三角帆蚌热休克蛋白60基因克隆及其表达分析
热休克蛋白60基因定点诱变导致其在细胞内定位的改变
热休克蛋白60基因定点诱变导致其在细胞内定位的改变王银;游丽琴;李云鸿;滕鹏;成文静;张玉梅;苗珍花;蒲静;马娇;张楠【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2011(033)007【摘要】目的研究将热休克蛋白60(HSP60)蛋白序列中第70位的丝氨酸(serine)突变为丙氨酸(alanine)后,HSP60在细胞内定位的改变.方法将PrC/CMV -HSP60P1重组质粒中HSP60P1编码第70位丝氨酸的碱基定点诱变为编码丙氨酸的碱基序列,转染至小胶质细胞BV -2细胞株中表达.细胞经10h缺氧处理后,裂解细胞,应用差速离心方法分离细胞膜、细胞质和线粒体,应用Western- blot方法检测各细胞器中HSP60的含量.结果在转染未诱变PrC/CMV - HSP60P1质粒的细胞中,正常情况下,HSP60大部分分布在线粒体,少部分在胞浆,细胞膜中未见表达；缺氧刺激后,HSP60在细胞膜、胞浆和线粒体中均有表达；然而70位丝氨酸突变为丙氨酸后,只观察到HSP60在胞浆和线粒体中的表达,而在细胞膜上未见表达.结论作为磷酸化位点的Serine70对HSP60在细胞内的定位具有关键作用.【总页数】4页(P609-611,618)【作者】王银;游丽琴;李云鸿;滕鹏;成文静;张玉梅;苗珍花;蒲静;马娇;张楠【作者单位】宁夏医科大学科学技术中心,银川750004;宁夏医科大学基础医学院神经生物系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004;宁夏医科大学科学技术中心,银川750004;宁夏医科大学基础医学院神经生物系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院神经生物系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004【正文语种】中文【中图分类】R345.05【相关文献】1.pEGFP-HuR真核表达载体的构建及热休克刺激后细胞内定位的改变 [J], 于文燕;艾斯克·吐拉洪;周宁;买买提祖农·买苏尔;罗海华;张传丽;孙宏卫;孙湛;马小娟2.缺氧缺血新生鼠脑组织谷氨酸及脑细胞内钙改变和降钙素基因相关肽的保护作用[J], 唐兰芬;王优;黄宇戈;黄秀兰;侯敢3.科学家揭示人类基因组“暗物质”——可帮助定位导致疾病的基因突变 [J],4.人体细胞内线粒体基因变异可导致衰老 [J], 巴木;文仪5.应力导致的细胞内信号转导和基因表达变化 [J], 尚娟芳;王远亮;唐丽灵;牛旭锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三角帆蚌钙网蛋白基因cDNA的全长克隆与表达分析
三角帆蚌钙网蛋白基因cDNA的全长克隆与表达分析舒妙安;胡杭娇;陆晶莹;徐宾朋;王岩;刘广绪;郭晓令【期刊名称】《水生生物学报》【年(卷),期】2013(000)006【摘要】采用同源克隆策略和RACE技术,从三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)外套膜组织中成功克隆得到钙网蛋白(Calreticulin, CRT)基因的全长cDNA序列,共1838 bp,开放阅读框为1257 bp,编码418个氨基酸,5′端非编码区为75 bp,3′端非编码区为506 bp,基因序列提交GenBank的登录号为JX416227。
生物信息学分析表明,三角帆蚌钙网蛋白基因具有一段信号肽序列、两条典型的钙网蛋白家族标签序列 KHEQNIDCGGGY和IMFGPDICG、三个保守的 N-、P-和 C-端功能域及内质网前导序列 HDEL。
NJ 法系统进化分析显示三角帆蚌首先与海洋双壳类紧密聚在一起,且与蚯蚓等环节动物亲缘关系较近,聚为一支,然后依次与虾类、昆虫、鱼类、两栖类、哺乳类聚在一起。
经荧光定量 PCR 检测,钙网蛋白基因在三角帆蚌的外套膜、闭壳肌、斧足、鳃、肝脏、性腺、心脏、肠等8个组织中均有表达,其中在外套膜、鳃和斧足等与贝类钙代谢相关的组织中表达量较高预示其可能参与三角帆蚌的钙代谢。
不同 Ca2+浓度处理试验的结果表明,随着水体中 Ca2+浓度逐渐升高,三角帆蚌钙网蛋白基因在外套膜中的表达水平呈先上升后下降的趋势,并在60 mg/L 时达到最高峰,表明适宜的 Ca2+浓度可促进钙网蛋白基因表达,而过高的Ca2+浓度则会抑制其表达。
同时在60 mg/L Ca2+浓度条件下,对三角帆蚌外套膜进行不同时间的表达试验,结果表明钙网蛋白基因的表达量随时间推移先上升,并于48h达到最大表达量,而后逐渐下降。
上述结果为进一步深入研究钙网蛋白基因的功能及其调控机理奠定基础。
%The full-length cDNA sequence of CalreticulinCRT gene was isolated from the mantle of Hyriopsis cumingii by using homology cloning strategy and SMART RACE technique. The entire CRT cDNA was 1838 bp, containing a 1257 bp complete open reading frame which encoding a protein with 418 amino acids, a 75 bp 5′UTR, and a 506 bp 3′UTR (GenBank accession number is JX416227). Bioinformatics analysis indicated that the calreticulin gene had a sig-nal peptide, two typical calreticulin family labels (KHEQNIDCGGGY and MFGPDICG), three conserved domains (N-, P-, and C-), and the endoplasmic reticulum retrieval sequence HDEL. Phylogenetic analysis indicated that the CRT gene of H. cumingii was closely related to seawater bivalves, followed by that of annelidas and then fish, amphibians, and mammals. Real-time PCR revealed that CRT gene was ubiquitously expressed in all tested tissues, but far more abun-dant in tissues that closely relating to calcium metabolism such as mantle, gill and foot. This result indicates an intrin-sical relationship between CRT gene and