暗视野显微镜
暗视野显微镜实验原理
暗视野显微镜实验原理暗视野显微镜是一种常用于生物学和医学领域的显微镜，其原理是利用特殊的光学技术，使样品在显微镜下呈现出明暗对比度，从而增强细胞和组织的观察效果。
下面将详细介绍暗视野显微镜实验的原理和操作步骤。
一、原理1. 暗视野显微镜的光路设计与普通显微镜有所不同。
在普通显微镜中，光线通过样品后被物镜聚焦到目镜，而在暗视野显微镜中，光线经过样品后，穿过一个特殊的光阑，使得未被样品散射的直射光被完全屏蔽，只有散射光通过光阑进入目镜。
2. 光阑是暗视野显微镜中的关键部分，它由一个圆形光阑和一个同心圆环组成。
圆形光阑用于屏蔽直射光，而同心圆环则用于引导散射光进入目镜。
通过调节光阑的大小和位置，可以调整样品的明暗对比度。
3. 在样品中，光线会被细胞和组织中的不同结构和成分所散射。
这些散射光通过光阑进入目镜后，会与直射光相干叠加，形成明暗对比度。
由于散射光的相位和振幅与直射光不同，因此在目镜中观察到的样品会呈现出明暗不一的图像。
二、操作步骤1. 准备样品：将待观察的生物样品制备成薄片或薄片切片。
在制备过程中，需要注意避免样品过厚或过薄，以免影响观察效果。
2. 装载样品：将样品放置在载玻片上，并加入适量的显微镜目标液，以保持样品湿润，并提高观察的清晰度。
3. 调整光源：打开显微镜的光源，根据需要调节亮度。
对于暗视野显微镜，需要将光源调暗，以减少直射光的干扰。
4. 调整光阑：通过旋转光阑的大小和位置，调整样品的明暗对比度。
一般来说，光阑的直径应略大于样品的直径，以确保散射光能够完全进入目镜。
5. 调焦观察：通过调节显微镜的焦距，使样品处于清晰的焦平面上。
可以通过调节物镜和目镜的焦距来实现。
6. 观察记录：通过目镜观察样品，并记录所见到的结构和细胞。
可以使用目镜上的刻度盘来测量样品的大小。
三、应用领域暗视野显微镜广泛应用于生物学和医学领域，特别是在细胞学、组织学和病理学研究中起着重要作用。
通过暗视野显微镜，研究人员可以观察到细胞内部的结构、细胞器的分布以及细胞和组织的形态和结构变化。
暗视野光学显微镜
暗视野光学显微镜一、操作步骤（1）．将显微镜上的视野调节旋钮旋至暗视野处（2）．将光源亮度调至最大，使在低倍镜下所见的光环亮度最大。
（3）先在低倍镜下找聚光镜的光亮点或环形圈，并扭动暗视野聚光镜的调节杆，使亮点或环形圈移至视野正中。
（4）．在聚光镜镜面上滴加香柏油一滴,然后稍下降。
将标本置载物台上,旋上聚光器使油与载玻片接触(不能有气泡产生)。
（5）．先用低倍物镜及7×目镜进行配光对准物体。
调节聚光器的高度,首先在载玻片上出现一个中间有一黑点的光圈,最后为一光亮的光点,光点愈小愈好,由此点将聚光器上下移动时均使光点增大。
（6）．换上所需目镜和高倍镜,缓慢上升物镜进行调焦,至视野中心出现发光的样品。
（7）．在盖玻片上滴一滴香柏油,将油镜镜头浸在油中后调节物镜焦距处，再缓缓上下移动聚光镜高低，使物体发出最大亮度为止。
二、注意事项（1）．进行暗视野观察时,聚光镜与载玻片之间滴加的香柏油要充满,否则照明光线于聚光镜上面进行全面反射,达不到被检物体,从而不能得到暗视野照明。
（2）．在进行暗视野观察标本前,一定要进行聚光镜的中心调节和调焦,使焦点与被检物体一致。
（3）．由于暗视野聚光镜的数值孔径都较大( NA=1．2—1．4),焦点较浅,因此,过厚被检物体无法调在聚光镜焦点处,一般载玻片厚度为1．0mm左右,盖玻片厚度宜在0．16mm以下,同时载玻片、盖玻片应很清洁,无油脂及划痕,否则都会严重地扰乱最终的像。
