小鼠一氧化氮合成酶(NOS)说明书
一氧化氮测定指标
一氧化氮测定指标
一氧化氮（NO）的测定指标通常包括以下几个方面：
1. NO 浓度：直接测量样品中NO 的浓度，常用单位为ppm（百万分之一）或μM（微摩尔/升）。
2. NO 代谢产物：例如硝酸盐（NO3-）和亚硝酸盐（NO2-），它们可以作为NO 生物活性的指标。
3. NOS（一氧化氮合酶）活性：NOS 是合成NO 的酶，测定其活性可以间接反映NO 的产生情况。
4. NO 依赖性血管舒张：通过观察血管对NO 的反应，评估血管内皮功能和血管舒张能力。
这些指标可以通过不同的实验方法来测定，例如化学分析、酶联免疫吸附法、气相色谱法、荧光法等。
具体的测定方法和指标选择会根据研究目的和实验条件而有所不同。
测定一氧化氮的指标在生物学、医学和环境科学等领域都有重要意义。
例如，在心血管研究中，NO 与血管舒张和血液循环有关；在免疫系统中，NO 参与炎症和免疫反应；在环境监测中，NO 可能与空气污染和健康问题相关。
诱导型一氧化氮合酶
诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与寄生虫感染转载自中国科技信息网一氧化氮(NO)在体内由L－精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)的催化下生成。
它是一种重要的信使分子, 参与血管、气道平滑肌的调节,神经递质的传递,细胞杀伤, 肿瘤细胞的溶解及内分泌激素的释放过程, 与许多疾病的发生、发展密切相关; 既在机体多个系统多种细胞中具有广泛的生理功能，又可能参与多种疾病的发生过程。
NOS是合成NO的唯一限速酶，寄生虫感染时，动物机体内由其诱发产生各种细胞因子，细胞因子激发一氧化氮合酶基因,其转录产生iNOS (inducible nitricoxide synthase)mRNA,由iNOSmRNA指导一氧化氮合酶生成。
本文就NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成和NO对寄生虫的作用以及影响NO抗寄生虫感染的因素做一简要综述。
1 NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成许多研究表明,NO 是一种重要的细胞内信使和新的神经递质, 又是效应分子[1]。
它介导并调节多种生理机制, 在呼吸系统、神经系统、炎症和免疫反应中起着重要的作用, 但也导致病理生理状态。
由于NO 可在数种哺乳动物细胞内产生, 在体内又具有广泛的生理作用, 因而这种化学结构如此简单的小分子被美国《Science》杂志评为1992 年年度分子[2]。
NOS 根据所在组织类型，在细胞中的分布，效应方式，组织表达，对Ca 2＋/钙调蛋白的依赖性及对不同激动剂的反应，可分为以下3种类型[3]: I型:神经型NOS （ncNOS )，首先于脑组织中发现，所产生的NO为神经递质，也可能作为神经和血管之间的间介物。
为结构表达。
Ⅱ型:可诱导型NOS (iNOS)，主要存在于单核/巨噬细胞系统、肝脏、平滑肌、神经胶质细胞中，另外在内皮细胞、神经元中也有分布。
为非结构表达。
Ⅲ型:上皮型NOS(ecNOS)，存在于血管内皮细胞，与ncNOS类似，为结构表达，对Ca2＋/钙调蛋白依赖，分布于胞浆中。
两种方法检测胚胎小鼠内皮型一氧化氮合酶结果的相关性分析
白含 量进行 检 测 ， 旨在探 讨两 种 方法 检测 结果 之间 是否 有相关 性 。
两 种 方 法 检 测 胚 胎 小 鼠 内皮 型 一 氧 化 氮 合 酶 结 果 的 相 关 性 分 析
包 翠 芬 刘 霞 王 晓 梅 穆 长 征
（ 辽宁 医学 院科学 实验中心 ， 组织胚胎学教研室 ， 第一 临床学 院，锦州 １ １Ｏ ） ２ Ｏ １
（ 关键词］ 小 鼠； 肾 ； 内皮型一氧化氮合酶 ； 流式细胞仪
材料 和 方法
