分析方法的验证与确认

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四、不同的检验项目在进行分析方法验证 或分析方法确认时须进行的验证或确认内 容总结
（1）鉴别试验除专属性、耐用性外，其它都不要求。 （2）含量测定方法验证除检测限、定量限外，其它都要 求做，确认主要要考察方法的耐用性，精密度和专属 性可示情况而定。 （3）杂质的限度检查方法的验证与确认除专属性、检测 限、耐用性外，其它都不要求 （4）杂质的定量测定方法验证除检测限外，其它都要求， 其确认也要考察专属性、精密度、LOQ、耐用性等。
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一、分析方法的验证与确认概述
相关法规的要求：
我国2010版GMP第二百二十三条也明确规定：符 合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证： 1、采用新的检验方法； 2、检验方法需变更的； 3、采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收 载的检验方法； 4、法规规定的其他需要验证的检验方法 对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验 方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠。
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二、分析方法的验证和确认 的区别与联系 从以上可以看出，分析方法的验证 与确认是不可分割的，确认是验证的一 部分，它们本质上是相同的概念，具体 来说分析方法的验证是证明检验方法或 操作规程能达到预期结果的一系列活动， 分析方法的确认是证明检验设备能正确 运行并可达到预期结果的一系列活动。
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三、分析方法的验证与确认在实践中 的具体应用
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5药典、客户提供的检验方法的转移应 用确认
对新产品的方法验证通常在产品开发阶段 完成；大规模生产后的验证通常包括方法确认 和方法转移 。分析方法确认是指当国家标准 或药典标准已经变化时在本实验室进行的对所 涉及产品是否适用的确认实验 。确认之前应 对新旧方法进行核对，标明所有变更细节检验 样品的信息（批号、规格),变更项目的接收标 准确认试验的样品通常包括正常产品、稳定性 产品。方法转移指检验方法由转移方转移至接 收方时进行的实验 。
1、什么情况下进行分析方法的验证？ （1）新药申报时，药品质量标准中分析方法必须验 证； （2）药物生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析 方法进行修订时，则质量标准分析方法必须进行验证
2010版药典中分析方法验证指导原则只规定了项目和基本方 法而没有合格标准:附录XIX A；中国GMP(2010版)非常关注验证 的过程,分析方法验证不完善是常见的问题 。
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.4 方法的准确度 衡量该方法的实测结果与真实值的吻合 程度，即方法的回收率。 4.4.1含量方法的准确度：取已知浓度的样品 （浓度范围为含量测定浓度的80%、100%、 120%）各三份，每份进样测定三次，计算该方 法的百分回收率。 可接受标准：回收率在98％～102％之间
4.7 方法耐用性（仅在新申报产品的方法的第一次验 证时进行） HPLC法，方法耐用性要求进行改变流动相比例和 流动相PH值的测试，主要考察原料药生产工艺中可能 存在的杂质（包括原料中间体、前体及降解产物）与 成品主峰的分离度达到要求，并确保成品主峰中没有 干扰峰存在，同时观察杂质峰的出峰顺序是否发生变 化。 GC法，方法耐用性要求进行改变柱温和载气流速 测试，主要考察所有残留溶剂峰之间的分离度是否仍 达到标准要求。
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二、分析方法的验证和确认 的区别与联系
对于分析方法的验证和确认，存在很多有关 这两个术语的讨论，它们也经常被交叉互用。 USP 32 通则<1225>和<1226>中解释了这 两个术语的差异。通则<1225>的标题是：“法 定方法的验证”。它阐述了分析方法的验证， 包括从建立方法开始的所有验证参数，结果得 到某一特定样品的验证方法。这一过程建议用 于内部制定方法的验证。通则<1226>题为“法 定方法的确认”。它建议在应用法定方法时， 应证明实验室有能力成功应用该方法。在方法 转移时，接受方法的实验室也应进行方法确认。
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三、分析方法的验证与确认在实践中 的具体应用
