日本囊对虾apo-14基因的全克隆及序列分析

日本 囊 对 虾 ａ ｐ ｏ 一 １ ４基 因 的 全 克 隆 及 序 列 分 析
乔 莹， 王 军 ， 钟声平 ， 刘 洪涛 ， 毛 勇
（ 厦 门大学 海洋与地球学 院 ， 福建 厦门 ３ ６ １ ０ ０ ５ ）
摘 要 ： 以 日本 囊 对 虾 （ Ｍａ ｒ ｓ ｕ ｐ ｅ ｎ ａ ｅ ｕ ｓ ｊ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｃ ｕ ｓ ） 肝胰腺组 织为实 验材料 ， 提取 总 Ｒ Ｎ Ａ， 通过 ３ 以及 ５ 一 Ｒ Ａ Ｃ Ｅ
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材料 以鲜活 的 日本 囊对 虾肝胰 脏组织 为 实验材 料 ， 提取 总 Ｒ Ｎ Ａ。反 应 中用 的 ｄ Ｎ Ｔ Ｐ、 Ｐ Ｃ Ｒ缓 冲液 、
Ｔ ａ ｑ酶 、 限制性 内切 酶 、 Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｒ ｕ ｌ ｅ ｒ Ｄ Ｎ Ａ Ｍ ｉ ｘ ｔ ｕ ｒ ｅ ｌ ａ ｄ ｄ ｅ ｒ 、 Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 试 剂 和琼 脂 糖均 购 自 ＭＢ Ｉ Ｆ ｅ ｒ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ公 司 ； 反
中图 分 类 号 ： Ｑ ７ ８ １ 文献标志码 ： Ａ
载脂蛋 白（ ａ ｐ ｏ ｌ ｉ ｐ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ） 是 动物 体 内脂质 的主要 载体 ， 除 了在血 脂 的运输 中起重 要 作用 外 ， 还 可 以作
为 某些 生物 酶 的辅 助 因子 、 配 体结合 受 体 蛋 白和 脂 质转 运 载 体 ， 以调 节 生 物体 组 织 内脂 蛋 白的代 谢 和 吸 收ｌ ｌ 。载脂 蛋 白基 因编码 的 １ ４ ｋ Ｄ ａ载脂蛋 白作 为高 密度 脂 蛋 白 Ｈ Ｄ Ｌ的重 要组 成 成 分 ， 最早 是 在 日本
鳗鲡（ Ａ ｎ ｇ ｕ ｉ ｌ ｌ ａｊ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ ） 中鉴定 获得 的 。随后 ， 在鲤 （ Ｃ ｙ ｐ ｒ ｉ ｎ ｕ ｓ ｃ ａ ｒ ｐ ｉ ｏ ） 、 河豚 （ Ｔ ａ ｋ ｆ ｉ ｕ ｇ ｕ ｒ ｕ ｂ ｒ ｉ ｐ ） 、 橙 点石 斑
鱼（ Ｅ ｐ ｉ ｎ ｅ ｐ ｈ ｅ ｌ ｕ ｓ ｂ ｌ ｅ ｅ ｋ ｅ ｒ ｉ ） 、 草鱼 （ Ｃ ｔ ｅ ｎ ｏ ｐ ｈ ａ ｒ ｙ ｎ ｇ ｏ ｄ ｏ ｎ ｉ ｄ ｅ ｌ ｌ ａ ） 以及 黑头 呆鱼 （ Ｐ ｉ ｍ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ｅ ｓ ｐ ｒ ｏ ｍ ｅ ｌ ａ ｓ ） 等１ １ 种 硬骨鱼 中都 有发 现 Ｊ 。其 主要 作用 是参 与鱼类 各个 组织 的代谢 ， 特 别是 参 与鱼 的消化 器 官 内脂质 运输 与 代谢 作
