人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒使用说明书
一氧化氮含量测定试剂盒使用说明
一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒使用说明微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1475规格：100T/48S产品组成：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
产品说明：NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。
它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-，在酸性条件下，NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。
为了排除样品色素等的影响，每个样品需做对照管。
自备实验用品及仪器：天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
操作步骤：一、样品处理：1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。
3.体液和培养液等其它液态样品：直接测定。
二、测定步骤和操作表：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm。
2、操作表对照管测定管样品（μL）100100试剂一（μL）50试剂二（μL）50试剂三（μL）5050混匀，4℃室温静置15min，于微量石英比色皿/96孔板，对照管调零，测定550nm处吸光值，记为A550。
一氧化氮检测试剂盒(化学法)
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
碧云天生物技术一氧化氮检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号一氧化氮检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0021S 一氧化氮检测试剂盒 500次 S0021M一氧化氮检测试剂盒2500次产品简介：碧云天生产的一氧化氮检测试剂盒采用了经典的Griess Reagent ，并对其测定的溶液体系进行了优化，使检测下限达到1µM ，在1-100µM 范围内有非常完美的线性关系。
检测速度极快，完成一条标准曲线或5-10个样品的测定只需3分钟。
样品范围广，可以检测细胞或组织及其培养液中的一氧化氮的含量，酚红和10%血清均对测定无明显干扰，也可以检测血清、血浆和尿液中一氧化氮的含量。
包装清单：产品编号 产品名称 包装 S0021S-1 1M NaNO 2 1ml S0021S-2 Griess Reagent I 25ml S0021S-3 Griess Reagent II25ml —说明书1份产品编号 产品名称 包装 S0021M-1 1M NaNO 2 1ml S0021M-2 Griess Reagent I 125ml S0021M-3Griess Reagent II125ml —说明书1份保存条件：-20ºC 避光保存，一年有效。
4ºC 避光保存，半年有效。
注意事项：本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
如保存不当导致溶液变色或沉淀，则说明该溶液已经失效，请购买新的试剂盒。
不建议使用RIPA 裂解液对细胞或者组织进行裂解，使用RIPA 裂解液可能在后续反应中产生沉淀，影响测试。
推荐使用碧云天的细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用)(S3090)或Western 及IP 细胞裂解液(P0013)。
人一氧化氮NOELISA试剂盒使用方法
人一氧化氮(NO)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。
用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
酶联免疫分析试剂盒说明书
人chemerin酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关液体中chemerin含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中chemerin水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入chemerin抗原、生物素化的抗人chemerin抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的chemerin呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20,000pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释10,000pg/ml，5,000pg/ml，2,500pg/ml，1,250pg/ml，625pg/ml，312.5pg/ml，156pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制10,000pg/ml标准品：取0.5ml20,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