4、新申报产品的GC或HPLC方法验证 4.1 选择性（或专属性） 选择适当的仪器、相应条件、试剂（包括仪器型 号、GC或HPLC色谱柱，流动相配比等），使原料药生 产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间体，前体 及降解产物）或制剂生产过程中产生的杂质能与主峰 较好地分开，并确保主成份峰中没有其他干扰物质峰 存在，对其检验的专属性进行评价和确认。 可接受的标准为：空白对照应无干扰，杂质峰与主峰 应能完全分离，分离度不得小于1.5。
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.4.3 GC法残留溶剂准确度试验，取残留溶剂限 度的LOQ、50%、100%、120%四个浓度点（也可 根据产品质量情况选择其他点）溶液，若样品 测定浓度值低于限度值的10%时，应增加测定 限度的10%的浓度点溶液。加入样品中，每个 浓度点测定三次，计算扣除样品浓度后的百分 回收率。
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.2精密度 4.2.1 系统精密度 通过对单个测定值与平均值之间的偏差程度来衡 量系统的误差。 对同一均匀的样品溶液或标准品溶液，连续重复 进样六次，记录每次进样后各组分的响应，峰面积或 峰高，计算各响应值与平均值之间的偏差——相对标 准偏差RSD。 可接受的标准为：RSD2.0%。
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二、分析方法的验证和确认 的区别与联系
验证分析方法的目的是证明“预期目标的 适用性”。分析测量的目的是产生准确可靠的 数据。只有方法验证无法保证这一目标的实现， 但是应当将其作为分析测量质量保证体系的一 部分。USP 通则<1058>分析仪器确认中明确提 出了这一点。该通则开头部分讨论了实验室数 据质量的不同要素的重要性，其中还解释了为 何系统适用性试验或质量控制图的分析不足以 确保分析检测结果的准确可靠，仪器确认和方 法验证同样重要。
5.2 系统适应性 按药典方法及客户方法规定操作。 5.3系统精密度、最小检测限、最小定量限、耐 用性、溶液稳定性等分别按4.2.1、4.5、4.6、 4.7及4.8操作。 5.4样品对比检验：对公司自我生产的三批产品 与转让方生产的产品最少一批同条件下进行检 验，应均符合相应质量标准要求。
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四、不同的检验项目在进行分析方法验证 或分析方法确认时须进行的验证或确认内 容参考下表：
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.6 最小定量限 能够重复的、准确的测量峰面积（相当于供 分析物）的进样量。峰高等于噪声高的 10.0±1.0。 4.6.2 操作：按检测限方法测定仪器的平均噪 声，按最小检测限操作方法操作，将按信噪比 为10.0±1.0的浓度定为最小定量限。
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.3 方法的线性范围 4.3.1 在含量测定浓度的80～120%选择五个不 同的浓度点，每一个浓度需测定二次，记录各 对应浓度下的相应响应值（峰高，峰面积或峰 面积的比值），以衡量样品量与检测器响应间 的线性对应关系。
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.3.2 可接受标准：相关系数r≥0.999 4.3.3 在HPLC法有关物质测定时，测定浓度从总 杂质120%至LOQ（定量限）浓度选取五个点， 每个浓度点测定二次。 GC法残留溶剂测定时，测定浓度从残留溶剂限 度的120%至LOQ浓度选取五个点，每个浓度点 测定二次。 可接受标准：相关系数r≥0.990
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.8溶液稳定性 HPLC法，将配制好的溶液每隔半小时进样一次， 连续进样5次（即放置两小时），比较含量和 有关物质的变化。 可接受的标准为：主成分的含量变化的绝对 值应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在±0.1 ％以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。
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质检中心
质检中心大门
质检中心走廊
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精密仪器室
高 效 液 相 色 谱 仪
气相色谱仪
紫外分光光度计
3试剂存放室、ຫໍສະໝຸດ 物检测室试 剂 存 放 室
生 物 检 测 室
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分析方法的验证与确认的交流
主要内容： 一、分析方法的验证与确认概述 二、分析方法的验证和确认 的 区别与联系 三、分析方法的验证与确认在实 践中的具体应用 四、不同的检验项目在进行分析 方法验证或分析方法确认时须进 行的验证或确认内容参考 五、注意事项
