细菌划线分离与纯培养

实验4：细菌划线分离与纯培养
一、实验目的
1.掌握需氧菌分离培养的基本要领。 2．了解细菌的分离培养原则及常用的方法
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Fcous
二、实验内容
1.融化培养基，倾注平板。 2.用普通琼脂平板每人做一次划线分离培养。 （病料） 3.用普通肉汤做一管大肠杆菌的移植培养。 注：上述接种的培养基注明班组后进行培养。
实验三
实验四
小结
实验结果在固体培养基观察记录
菌落
★定义：指单个细菌在平板培养基上生长 繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、 表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、 黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌 堆积物
细菌在半固体培养基中的生长现象
三、作业
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3
1.为什么要进行细菌的分离培养？ 2.进行分离培养应注意哪些事项？ 3.细菌分离培养的方法有哪些？（重点叙述 平板划线法）
实验四
实验四
小结
“ 1
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在细菌学检验中，细菌的分离培养是重要的 基本技术之一。从混杂微生物中获得单一菌 株纯培养的方法称为分离。纯培养是指一株 菌种或者一个培养物中所有的细菌都是由一 个细胞分裂、繁殖产生的后代。 分离培养的目的在于从被检的材料中，或 者从众多杂菌中分离出纯的病原菌。 细菌分离培养应先从被检材料或者病料中 分离培养出单个菌落，然后取可疑菌落进 行纯培养，再将纯培养物移植培养。
细菌在半固体培养基中的生长现象
无动力 现象
有动力 现象
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”
实验三
实验四
小结
“ 6
平板划线分离培养法 1、划线分离的培养基必须事先倒好，需充分冷 却待平板稍干后才可使用。 2、为便于划线，一般培养基不宜太薄，每一个 平皿倾倒约20ml培养基，培养基应厚薄均匀， 平板表面应光滑。 3、划线分离主要有连续划线和分区划线两种。
”
实验三
实验四
小结
“ 6
平板划线分离培养法 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 连续划线法：适用于含菌量较少的标本 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 倾注培养法:用于细菌计数 液体培养基接种法 斜面接种法
”
实验三
实验四
小结
“ 7
细菌接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
沾取标本
接种
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
”
实验三
实验四
小结
“ 6
平板划线分离培养法
三段分区法
四段分区法
”
实验三
实验四
小结
分区划线法(3区)
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
”
实验三
实验四
小结
“ 5
兼性厌氧性细菌分离培养法 细菌培养中，有少数细菌（如牛型布氏杆菌） 在含有5%--10%二氧化碳的环境下才能生长。
”
实验三
实验四
小结
“ 6
平板划线分离培养法 菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用平板 划线法进行纯种分离。 此方法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平 板表面多方向连续划线，使混杂的微生物在平 板表面分散，经培养得到分散的由单个微生物 繁殖而成的菌落，从而达到纯化目的。
实验三
实验四
小结
连续划线法
斜面接种法及接种后菌落生长 示意图
实验三
实验四
小结
细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：37℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
实验三
实验四
小结
实验结果观察记录
细菌生长情况的观察 观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意 其大小、形 状、边缘、表面结构、透明度、 颜色等性状。
”
实验三
实验四
小结
“ 3
需氧性细菌分离培养法 1、平板划线分离法 2、倾注平皿分离法 3、芽孢需氧菌分离培养法 4、利用化学药品的分离培养法 5、实验动物分离法 6、琼脂斜面分离法 7、琼脂平板涂布分离法 8、营养肉汤分离法
”
实验三
实验四
小结
“ 4
厌氧性细菌分离培养法 1、生物学方法 植物组织（马铃薯、燕麦、发 芽谷物）动物组织（新鲜动物组织、加热的肌 肉） 2、化学方法 焦性没食子酸法、硫乙醇酸钠法 3、物理学方法 利用加热、密封、抽气等物理 方法，驱除或者隔绝环境及培养基中的氧气， 造成厌氧环境。
• 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散 生长，穿刺线边缘模糊。 • 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清 晰。
实验三
实验四
小结
细菌在液体培养基中的生长现象
混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌
单菌落（clone)
菌苔(lawn)
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液体培养时的群体形态：
液体培养时的生长形态