罗氏沼虾原肌球蛋白基因的克隆表达及变应原性鉴定
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ＩＥ 识 别，同时又保 留了相 关 的 Ｔ 细胞抗原决定簇 ， ｇ
大 类食物 引起 的． 这 ８ 在 大类容易 引起 过敏反应 的食 物 中，虾类 及其 制 品是 很重 要 的一 类口 １ ～，因此 研 究 虾 的致敏反应 具有重要 的实用价 值．目前，国外许 多
仍然具 有刺激 Ｔ细胞 的能力，从而在减少 发生不 良反
摘要：通过 Ｎ Ｂ 查找到罗氏沼虾原肌球蛋白的ｍＲ Ａ 根据其 Ｃ Ｓ ＣＩ Ｎ ， Ｄ 区域设计特异引物， 通过反转录聚合酶
链 反 应 （ＴＰ Ｒ 克隆 出 目的基 因 片段 ，测序 后 将 该 片段 克 隆 到原 核 表 达载 体 ｐ Ｔ２ ａ 上，转 化 到 Ｅ ｏｉ Ｒ －Ｃ ） Ｅ －８ ．ｃ ｌ ＢＬ ＩＤ ３和 Ｅ ｃ ｌＲ ｓｔ 后 ，经异 丙基一 ． 一 代乳 糖苷 （ Ｔ 诱导 表达，用 Ｎｉ ２ （ Ｅ ） ． ｏｉ ｏ ａ ａ ｔ Ｊ 硫 Ｄ Ｉ Ｇ） Ｐ 亲和 层析 柱对重组 变应原 进行 纯化 ．采用 免疫 印迹检 测其与 对虾 过敏患 者血 清的 ＩＥ结合 活性 ．对罗 氏沼 虾变应 原进行 了表 达 、鉴定 ｇ
第 ３ 卷 第 ４期 ６
２１ ０ ２Biblioteka Baidu ７月
江西 师 范 大 学 学 报 （ 自然 科 学 版）
Ｊｕｎｌ ｆｉ ｇｉ ｏｍ ｌ ｎ ｅ ｉ （ ａ ｒｌ ｃ ｎｅ ｏｒａ ｏ ａ ｘ Ｎ ｒ ａＵ ｉ ｒｔ Ｎ ｔ ａＳｉ ｃ） Ｊｎ ｖ ｓｙ ｕ ｅ
、０ ．３ ，１ ６Ｎ ｏ． ４ Ｊ ．２０１ ｕ１ ２
实验 及皮 肤 实验 结果 显 示，大部 分 的基 因重 组过 敏 原 的过 敏原 活性 与 天然 过敏 原 提取 液相 当，而 天然
过敏 原 即使达 到标 准化 也会 因为含有 多种 非有 效成
分 而影 响 诊 断和 疗效 ．此外 ，利 用 基 因工 程 技术 可
以减 少重组 过敏原与 ＩＥ结合 的抗 原表位，从而不被 ｇ
肌 球蛋 白［１．国 内许多 学者也对 我 国的虾 、蟹原 肌 ７４ －］ 球 蛋 白进行 了克 隆研 究【－ ］ １１．而对 于 罗 氏沼虾 原 肌 ５６ 球 蛋 白基 因克 隆方 面的研究 国内鲜 见报 道． 罗 氏沼 虾（ ｃｏ ｒｃ ｉｍ ｒｓｎ ｅ ｉ 原产 于印 Ｍａ ｒｂａ ｈｕ ｏｅ ｂｒ ｉ ｇ） 度 太 平洋 地 区 ，生 活 在淡 水或 者 咸淡 水 水 域，现 主 要 在 我 国南 方 推广 养殖 ，尤 以广 东发 展 最快 ．因此 ，
及 纯化 ，成功 地获 得 了具 有变 应原 活性 的重组 罗 氏沼虾 原肌球 蛋 白，为 罗 氏沼虾过 敏性 疾病 的诊 断 、治疗 奠 定 了基础 ．
关键 词 ：罗 氏沼 虾；原肌球 蛋 白： 变应 原：克隆 和表 达
中图分 类号： ８ Ｑ７
文献 标志码 ： Ａ
外源 毒 性 物质 和病 原 微 生物 污 染，而 且， 目前体 外
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
罗 氏沼 虾购 自广东省 深圳 市南 山市场 ； ＮＡ 提 Ｒ 取 试 剂 盒 （ ｉ ｅ 公 司） Ｑａ ｎ ｇ ；ＡＭＶ Ｆｒ ｔ ｎ Ｄ ｉ ｔＳｒ ｄ ｃ ＮＡ ｓ ａ