的发育 、 增 强应激 性 － ７ ］ 以及幼 虾的 生长 和 蜕 皮过 程 均 有 显 著 的影 响 Ｊ 。因此 ， 清 楚 了解对 虾 脂 质 代谢 和运输 过程 ， 对于 Ｅ ｔ 本囊 对 虾 育种 、 品种 改 良以及 养 殖 过 程 中饲养 成本 的控 制 均 具 有 重 要 的 指 导 意义 。
Baidu Nhomakorabea
转 录试 剂 盒 ， 胶 回收试 剂盒 购 自 Ｔ ａ Ｋ ａ Ｒ ａ公 司。
１ ． ２ ＲＮ Ａ提取
取０ ． ５ ｇ对虾 肝胰 脏置 于预冷 的玻璃 匀浆 器 中 ， 加入 ３ ０ ０ Ｌ的 Ｔ ｉ ｆ ｚ ｏ ｌ 进行组 织 匀浆 ； 再
加入 ３ ０ ０ ｔ ｘ Ｌ的氯 仿均 匀混合 ， ４℃ ３ ２ ０ ０ ０ ｒ・ ｍ ｉ ｎ 离心 １ ５ ｍ ｉ ｎ ； 小心 吸取 上 清液 ， 移 人 离心 管 中 ， 再 加入 相 同体 积预 冷 的异丙醇 ， ４℃ ３ ２ ０ ０ ｒ ・ ｍ ｉ ｎ 离心 １ ５ ｍ ｉ ｎ ； 移去 上清 液 ， 用１ ｍＬ ＝ ７ ０ ％ 的乙醇 冲洗沉 淀 ２ 次， 加入 适量 经 Ｄ Ｅ Ｐ Ｃ （ 焦碳 酸 二 乙酯 ） 处理 过 的蒸 馏水 溶解 ， 一 ８ ０℃保存 。
用， 维持脂 质代谢 的稳 态与 平衡 。 日本囊 对虾 （ Ｍａ ｒ ｓ ｕ ｐ ｅ ｎ ａ ｅ ｕ ｓ ｊ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｃ ｕ ｓ ） 广泛 分布 于印度 、 澳 大利 亚 、 红海、 坦桑 尼 亚 、 菲律 宾 及 日本 的东 南沿海 海域 ， 是我 国重要 的经济养 殖虾类 。已有研 究表 明 ， 富含 脂类 的食 物 对 虾类 的 体质 量增 长 Ｊ 、 性 腺
基 因克隆技术 ， 首次在 日本囊对虾 中克隆到载脂蛋 白 ａ ｐ ｏ ｌ ｉ ｐ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ 一 １ ４ （ ａ ｐ ｏ 一 １ ４ ） 基 因的全长序列 ， 包含完 整的 Ｏ Ｒ Ｆ以及 ３ 一 Ｕ Ｔ Ｒ和 ５ Ｕ Ｔ Ｒ。 日本囊 对虾 ａ ｐ ｏ ． １ ４ ｅ Ｄ Ｎ Ａ序列 全长 为 ７ ８ ４ ｂ ｐ ， 其中 Ｏ Ｒ Ｆ长 度为 ４ ２ ０ ｂ ｐ ， 编码 １ ３ ９个氨基酸。对虾 ａ ｐ ｏ 一 １ ４氨基酸序列与其他鱼类 ａ ｐ ｏ 一 １ ４氨基酸序列有较 高的相似性 。 关键词 ：日本囊对虾 ； 载脂蛋 白 ； ａ ｐ ｏ 一 １ ４ ； 克 隆； 序列 分析
目前 ， 对 于虾 类养 殖过程 中的脂类 营养 代 谢 以及 脂 类运 输 途 径 的研 究 较 少 。笔 者 通 过基 因克 隆 ， 首 次在
虾类体内得到了载脂蛋 白ａ ｐ ｏ ｌ ｉ ｐ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ － １ ４ （ ａ ｐ ｏ ． １ ４ ） 基因的全长序列 ， 并与其他物种的蛋 白序列进行了比 对 分析 ， 旨在 为深入 研究该 基 因 的具 体功 能奠定 基础 。
第 ４卷 第 １ 期
２ ０ １ ３年 ３月
热 带 生 物 学 报
Ｊ ｏＵＲＮＡＬ ｏＦ ＴＲｏＰＩ ＣＡＬ ＢＩ ｏＬｏＧＹ
Ｖｏ ｌ Ｊ ４ Ｎｏ ．１ Ｍａ ｔ ． ２ ０ １ ３
文章编号 ： １ ６ ７ ４— ７ ０ ５ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １ — ０ ０ １ ７— ０ ８