三、基本原理生活的细菌在明视野显微镜下观察是透明的,不易看清。
暗视野显微镜的原理与来自缝隙的一束强光通过暗室时,可清楚地看到其中细微灰尘的现象是一样的,即给样品照明的光不直接穿过物镜,而是由样品上反射或折射的光进入物镜,那么,在漆黑的视野中,由于反差增大了,使样品能够看得更清楚。
因用暗视野法可以在黑暗的视野中看到光亮的菌体,故在观察生活细菌及细菌运动时常采用此法。
暗视野显微镜的构造主要是采用一种特殊的聚光器,在聚光器的下方中央为圆形黑盘所遮,光仅由周缘进入,使光会聚于载玻片上,并斜照物体,物体经斜射照明后,发出反射光可进入物镜,这样,造成显微镜视野黑暗,而其中的物体明亮。
超显微镜原理
暗视野显微镜（dark field microscope）是光学显微镜的一种，也叫超显微镜（ultramicroscope ）。
暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。
利用这种显微镜能见到小至4~200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。
暗视野显微镜是利用丁达尔（Tyndall）光学效应的原理，在普通光学显微镜的结构基础上改造而成的。
暗视野聚光器，使光源的中央光束被阻挡。
不能由下而上地通过标本进入物镜。
从而使光改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。
暗视野显微镜的基本原理是丁达尔效应。
当一束光线透过黑暗的房间,从垂直于入射光的方向可以观察到空气里出现的一条光亮的灰尘“通路”,这种现象即丁达尔效应。
暗视野显微镜在普通的光学显微镜上换装暗视野聚光镜后,由于该聚光器内部抛物面结构的遮挡,照射在待检物体表面的光线不能直接进入物镜和目镜,仅散射光能通过,因而视野是黑暗的。
暗视野显微镜由于不将透明光射入直接观察系统，无物体时，视野暗黑，不可能观察到任何物体；当有物体时，以物体衍射回的光与散射光等在暗的背景中明亮可见。
在暗视野观察物体，照明光大部分被折回，由于物体(标本)所在的位置结构，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的变化。
暗视野显微镜常用来观察未染色的透明样品。
这些样品因为具有和周围环境相似的折射率，不易在一般明视野之下看的清楚，于是利用暗视野提高样品本身与背景之间的对比。
这种显微镜能见到小至4~200nm的微粒子，只能看到物体的存在、运动和表面特征，不能辨清物体的细微结构。
各种特殊生物显微镜的原理和使用
荧光专用物镜
FL25X/0.65 FL40X/1.0（甘油） FL100X/1.25（甘油）
荧光染料：
核 酸：溴化乙锭、吖啶橙、PI、DAPI等。 细胞骨架：鬼笔环肽。 蛋 白：抗原抗体免疫荧光
各种荧光蛋白（GFP、YFP等）
四、使用方法． 1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮 点。
旋光现象：线偏振光通过某些透明介质后，它的光振动 方向将绕着光的传播方向旋转某一角度 的现象，称 为旋光现象。这种介质称为旋光物质。如石英、糖、 酒石酸钾钠等。
偏振光经过旋转的检偏器后光强发生变化
自然光
. . ..
线偏振光 .
起偏器
检偏器
偏振光经过旋转的检偏器后光强发生变化
P1
P2
自然光
. ...