裂解 液 加 入 电泳 胶 样 品槽 ，１０ 电压 下 电泳 ，待 ０Ｖ 样 品 到达合 适 位置 ，停 止 电泳 ，将 胶板 取 下 ，转膜 液 洗 涤 １－０ ｎ ０３ｍｉ。将 胶 与 ０４ ／ Ｐ ＤＦ膜 （ ． ５ ｍ Ｖ ￣ 用前 置于 甲醇 内浸 透 ５ ｎ左 右 ，再 放 人转 膜 液 中至少 ｍｉ ５ ｎ ｍｉ）置 于 厚 滤 纸 （ 已用 转 膜 液 浸 泡 ） 之 间 ，赶 尽 气 泡 ，常 温 下 半 干 转 印 ，转 印完 成 后 将 Ｐ ＶＤＦ 膜用 ＴＢ Ｔ （ Ｓ１ Ｔｕｅ２ Ｓ ＴＢ －％ ｅｎ ０溶 液 ） 冲 洗 ，５ ％ 脱脂 奶 粉 溶 液 室 温封 闭 １２ 。与 一 抗 （ 抗 小 鼠 —ｈ 兔 ｅ ＮＯＳ抗 体 ，稀 释 度 为 １：４ ０ ４ 孵 育 过 夜 ， ０） ℃ ＴＢ Ｔ洗 脱 ３次 ，每次 至少 ５ ｎ 再 与 二抗 （ 性 Ｓ ｍｉ； 碱 磷 酸酶标 记 的羊 抗兔 ＩＧ 抗体 ，稀 释 度 为 １：２０ ｇ ０） 室 温 孵 育 ｌ ，ＴＢ Ｔ 溶 液 洗 脱 ３次 ，每 次 至 少 ｈ Ｓ ５ ｎ ｍｉ；ＮＢ ／ Ｃ Ｐ显色 ；扫 描 电泳 条 带 输 入 电脑 ， ＴＢＩ
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书试验原理：BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书操作注意事项1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
一氧化氮肾内作用
鼠髓袢升支粗段细胞中 NF/KB p50/P65 蛋白参与iNOS基因活化
髓袢升支粗段和内髓部集合管，受低氧 诱导基因调节 转化生长因子-β1，局部调控
二、NO与肾脏生理学
二、 NO与肾脏生理学
二、NO与肾脏生理学
（一）NO与肾血流动力学
NO 对肾血流量和局部微循环具有重 要的调节作用。NO可明显舒张隔离灌流的 鼠和人肾动脉。 NO可能是肾内血管紧张性的调定者
局部NOS抑制在髓旁肾单位引起入球、出 球小动脉阻力同等程度增强
二、NO与肾脏生理学
在深层肾单位，NO既可调节入球小动脉 的阻力，也可调节出球小动脉的紧张度。 生理情况下，皮质肾单位出球小动脉不 释放NO，这可能是允许入球、出球小动脉独 立调节其紧张性，从而参与肾小球血流动力 学的精细调节机制
二、NO与肾脏生理学
二、NO与肾脏生理学
在麻醉大鼠，抑制 NOS 而未引起血压 变化时，可潜在地提高肾神经活动，横断 脊髓可使这一效应消失，由此推测 NOS 阻 断剂可通过血-脑屏障直接刺激交感中枢。 在清醒动物，肾去神经支配对急性 NOS 抑制所致的肾血流动力学反应无影响， 但可阻断压力性利钠效应。
二、NO与肾脏生理学
在远端肾单位，NO可直接抑制集合管对钠 的重吸收和水的渗透。
三、长期NO抑制效应
三、 长期NOS抑制效应
三、长期NO抑制效应
慢性NOS抑制可导致持久的、剂量依赖性高 血压并伴有心血管和肾损伤。 中等剂量L-NAME（5mg/kg/day）持续应用 2月可出现高血压、肾血管收缩，肾小球滤过率 降低、肾小球毛细血管压持续升高、蛋白尿、肾 小球硬化和肾间质纤维化。 高剂量的L-NAME持续4-6周，除上述类似变 化外还观察到更严重的肾内血管损伤，如小动脉 管壁明显增厚和纤维素样变性，并常伴有肾小球 片状崩解。
二、一氧化氮(NO) - 陕西师范大学网络教育学院首页
二、一氧化氮（NO）一氧化氮（NO）是一种简单的气体分子，可在哺乳类神经细胞内经一氧化氮合酶（NOS）作用产生。
它兼有第二信使和神经递质的功能，是一种新的细胞间信息传递的重要载体，广泛参与了生理的调节，并在中枢与周围神经系统中发挥神经传导作用。
NO 是一种极不稳定的生物自由基，分子小，结构简单，常温下为气体，微溶于水，具有脂溶性，可快速透过生物膜扩散，生物半衰期只有3－5s，其生成依赖于一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase, NOS ）。