calcium metabolism in H. cumingii. When exposed to a serie of increasing Ca2+, the mRNA expression of CRT gene in mantle was shown to be bell-shaped, ascending when Ca2+concentration was less than 60 mg/L and descending whenCa2+concentration was greater than 60 mg/L. The result that CRT gene expression reached its maxium when exposed to 60 mg/L Ca2+, suggesting appropriate Ca2+concentration would stimulate the ex-pression of CRT gene. Moreover, as the Ca2+(60 mg/L) exposure time increased, the CRT gene expression in mantle was shown to increase initially, reach its peak at 48h, and then decrease subsequently. The resultsof present study will provid useful information for further studies on function and regulation mechanism of CRT gene.【总页数】8页(P999-1006)【作者】舒妙安;胡杭娇;陆晶莹;徐宾朋;王岩;刘广绪;郭晓令【作者单位】浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058【正文语种】中文【中图分类】Q781【相关文献】1.三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆与表达分析 [J], 李文娟;李倩;祁晓翔;尚朝;周子睿;施志仪2.三角帆蚌肌球蛋白必需轻链基因(MELC)的cDNA全长克隆与表达分析 [J], 舒妙安;胡杭娇;陆晶莹;徐宾朋;王岩;刘广绪;郭晓令3.三角帆蚌HcCUBDC基因cDNA的全长克隆与表达分析 [J], 罗红瑞;白志毅;刘晓军;李清清;董绍建;曾仕梅;李家乐4.三角帆蚌钙网蛋白基因cDNA的分子特征与表达分析 [J], 夏秀琳;汪桂玲;白志毅;李家乐5.一种三角帆蚌肌浆网Ca2+-ATP酶基因cDNA的全长克隆与表达分析 [J], 张爱菊;刘士力;刘金殿;张根芳;周志明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三角帆蚌精氨酸酶基因的cDNA克隆与组织表达分析
２ １ ０ １年 ７月
水 生 生 物 学 报
ＡＣＴ Ａ ＨＹＤＲＯＢ ＯＬ Ｉ ＯＧＩ Ｉ ＣＡ ＣＡ Ｓ ＮＩ
Ｖｏ１ ．３５，Ｎ Ｏ． ４
Ｊ ｙ， ２ ０ ｌ１ ｕｌ
Ｄ０Ｉ ０ ３ ２ ／ Ｐ Ｊ １ ３ ． ０ １０ ５ ６ ：１ ．７ ４ Ｓ ．．０ ５ ２ ｌ ． ０ ９
中图分 类号： ８ Ｑ７ １ 文献标 识码 ： Ａ 文 章编号 ： ０ ０３ ０ （０ ０ ． ５ ６０ １０ —２ ７２ １）４０ ９ ．８ １
精 氨酸 酶，又 叫做 Ｌ精 氨 酸尿素 水解 酶，其分 ．
用 ＿ ，而且 对 急性非 淋 巴 白血 病 细胞生 长具 有抑 制 ｌ
布广泛 ，在 细 菌 、酵母 、植 物 、动物 中都 存在 。精
１ 材料与 方法
１１ 实验动 物及处 理 ．
精氨酸酶缺陷症，如发 育不 良， 神经系统 缺陷等 ［ Ｊ 。 卜
精 氨酸 酶通 过催 化水 解精 氨 酸，对肿 瘤细 胞进 行 营 养剥夺 ，且 对正 常组 织 影 响较 小，因此 被 认 为是一 种 良好 的抗 肿瘤 药物 。许 多实验证 明精 氨酸 酶能 显 著抑制 肿瘤 细胞 的分 裂 【 ，精氨 酸酶不 但对 人急性 ｌ 刚 早 幼 粒 白血 病原 代 细 胞 有 抑 制 生 长 和 引 导 分 化 作
摘 要 ：精氨 酸酶 （ ｇｎ ｓ，Ａｒ） Ａｒｉａｅ ｇ是生 物 体尿 素循 环 当 中一种 标 志性 的酶 类，它不 但 与生 物体 许 多疾 病相 关， 而 且是 目前用 于治疗 肿瘤 和癌症 的一种 重要 的工具酶 ＤＮＡ末 端快速扩 增（ ａｉ ｍｐｉ ｃｔ ｎ ｏ Ｄ ｎ ｓ ＡＣ ） 术获得 三角帆蚌 精氨 酸酶基 因的全 长 Ｒ ｐｄ ａ ｌｉａ ｏ ｆｅ ＮＡ ｅｄ，ｋ Ｅ技 ｆ ｉ ｅ ＮＡ序列 。生 物信息学 方法分 析表 明精氨 酸酶基 因 ｅ ＮＡ序列 长 １ ２ ｐ Ｄ Ｄ ７ ０ｂ ，开放 阅读 框（５ １７ ）０ ８ｂ ， ６ — ０ ２ １０ ｐ 编码 ３ ５ ３ 个氨基酸， 端 非编码区为 ６ ｐ ３ ５ ４ｂ ， 端非编码 区为 ６ ８ｂ ，软件推测其编码蛋 白相对分子量为 ３ ．１ Ｄ。 ４ ｐ ６８ ｋ 研 究采 用实 时荧 光定 量 Ｐ Ｒ ｑ ａ ｔ ａｉｅ ｒａ— ｍｅ Ｐ ，ｑ ＣＲ 方 法分 析该 基 因在不 同组织 中的表达 规律 ， ｃ （ｕ ｎｉ ｔ ｅ ｌ ｉ ＣＲ Ｐ ） ｔｖ ｔ 结 果表 明，该基 因在 肝脏 、胃、肠 、鳃 、心脏 、外套 膜 、斧足共 ７个组织 中都 有表达 ，但 主要集 中在肝 脏 、 胃和肠 消化 器 官 中表 达 。这可 能说 明低等 的无 脊椎 动物 三角 帆蚌 的精氨 酸酶兼 具有 Ｉ 和 Ⅱ型精 氨酸酶 的 型 特征 和功能，既可 以参与尿 素循环 ，又可 以在生 理和病 理过程 中发挥重 要作用 ，但还 需进一 步验证 。 关键 词 ：三 角帆蚌 ；精氨 酸酶 ； Ｃ ；实时荧 光定量 Ｐ Ｒ；组织 表达 ＲＡ ＮＡ克 隆与组 织表达分 析 Ｄ
三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆与表达分析
三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆与表达分析李文娟;李倩;祁晓翔;尚朝;周子睿;施志仪【摘要】[目的]研究三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化.[方法]通过RACE技术,以我国重要的淡水珍珠贝——三角帆蚌为研究客体,克隆了CaM的cDNA全长,并通过Real-Time Q-PCR技术分析了该基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化.[结果]三角帆蚌CaM基因cDNA全长659bp,包括70 bp的5'UTR,299 bp的3'UTR和447 bp的ORF,编码149个氨基酸,预测其分子量为16.8 kDa,等电点为4.14.cDNA序列比对信息表明三角帆蚌与池蝶蚌、合浦珠母贝间均具有57％的相似度,而其蛋白具有高度的保守性,除斑马鱼外,各生物CaM相似率达97％.定量数据表明,CaM基因广泛表达于三角帆蚌各组织,外套膜内膜与腮中表达量显著升高(P＜0.05),其次是外套膜外膜和内脏团组织.