3 细胞内的某些成分可与荧光素结合而显荧光，如溴化乙锭与吖啶 橙可与DNA综合，进行细胞内DNA含量测定。
(2)将视场光阑适当缩小，用10X物镜找到被检物体，同 时在视场中看到视场光圈的轮廓象。上下缓慢调整聚 光镜，使视场光圈像清晰可见。
(3)视场光圈如不在视野中央，可利用聚光镜外侧两个调 节螺丝进行调整，再将其开大到相应位置。
2 相差显微镜
2.1 原理
光波有振幅（亮度）、波长（颜色）及相位(指在某一时间 上光的波动所能达到的位置)的不同。
传播方向
E
振动面
3.自然光— 普通光源发出的光,在垂直于传播方向 的平面上,所有可能方向的光矢量E 的振幅都相等。
二、起偏和检偏
起偏：使自然光（或非线偏振光）变成线偏振光的过程。
检偏：检查入射光的偏振性的过程。
双折射现象：一束光射入各向异性晶体后有两束折射光 的现象。尼科耳棱镜。
暗视野显微镜实验原理
暗视野显微镜实验原理引言：暗视野显微镜是一种常用的显微镜技术，它能够观察无法被普通显微镜观察到的样品。
本文将详细介绍暗视野显微镜的实验原理和工作原理，并探讨其在科学研究和生物医学领域的应用。
一、暗视野显微镜的实验原理暗视野显微镜利用了相位差干涉原理，通过对样品和背景之间的相位差进行测量，实现对样品的观察。
相位差是光束通过不同介质或不同部分时产生的光程差的一种度量。
在普通显微镜中，样品的透明度差异会导致光束的相位差，从而形成对比度低的图像。
而暗视野显微镜通过引入一个相位补偿器，使得样品和背景之间的相位差变化为强度差，从而增强了对比度，使得样品的细节更加清晰可见。
二、暗视野显微镜的工作原理暗视野显微镜由三个主要部分组成：光源、补偿器和检测器。
光源发出一束平行光，并通过凸透镜使光束汇聚到样品上。
样品会对光束进行散射和吸收，产生相位差。
接下来，光束通过一个补偿器，该补偿器会引入一个反位的相位差，以抵消样品中的相位差。
经过补偿器后，光束进入检测器，检测器会将相位差转化为强度差。
最后，通过图像处理和显示装置，观察者可以看到一幅明亮且对比度较高的图像。
三、暗视野显微镜的应用1. 细胞观察：暗视野显微镜在生物医学领域中被广泛应用于细胞观察。
由于暗视野显微镜可以增强对比度，使得细胞的形态和结构更加清晰可见。
这对于细胞学研究和疾病诊断具有重要意义。
2. 纳米颗粒研究：暗视野显微镜还可以用于纳米颗粒的观察和研究。
由于纳米颗粒非常小，普通显微镜很难观察到其细节。
而暗视野显微镜可以通过增强对比度，使得纳米颗粒的形态和分布更加清晰可见。
3. 材料科学研究：暗视野显微镜在材料科学研究中也具有广泛的应用。
通过观察材料的表面形貌和内部结构，可以研究材料的性质和性能。
暗视野显微镜可以帮助科学家更好地理解材料的微观结构，从而指导材料的设计和制备。
结论：暗视野显微镜利用相位差干涉原理，通过引入相位补偿器来增强对比度，实现对样品的观察。
暗视野显微镜
BF降低聚光镜DF镜像DF效果：只观察到标本的表形，运动状态→原虫、细菌鞭毛、伪足、管型、结晶等。
理论分辨率：优于0.004micron光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法3光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法9相长干涉：0相位，振幅M+M ＝2M相消干涉：相位相反，光程差1/2λ；合成波极振幅小。
光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法10光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法11光的干涉环状光阑–造成光程不同，偏斜/衍射。
产生直射光及衍射光。
相(位)板：共轭面(半透明环)→通过直射光，补偿面(中间) →通过衍射光。