Ｓ ｎｈ ｓ ｓ ｔ 国 Ｂ Ｉ 司） ｙ ｔｅ ｉＫｉ美 （ Ｂ公 ；质粒小 量抽提试 剂 盒
和 Ｄ Ａ 胶 回 收 试 剂 盒 （ 国 Ｏ ＧＡ 公 司 ） Ｎ 美 ＭＥ ；
本 实 验选 择 在广 东 比较普 遍 的罗 氏沼虾 ，并 对其 原
肌 球 蛋 白基 因进 行克 隆表 达 ，获得 纯 度较 高 的重 组 罗 氏沼虾 原 肌球 蛋 白变应 原 ．重组 过 敏原 应 用于 诊
０ 引 言
近 年来 食 品安 全 问题越 来 越 突 出，食 物过 敏 已 经 引起 了人们 的普遍关 注【 】 ９ ５年世 界粮农 组织 ｌ ．１９ （Ａ 报 告，９ ％以上 的食物 过敏是 由鸡 蛋 、牛奶 、 Ｆ Ｏ） ０
鱼 、贝类 海 产 品 、大豆 、花生 、坚 果 类 和小 麦 等 ８
应 的 同时 又不 影 响 治疗 效 果 ．因此 ，获取 过 敏 原 的 ｃ Ａ，并 异 源 表 达 出有 功 能 的重 组 过 敏 原 被认 为 ＤＮ 是诊 断和 治疗过 敏性疾 病 的 良好 的有效 手段¨ ． 引
学者 对其 当地 甲壳类进行调查 、 抗原分 析和纯化 等工 作 ，发 现 虾类 主要 过敏 原是 存 在 于其 肌 肉组织 的原
ｐ Ｔ２ ａ＋ 载 体 （ 国 Ｎｏ ａ ｅ 公 司 ） 肠 杆 菌 Ｅ －８ （） 美 ｖｇ ｎ ；大
Ｅｃ ｌＴ ｐ 、 ． ｌＢ ２ （ ３ 、 ． ｌＲ ｓｔ （ 实 ． ｉ ｏ Ｅ ｃ ｉ Ｌ ＤＥ ） Ｅｃ ｉ ｏ ａ ａ本 ｏ ｌ ０ ｏ １ ｏ ｔ
断 和治疗 过 敏性 疾病 有 着极 大 的优 势，它既 可保 持
极 高 的纯 度 ，没 有 杂 蛋 白，容 易标 准 化 ，以及 没 有
验 室保存 ） 白电泳 预染 Ｐｏｅｎ Ｍａ ｅ（ 国 ＭＢ ；蛋 ｒｔｉ ｋｒ 美 Ｉ
Ｆ ｍｅｔｓ 司） ｅ ｎａ 公 ；内切 酶及其 他试 剂均 为 Ｔ ｋｒ 公 司 ａ ａａ
收 稿 日期 ：２ ｌ一４ １ ０ ２Ｏ —０
基 金 项 目：国 家 自然 科 学 基 金 （ １０ ２ ０ １ ７ ９ ０，深 圳 市 深 港 创 新 圈 ｉ ３ １ １ ８ ，８ ２ １ ５ ） ￣ ｆＷ２ １ ０ ０和 深圳 大学基 础研究 课题 （ｏ １资助项 目． Ｓ ０ １ １） ｌ０ ２ ｌ０ ） １
文章 编号 ： ０ ０５ ６ （０ ２０ —４ ５０ １０ —８２２ １）４０ ２ —６
罗 氏沼 虾原 肌球 蛋 白基 因的克隆表 达及变 应原 性鉴定
罗伟 芝，符春 荣，邬 玉 兰，陈献雄 ，刘 志刚，黄 海珍
（ 圳 大 学过 敏 反 应 与 免 疫 学研 究 所 ，广 东 深圳 ５ ８ ０ ） 深 １０ ０
大 类食物 引起 的． 这 ８ 在 大类容易 引起 过敏反应 的食 物 中，虾类 及其 制 品是 很重 要 的一 类口 １ ～，因此 研 究 虾 的致敏反应 具有重要 的实用价 值．目前，国外许 多
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摘要：通过 Ｎ Ｂ 查找到罗氏沼虾原肌球蛋白的ｍＲ Ａ 根据其 Ｃ Ｓ ＣＩ Ｎ ， Ｄ 区域设计特异引物， 通过反转录聚合酶
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第 ３ 卷 第 ４期 ６
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江西 师 范 大 学 学 报 （ 自然 科 学 版）