碧云天-总一氧化氮检测试剂盒说明书
总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。
一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。
高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。
本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。
浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。
酚红和10%血清对测定无明显干扰。
样品需要量少。
根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。
检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。
本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。
NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。
注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。
人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒
人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒人试剂盒说明书,人血清一氧化氮（NO）ELISA检测试剂盒樊克生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本血清试验原理：NO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NO浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将NO和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中NO的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)试剂盒使用说明
NADH氧化酶（NADH oxidase，NOX）试剂盒使用说明分光光度法货号:BC0630规格：50管/48样产品说明：试剂一：液体50mL×1瓶，-20℃保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，-20℃保存。
试剂三：液体1mL×1瓶，-20℃保存。
试剂四：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂六：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存。
产品简介：NOX（EC1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。
该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。
NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水操作步骤：一、样品测定的准备：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2将匀浆600g，4℃离心5min。
3弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11100g，4℃离心10min。
4上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的NOX（此步可选做）。
5步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于NOX活性测定。
二、测定操作：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（1）试剂四、试剂五和试剂六于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。
碧云天-总一氧化氮检测试剂盒说明书
总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。
一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。
高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。
本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。
浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。
酚红和10%血清对测定无明显干扰。
样品需要量少。
根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。
检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。
本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。
NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。
注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。
一氧化氮合成酶
一氧化氮合成酶
一氧化氮合成酶：
1、定义：
一氧化氮合成酶（Nitric Oxide Synthases，简称NOS），又叫硝酸根合成酶，是植物、动物和真菌中一类具有单功能酶特性的酶，其主要作用是将L-精氨酸（L-Arg）氧化水解反应合成一氧化氮（NO）。
2、分类：
一氧化氮合成酶根据分子结构分为三大类，即传统的甲基化的酶（tMNOS）、等
位变异性酶（iMNOS）和改良型酶（mNOS）。
3、作用：
一氧化氮合成酶的作用是促进L-精氨酸氧化水解合成一氧化氮（NO），而一氧化
氮又是一种重要的消炎和免疫保护物质，对于维持细胞间的平衡起着重要作用。
4、应用：
一氧化氮合成酶在医学和农学领域具有重要作用，特别是在心血管领域，一氧化氮合成酶可以抑制血管收缩，从而促进微血管扩张，有利于血液循环；在农业上，一氧化氮合成酶可以促进植物的生长发育。
因此，一氧化氮合成酶的研究在医学和农学领域都有重要的应用价值，可以为我们的健康和农业生态系统的可持续发展奠定坚实的基础！。
测定试剂盒(测总NOS)
一氧化氮合酶一氧化氮合酶（（NOS ）测定试剂盒测定试剂盒（（测总NOS ）说明书修订日期说明书修订日期：：2015.07.13 Cat number ：KGT020-1/KGT020-2 Store at -20 for for ℃ 3 months For Research Use Only （科研专用）一、实验原理NOS 催化L －Arg 和分子氧反应生成NO ，NO 与亲核性物质生成有色化合物，在530nm 波长下测定吸光度，根据吸光度的大小可计算出NOS 活力。
二、试剂盒组份组份KGT020-1 25TKGT020-2 50T 保存条件Buffer A 6.0 mL 6.0 mL*2 －20℃ 试剂 B 粉剂*2 粉剂*3 －20℃ 试剂 B 稀释液 0.6ml*2 0.6ml*3 －20℃ Buffer C 3.0 mL 6.0 mL 4℃避光 Buffer D 3.0 mL 6.0 mL 室温 Buffer E60 mL60 mL*24℃注意事项1. Buffer A ： 底物缓冲液6ml×2瓶，－20℃以下避光冷冻保存3个月。
临用前化冻摇匀。
没有用完的试剂，可以－20℃以下避光冷冻保存以备下次再用。
2. 试剂B 工作液：促进剂淡黄色或白色粉剂×3支，稀释液0.6ml×3支。
-20℃以下冷冻保存6个月。
测试前取试剂 B 稀释液一支0.6ml 加入一支粉剂中充分混匀（即将1.5ml 小离心管反复颠倒，并将小离心管尖部的液体弹下来），测试后剩余的试剂可放入－20℃以下冷冻保存，时间不超过一周。
若发现粉剂变成黄褐色或咖啡色，则不可再用。
3. Buffer C ：黄色显色剂6ml×1瓶，4℃避光冷藏保存3个月。
4. Buffer D ：透明剂6ml×1瓶，室温保存6个月。
天冷后会凝固，待37℃水浴变澄清时再使用。
5. Buffer E ：终止剂60ml×2瓶，4℃保存6个月。
一氧化氮检测试剂盒原理
一氧化氮检测试剂盒原理一氧化氮检测试剂盒是一种基于化学反应的检测方法。
该方法利用了一氧化氮与二氧化氮（Nitrogen Dioxide, NO2）在碱性条件下的反应，通过测量反应产生的颜色变化来间接检测一氧化氮的含量。
一氧化氮检测试剂盒通常包含两种关键试剂：Griess试剂和还原剂。
Griess试剂是一种含有硫酸铁铵和磷酸的溶液，它可以与反应中产生的亚硝酸盐（Nitrite）反应生成深紫色的染料。
还原剂是一种强还原剂，如氢氨基钠（Hydroxylamine hydrochloride），它的作用是将一氧化氮和二氧化氮还原为亚硝酸盐。
一氧化氮检测试剂盒的操作步骤通常如下：1. 准备样品：收集待测样品，并将其加入试剂盒中。
2. 加入试剂：加入Griess试剂和还原剂，使样品中的一氧化氮与还原剂发生反应。
3. 反应发生：在碱性条件下，一氧化氮与还原剂反应生成亚硝酸盐。
4. 颜色变化：亚硝酸盐与Griess试剂反应生成深紫色的染料，产生颜色变化。
5. 测量光密度：使用光度计或分光光度计测量反应产物的光密度，光密度与一氧化氮的含量成正比。
6. 计算浓度：通过与已知一氧化氮浓度的标准品比较，计算待测样品中一氧化氮的浓度。
一氧化氮检测试剂盒的原理是基于一氧化氮与还原剂在碱性条件下的反应，通过测量反应产生的染料的光密度来间接检测一氧化氮的含量。
这种检测方法具有灵敏度高、操作简便、结果准确等优点，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
总结起来，一氧化氮检测试剂盒利用一氧化氮与还原剂在碱性条件下的反应，通过测量反应产生的染料的光密度来间接检测一氧化氮的含量。
该方法操作简便、结果准确，被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。