光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法13明反差－负相差+相板，共轭面涂相位膜推迟直射光1/4波长，使其与衍射光接近同一相位，同时加大对直射光的吸收，物像明亮，背景暗光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法16光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法17暗反差－正相差（－相板）共轭面仅涂吸收膜－振幅小，补偿面涂相位膜推迟衍射光1/4，使两者差1/2相位，合成波振幅形成相消干涉，背景亮，物体暗光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法23光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法24偏振现象□自然光经反射、折射、双折射后及吸收后，可成为只在一个方向振动的光波，为偏光现象或称“偏振光”。
光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法正常光，1.658＞树胶折射率异常光，1.53~1.54光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法27光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法如不是双折射体物质表现为各向同性，无论怎样旋转标本也不会出现物像，因起偏镜发出的直线偏振光的振动方向不发生改变，仍与检偏镜振动方向相垂直。
成像检偏镜双折射体起偏镜自然光光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法29光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法31作轴向偏斜调节，产生平行劈裂＜被检目标CON前焦面Obj后焦面棱镜I棱镜II相差观察法33横向偏移90°光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法34光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法36光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法37光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法38DIC像差与相差的光路光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法40４种光镜法镜像：BF,DF,PH,DIC光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法41光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法相差、DIC相差、HOFFMAN相差镜像之比较光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法43斜射光照明光学显微镜及镜像记录第2节暗场相差观察法。
3.暗视场和相差显微镜
图7 光环与相板的合轴过程 a 未调整状态 b 近调整状态 c 正常态
四 相差物镜的选择
字母 反差 P N H L 正 负 高 低 应 用
观察细胞和细胞核的内部结构 观察微小的物体 ,如孢子 ,鞭毛和活的样品等 当样品反差较低时 当样品反差较高时
M
中
当样品反差为中等时
图8 光的干涉及明暗相差形成的图解
思考题
1 试述相差显微镜的成像原理及结构特点 2 简述相差显微镜的使用方法及注意事项
图5 相板结构示意图
（三） 使用方法
相差装置的安装
相差物镜的调换安装
转盘聚光器的调换安装 把绿色滤色镜放入镜座的滤色镜架上
聚光器的调中
相板圆环与环状光阑圆 ,薄则环的合轴调中 相差物镜与环状光阑的匹配
把CT放入目镜筒
明环和暗环的聚焦 明环和暗环的调中重叠
回装观察目镜
图6 相差聚光器及合轴望远镜
（五） 镜检
观察原生动物的结构，细胞器， 细胞质中超微质点的运动，存在方式， 观察植物细胞器，细胞质运动。