插核育珠能增加该基因在各组织的表达,特别是在外套膜外膜和鳃组织中,育珠蚌该基因的表达显著高于非育珠蚌(P＜0.05).此外,水体Ca2+浓度的增大对CaM基因表达有显著的影响,外套膜内膜该基因的表达随Ca2+浓度升高而增加,而外套膜外膜1.25 mmol/L Ca2+浓度下该基因的表达水平显著高于0.50 mmol/L、3.00 mmol/L 组(P＜0.05).[结论]为进一步深入研究钙调蛋白基因的在珍珠生长过程中的功能及其调控机理奠定了分子基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)022【总页数】5页(P7310-7314)【关键词】三角帆蚌;CaM;序列克隆;基因表达【作者】李文娟;李倩;祁晓翔;尚朝;周子睿;施志仪【作者单位】上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海市高校水产养殖学E-研究院,上海海洋大学,上海201306【正文语种】中文【中图分类】S188钙调蛋白(Calmodulin protein，CaM)是存在于生物体内含量最丰富的钙离子结合蛋白，广泛存在于所有真核细胞中，参与细胞钙代谢、离子转运、细胞分泌、细胞增殖与分化、基因表达、防御反应等重要生理过程的调节［1－2］。
三角帆蚌一种新型SOD基因的克隆与表达分析
来水 。 每箱放水 Ｉ Ｏ Ｏ Ｌ （ 水温 ２ ０ ± ２ ℃） ． 设 对 照 组 和 处理组 ， 每组 ３个 平 行 ． 处 理组 中 。 每 只蚌用 注射 器 从 闭壳 肌 注 射 １ ０ ０ ￣ Ｌ嗜水 气 单 胞 菌 悬 液 （ ５ ｘ １ ０ ｃ ｆ ｕ ／ ｍ Ｌ ） ， 对 照组 注射 等量 的 ０ ． ６ ５ ％Ｎ ａ Ｃ １ ＿ １ ．
三 角帆 蚌 一 种 新 型 Ｓ Ｏ Ｄ基 因 的克 隆 与表 达 分析
杨 受保 林钰如 钱 瑶璇 吕思 思 陆 赕 王 恒
生命科学学 院， 浙江 绍兴 ３ １ ２ ０ ０ ０ ） （ 绍兴 文理 学院 摘
要： 采用 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ和 Ｒ ＡＣ Ｅ技术 ， 从三角帆蚌 （ Ｈ ｙ ｒ ｉ ｏ ｐ ｓ ｉ ｓ ｃ ｕ ｍ ｉ ｎ ｇ ｉ ｉ ） 中克隆到了一个新型超氧 化物歧化 酶基 因（ 命名
０ 引 言
超氧化物歧化酶 （ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｏ ｘ ｉ ｄ ｅ ｄ ｉ ｓ ｍ ｕ ｔ ａ ｓ ｅ ， Ｅ Ｃ １ ． １ ５ ． １ ． １ ， Ｓ Ｏ Ｄ） 是在 从 细 菌 到 哺 乳 动 物 中均 广 泛 存 在 的一种 金属 酶 ． 能催 化 超 氧 阴离 子 转 变 为 Ｈ ， ０ ， 和０ ，的歧 化 反应 （ ２ ０ 一 ＋ ２ Ｈ 一Ｈ ０ ＋ Ｏ ） ， 维 持机 体内 Ｏ ， 一 等 活性 氧 （ Ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｏ ｘ ｙ ｇ ｅ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｅ ｓ ， Ｒ Ｏ Ｓ ） 产生 与消 除 的动 态 平 衡 ［ １ － ２ ］ 。 在抗 氧化 、 抗 辐 射 损
为Ｈ ｃ Ｓ Ｏ Ｄ ｎ ） ． Ｈ ｃ Ｓ Ｏ Ｄ ｎ基 因的长度为 １ ５ ７ ５ ｂ ｐ ， 包括一个长 ８ ０ ４ ｂ ｐ的开放阅读框 ， 编码 ２ ６ ７个氨基酸 的蛋 白 ， 并含有一个保守 的Ｃ ｕ — Ｚ ｎ — Ｓ Ｏ Ｄ结构域 ． Ｈ ｃ Ｓ Ｏ Ｄ ｎ ｍ Ｒ Ｎ Ａ在所检测 的三角 帆蚌 的各个组织 中均有表达 ， 而腮 中最 高． 在 嗜水气单 胞菌诱导 下 ， 血细胞 中的 Ｈ ｃ Ｓ Ｏ Ｄ ｎ ｍ Ｒ Ｎ Ａ的表达水平在 ３ ｈ时显著上调 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 表明Ｈ ｃ Ｓ Ｏ Ｄｎ 在 三角帆蚌抗 细菌感染 的天然免疫反应
三角帆蚌theromacin基因克隆及其表达分析
湖 南 文 理 学 院 学 报 （ 然 科 学 版） 自
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ｎ ｎＵｎｖ ｒｉ ｆ ｒｓ ｎ ｃ ｎ ｅＮａｕ ａ ｃ ｎｅＥ ｉｏ ） ｏ ｒ ａ ａ ｉｅｓ ｙ Ａ ｔ ａ ｄＳｉ ｃ（ ｔｒｌ ｉ ｃ ｄｔ ｎ ｏ Ｈｕ ｔｏ ｅ Ｓｅ ｉ
ｃ ｏ ｓ ｄ ｔ ｈ ｋ ｎ ｏｔｅｉ ｃ ｂ ｔ ｇ ａ ２ ／ ｎ ３ ℃ ． ｈ ａ ｔ ｒａｌ ｕ ｄ ｗａ ｅ ｔ ｄ ｂ ｏｏ ｙ ＰＣ ａ ｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｎ ， ｈ ｏ ｅ ｓ ａ ｉ ｇ ｂ ｔ ｎ ｕ ａ ｉ ｔ ０ ｒ ｏ ｌ ｎ ２ ｍｉ ， ７ Ｔ ｅｂ ｃｅ ｉ ｉ ｓｔ ｓｅ ｙ ｃ ｌ ｎ Ｒ ｅ ｕ ｎ ｉ ｇ ｉ ｑ ｎ
ｅｐｅｓ ｎｐａｍｉ ｅｔ ｄｍａｅｉｓｃｅｓ ｌ ｘ ｒｓｅ ． ｈ ｅｏ ｃ ｐ ｎｒａ ｉｇｆ ｍｅＯＲ ） ａ ｓｌ ｅ ｘ ｒｓｉ ｌｓ ｄｖ ｃ ｒａ ｋ ｕ ｃｓｆ ｌ ｅｐｅｓｄ Ｔ ｅｔ ｒｍａｉ ｏ ｅ ｅｄｎ ａ （ Ｆ ｗ ｓ ｏａ ｄ ｏ ｏｎ ｔ ｕ ｙ ｈ ｎ ｒ ｉ ｔ
Ｌ ｄ ｅ 购 自北京 Ｓ ｌ ｂｏ ｂｏｔｋＥＺＮ． Ｐａｍｉ ａｄ ｒ ｏａ ｉ． ｉ ｅ ． ． ＡⅢ ｌｓ ｄ ｒ Ｍｉ ｄＫｉＩ购 自 Ｏ Ｇ 公 司． ｎ ｉ ｔ ＭＥ Ａ
Ｌ ａ － ｕ ， ＵＪａ－ ｎ ， Ｉ ａ－ｉ， Ａ ｉｏ ｙ Ｉ ｏ ｇ ｏ Ｓ ｎ ｍｉｇ ＬＵ Ｑｉ ｌ ＸＩ Ｏ Ｔａ － ｉ Ｙ ｉ ｏ ｎ （ ａｏａ ｒ ｆ ｕ ｃｌ ｒ Ｂ ｏ ｇ， ｏｌ ｅ ｆ ｉ ｌ ｃｅｃ ｄＴｃｎ ｌｇ， ｕ ａ ｒ ｕｔｒ ｎｖｒｉ ， Ｌ ｂｒｔ ｙｏ Ａｑ ａｕｔ ｅ ｉｌ ｙ Ｃ ｌ ｇ Ａｎｍａ Ｓｉｎｅ ｎ ｅｈ ｏｏ ｙ Ｈ ｎ ｎ ｉ ｌ ｅＵ ｉｅｓｙ ｏ ｕ ｏ ｅ ｏ ａ Ａｇ ｃ ｕ ｔ Ｃ ａｇｈ １ １ ８ Ｃ ｉａ ｈ ｎ ｓａ ０ ２ ， ｈｎ ） ４
三角帆蚌theromacin基因克隆及其表达分析