通过对一氧化氮的检测，可以更好地了解其在生物体内的功能和调节作用，为相关研究和治疗提供重要的参考依据。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备：根据实验要求，准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。
例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。
3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。
NO试剂盒说明书
NO试剂盒说明书一氧化碳试剂盒说明书(硝酸还原酶法)一.测定意义：NO化学性质活泼，体内代谢转化为硝酸盐(NO3)和亚硝酸盐(NO2),血清(NO3)与(NO2)浓度之和(NO2+NO3)才能准确代表体内(NO)水平。
血清(NO3+NO2)含量测定，国内有的单位采用金属镉还原法，但该法操作繁琐(血清需除蛋白)，反应不易控制(金属镉可将NO2进一步还原)，且不能完全将NO3还原为NO2，准确性差。
本测试法为一种灵敏、简捷、快速、稳定、易推广的方法。
二、原理：NO化学性质活泼，在体内代谢很快转化为NO2和NO3，而NO2又进一步转化为N03-,而NO2-又进一步转化为NO3-,本法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-，通过显色深浅测定其浓度的高低。
一、试剂组成与配制：1.试剂一：液体6ml×2瓶(50T)如6ml×1瓶(25T)，-20℃以下保存。
使用前请放37℃水浴中或室温使其溶解后再用。
2.试剂二：液体6ml×2瓶(50T)如6ml×1瓶(25T)，-20℃以下保存。
使用前请放37℃水浴中或室温后再用。
混合试剂的配制：按试剂一：试剂二=1：1的比例配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，现用现配3、试剂三：液体12ml×1瓶(50T)如6ml×1瓶(25T)，室温保存4、试剂四：液体6ml×1瓶(50T)如3ml×1瓶(25T),室温保存5、试剂五：粉剂×1支，用时加90℃-100℃热蒸馏水20ml(50T)如10ml(25T)[注]，充分溶解，避光保存。
6、试剂六：粉剂×1支，用时加蒸馏水8ml(50T)如4ml(25T),避光冷藏保存，当颜色变成深咖啡色不可再用。
7、试剂七：液体8ml50T(4ml25T)×1瓶，室温保存。
显色剂的配制：需多少配多少试剂五：试剂六：试剂七=2.5：1：1.若能在一月内用完者也可以一次配成。
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
一氧化氮检测试剂盒及检测方法与设计方案
一氧化氮检测试剂盒及检测方法与设计方案一氧化氮（NO）是一种重要的生物活性分子，在许多生理和病理过程中发挥重要作用。
因此，开发一种简单快速、灵敏准确的一氧化氮检测试剂盒及相应的检测方法和设计方案具有重要的意义。
以下将详细介绍一氧化氮检测试剂盒及相应的设计方案。
首先，对于试剂的选择，应选取具有高度灵敏性和特异性的试剂。
一氧化氮的浓度通常很低，因此需要使用高灵敏度的化学试剂来检测其浓度。
一种常用的试剂是Griess试剂，该试剂与一氧化氮反应生成可检测的化合物。
此外，还有一些基于荧光和发光技术的试剂可用于一氧化氮的检测。
其次，在实验步骤方面，应设计简单可行的实验步骤来进行一氧化氮的检测。
一种常用的实验步骤是将待测样品和试剂混合，并在一定的温度和时间条件下反应，然后通过光谱测定试剂与一氧化氮反应产生的化合物的吸光度或荧光强度。
实验步骤应尽可能简单明了，以提高实验的可重复性和稳定性。
在检测原理方面，应该基于一氧化氮的化学性质和检测方法的原理来设计。
一氧化氮是一种高活性的气体，其荧光、发光、吸光度或电化学性质可用于检测。
例如，荧光性染料可以与一氧化氮反应生成荧光产物，通过测定荧光的强度来分析一氧化氮的浓度。
另一种常用的方法是通过光谱测定试剂与一氧化氮反应产生的化合物的吸光度。
此外，还可以使用电化学方法来检测一氧化氮的浓度。
最后，在数据分析方面，应使用合适的统计方法来处理实验数据，计算并分析一氧化氮的浓度。
如果设计了标准曲线，可以根据标准曲线来计算样品中一氧化氮的浓度。
此外，对于复杂的样品或实验结果，可以使用统计学方法进行数据分析和解释。
总结起来，设计一氧化氮检测试剂盒及相应的检测方法和设计方案应包括试剂的选择、实验步骤、检测原理以及数据分析等方面。
通过合理的设计，可以开发出简单快速、灵敏准确的一氧化氮检测方法，为一氧化氮的检测提供重要的工具和技术支持。
碧云天一氧化氮合成酶检测试剂盒
一氧化氮合成酶检测试剂盒产品编号产品名称包装S0025 一氧化氮合成酶检测试剂盒 100次产品简介：¾一氧化氮合成酶检测试剂盒(Nitric Oxide Synthase Assay Kit)可以检测活细胞内总的一氧化氮合成酶的活性。
如果和特异性的一氧化氮合成酶抑制剂配合使用，也可以检测不同类型的一氧化氮合成酶的活性。
¾本试剂盒提供了一种在生理条件下通过荧光检测活细胞内一氧化氮合成酶活性的方法，不需要使用传统方法所需的放射性同位素。
本试剂盒采用了可以穿透细胞膜的最新一代一氧化氮荧光检测探针DAF-FM DA (3-amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate)，在提供充足的底物的条件下检测细胞内的一氧化氮合成酶可以催化产生的一氧化氮量，从而检测出一氧化氮合成酶的活性。