二 相差显微镜
（一）实验原理
相差显微镜是利用特殊的相差装置 ,通过光的衍
射和干涉效应把光波通过样品的相位差变为振幅差
以增大透明物体的明暗反差 ,从而可以用来观察未染 色的活体组织和细胞结构的一种仪器
暗视野显微镜是以丁达尔效应为基础，通过 特殊的聚光器，使照射样品的直射光不能进入物 镜，只有被照样品表面反射或衍射的散射光进入 物镜，因而在黑暗的视野中形成物体明亮的像。
图1 暗视野聚光器工作原理
（二） 结构特点
1.丁达尔效应：光通过浑浊媒质时 ,浑浊媒质所
呈现的光的强烈散射现象,通常称为丁达尔效应 2.暗视野照明方法 （1）暗视场光挡 （2）暗视场聚光器
暗视野显微镜观察草履虫实验报告
文章标题：探寻微观世界：暗视野显微镜观察草履虫实验报告在我们日常生活中，很难想象到微观世界的奇妙与复杂。
然而，通过科学技术的进步，我们有幸能够利用暗视野显微镜来窥探微生物的世界。
本文将基于暗视野显微镜观察草履虫的实验报告，探索微生物世界的奥秘，以及暗视野显微镜在科学研究中的重要意义。
一、实验材料与方法在进行暗视野显微镜观察草履虫的实验中，我们准备了一台暗视野显微镜、草履虫标本、蒸馏水、载玻片等实验工具。
我们将草履虫标本放在载玻片上，加入少量蒸馏水后覆盖另一片玻片。
将载玻片放在暗视野显微镜的工作台上进行观察。
二、观察过程和结果通过暗视野显微镜观察草履虫的过程中，我们发现草履虫在显微镜下呈现出清晰的轮廓和细节。
我们可以清晰地看到草履虫的体形、纤毛、细胞器等结构，这些结构在肉眼下是无法观察到的。
通过调节暗视野显微镜的焦距和光源，我们还可以更清晰地观察到草履虫在水中的游动状态，以及其与其他微生物的互动。
三、实验总结与个人观点通过本次实验，我们不仅深入了解了暗视野显微镜的观察原理和操作技巧，也对草履虫这一微生物的生态和行为有了更全面的认识。
我们深刻体会到，暗视野显微镜在微观世界的探索中具有不可替代的作用，它为科学研究提供了重要的工具和支持。
我们也认识到微生物世界的多样性和微生物在生态系统中的重要性。
在我看来，微生物作为地球生命的基本单位，其丰富的形态和功能对我们的生存环境和人类健康有着重要影响。
暗视野显微镜的发明和应用，让我们能够更深入地认识微生物世界，从而更好地保护生态环境、预防疾病等。
我认为微生物学及暗视野显微镜研究在当今科学研究中具有重要的意义。
总结起来，暗视野显微镜观察草履虫的实验为我们打开了微观世界的大门，让我们领略到微生物世界的丰富多样性和微观生命的奇妙之处。
希望未来我们能够继续通过科学技术的进步，更深入地探索微观世界，为人类的生存、健康和环境保护做出更大的贡献。
参考资料：1. 陈恩泽、刘正春、顾剑飞编著. 暗视野显微镜观察技术手册. 北京：化学工业出版社. 20072. 鲁斌等编著. 微生物学实验教程. 北京：高等教育出版社. 2015.暗视野显微镜观察草履虫的实验报告，让人对微观世界有了更深入的了解。
光学显微镜的几种特殊显微镜
光学显微镜的几种特殊显微镜一.暗视野显微镜暗视野显微镜由于不将透明光射入直接观察系统，无物体时，视野暗黑，不可能观察到任何物体，当有物体时，以物体衍射回的光与散射光等在暗的背景中明亮可见。
在暗视野观察物体，照明光大部分被折回，由于物体(标本)所在的位置结构，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的变化。
暗视野显微镜在普通光学显微镜台下配一个暗视野聚光器,来自下面光源的光线被抛物面聚光器反射，形成了横过显微镜视野而不进入物镜的强烈光束。
因此视野是暗的，视野中直径大于 0.3m 的微粒将光线散射，其大小和形态可清楚看到。
甚至可看到普通明视野显微镜中看不见的几个毫微米的微粒。
因此在某些细菌、细胞等活体检查中常常使用。
二.相位差显微镜相差显微镜是荷兰科学家Zermike 于1935年发明的，用于观察未染色标本的显微镜。
活细胞和未染色的生物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位发生变化(振幅差)，这种振幅差人眼无法观察。