三角帆蚌theromacin基因克隆及其表达分析李耀国;苏建明;刘巧林;肖调义【期刊名称】《湖南文理学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(23)4【摘要】为了构建一个theromacin抗菌肽基因(theromacin)融合表达载体并使其成功表达,通过RT-PCR扩增出三角帆蚌theromacm的开放阅读框序列,将其亚克隆到pUCm-T载体中,转Escherichia coli DHSa,经菌液PCR初步检测及测序验证后同pET32a(+)载体经酶切、纯化及连接,转入到大肠杆菌Escherichia coliBL21 (DE3)中,测序验证后得到融合表达质粒pET32a(+)-Ther.在37℃条件下,OD600为0.8时用1 mmol/L IPTG诱导8h之后SDS-PAGE电泳检测.结果表明:扩增出的开放阅读框序列大小为294 bp,编码97个氨基酸.pET32a(+)空载体表达出约为19kDa大小的产物,含目的基因的pET32a(+)-Ther表达出大小约为29 kDa的融合表达目的条带.实现了theromacin在大肠杆菌中的成功表达,并为进一步研究theromacin的功能奠定了基础.【总页数】5页(P65-69)【作者】李耀国;苏建明;刘巧林;肖调义【作者单位】湖南农业大学动物科学技术学院水生生物学实验室,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院水生生物学实验室,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院水生生物学实验室,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院水生生物学实验室,湖南长沙,410128【正文语种】中文【中图分类】Q785【相关文献】1.三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)叉头蛋白2(foxl2)基因和性别决定框14(sox14)基因克隆与表达分析 [J], 叶容晖;任海波2.三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析 [J], 吴圣楠;隗黎丽;李海军;付建平;刘毅3.三角帆蚌短型肽聚糖识别蛋白S3基因克隆及表达分析 [J], 李海军;张建强;吴圣楠;隗黎丽;刘毅4.三角帆蚌热休克蛋白60基因克隆及其表达分析 [J], 吴圣楠;刘大伟;刘毅;胡宝庆;张建强;王艳;王婷5.背角无齿蚌抗菌肽theromacin基因cDNA全序列克隆及表达分析 [J], 张果苹;汪桂玲;郭诗照;白志毅;李家乐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
热休克蛋白60在胃癌中的表达及其与胃癌生物学行为的关系
化ＳＢ Ａ Ｃ法检测 ４ ８例 胃癌 组织 中热 休 克蛋 白 ６ ０的表 达 。结果 胃癌 组 织 中 ＨＳ ０蛋 白表达 阳性 率分 别 为 Ｐ６ ８．％ ； Ｓ ６ １３ Ｈ Ｐ０表达 与肿瘤分化程度和 Ｋ － ｉ ７增 殖指数有关； ６ 结论
和 发 展 中起 重 要 作 用 ， 能 与 胃癌 预 后 有 关 。 可 关键词 ： 胃癌 ；热休 克 蛋 白 ６ ０；免 疫 组 化 中 图分 类号 ：７ － 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ：０ ４７ ｌ （０ ０ ０ －１３０ Ｒ ３３ Ａ １０ －１５ ２ １ ） ３ ８ －２ ０ ‘
ｃ ｎ ｅ ｓｅ ｉ ｅ ｉ ｉｃ ｎ ｙｗ ｓｃｒ ｌ ｅ ｉ ｅｄ ｇｅ ｆ ｉｅ ｎｉｔ ｎ ａ ｄＰ （ ０ ０ ） ｏ ｃ ｓ ｎ Ｔ ｅｅｐ ｅ— ａ ｃ ｒ ｐ ｃｍ ｎｓ ｎｆ ａ ｔ ａ ｏ ｅａ ｄｗ ｔ ｔ ｅｒｅ ｏ ｄｆ ｒ ｔ ｉ ｎ Ｉ Ｐ＜ ． ５ ．Ｃ ｎ ｌ ｉ ： ｈ ｘ ｒ ｇ ｉ ｌ ｔ ｈｈ ｆ ｅ ａｏ ｕ ｏ ｓ
（ ．泰 山医学院 ， １ 山东 泰安 ２ １０ ２ 泰山医学 院附属聊城 医院消化 内科 ， ７ ００； ． 山东 聊城 ２ 克蛋 白６ （ Ｓ ６ ） 胃癌组织 中的表达及 与 胃癌 生物学行为关系。方法 采用免疫 组 ０ Ｈ Ｐ０ 在 Ｈ Ｐ ０与胃癌 生物学行 为有关， 胃癌 的发 生 Ｓ６ 在
三角帆蚌CypA基因的克隆及其在嗜水气单胞菌感染后的表达分析
三角帆蚌CypA基因的克隆及其在嗜水气单胞菌感染后的表达分析夏虎;雷婷;杨品红;刘良国;余嘉;张运生;邓以国;陈福艳;陈秀荔;贺欢乐【期刊名称】《水生生物学报》【年(卷),期】2024(48)5【摘要】为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA 基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。
三角帆蚌CypA基因cDNA 序列全长1237 bp,其5′非编码区(UTR)长度为57 bp,3′非编码区长度为688 bp,三角帆蚌CypA基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长度为492 bp,编码164个氨基酸,CypA蛋白质理论等电点为8.9,相对分子量为17.29 kD。
在GenBank中进行同源序列检索,三角帆蚌CypA氨基酸序列与其他贝类CypA的相似性依次为池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)(99.39%)、青蛤(Cyclinasinensis)(77.44%)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)(78.05%)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)(78.66%)和大竹蛏(Solen grandis)(75.05%)。
通过SWISS-MODEL预测三角帆蚌CypA含有8个β折叠和2个α螺旋,可能形成CypA的活性中心区域。
利用MEGA 5.1软件将三角帆蚌CypA与其他物种CypA 基因进行序列比对并构建系统进化树,分析发现三角帆蚌CypA与池蝶蚌的CypA聚为一支,其与池蝶蚌CypA具有最近的亲源关系。
通过qRT-PCR检测CypA基因在三角帆蚌不同组织中表达,发现三角帆蚌性腺中CypA基因的表达量最高,肝脏、肾和鳃中的表达量次之。
对三角帆蚌浸泡感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),CypA基因在肝脏、性腺、肠和鳃中的表达水平在感染72h先升高后降低,其表达量在性腺和鳃中6h最高,肝脏中12h达到峰值,肠中24h达到最高值,表明三角帆蚌感染嗜水气单胞菌后,可显著诱导CypA基因的表达。
三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响
三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响韩健;李文娟;施志仪;郝莹莹;靳雨丽【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2010(000)012【摘要】为研究三角帆蚌Nacrein蛋白对珍珠晶体成型的影响,通过巢式及3'-RACE PCR对三角帆蚌基质蛋白Nacrein基因3'端序列进行克隆,得到850 bp碱基片段,分析表明其与合浦珠母贝同源基因序列相似度为56%,与马氏珠母贝相似度为50%.试验通过水提法初步分离出珍珠质水溶性基质蛋白,并采用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)分离出分子量约为60 kD的Nacrein蛋白.此外,采用配对试验设计,对试验组外套膜组织培养样品加入Nacrein 蛋白,研究Nacrein蛋白对晶体成型的影响,结果显示,加入Nacrein蛋白的试验组结晶成棱形状;而未加Nacrein蛋白的对照组结晶成雪花状,而且在晶体形成的时间上,试验组也较之对照组要旱.