前体：L-精氨酸合成：在NOS的作用下，精氨酸首先水解，再氧化生成瓜氨酸和NO。
瓜氨酸再通过精氨酸代琥珀酸重新合成精氨酸。
失活：NO在体内可被氧自由基、血红蛋白、氢醌迅速灭活，极易与氧反应生成NO2 ，在中性体液中转化为NO3-而丧失生物活性。
（一）、NOS有两型3种：一型为依赖于 Ca2+ 和钙调蛋白（CAM）的结构型NOS（cNOS），包括神经元型NOS （nNOS ）和内皮细胞型NOS（eNOS ）；二型是不依赖于Ca2+和CAM的诱导型NOS （iNOS ）。
通过定量PCR测定，证实了大鼠 NOS mRNA广泛分布于中枢和外周组织中，其中以小脑的含量为最高；在外周组织中，以肾脏含量为最高，其次为心脏和肺。
（二）、NOS抑制剂：L-Nω-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）NG-甲基-L-精氨酸（L-NMMA）N-硝基-L-精氨酸（L-NNA ）氨基胍（AG）选择性抑制 iNOS硝基吲唑（7-NI）选择性抑制 nNOS非对称性二甲基精氨酸（ADMA）和L-单甲基精氨酸（L-MMA）选择性抑制内源性NOS 作用方式：一是通过扩散进入靶细胞，与细胞内特殊的靶分子相互作用，当NO与鸟甘酸环化酶（GC）作用而激活后者，产生环磷酸鸟苷（cGMP），随着细胞内cGMP水平的升高而激活一系列生理和生化过程。
另一个途径是激活二磷酸腺苷（ADP），促进ADP-核糖基直接与受体分子结合。
一氧化氮及一氧化氮合酶的测定
作者： 徐畅;安书成
作者机构： 陕西师范大学生命科学学院;陕西师范大学生命科学学院 硕士研究生西安
710062;教授西安 710062
出版物刊名： 当代教师教育
页码： 115-118页
主题词： 一氧化氮 一氧化氮合酶 测定
摘要： 一氧化氮(NO)作为细胞间及细胞内的信息物质,在机体的生理、病理过程中有重要的作用。
一氧化氮合酶(NOS)是NO生成过程中必需的酶,在生物体内有广泛分布,随着NO的研究日益深入,测定生物体NO及NOS的方法显得尤为重要。
本文介绍了常用的研究NOS、测定硝酸盐/亚硝酸盐及直接测定NO的几种方法。
一氧化氮合酶解偶联
一氧化氮合酶解偶联
一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase，简称NOS）是一种能够催化产生一氧化氮（NO）和L-瓜氨酸的酶。
在正常的生理条件下，NOS通过氧化L-精氨酸来生成NO，这个过程需要NADPH、FAD、FMN以及四氢生物喋呤（BH4）等辅因子的参与，并且是一个耦合的过程，即电子从NADPH经FAD和FMN传递给血红素中心的氧分子，生成NO和L-瓜氨酸。
然而，在某些情况下，NOS可能会发生解偶联（Uncoupling），即电子传递链中的某个环节出现问题，导致电子不能正常地传递给氧分子，而是泄漏到氧分子以外的其他受体上，如分子氧，生成超氧阴离子（O2•−）等活性氧类物质。
这种现象被称为NOS 解偶联。
NOS解偶联的发生可能与多种因素有关，如BH4的缺乏或氧化、NADPH的缺乏、钙离子的浓度变化、酶的结构改变等。
当NOS发生解偶联时，它不仅不能正常地生成NO，还会产生大量的活性氧类物质，这些物质可能对细胞造成氧化应激损伤，从而引发多种疾病，如心血管疾病、神经退行性疾病、炎症性疾病等。
因此，维持NOS的正常耦合状态对于维持生理功能和预防疾病具有重要意义。
这可以通过提供充足的辅因子、保持适当的钙离子浓度、避免氧化应激等方式来实现。
实验4 NOS
A
B
Hippocampal pyramidal neuron immunostained with an antibody against the synaptic vesicle associated protein synapsin. Cultured hippocampal neuron stained with antibodies against MAP2 (blue) and synapsin (red).