详细的检测原理参考图1。
采用一些一氧化氮合成酶的抑制剂则可以测定出特定类型的一氧化氮合成酶的活性。
例如，采用iNOS抑制剂，未加iNOS抑制剂测定出来的酶活力减去加了iNOS抑制剂测定出来的酶活力就是iNOS的酶活力。
图1. 一氧化氮合成酶检测试剂盒原理图¾本试剂盒是目前为止世界上最先进的一种一氧化氮合成酶检测试剂盒。
和Calbiochem等多年前就开始提供的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比无需使用同位素，和Sigma等最近推出的基于荧光的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比采用了最新一代的荧光探针，灵敏度更高，特异性更好。
本试剂盒的缺点是和其它荧光法一氧化氮合成酶检测试剂盒一样，仅能提供一氧化氮合成酶的相对活性。
¾本试剂盒和检测细胞内一氧化氮水平的不同之处在于提供了充足的底物L-Arginine和一些可以穿透细胞膜的反应辅助因子，确保一氧化氮合成酶的催化的一氧化氮合成不会受底物的量或辅助因子的量的限制，从而可以测定出细胞内一氧化氮合成酶活力。
¾本试剂盒最适合用于贴壁的细胞或组织的一氧化氮合成酶的检测，对悬浮细胞也可以进行检测。
【doc】一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其运用
一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其运用4生理,1994,4B(4),347354ActaPhysiologicaSinica一氧化氮合成酶(NOS)基因表达的半定量检测及其运用1张晨晖李肯虹,继峰周洪张新波场健r_元j五吾础研究所分子生物学研究室北京I.口舶3)-三Jl摘要'/4'本工作参照Mi~lin(1993)定量RTPeR方法,建立了一种灵敏,简捷,特异的定量NOSmRNA测定方法}证明了NOSmRNA不仅存在于脑组织,亦广泛分布于心,肾,肺和肝组织中,其中以脑组织含量最高,肾,心次之.除内皮细胞以外,平滑肌细胞中亦有NOS基因的表达}此外,本工作还观察到,自发性高血压大鼠的脑,肾,肝和平精肌细胞中NOSmRNA水平下降,提示NOS基因表达受抑,可能与高血压的病国密切相关.f上一,关键词:.=墨些窒盛堕差里室垄自发性高血压太最;半定量pcRzfl兰,-近年来的研究证明,一氧化氮(nitricoxide,NO)是一种血管内皮细胞释放的内皮衍化舒张因子(endothelium—delvedrelaxingfactors,EDRFs),它具有舒张血管,降低血压,抑制血管平滑肌细胞增殖和血小板粘附等重要的生理作用,在高血压,心肌缺血等许多心血管疾病的发病中具有重要意义.NO是由L广精氨酸(L—ARG)和分子氧在一氧化氮合成酶(nitricoxidesynthase,NOS)催化下合成的,NOS则是NO生成的关键酶.最近,NOS cDNA已经在大鼠内皮细胞,小脑中克隆出来0一:.但是关于它在体内不同组织的分布以及在心血管疾病高血压发病中的作用,迄今还未见报道.本工作应用聚合酶链式反应(po]y—merasechainreaction,PCR)技术建立了一种新的,简捷,特异的定量NOSmRNA的测定方法,研究了NOS在大鼠体内的分布,发现自发性高血压大鼠(spontaneoushyl~rtenslverat,SHR)脑,肾和肝中NOSmRNA的表达明显降低,其内皮依赖性的血管舒张反应亦明显下降提示,N0S基因表达下降,可能与高血压的病因密切相关.1材料和方法动物本工作选用8—1o周龄的雄性SHR和WKY(Wistar-Kyotorat,WKY)大鼠进行实验,SHR大鼠由Okamoto等选育成功,其特点为1oo%高血压自发率(BP=22.7士1.3kPa),同时具有高血压性心血管病变,适用于人类高血压病的研究,WKY为其正常对照模型,实验所用动物由中国医学科学院心血管研究中心提供车文19日3年6月8日收到1993年9月12日修回生理46卷试剂本工作所用的反转录酶(MoMLV)和TaqDNA聚台酶分别购自美国的Stret- gene公司和Perkin—Klmer公司,[P]dCTP为北京福瑞公司产品(放射比活度为3O00Ci/mmo1)RandomPrimer和dNTP购自美国Promega公司,其它试剂均购自美国Sigma 公司.细胞培养取用6—8周龄雄性SHR,WKY大鼠和新生小牛的胸主动脉段,分别按Hofman和Booyse的方法培养血管平滑肌细胞和内皮细胞.本实验选用5—8代细胞进行实验.总RNA的制备取10的平滑肌细胞或内皮细胞,用RNAzolBRNA提取试剂盒(美国TEL—TEST公司)提取细胞总RNA.各取1g脑,心,肺,肾,肝组织采用异硫氰酸胍一酚一氯仿方法:提取组织总RNA.总RNA提取完成后,分别用紫外分光光度计测定总RNA的浓度,重复测定三次.oD:OD.比值在1.8—2.0之间.计算样品总RNA的浓度.反转录(reversetranscription,RT)取2lag总RNA,在65℃变性3min,依次加入0.5mmol/LdNTP,0.01mol/LDTT,10pmol/LRandomPr/mer,15unit反转录酶和oH 8.350mmot/LTris—HCI,75mmol/LKCI,3mmol/LM鲁cl2缓冲液,总反应体积为201.