研究表明,Nacrein蛋白能加速外套膜组织分泌的钙质形成棱状结晶,从而对晶体成型产生影响.本研究为进一步研究基质蛋白对生物矿化的作用提供试验依据,对珍珠培育生产有一定指导意义.【总页数】5页(P137-141)【作者】韩健;李文娟;施志仪;郝莹莹;靳雨丽【作者单位】上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306;上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306;上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306;上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306;上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306【正文语种】中文【相关文献】1.人γ晶体蛋白的一级结构测定I.γ晶体蛋白的分离提纯及其顺序测定方法(GC／MS法)的研究 [J], 程志青;曾奇;潘苏华;吴开力2.三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)叉头蛋白2(foxl2)基因和性别决定框14(sox14)基因克隆与表达分析 [J], 叶容晖;任海波3.三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析 [J], 吴圣楠;隗黎丽;李海军;付建平;刘毅4.三角帆蚌短型肽聚糖识别蛋白S3基因克隆及表达分析 [J], 李海军;张建强;吴圣楠;隗黎丽;刘毅5.硫酸铜对三角帆蚌的珍珠质量及外套膜与珍珠囊细胞的影响 [J], 肖永清;石安静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三角帆蚌HcCnAα基因克隆及维氏气单胞菌感染后的表达
三角帆蚌HcCnAα基因克隆及维氏气单胞菌感染后的表达龙凯;孙瑜;李艳红;腾树君;吴正理【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2024(48)5【摘要】钙调神经磷酸酶(CN)属苏/丝氨酸蛋白磷酸酶,在软体动物的抗菌应答、免疫调节中发挥重要作用。
本研究利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得三角帆蚌CN基因α型催化亚基(HcCnAα)的cDNA序列,并进行了生物信息学分析。
构建pET30a-HcCnAα原核表达载体,将诱导表达、纯化、复性后蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。
用蛋白质印迹法(Western blot,WB)和荧光定量PCR(qPCR)技术分析健康状态和感染维氏气单胞菌GL2后HcCnAα在三角帆蚌不同组织中的表达情况。
结果显示,HcCnAαc DNA全长2737 bp,其中3′UTR长131 bp,5′UTR 长1154 bp,CDS区为1452 bp,编码483个氨基酸,序列包含蛋白磷酸酶保守的PP2Ac结构域。
WB和qPCR结果显示,HcCnAα在三角帆蚌各组织中广泛存在,并在闭壳肌、斧足、性腺、鳃中的表达量较高,在血液中的表达量最低。
维氏气单胞菌GL2感染三角帆蚌后3~24 h,鳃中HcCnAα的表达量显著升高,6 h时闭壳肌中表达量也显著升高,感染后24 h,肝胰腺、斧足、血液、外套膜中的表达量显著升高。
而感染后48 h,闭壳肌、鳃、外套膜、肝胰腺中的表达量显著降低。
研究表明,三角帆蚌HcCnAα基因与其他物种CnAα基因高度相似,具有保守的PP2Ac结构域,在各组织中普遍表达,并参与了三角帆蚌在细菌感染后的免疫反应。
本研究首次克隆了三角帆蚌HcCnAα基因并制备了多克隆抗体,揭示了HcCnAα基因参与三角帆蚌的抗感染免疫应答,为深入研究三角帆蚌的免疫调控机制和疾病防控策略奠定了基础。
【总页数】12页(P32-43)【作者】龙凯;孙瑜;李艳红;腾树君;吴正理【作者单位】西南大学水产学院;潼南区农业科技推广中心【正文语种】中文【中图分类】Q786;S944.121【相关文献】1.维氏气单胞菌感染对西伯利亚鲟血清指标和hsp70基因表达的影响2.维氏气单胞菌AcrV基因的克隆与原核表达3.维氏气单胞菌感染异育银鲫基因表达谱分析4.革胡子鲶感染维氏气单胞菌后β-防御素基因的时空表达分析5.三角帆蚌CypA基因的克隆及其在嗜水气单胞菌感染后的表达分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
热休克蛋白60在胃淋巴瘤中的表达
热休克蛋白60在胃淋巴瘤中的表达胃淋巴瘤是一种常见的消化系统恶性肿瘤，其治疗方法主要包括化疗、放疗、手术和靶向治疗等。
然而，由于胃淋巴瘤的异质性和药物耐受性，目前的治疗效果还不尽如人意。
因此，寻找新的治疗靶点和更好的治疗方法变得尤为重要。
热休克蛋白60（HSP60）是一种分子分子质量约60 kDa的分子伴侣蛋白，广泛存在于细胞质和线粒体中，参与细胞代谢和应激反应等多种生物学过程。
最近的研究发现，HSP60参与了多种肿瘤的发生和发展，包括胃癌、肝癌、乳腺癌等。
然而，关于HSP60在胃淋巴瘤中的表达及其作用仍有很多不明确的地方。
一些研究表明，在人类胃淋巴瘤组织中HSP60的表达水平明显升高，而且与治疗抵抗力和预后相关。
例如，一项病理学研究发现，HSP60阳性胃淋巴瘤组织数量显著增加，同时HSP60的表达水平与肿瘤的浸润深度和预后密切相关。
这表明HSP60可能涉及了胃淋巴瘤的发生和发展，其高表达水平可能对治疗效果产生一定影响。
目前，有很多研究探究了HSP60与体内肿瘤细胞生长、分化及凋亡的关系。
一些研究表明，HSP60的表达量与肿瘤的增殖和浸润深度具有正相关的关系；另一些研究则发现HSP60的高表达水平可能会抑制肿瘤细胞的凋亡。
这些结果表明，HSP60可能在胃淋巴瘤的发生和发展中发挥了积极作用。
另外，一些药物的作用机制也与HSP60有关。
例如，一项研究发现，在人类胃癌细胞HGC-27中，某些衍生自Libocedrus chevalieri的天然化合物能够通过抑制HSP60的表达水平来诱导细胞凋亡，从而达到抗癌作用。
这说明，通过针对HSP60的治疗方法可能成为胃淋巴瘤治疗的一个新方向。
总体而言，热休克蛋白60在胃淋巴瘤中的表达与治疗效果和预后密切相关。
HSP60可能影响胃淋巴瘤的发展，但其具体作用机制尚需进一步研究。
未来，针对HSP60的治疗方法可能成为胃淋巴瘤治疗的一个新方向。
腾冲嗜热厌氧菌热休克蛋白60及其基因表达的热激动态变化分析