第四次实验
神经元功能定位的NOS技术
教学目的：掌握神经元功能定位的NOS技术，了
解神经组织细胞培养技术
教学重点：神经元功能定位的NOS技术 教学难点： NOS阳性神经元的定位 教学对象：临床医学2006级八年制
实验内容
神经元功能定位的一氧化氮合酶法
（NOS法）的基本原理及其应用
NOS法的操作过程与结果判读
1、操作简单
2、NADPH-d组化法和不同的神经递质及 神经活性物质的免疫组织化学法可联合 应用，标记共存神经元。 3、NADPH-d标记可以呈现Golgi样的完整 神经元形态
二、NOS法的操作与结果
显色液：需新鲜配置
0.1M PB(pH 7.3) 0.1%还原型NADPH
0.01%NBT
缺点：培养组织与细胞与在体环境仍存在相当差异，在 观察与解释结果时必须牢记的。
神经组织细胞的培养与存活
神经组织培养特别是神经细胞的分离培养 较其它组织细胞培养常需要较高的条件，培养 方法也较为特殊（原代培养、特殊营养要求）。 神经组织培养存活的标志是：在分离细胞 培养的标本中，在种植后24小时内贴壁，并逐 渐生长出数十微米长的突起；组织器官培养的 标本只要组织片薄，不漂浮，即为贴壁，而后 有生长晕长出，则组织片一般是存活的。
一氧化氮合酶抑制剂
一氧化氮（NO）信号通路研究一氧化氮合酶（NOS）抑制剂研究背景：一氧化氮（ NO ）是自分泌和旁分泌的信号通路分子，可以扩散进入生物膜。
发挥作用时间很短（几秒钟），主要的生理功能是促进血管动态平衡。
它能够抑制平滑肌收缩生长，阻止血小板凝聚以及防止白细胞 - 内皮细胞粘附。
另外它还参与免疫防御系统，神经传递，血管生成等过程。
NO 的下游靶标包括鸟苷酸环化酶和NF-κB，前者可以提高 cGMP 水平，后者在 iNOS 基因表达作为重要的转录因子。
体内 NO 水平和信号失调常发生于某些疾病状态。
糖尿病病人具有低于全球的 NO 水平，动脉粥样硬化常常会导致 NO 信号通路受损。
因此对 NO 信号通路的研究极具意义。
NO信号通路与NOS合酶：一氧化氮（ NO ）是由一氧化氮合酶（ NOS ）氧化 L- 精氨酸产生的，由于 NO 半衰期非常短（约5s ），为此大多数对 NO 功能的研究都是以 NOS 活性的调控为基础。
开发以 NOS 为靶标的抑制剂不仅能很好的阐明 NO 信号通路作用机制，也是开发 NO 引起的疾病治疗药物的重要思路。
►总NOS（一氧化氮合酶）抑制剂表 1 总NOS（一氧化氮合酶）抑制剂体目前发现参与 NO 正常生理或病理过程的有三种类型的 NOS ，分别是： nNOS (neuronal/Type I/NOS-1/bNOS) ， eNOS (endothelial/Type III/NOS-3) 和iNOS (inducible/Type II/NOS-2) 。
►n NOS（神经一氧化氮合酶）抑制剂n NOS ，与 iNOS 和 eNOS 一起催化 L- 精氨酸和分子氧产生 NO 和 L- 瓜氨酸。
体内钙离子浓度超过 100 nm 可激活酶活性，酶的催化反应需要辅助因子四氢生物喋呤（H4B）、黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）、黄素单核苷酸(FMN)和NADPH的参与。
nNOS 的转录调控机制非常复杂， nNOS 基因通过可变启动子、选择性剪切、盒式插入 / 缺失、 3'-UTR 切割位点的变化和聚腺苷酸化等方式产生多种 mRNA 转录子，进而引起氨基酸序列的变化，从而翻译产生不同结构和功能特征的 nNOS 亚型。
一氧化氮及其对营养物质代谢的调节