在37℃保温90min.反应结束后,加入50TE缓冲液(pH8.010mmol/LTris—HCI,1mmol/ LEDTA),于70℃加热10min以终止反应定量PCRNOS寡核苷酸的引物合成是根据Bredt等E3]发表的大鼠小脑NoscD- NA序列应用DNA合成仪合成的.引物A,B序列分别为:5GG:GAATCCATACCAGCCTGATCCATGGAACC35TACTCGAAACGCCTGAA TGG3用这一对引物可以扩增出自2463bp-3124bp(661bp)的NOScDNA序列,长度相当于821aa一1041aaNOS氨基酸序列.取1/lo体积(71)反转录反应液,分别加入200mmol/LdNTP,50pmol/LNOS寡核苷酸引物,0.5ttCi32P]dCTP和pH8.310mmol/LTr/s—HCI.50mmol/LKC1,1.5mmol/ LMsCl缓冲液,2.5unitTaqDNA聚合酶;总反应体积为100l.最后加入50山轻矿物油.PCR反应所需的变性,退火和延伸温度分别为:94℃,55℃和72℃,反应时间分别为:1,2和3min.共进行25—35次循环.首次循环.94℃需要3min.反应完成后取10山PCR反应物进行1.5琼脂糖凝胶电泳(含0.5~tg/ml的溴化乙锭)分析,以0xl74/HaeⅢ为分子量标准,电泳缓冲液为1xTBE(0.09mol/LTris一硼酸,0.002mol/LEDTApH8.0). 电泳完毕后在紫外灯下照片,并切取含有荧光条带的凝胶,应用液体闪烁计数仪进行放射性测量.2实验结果2.1NosmRNA刹量方法的建立本工作依据Martin(1993)的方法建立了定量NOSmRNA测量方法.其结果如图1. 2所示.由图1可以看出,脑组织总RNA反转录后经25—35次PCR扩增后,其NOScDNA片段约为660bp与所设计的NOScDNA相同.其扩增量与扩增循环次数密切相关.由图2可以看出,脑组织总RNA样本量不同,RT—PCR后NOScDNA产率亦不同.具有明显的4期氧化氮合成酶(Nos)基因表达的半定量捡涮及其运用349剂量一效应关系;应用0.25ug的总RNA,即可检测到NOSmRNA圉1PCR扩增产率与循环次数之间的剂量一效应关系.1Dose—effectrelationshipbetwec"theyieldofPCRproductandthenumberofPCRampJificationcycle(n一3,:K2:SE).M:xl74/Ha~Il000Am0u"【ofIOtillRNA2530圉2PCR产量和总P,NA量之间的剂量一效应关系Fig.2D.se—effectrelationshipbetwoentheyieldofPCRproductandtheamountoftotalRNAn一3,士SE.0,l?2,3,4tamountoftOtalRNA(0,0t25,0.5,1.0,1.5.2,respec-tire竹).MI.xl74I/HaeI.…取浓度脑组织总RNA(2g),分别经过5RT—PCR后.NOScDNA产率基本相同?具有良好的重复性.结果见图3所示.圈32恒量总RNART-PCR重复实验Fjg?3RT-PCRrepeatexperimentwithaconstant~Jnount.ftotalRNA(2ug)l,2,3-4,5:RT—PCRrepeattimesM:似174/Ha~I.2?2N0SmRNA在大鼠体内分布取正常Wistar大鼠小脑,心,肺,肾,肝组织,提取总RNA,应用RT-PC~,测定不同组织中NOSmRNA的分布,其总RNA用量均为2.0ug,其结果如图4所示.由图可l}{∞一.r.....mr....L.................._-畜●吾j墨lu.u0u芍fd2自言q孙lE3u1lx,&5i0.I.0}dlu】lf【山生理46卷看出,在所测组织中均有NOSmRNA分布mRNA的含量约为肾脏和心脏的5倍.其中以小脑为最高,肝脏最低;其小脑内NOS取107的平滑肌细胞和内皮细胞,提取总RNA,经RT—PCT测定NOSmRNA,其细胞总RNA为2g.结果如图4所示.由图可以看出,NOSmRNA不仅存在于内皮细胞,亦分布于平滑肌细胞中,内皮细胞NOSmRNA的含量较高于平滑肌细胞图4NOS基因在正常大鼠不同组织和培养细胞中的表选Fig.4ExpressionofNOSgeneinvarioustissuesandculturedcellsofnormalratby RT—PCRM:HX174/HaeI}H:Heart;B}Brain;P;Lung;E,EC:Endothelialcall;K:KJdney~L!Uver;S,SMC:Smoothmusclec~11.2.3自发性高血压大鼠NosmRNA的变化分别取SHR和WKY大鼠的小脑,肾,肝组织,提取总RNA,依前法测定NOSmRNA .其所测样品总RNA用量均为2.结果如图5所示,由圈可以看出,在所检测的组织中,SHR大鼠NOSmRNA均低于WKY正常大鼠,其中在小脑降低了39.在肾脏降低了55,在肝脏降低了88.分别取10T个培养的WKY和SHR主动脉平精肌细胞,提取总RNA,各取2,同样用RT-PCR检测NOSmRNA,结果如图5所示.由图亦可以看出,SHR大鼠平精肌细胞中NOSmRNA含量明显降低,约较WKY大鼠降低了62.由以上结果可以看出,在SHR大鼠,无论是平滑肌细胞还是小脑,肾脏,其NOS基因的转录均明显降低.2.4自发性高血压大鼠内皮依赖性血管舒张反应为了进一步鉴定SHR大鼠血管EDRF/NO的反应性.