腾冲嗜热厌氧菌热休克蛋白60及其基因表达的热激动态变化分析孟博;王敬强;李娜;马延和;刘斯奇【期刊名称】《微生物学报》【年(卷),期】2006(46)2【摘要】热休克蛋白60(HSP60)是细菌体内一种非常重要的分子伴侣,其可以协助蛋白质或肽链的正确折叠和构型,防止变性和降解.基于本实验室的早期观察,腾冲嗜热厌氧菌的HSP60是一个典型的温度相关蛋白质,在80℃的表达水平最高.为了进一步了解嗜热菌应急的分子机制,继续进行了在热激后HSP60基因表达的动态研究.将最适温度(75℃)下培养的腾冲嗜热厌氧菌迅速地转移至80℃继续培养,然后在不同的时间点上分别取样,并通过双向电泳、Western blot和Real-time PCR等方法,分析了HSP60在mRNA和蛋白质水平上的表达量的改变.试验结果表明,在80℃热处理4h内的短期应急过程中,HSP60蛋白水平一直呈上升趋势,而它的mRNA水平则表现为先升高后下降的一个非对称性的峰形变化.HSP60的mRNA和蛋白质的对温度的应答快慢程度是不同的.HSP60的mRNA水平的显著变化在1h内便可观察到,而蛋白质水平的显著改变要延迟3h左右.此外,HSP60的mRNA和蛋白质对温度的应答量变大小也是不同的.【总页数】6页(P269-274)【作者】孟博;王敬强;李娜;马延和;刘斯奇【作者单位】中国科学院北京基因组研究所,北京,101318;中国科学院北京基因组研究所,北京,101318;中国科学院北京基因组研究所,北京,101318;中国科学院微生物研究所,北京,100080;中国科学院北京基因组研究所,北京,101318【正文语种】中文【中图分类】Q936【相关文献】1.二氧化钛富集磷酸肽方法优化及在腾冲嗜热厌氧菌磷酸化蛋白质组分析中的应用[J], 林威;王京兰;应万涛;钱小红2.腾冲嗜热厌氧菌的超氧化物歧化酶的进化踪迹分析 [J], 刘元东;刘楚干;丁建南;邱冠周3.腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析 [J], 武岚;钱忠;付俊;缪时英;王琳芳4.腾冲嗜热厌氧菌6-磷酸果糖激酶的克隆、表达及其生物活性 [J], 周传奇;王敬强;钱忠;马延和;刘斯奇5.腾冲嗜热厌氧菌葡萄糖激酶在不同温度下的表达和催化活性 [J], 钱忠;王敬强;周传奇;马延和;刘斯奇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三角帆蚌细胞色素P450基因的克隆与表达分析
表 达规律，以及 三角 帆蚌 感染致病 菌后 ＣＹ Ｐ基 因的表达变 化 情况，为研 究 Ｃ ＹＰ在 三角帆蚌机 体 内的功 能奠定基础 。
１ 材 料 与 方 法
１１ 实 验 动 物 及 处 理 ．
二 年龄 健康 三 角帆 蚌购 自湖 南省 常德 市 三角 帆蚌养
殖基 地，暂养 于湖南 农业 大学 水产 养殖基 地 。 取健康 三 角
在 于人 、动物 、植物 和微生 物之 中，参与许 多外 源性 物质
（ 物 、毒物 和 环境 污染 物 质等 ） 内源性 物 质（ 素 、脂 药 疫相 关
基 因 ＥＳ ， Ｙ Ｔ Ｃ Ｐ即为 其 中之一 。本研究 旨在 克隆 三角 帆蚌 Ｃ Ｐ基 因全长 ｃ ＮＡ，探讨 该基 因在 三角 帆蚌各 组织 中 的 Ｙ Ｄ
抗体识别，参与丙型肝炎病毒感染等疾病的免疫损伤【： １
Ｃ ＹＰ 作 为毒 理学 指标 和 生物 标记 物 ，已被广 泛应 用 于环 境 的监测 ［ ８ ５ ［ 以鲤鱼 （ ｙ ｒｎ ｓ ｃ ｒ ｏ 为研 究 对象 发 － ，如 Ｃｐ ｉｕ ａｐｉ） 现 高污 染处 ＣＹ 酶 类 的变化 显著 ｌ；在 鲽￣ （ ａｉ ｔｙ Ｐ ９ ＿ Ｐｌｔ ｈｈ ｓ ＿ ｃ
帆 蚌 （ 壳 紧闭 ， 足迅 速 ，出水管 喷 水有 力 ， 色 发 白， 两 缩 体 体 质健壮 ） 置水 族箱 中暂 养 ７ ，取 １只经灭 菌 ＤＥ Ｃ水 清 ｄ Ｐ
洗 后，取其 肝脏液 氮速 冻 ；其余 的蚌 随机 分成 两组 ，每 组
３ ０只 ，一组 为对 照组 ，人工 注射 ０６ ％灭 菌生 理盐水 ：另 ．５
肪 酸 等） 的代 谢 ，在碳 源 同化 、激 素 合成 、外 源 物质 降解
和致 癌 物质 消 除 等方 面发挥 重 要 作用 ，亦对 维 持 生 物体 内环境 的平衡 及神 经 内分泌 的正 常功 能起着 重要 作用 【。 １ ］
热休克蛋白60在鳞状细胞癌、鲍温丘疹病、日光性角化病中的表达
刘冬梅 ， 亦秀， 蒋 张优拉 ， 黄池 清 ， 学峰 付 （ 浙江 省金 华市第 五医院 ， 华 ３ １０ ） 金 ２ ０ ０
瘤组 织 中 的 阳性 率 均 显 著 高 于瘤 旁 正 常 组 织 （ Ｏ ５ ： Ｐ＜ ． ）三组 间 两 两 比较 结 果 为 Ａ ＝ Ｃ ＝ Ｐ Ｐ＞ ．５ ， 统 计 学 意 ０ Ｋ Ｓ Ｃ Ｂ （ ０ ）无 ０
义 Ｓ Ｃ低分化和高分化组间无统计学意义 结论 Ｃ
Ａ Ｋ和 Ｂ Ｐ的 生物 行 为有 关
ＨＳ ６ Ｐ ０在 Ａ Ｂ 、Ｃ Ｋ、Ｐ Ｓ Ｃ中高表达。 Ｓ ６ Ｈ Ｐ ０的高表 达可能与 Ｓ Ｃ、 Ｃ
关键 词 ： 鳞状 细 胞 癌 ； 温 丘疹 痛 ； 鲍 日光 性 角化 病 ； 热休 克蛋 白 中 图分 类 号 ： ７０２ ｌ Ｒ ３． ６ 文献 标 识码 ： Ａ 文章 编 号 ：６２ ０ ０ （０ ０ ０— ３９ ０ １７ — ７ ９ ２ １ ）６ ０ ４ — ３
Ｌ Ｕ Ｄ ｎ — ｉＪ ４Ｎ ｉ ｘ ｕ Ｚ ｛ ｎ ｆ Ｉ ｏ ｇ ｍｅ ． ｒ Ｇ Ｙ — ｉ ． Ｈ ＮＧ Ｙｏ — ｆ Ｌ日Ｕ Ｇ Ｃ ｉｑ ｎ ， Ａ ｈ — ｉｇ
Ｘｕ — ｅ ７ ｇ
Ｔ ｅＦ ｓ ｉｌｏ ＨＨ Ｊｔ ｌｔ ２ ０ ０． ｈｎ ｈ 讯ｈＨｏｐｔｌｆ如１ ａ．ｉｈｌ １ ０ Ｃ ｉａ ｆ ｌ （３
Ａ ｓ ａｔＯｂｅｔ ｅ Ｔ ’、ｓｇｔ ｔｅ ｘｒｓｉ ｆ ｅｔｈｃ ｒｔ ｎ ０Ｈ Ｐ ０ ｉ ｓｕ ｍ ｕ ｅｌａｃ ｏｌ ｆｃ ） ｂｔ ｃ： ｊｃ ｖ ０ ｆｅｔ ａ ｐｅｓ ｎｏｈ ａｓｏｋｐｏ ｉ ６ （ Ｓ ６ ）ｎ ｑ ａ ｏ ｓ ｌｃｒｉ ｎ ｃ． ｒ ｉ １ ｉ ｅｈ ｅ ｏ ｅ ｃ ｎ ａｓ
热休克蛋白10和热休克蛋白60的表达、纯化及与线粒体DNA转录因子A相互结合
热休克蛋白10和热休克蛋白60的表达、纯化及与线粒体DNA转录因子A相互结合程晓丽;神吉智丈;李春燕;金秀日;康東天【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2007(042)001【摘要】目的:表达、纯化热休克蛋白10(Hsp10)和热休克蛋白60(Hsp60),研究人类线粒体DNA转录因子A(TFAM)在体外与Hsp10,Hsp60间的相互交联作用.方法:使用Escherichia.Coli(E.coli)诱导表达含有6个组氨酸标记的Hsp10和Hsp60,镍离子鳌合树脂分离纯化后,体外分别与纯化TFAM共育,抗-TFAM抗体免疫沉淀,SDSPAGE分离蛋白,CBB探测分析.结果:Hsp10可在体外与TFAM发生免疫共沉淀,Hsp60不能.结论:Hsp10可能为TFAM-复合体组分.【总页数】3页(P50-52)【作者】程晓丽;神吉智丈;李春燕;金秀日;康東天【作者单位】郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室,郑州,450001;日本九州大学大学院医院临床检验生化研究室,福州,812-8582;日本九州大学大学院医院临床检验生化研究室,福州,812-8582;日本九州大学大学院医院临床检验生化研究室,福州,812-8582;日本九州大学大学院医院临床检验生化研究室,福州,812-8582;日本九州大学大学院医院临床检验生化研究室,福州,812-8582【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域的表达、纯化及结合特性 [J], 哈依努尔;李俊;陈永恒;陈林;陈主初2.人转录因子USF基因在大肠杆菌中的表达、纯化及在FAK启动子中的结合研究[J], 李淑锋;华子春3.转录因子E2F—1的DNA结合结构域与GST的融合表达和纯化 [J], 姜勇;徐应琪4.人转录因子hASH4的表达纯化及其DNA结合活性 [J], 苏琢磊;楼田甜;王远东;季朝能5.人热休克蛋白转录因子1 DNA结合结构域的表达、纯化和晶体生长 [J], 回佳菡;唐咏;张春玲;许凌峰;李雪梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