一氧化氮及其对营养物质代谢的调节郑萍;田刚;毛湘冰;余冰;张克英;陈代文【摘要】Nitric oxide (NO), a major cellular signaling molecule, is produced by NO synthases (NOS) using arginine as a substrate. NO is not only a key endothelial derivative factor, but also plays an important role in the regulation of nutrient metabolism, such as glucose, fat, and amino acid. The synthetic rate of NO in cells can be regulated by arginine availability and NOS cofactors. Therefore, we can adjust the nutrient metabolism through the regulation of nitric oxide synthesis. [ Chinese Journal of Animal Nutrition, 2011, 23 ( 6 ):893-900 ]%一氧化氮是由一氧化氮合成酶以精氨酸为底物合成的重要细胞信号分子,不仅是脉管系统中重要的内皮衍生因子,而且在营养物质代谢调控上有着重要的作用.一氧化氮参与葡萄糖、脂肪、氨基酸等营养物质的代谢调控.细胞中一氧化氮的合成速率可通过各种途径控制精氨酸的有效性及一氧化氮合成酶的辅助因子来调节,通过调节一氧化氮的合成可以调节营养物质的代谢.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2011(023)006【总页数】8页(P893-900)【关键词】一氧化氮;葡萄糖;氨基酸;脂肪;代谢【作者】郑萍;田刚;毛湘冰;余冰;张克英;陈代文【作者单位】四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养教育部重点实验室,雅安,625014;四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养教育部重点实验室,雅安,625014;四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养教育部重点实验室,雅安,625014;四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养教育部重点实验室,雅安,625014;四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养教育部重点实验室,雅安,625014;四川农业大学动物营养研究所,动物抗病营养教育部重点实验室,雅安,625014【正文语种】中文【中图分类】S811一氧化氮(NO)是由一氧化氮合成酶(NOS)以精氨酸为底物合成的内皮细胞衍生舒张因子[1-3]。
植物一氧化氮(NO)说明书(1)
2张
6 显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月
用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
植物一氧化氮(NO)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 15µmol/L -400µmol/L
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定植物组织，细胞及相关样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物一氧化氮(NO)水平。用纯化的植物一氧化
免疫抑制小鼠肺白念珠菌感染模型的建立
1 Tsai PW，Yang CY，Cheng HT，et al. Human antimicrobial peptide IL-37 inhibits adhesion of candida albicans by interacting with yeast cell-wall carbonhydrates〔J〕. PLoS ONE，2011； 6（ 3） ： e17755.
