec 2tive ,target 2specific siRNA design software for mammalian RNA interference [J ].Nucleic Acids Res ,2004,32:W 1242129.[9]　Reynolds A ,Leake D ,Boese Q ,et al.Rational siRNA designfor RNA interference[J ].Nat Biotechnol ,2004,22(3):3262330.[编辑:刘红武]收稿日期:2006202221;修回日期:2006204214基金项目:怀化市科技计划资助项目(0502)作者单位:1.418000湖南怀化医学高等专科学校检验　系;2.中国科学院生物物理研究所结构与分子生物学研究　中心作者简介:张申(1955-),男,学士,教授,主要从事自由　基生物学研究巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶来源的NO 对共培养HL 60细胞凋亡的影响张　申1,尹利华1,卫涛涛2E ffects of Inducible Nitric Oxide Synthase Derived Nitric Oxide on Apoptosis of H L 60Cells Co 2cultured with RAW 264.7MacrophagesZHAN G Shen 1,YIN Li 2hua 1,WEI Tao 2tao 21.De partment of L aboratory Medicine ,H uai hua Medical College ,H uai hua 418000,China;2.Center f or S t ructural and Molecular B iology ,I nstitute of B iophysics ,Chinese A cadem y of SciencesAbstract :Objective To study effects of inducible nitric oxide synthase (iNOS )2derived nitric oxide (NO )on apoptosis of HL 60cells co 2cultured with RAW 264.7macrophages.Methods Upon stimulation withlipopolysaccharide (L PS )and interferon 2γ(IFN 2γ),inducible nitric oxide synthase gene was expressed in RAW 264.7macrophages ,which caused the consequent generation of nitric oxide.Effects of nitric oxide on HL 60cells viability ,expression of bcl 22and bax protein ,activity of Caspase 23and cell apoptosis were evaluated with M T T assay ,Western blot analysis ,fluorescence analysis ,flow cytometry (FCM ),trans 2mission electron microscopy (TEM )and DNA agarose gel electrophoresis.R esults The results showed that iNOS 2derived nitric oxide caused oxidative damage of HL 60cells co 2cultured with RAW 264.7mac 2rophages ,and decreased cell viability ,and evidently reduced expression of bcl 22and increased expression of bax ,and induced activity of caspase 23and DNA f ragmentation.Conclusion The results suggested im 2portant effect of iNOS 2derived nitric oxide on apoptosis of cells in RAW 264.7macrophages.K eyw ords :Induciblenitricoxidesynthase ;Nitric oxide ;Apoptosis ;Mac 2rophage摘　要:目的　研究巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶(iN 2OS )来源的一氧化氮(NO )对共培养HL 60细胞凋亡的影响。

方法　以脂多糖(L PS )和γ2干扰素(IN F 2γ)诱导RAW 264.7巨噬细胞iNOS 基因的表达产生过量NO 为实验模型,通过噻唑蓝(M T T)试验、蛋白质印迹分析、荧光分析、流式细胞术(FCM)、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等分析技术,观察NO对共培养的HL60细胞存活率、bcl22和bax蛋白表达、Caspase23活性和细胞凋亡的影响。

结果　RAW264.7巨噬细胞中iNOS来源的NO对共培养HL60细胞能造成氧化损伤,降低细胞的存活率;bcl22表达明显下降,而bax表达增加;激活Caspase23和促进DNA的降解。

结论　巨噬细胞中iNOS来源的NO在诱导细胞凋亡中发挥重要的作用。

关键词:诱导型一氧化氮合酶;一氧化氮;细胞凋亡;巨噬细胞中图分类号:Q786 文献标识码:A 文章编号:10002 8578(2007)01200882050　引言巨噬细胞是一种参与机体非特异性免疫防御的重要免疫细胞。

1988年Hibbs首先证明哺乳动物的巨噬细胞能产生NO[1],现已证实,NO是一种具有重要生理、病理功能的内源性生物信息分子,在生物体内,NO由三种不同的一氧化氮合酶(Nit ric ox2 ide synt hase,NOS)催化L2精氨酸而生成,其中可诱导型一氧化氮合酶(Inducible nit ric oxide synt hase, iNOS)是在诱导因素作用下,由巨噬细胞、中性粒细胞、胶质细胞等产生,其活性不受Ca2+浓度的影响,生成NO量大,主要作用是参与炎症反应和免疫细胞对病原体的防御。

但过量的NO可与超氧阴离子(O2・-)迅速反应,生成具有强氧化性的过氧化亚硝基阴离子(ONOO-)[2],ONOO-引起的氧化损伤是NO具有细胞毒性的重要原因之一[3,4]。

本研究以脂多糖(L PS)和γ2干扰素(IN F2γ)诱导RA W264.7细胞iNOS基因的表达产生过量NO为模型,通过M T T试验、蛋白质印迹分析、荧光分析、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳等分析技术,观察NO对共培养的HL60细胞存活率、bcl22和bax蛋白表达、Caspase23活性和细胞凋亡的影响。