取6只SHR大鼠主动脉环进行离giJc05u'j.三nlJ|.;4期一氧化氨合成酶(NOS)基因表达的半定量检测及其运用35J团SHR口WKY图5NOS基因在sHR和WKY不同组织和细胞中的表达Fig.5ExpressionofNOSgeneinvarioustissuesandculturedcellsinSHRandWKYn一3,土sE;P<0.05,.'P<0.01.M:174/HaeISMC:SmoothmusclecellSc:SHRSMC}SL:SHRLung;SK{SHRKidney;SB:SHRBrain;We!WKYSMClWL:WKYLung;WK:WKYKidney'WB:WKYBrain-圈6乙酰胆碱诱导的SHR和WKY主动脉内皮依赖性舒张反应≤Fig-6Endothelium—dependentrelaxationevkedbyAChinaortafromSHRandWKY.n=6.~4-SE,P<0.05,"P<0.01.j0——0WKygroupI●——●跚Rgroup1——L-ARG+SHR.囊～体灌流实验,观察乙酰胆碱(ACh)内皮依赖性血管舒张反应,结果如图6所示.由图可以看出.SHR大鼠主动脉ACh所引起的血管内皮依赖性舒张反应明显低于WKy 大鼠,其㈣uIdI.iirJ0j△2EⅢl;=E生理46卷最大的舒张反应亦只有WKY大鼠的I/2.为了进一步验证SHR大鼠ACh内皮依赖性血管舒张反应降低的机制,本实验还将10mol/LL-ARG预先加入SHR大鼠主动脉环灌流槽中,以补充EDRF/NO的前体,10min后,再进行ACh舒张反应实验,结果如图6所示.由图可以看出,补充Ⅱ)F,NO的前体,可使SHR主动脉ACh内皮依赖性舒张反应恢复.这些实验结果说明,自发性高血压大鼠NOS基因转录和表达下降,内皮依赖性血管舒张反应降低.3讨论3.1mRNA的测定mRNA的测定是分子生物学研究中一个常用的方法,主要有斑点杂交,NorthernBlotting等几种方法].但是由于mRNA含量少,又极易降解,因此对于其含有极小量特异mRNA的组织和样品,测定较为困难为此,近年来发展了RNA—protoc-fiveassay和含内标化的RT—PCR定量测定mRNA的方法.RNA—protectiveassay 虽然灵敏,准确,但操作复杂,价格昂贵,不易普及].定量RT—PCR虽然简便,快速并能定量,但因含有一个"内标准"而易产生"管效应",从而抑制特异性RT—PCR反应,干扰mRNA 的测定].本工作参照Martin(1993)~所建立的RT-PCR定量测定p-肾上腺素能受体mRNA 的方法,建立了NOSmRNA的测定方法.这种方法不另设内标准,排除了"管效应",而应用["P3dC'FP直接掺入PCR扩增反应,这不仅可使小量mRNA通过RT—PCR得以扩增和放大,而且可以通过掺入的放射性强度,直接进行rnRNA的定量测定.这种方法具有明显的荆量一效应关系和良好的重复性.我们曾经应用NorthernBlotting方法,测定不同组织中NOSmRNA含量,结果发现需要4O一6O嵋总RNA,才可检测到太鼠小脑和肾中NOSmR-NA,在肝脏,肺,平滑肌细胞中即使应用再太剂量总RNA亦难以测定;而应用本文这种方法,只需0.25—2g总RNA,即可测出组织中所含的NOSmRNA.应该指出.应用这种方法时,对提取的总RNA定量必须十分准确.ODOD的比值必须在18以上,总RNA定量应多次测量.3.2NOSmRNA在体内分布关于NOSmRNA在组织中的分布已有报道Brcdt等(1991)应用大鼠脑NOSeDNA探针和NorthernBlotting分析,发现NOSmRNA只存在于脑内rIWilliam等(1992)应用牛内皮细胞NOSeDNA为探针和NorthernBlotting分析,发现NOS只分布于内皮细胞中0}从而提出NOSmRNA不是普遍存在的.在许多组织中很难测到NOSmRNA的存在,但是不同组织的NOSe.DNA具有高度同源性[JI应用NOS 生物测定的方法证明,N0s亦广泛分布于不同组织中口".因此我们设想,在一些组织中难以测定出NOSmRNA,主要是因为组织中NOS特异性的mRNA在总RNA中所占比例过少,测定方法不够灵敏所致.本工作应用快速,灵敏的定量RT-PCR方法,不仅测出了脑内和内皮细胞中NOSmRNA,亦测出平滑肌细胞和心脏,肾脏,肺,肝脏组织中NOSmRNA.提示:NOSmRNA在体内不同组织中是广泛存在的.这与生物检测的结果相一致.过去认为NOSmR—NA主要存在于内皮细胞和巨噬细胞,本工作证明了在平滑肌细胞中亦有NOS的高表达}最近Nunokawa等(】993)从平滑肌细胞中克隆到NOSeDNA:Ⅲ,说明平滑肌细胞和内皮细胞4期一氧化氮合成酶(NOS)基因表达的半定量检测及其运用353一样,亦是NOS基因转录和表达的场所之一.近年来的研究表明,NOS可分为结构型和诱导型两类,而大鼠脑NOS即属于结构型[t3;我们应用依据大鼠脑NOScDNA序列设计合成的PCR引物,检测出在脑,心,肾,肺,肝,血管内皮细胞和平滑肌细胞中都有NOSmRNA的表达提示,结构型NOS可能是不同组织中所共有的.关于NOS结构型与诱导型之间的相互关系及其组织特异性,还需进一步研究3.3NOS在高血压发病中的作用既往的研究证明,内皮细胞损伤,Ea~RF/NO生成障碍是高血压发病的一个重要因素口.我们的实验亦证明,SHR大鼠血管内皮依赖性舒张反应明显下降.但是,这些研究都是基于药理方面的实验或是间接测定NOS的结果.