热休克蛋白60及其抗体在扩张型心肌病患者中的表达
维普资讯
ｌ２ １
咸 宁学 院学 报 （ 医学 版 ）０８年第 ２ ２０ ２卷第 ２期 Ｊ ｒ ｌｆ ｉ ｎ ｇ ｎ ｅｉ Ｍｄ ａＳｉｃｓ］ ｏ ｎ ａ ｉ ｉｒｔ ｅｉｌ ｃｎｅ） ｕ ａｏＸ ｎ ｎ Ｕ ｖ ｓｙ（ ｃ ｅ
热休 克 蛋 白 ６ Ｏ及 其 抗体 在 扩 张型 心 肌 病 患 者 中的表 达 ’
江儒 文 刘 唐威 ， 伟锋 ， 伍 （ ． 东 省第 二 中医院心 内科 ， １广 广东 广 州 ５０６ ；． 西 医科 大学 第一 附属 医院 心 内科 ） １０ ５２ 广
摘要 ： 目的 探讨扩张型心肌病（ Ｃ 心肌组织 中 Ｈ Ｐ０以及血清 中抗 人 Ｈ Ｐ ０抗体 在 Ｄ Ｍ 发 生、 Ｄ Ｍ） Ｓ６ Ｓ６ Ｃ 发展 中的作用 。方法 应用 免疫 组织化学方法检测 １ ５例 Ｄ Ｍ 患者及 ７例正 常对 照者心肌 组织 中 Ｈ Ｐ ０的表达 和 Ｃ Ｓ６ 分布 ； 采用酶联 免疫吸附试验（ ＬＳ 法检测 ４ Ｅ ＩＡ） ４例 Ｄ Ｍ 患者和 ４ Ｃ ２例对照者血 清 中的抗 人 Ｈ Ｐ ０抗体 水平。 Ｓ６ 结果 Ｄ Ｍ 患者心肌组织 中 Ｈ Ｐ ０的表达 明显增加 ， Ｓ ６ Ｃ Ｓ６ Ｈ Ｐ ０几乎全 部 为胞 浆 性表达 ， 见核 阳性颗 粒。Ｄ Ｍ 未 Ｃ 患者血清 中的抗人 Ｈ Ｐ０抗体水平较对 照组 明显升高 （ Ｓ６ Ｐ＜００ ） ．５ 。结论 Ｄ Ｍ 患者 Ｈ Ｐ ０在心肌 组织 的过 高 Ｃ Ｓ６ 表达及其血清抗体 水平 的升高， 可能促 进 Ｄ Ｍ 的发生、 Ｃ 发展 ， 同时又为心肌提供一定 的保护作用 。
关键词 ： 扩张型心肌病‘ ； 热休克蛋 白６ ； ０ 热休克蛋 白 ６ ０抗体 中图分类号 ： ５ ２ ２ Ｉ ４ ． Ｌ 文献标识 码 ： Ａ 文章 编号 ：０ ８０３ （ｏ ８ ｏ －１２０ １０ －６ ５ ２ ｏ ） ２ｏ １－４
热休克蛋白60在人膀胱癌中的表达及意义
热休克蛋白60在人膀胱癌中的表达及意义
谢先明;陆爱权;覃宗升;刘景龙
【期刊名称】《武警医学》
【年(卷),期】2007(18)7
【摘要】目的探讨热休克蛋白60在膀胱癌的表达及意义.方法应用免疫组织化学技术(SP法)检测热休克蛋白60在50例膀胱移行细胞癌标本和15例正常膀胱组织中的表达.结果热休克蛋白60阳性表达率在膀胱癌和正常膀胱黏膜分别为62%和20%,差异有统计学意义(P＜0.01).不同病理分级和临床分期的膀胱癌中热休克蛋白60的表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论热休克蛋白60在膀胱癌发生和发展中起重要作用,它的表达与膀胱癌细胞分化,肿瘤的浸润深度密切相关.
【总页数】3页(P498-500)
【作者】谢先明;陆爱权;覃宗升;刘景龙
【作者单位】武警广西总队医院医务处,南宁530003;武警广西总队医院病理科,南宁530003;武警广西总队医院外一科,南宁530003;武警广西总队医院病理科,南宁530003
【正文语种】中文
【中图分类】R737.14
【相关文献】
1.热休克蛋白60在胆囊癌组织中的表达及临床意义 [J], 李荣;陈传奇;孙岩
2.原发性干燥综合征患者唇腺中热休克蛋白60与细胞外基质金属蛋白酶诱导因子
的表达及意义 [J], 竺红;王莉;朱蓉;王雪梅;杨吉娟;周少岚;宫怡
3.热休克蛋白60和胰蛋白酶在胰腺组织中的表达及意义 [J], 高志荣;李永渝
4.热休克蛋白60在口腔鳞状胞癌中的表达及临床意义 [J], 李芳;杨蕾;刘瑜;常虹;杨松
5.热休克蛋白60、70在川崎病冠状动脉病变中的表达及意义 [J], 穆志龙;高颖;卫丽;贺改涛;马蕾;焦富勇;王杰民
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。
HSP60 分子是 HSPs 家族中最为保守的分子伴 侣蛋白 , 大多数成员为组成型表达蛋白 。 HSP60 在真核生物中主要存在于线粒体中 , 蛋白 N-末端有 一个线粒体定位序列 , 能够引导 HSP60 进入线粒体 HSP60 基因如发生突变 , 会导致线粒体功能障 中 。 碍 。 HSP60 在细胞生命活动中占据着非常重要的 地位 , 当机体处于应激状态时 , HSP60 被大量合成 ,
899
Tab. 2
物种名 Species 光滑双脐螺 Biomphalaria glabrata 原鸡 Gallus gallus 灰仓鼠 Cricetulus griseus 小家鼠 Mus musculus 火鸡 Meleagris gallopavo 家猫 Felis catus 海象 Odobenus rosmarus divergens 狨猴 Callithrix jacchus 尼罗罗非鱼 Oreochromis niloticus 大熊猫 Ailuropoda melanoleuca 赤点石斑鱼 Epinephelus akaara 牙鲆 Paralichthys olivaceus 白云金丝鱼 Tanichthys albonubes
肝胰腺、外套膜及肌肉等 5 种组织 , 用 Trizol 法提 取总 RNA, 用紫外分光仪 (UV-5100) 测定浓度并统 一稀释至 100 ng/μL, 各取 2 μL 反转录成 cDNA, 利 用 RT-PCR 法检测室温下 (20℃)hcHSP60 在三角帆蚌 不同组织中的表达 , 引物见表 1 。 PCR 扩增条件 : 94℃5min; 94℃30s, 58℃30s, 72℃90s, 40 循 环 ; 72℃10min。产物用 1%琼脂糖凝胶电泳进行分析。
(1. 江西师范大学生命科学学院 , 南昌 330022; 2. 南昌大学生命科学与食品工E 技术 , 对高通量转录组测序所得三角帆蚌 HSP60 基因 (hcHSP60)长片段 (2629 bp)进行了 3末端克隆 , 经拼接得到 hcHSP60 cDNA 全长序列。 采用多种分子生物学软件对 hcHSP60 cDNA 全长序列进 行了特征分析 , 并采用 RT-PCR 技术检测了其组织分布及经冷热应激后的表达变化。结果显示 , hcHSP60 cDNA 全长为 2807 bp, 其中开放阅读框为 1707 bp, 编码 568 个氨基酸 , 预测分子量大小为 61.04 ku, pH 7.0 时的理论等电点为 5.63。序列中不存在信号肽与跨膜结构。氨基酸序列保守性分析表明 , hcHSP60 氨基酸序 列与光滑双脐螺 HSP60 同源性最高 (达 82%), 而与牙鲆、 白云金丝鱼 HSP60 的同源性最低 (为 75%)。 RT-PCR 检测结果表明 , hcHSP60 在肝胰腺中的表达水平最高 , 而在血液中的表达水平最低。30℃与 35℃水温处理三 角帆蚌 4h 后 , 各组织中 hcHSP60 表达水平明显上升 , 表明 hcHSP60 可能在三角帆蚌耐热应激反应中起着重 要作用。 关键词 : 三角帆蚌 ; 热休克蛋白 60; 序列分析 ; 表达 中图分类号 : Q781 文献标识码 : A 文章编号 : 1000-3207(2014)05-0897-06