免疫抑制小鼠肺白念珠菌感染模型的建立
许 群 眭 建 （ 江苏大学临床医学院，江苏 镇江 212001）
〔摘 要〕 目的 建立免疫抑制小鼠肺部白念珠菌感染模型，为相关的感染研究提供科学依据。方法 ICR 小鼠一次性腹腔注射环磷酰胺 200 mg / kg，尾静脉采血计数白细胞。鼻滴组小鼠每天经双侧鼻孔滴入浓度为2 × 109 cfu / ml 的白念珠菌悬液 40 μl； 雾化组小鼠每天吸入浓度为 2 × 109 cfu / ml 的白念珠菌悬液 20 ml，连续感染 8 d 后处死小鼠，行组织培养和病理学检查。结果 环磷酰胺注射后，小鼠白细胞数明显下降。鼻滴组肺 组织培养可见乳白色光滑菌落生成，病理切片可见大量炎细胞浸润，肺泡结构紊乱，肺泡腔内可见弥散的红细胞。雾化组培养未见菌落生成，病理表 现为炎症反应。结论 降低小鼠免疫力，应用鼻滴的方法可以建立小鼠肺部白念珠菌感染模型。
一般情况免疫抑制鼻滴组小鼠在第3和第5天鼻滴接刘青梅等肠康颗粒对溃疡性结肠炎大鼠no水平及nos活力的影响第1o期在白念珠菌感染的研究领域中建立起一个简单可重复的标准化的肺部动物感染模型能为进一步探索发病机制疾病的发展过程新型抗真菌药物的研制及影像学方面的表现提供一个良好的方法将有助于新的诊疗方案的提出
图 1 各组小鼠体重变化趋势图
诱导型一氧化氮合酶
诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与寄生虫感染转载自中国科技信息网一氧化氮(NO)在体内由L－精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)的催化下生成。
它是一种重要的信使分子, 参与血管、气道平滑肌的调节,神经递质的传递,细胞杀伤, 肿瘤细胞的溶解及内分泌激素的释放过程, 与许多疾病的发生、发展密切相关; 既在机体多个系统多种细胞中具有广泛的生理功能，又可能参与多种疾病的发生过程。
NOS是合成NO的唯一限速酶，寄生虫感染时，动物机体内由其诱发产生各种细胞因子，细胞因子激发一氧化氮合酶基因,其转录产生iNOS (inducible nitricoxide synthase)mRNA,由iNOSmRNA 指导一氧化氮合酶生成。
本文就NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成和NO对寄生虫的作用以及影响NO抗寄生虫感染的因素做一简要综述。
1 NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成许多研究表明,NO 是一种重要的细胞内信使和新的神经递质, 又是效应分子[1]。
它介导并调节多种生理机制, 在呼吸系统、神经系统、炎症和免疫反应中起着重要的作用, 但也导致病理生理状态。
由于NO 可在数种哺乳动物细胞内产生, 在体内又具有广泛的生理作用, 因而这种化学结构如此简单的小分子被美国《Science》杂志评为1992 年年度分子[2]。
NOS 根据所在组织类型，在细胞中的分布，效应方式，组织表达，对Ca 2＋/钙调蛋白的依赖性及对不同激动剂的反应，可分为以下3种类型[3]: I型:神经型NOS （ncNOS )，首先于脑组织中发现，所产生的NO为神经递质，也可能作为神经和血管之间的间介物。
为结构表达。
Ⅱ型:可诱导型NOS (iNOS)，主要存在于单核/巨噬细胞系统、肝脏、平滑肌、神经胶质细胞中，另外在内皮细胞、神经元中也有分布。
为非结构表达。
Ⅲ型:上皮型NOS(ecNOS)，存在于血管内皮细胞，与ncNOS类似，为结构表达，对Ca2＋/钙调蛋白依赖，分布于胞浆中。
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小鼠小鼠一氧化氮合成酶一氧化氮合成酶一氧化氮合成酶(NOS)(NOS)(NOS)酶联免疫酶联免疫酶联免疫分析分析分析
试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围检测范围：： 96T
1µmol/L - 32µmol/L
使用目的使用目的：：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(NOS)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠一氧化氮合成酶(NOS)水平。
用纯化的小鼠一氧化氮合成酶(NOS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶(NOS)，再与HRP 标记的一氧化氮合成酶(NOS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶(NOS)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠一氧化氮合成酶(NOS)浓度。
试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液 6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（64µmol/L ） 0.5ml ×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶
4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6
显色剂B 液
6ml ×1/瓶
12
密封袋
1个
标本标本要求要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
32µmol/L 5号标准品 150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液 16µmol/L 4号标准品 150µl 的5号标准品加入150µl 标准品稀释液 8µmol/L 3号标准品 150µl 的4号标准品加入150µl 标准品稀释液 4µmol/L 2号标准品 150µl 的3号标准品加入150µl 标准品稀释液 2µmol/L
1号标准品
150µl 的2号标准品加入150µl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50µl ，待测样品孔中先加样品稀释液40µl ，然后再加待测样品10µl （样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl ，再加入显色剂B50µl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50µl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结操作程序总结：：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。