关于高血压时,NOS基因转录和表达的变化,迄今尚未见报道.我们首次测定了SHR 大鼠不同组织和平滑肌细胞中NOSmRNA的变化,发现SHR大鼠NOS基因转录和表达明显低于WKY大鼠NOS是EDRF/No生成的关键因素,NOS基因表达下降,可致EDRF/NO 生成下降,这可能是高血压发生和发展的又一个重要因素.关于高血压时NOS基因转录下降的机制目前尚不了解.现有一些实验证明,NOS 基因表达受许多生长园子,细胞园子的调节Its].因此SHR大鼠NOSmRNA下降,亦可能是继发于生长因子,细胞因子的变化,亦可能是基因结构的改变所致.我们的初步实验证明,应用NOScDNA探针对SHR大鼠NOS基因进行限制性长度多态性分析,发现SHR 大鼠NOS基因可能有多态性变化.参考文献[1]FrinC~-R.GandOanso~,nL(1993).Pdsinginterest_mnitricoxidesyntha~.T/B8,18(2), 35—36.[2]William,C.S.,Jeffrey,K.H.andCynil~,M.B.(1992).Molecularcloningandexpressionof aeDNAencodingendot~lialcellnitricoxidesymha~.,J.嘲.0.,2I1,15274—15276.[3]Brech-nS.-Hwang,P.andSnyde,S.H.(1991).Clonedandexpre~ednitricoxidete$ntlm~s ttu~-rurallyre穹embl鹪~ytoeaxrocnoP-450reductase.神,351,7l4—718.[4]Herman.W.andGooSer,D.(1977).hmmn0fIucenoeintheidentificationofdtfferer*ttattnamoothmugcleoe1lsinculture.脚.D妇H.朋啪H∞-18,52—54.[5]Booyse,F.M.,Sedlak,B.J.andRatelson,E.(1975).Ctlltttre0farterialend劬e1iaIcellslcharacterl-zat~onandgrowthofbovineaofticendothelJalceils.M帕.姗商靖∞..¨.925—939. 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人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒使用说明书
Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置
标准品稀释液：1.5ml×1瓶
酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）
【人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒组成：
封板膜:2片（48）/2片（96）
说明书:1份
密封袋:1个
标准品：2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存
样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存
显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存
终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮合成酶(NOS)水平。
用纯化的人一氧化氮合成酶(NOS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶(NOS)，再与HRP标记的一氧化氮合成酶(NOS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶(NOS)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮合成酶(NOS)浓度。
目的：本试剂盒用于测人血清，血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(NOS)的含量。
服务承诺：
供货期：款到发货。
工作时间内免费的技术咨询和指导。
请来电咨询
为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性(免费代测)。
保存条件及有效期：
试剂盒保存：2-8℃| 有效期：6个月
【人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒】样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备
用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
【人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒】注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好
控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
0.2IU/L - 6IU/L。