场 , 体长约 10—15 cm。购回实验室后 , 立即用自来 水将蚌壳上的淤泥仔细刷洗干净 , 置于盛有曝气自 来水的水族箱 (100 cm×60 cm×45 cm)中暂养 , 箱中 水量不宜过多 , 以刚刚淹没蚌体为佳。每天用曝气 自来水换水 1 至 2 次 , 充气泵充气饲养 , 暂养 1 周确 认蚌体健康无病之后方开始实验。 1.2 核酸提取与 cDNA 模板合成 采用 Invitrogen 公司的 Trizol 试剂盒提取总
5期
吴圣楠等 : 三角帆蚌热休克蛋白 60 基因克隆及其表达分析
表 2 用于氨基酸序列比对及进化树构建的 60 基因登录号 Genes of HSP60 used for multiple alignments and construction of phylogenetic tree 蛋白 Protein HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 HSP60 登录号 Accession No. ACL00842.1 NP_001012934.1 XP_003504389.1 AAI06113.1 XP_003207490.1 XP_003991044.1 XP_004393550.1 XP_002749639.1 XP_003456322.1 XP_002920071.1 ADM73510.1 ABB76381.1 ADK27679.1
[5] [3, 4]
迄 进入循环系统 , 协助变性蛋白恢复其天然结构 [8]。 今 除 了 研 究 最 多 的 细 菌 HSP60, 还 在赤 点 石 斑 鱼 (Epinephelus akaara)[9] 、 三 疣 梭 子 蟹 (Portunus trituberculatus)[10]、草鱼 (Ctenopharyn odon idellus)[11]、 凡纳宾对虾 (Litopenaeus vannamei)[12] 等物种中克隆 出 HSP60 全长序列 , 并对它们的基因结构、功能和 组织表达进行了研究 , 而针对软体动物 HSP60 的研 究则尚不多见。 三角帆蚌 (Hyriopsis cumingii) 是我国特有的淡 水育珠蚌 , 用其培育的珍珠质量上佳 , 近年淡水育 珠蚌培育珍珠开始发展 [13]。但日益严重的病害给我 国淡水育珠产业造成了重大经济损失。 HSPs 是生物 体内的重要抗感染和抗逆蛋白分子, 对三角帆蚌 HSPs 的深入研究有助于我国淡水育珠产业的健康 发展。本研究利用 3′RACE 技术 , 对高通量转录组 测 序 所 得 三 角 帆 蚌 HSP60 基 因 (hcHSP60) 长 片 段 (2629 bp)进行了 3末端克隆 , 经拼接得到 hcHSP60 cDNA 全长序列 , 采用多种分子生物学软件对其进
(2629 bp) 由转录组高通量测序结果获得 , 转录组测 序工作由北京贝瑞和康生物技术有限公司完成。依 据此序列 , 采用 Clontech 公司的 SMARTer™ RACE cDNA Amplification Kit 试剂盒获得该基因的 3′端序 列。 扩增时共设计 2 条引物 : HSP60-F1 与 HSP60-F2。 首先使用逆转录酶 SMARTScribe™ Reverse Transcriptase 和引物 3′ CDS primer A 对总 RNA 进行逆 转录合成 cDNA, 再使用引物 HSP60-F1 和 UPM (Long 引物和 Short 引物按 1︰ 3 比例混匀所得 ), 以 上面合成的 cDNA 为模板进行第一轮 PCR 扩增 ; 将 第 一 轮 PCR 扩 增 产 物 稀 释 50 倍 , 然 后 用 引 物 HSP60- F2 和 UPM 进行第二轮 PCR 扩增 , 将第二 轮 PCR 产物进行电泳并对目的条带进行切胶回收纯 化 , 纯化后的 PCR 产物与 pMD18-T 进行连接 , 转化 后挑取阳性克隆测序 , 最后进行全长序列拼接 , 得 到 hcHSP60 cDNA 全长序列。用于 hcHSP60 基因扩 增与表达的引物见表 1。
第 38 卷 第 5 期 2014 年 9 月
水 生 生 物 学 报
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
Vol. 38, No.5 Sep., 2014
doi: 10.7541/2014.134
三角帆蚌热休克蛋白 60 基因克隆及其表达分析
吴圣楠1 刘大伟2 刘 毅1 胡宝庆2 张建强1 王 艳1 王 婷1
RNA, 操作过程中 (包括组织总 RNA 提取以及应用 RNA 的所有相关实验 )所用离心管及枪头都经 1 g/L 焦碳酸二乙酯 (Diethylpryocarbonate, DEPC) 水处理 过夜 , 琉璃器皿及金属器械经 180℃高温烘烤 6h 以 上使 RNase 彻底失活。 RNA 的具体提取参考试剂盒 的说明书进行。 cDNA 合成按 SMART cDNA Syn-
[7] [6]
收稿日期 : 2013-08-11; 修订日期 : 2014-03-05 基金项目 : 国家自然科学基金项目 (31060359); 江西省自然科学基金 (20122BAB204017)资助 作者简介 : 吴圣楠 (1992—), 女 , 江西鹰潭人 ; 硕士研究生 ; 主要从事分子免疫学研究。 E-mail: wusn2013@ 通信作者 : 刘毅 , E-mail: yiliusan@
热休克蛋白 (Heat shock proteins, HSPs)是生物 体在受到物理或化学刺激时发生应激反应所产生的 一类蛋白质 , 又名应激蛋白。 根据分子量的不同 , 可 以将 HSPs 分为 HSP90、 HSP70、 HSP60 及小分子 HSPs 首次从热激果蝇幼虫唾 量 HSP 等若干家族 [1]。 液腺部位分离得到 [2]。HSPs 分子在正常状态下能帮 助新生肽链折叠 , 而在应激状态下 , HSPs 被大量诱 导 , 其分子伴侣作用变大 , 当细胞受到各种刺激时 , 蛋白质肽链由折叠变成延伸 , 空间构型也发生改变 , 进而与突变蛋白结合 , 使后者解离 , 并通过多肽折 叠、复性以维持细胞自稳定, 从而防止细胞受损
Tab. 1 引物 Primers Long Short HSP60-F1 HSP60-F2 β-actinF β-actinR HSP60F HSP60R 用途 Application RACE RACE 3 - RACE 3′- RACE RT-PCR RT-PCR RT-PCR RT-PCR
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行特征分析 , 并采用 RT-PCR 技术检测了其在多种 组织中的表达分布及在冷热应激后的变化情况。