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、０ ．３ ，１ ６Ｎ ｏ． ４ Ｊ ．２０１ ｕ１ ２
实验 及皮 肤 实验 结果 显 示，大部 分 的基 因重 组过 敏 原 的过 敏原 活性 与 天然 过敏 原 提取 液相 当，而 天然
过敏 原 即使达 到标 准化 也会 因为含有 多种 非有 效成
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及 纯化 ，成功 地获 得 了具 有变 应原 活性 的重组 罗 氏沼虾 原肌球 蛋 白，为 罗 氏沼虾过 敏性 疾病 的诊 断 、治疗 奠 定 了基础 ．
关键 词 ：罗 氏沼 虾；原肌球 蛋 白： 变应 原：克隆 和表 达
中图分 类号： ８ Ｑ７
文献 标志码 ： Ａ
外源 毒 性 物质 和病 原 微 生物 污 染，而 且， 目前体 外
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
罗 氏沼 虾购 自广东省 深圳 市南 山市场 ； ＮＡ 提 Ｒ 取 试 剂 盒 （ ｉ ｅ 公 司） Ｑａ ｎ ｇ ；ＡＭＶ Ｆｒ ｔ ｎ Ｄ ｉ ｔＳｒ ｄ ｃ ＮＡ ｓ ａ
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０ 引 言
近 年来 食 品安 全 问题越 来 越 突 出，食 物过 敏 已 经 引起 了人们 的普遍关 注【 】 ９ ５年世 界粮农 组织 ｌ ．１９ （Ａ 报 告，９ ％以上 的食物 过敏是 由鸡 蛋 、牛奶 、 Ｆ Ｏ） ０
鱼 、贝类 海 产 品 、大豆 、花生 、坚 果 类 和小 麦 等 ８
应 的 同时 又不 影 响 治疗 效 果 ．因此 ，获取 过 敏 原 的 ｃ Ａ，并 异 源 表 达 出有 功 能 的重 组 过 敏 原 被认 为 ＤＮ 是诊 断和 治疗过 敏性疾 病 的 良好 的有效 手段¨ ． 引
学者 对其 当地 甲壳类进行调查 、 抗原分 析和纯化 等工 作 ，发 现 虾类 主要 过敏 原是 存 在 于其 肌 肉组织 的原
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断 和治疗 过 敏性 疾病 有 着极 大 的优 势，它既 可保 持
极 高 的纯 度 ，没 有 杂 蛋 白，容 易标 准 化 ，以及 没 有
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Ｆ ｍｅｔｓ 司） ｅ ｎａ 公 ；内切 酶及其 他试 剂均 为 Ｔ ｋｒ 公 司 ａ ａａ
收 稿 日期 ：２ ｌ一４ １ ０ ２Ｏ —０
基 金 项 目：国 家 自然 科 学 基 金 （ １０ ２ ０ １ ７ ９ ０，深 圳 市 深 港 创 新 圈 ｉ ３ １ １ ８ ，８ ２ １ ５ ） ￣ ｆＷ２ １ ０ ０和 深圳 大学基 础研究 课题 （ｏ １资助项 目． Ｓ ０ １ １） ｌ０ ２ ｌ０ ） １
文章 编号 ： ０ ０５ ６ （０ ２０ —４ ５０ １０ —８２２ １）４０ ２ —６
罗 氏沼 虾原 肌球 蛋 白基 因的克隆表 达及变 应原 性鉴定
罗伟 芝，符春 荣，邬 玉 兰，陈献雄 ，刘 志刚，黄 海珍
（ 圳 大 学过 敏 反 应 与 免 疫 学研 究 所 ，广 东 深圳 ５ ８ ０ ） 深 １０ ０