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.4.2用HPLC法进行有关物质测定准确度试验：一般要 求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度 分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质 的限度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为0.1％、 0.2％和0.3％的杂质溶液），分别测定其含量，将实 测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率 数据的相对标准差（RSD）。 该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均 应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓 度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应 不大于10%
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一、分析方法的验证与确认概述
相关法规的要求：
• 美国食品药品管理局（US FDA）制定了两个行业指南， 分别是分析方法验证和是生物分析方法验证。 • ICH 出版了两个方法验证指南。Q2A给出了验证中必 须考虑的8 种验证参数的术语和定义。Q2B中包含了 方法学内容，但是同时声明允许一定的灵活性：“申 请人有责任选择最适合其产品的验证步骤和方法。” • EURACHEM 出版了方法验证的详细指南，分析方法的 适用性方法验证及相关主题的实验室指南。这是最详 尽的官方指南，包含了方法验证的理论和实践。
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一、分析方法的验证与确认概述
任何分析测试的目的都是为了获得稳定、 可靠和准确的数据。在药品的生产过程中，从 原料、中间体到成品都需要检验，检验的结果 既是过程受控的依据，也是评价产品质量的重 要手段。而分析方法的验证与确认结果可以用 于判断分析结果的质量、可靠性和一致性，这 也是所有分析质量管理体系不可分割的一部分。 许多法规和质量管理标准也要求实验室进行分 析方法验证。
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.2.2 方法精密度 通过测定样品含量与真值（平均值）的偏 差程度来衡量样品制备过程（包括称量，稀释） 中的误差。分别对同一批号的样品称量六次， 按含量测定方法测定其含量，计算每一单一含 量与平均含量之间的相对标准偏差RSD。 可接受的标准为：除另有规定外通RSD2.0%。
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三、分析方法的验证与确认在实践中的具 体应用
2、分析方法验证成功的前提条件： （1）仪器已经确认、校正并在有效期内 （2）经过培训的人员 （3）可靠稳定的对照品 （4）可靠稳定的实验试剂 （5）确认受试溶液的稳定性，在规定时间内 无降解。
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三、分析方法的验证与确认在实践中的具 体应用
3、分析方法学验证所要求验证的内容： （1）含量的测定（ GC或HPLC方法验证） （2）杂质的含量测定 （ GC或HPLC方法验证） （3）药物的定性鉴定 （4）药物的含量均匀度测定 （5）药物的微生物检测 （6）药物的细菌内毒素的检测
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.5 最低检测限 4.5.1 仪器能检测到样品中各组分的最低检测浓度，不 需定量。 4.5.2 操作 在仪器系统性实验符合检测要求的条件下，测定 三次空白样品，洗脱时间需用覆盖整个样品中所有组 分的流出。计算平均噪声水平。根据产品检验规程规 定的检测浓度配制梯度浓度，单针进样。当信噪比为 3.0±1.0，确定该浓度为待确定的最小检测限。将该 浓度溶液重复进样三次，若三次所得图谱的信噪比均 为3.0±1.0，则确定该浓度为最小检测限。
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
4.2.3 中间精密度 4.2.3.1按验证确定的方法，同一人用同一仪器 检测三批样品，每间隔24小时以上，测定一次， 共测定3次。 4.2.3.2由两人使用不同的仪器分别检测同三批 样品。 可接受的标准为：相对标准差均应不大于2.0%。
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4 新申报产品的的GC或HPLC方法验证
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5药典、客户提供的检验方法的转移应用确 认
5.1 方法选择性 选择适当的仪器、试剂（包括仪器型号、 GC或HPLC色谱柱，流动相配比等）使原料药生 产工艺中可能存在的杂质（包括原料，中间体， 前体及降解产物）与成品较好地分开，并确保 成品峰中没有其他干扰物质峰存在。
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5 药典、客户提供的检验方法的转移 应用确认