而相差显微镜通过改变这种相位差，并利用光的衍射和干涉现象，把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。
相差显微镜和普通显微镜的区别是:用环状光阑代替可变光阑， 用带相板的物镜代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。
相差显微镜相差显微镜具有两个其他显微镜所不具有的功能:①将直射的光(视野中背景光)与经物体衍射的光分开;②将大约一半的波长从相位中除去，使之不能发生相互作用，从而引起强度的变化。
相差显微镜（phasecontrast microscope）由P．Zernike 于1935年发明，并因此获1953年诺贝尔物理奖。
这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。
相差显微镜的基本原理是，利用物体不同结构成分之间的折射率和厚度的差别，把通过物体不同部分的光程差转变为振幅（光强度）的差别，经过带有环状光阑的聚光镜和带有相位片的相差物镜实现观测的显微镜。
暗视场显微镜的原理及注意事项 显微镜操作规程
暗视场显微镜的原理及注意事项显微镜操作规程暗视场显微镜：使用特别的暗视场聚光镜使照明光线偏移而不进入物镜，只有样品的散射光进入物镜。
注意事项1、制作暗视场光挡时，若光挡直径过小或光挡的中心位置不正，则不能全部挡掉直射光，视野不暗，样品与背景的明暗反差不明显；若光挡直径过大，聚焦到样品上的光线不足，使暗视野显微镜察看到的样品亮度不佳，影响察看效果。
2、使用暗视野显微镜时，照明光源的照明强度要高，否则样品的反射光强度不够，影响察看效果。
3、若视场中样品与背景明暗反差不强时，可以上下调整聚光器的位置，使视场内的反差提高。
4、要求使用的载玻片和盖玻片必需无划痕且无灰尘，物镜前透镜也必需清洁无尘。
载玻片与盖玻片的厚度应符合标准。
载玻片太厚，聚光器的焦点将落在载玻片内，达不到被检物体的平面上；使用油镜头时，由于物镜的工作距离很短，甚至无法调焦，从而看不到或看不清被检物体。
5、载玻片的厚度要适合，照明光束经暗视野显微镜聚光器后，产生空心照明光锥，即中心为暗区。
而反射光的焦点在聚光器上透镜表面之上，很短的距离。
因此，载玻片的适合厚度为0.8～1.2mm。
6、物镜的数值孔径必需小于聚光器的数值孔径，否则会因物镜的孔径角大于暗视野显微镜聚光器所形成的照明光束中心暗区的角度，致使部分照明光线射入物镜，破坏或降低了暗视场的照明。
7、暗视野显微镜镜检时室内要暗，假如没有这样的条件，应尽可能使用遮光装置，以阻拦目镜四周的光线射入。
8、在进行油镜镜检时，由于油内的杂质和气泡的漫反射，会阻拦暗视野显微镜镜检效果，所以要求尽可能地除掉油内的杂质和气泡。
工作原理暗视场显微镜在构造上应用丁达尔现象（Tyndall phenomenon:当聚光光束射入溶胶时，从光束的侧面可以看到一条发亮的光柱，在光的传播过程中，光线照射到粒子时，如粒子直径略小于入射光波长，则发生光的散射，每个微粒就成为一个发光点，从侧面可以看到一条光柱。
），装配了一类特别聚光器暗视场聚光器，使入射光束，从聚光器斜向照明被检样品。
暗视野显微镜说明安全操作及保养规程
暗视野显微镜说明安全操作及保养规程暗视野显微镜（Darkfield Microscope）是一种特殊的显微镜，它采用黑暗场（Darkfield）成像技术，将样本的反射和散射光线投射到样本底部的望远镜中，从而产生高对比度的图像。
由于暗视野显微镜具有高灵敏度、高分辨率等优点，因此被广泛应用在生物医学研究、材料科学、食品卫生等领域。
但是，如果不注意安全操作，使用暗视野显微镜会对人体造成一定的伤害，甚至可能导致设备的损坏。
因此，在使用暗视野显微镜之前，需要了解安全操作及保养规程。
安全操作规程1. 佩戴防护眼镜在操作暗视野显微镜时，可能会产生强光和高能量的激光束，会对人眼造成一定的伤害，因此在操作前要佩戴防护眼镜。
防护眼镜应选择透过紫外线、可见光和近红外线的滤光系数高的透明镜片，同时以硬质镜片为佳。
2. 禁止直视光束禁止直接用眼睛直视暗视野显微镜中的激光束，否则可能会造成瞬时光性性质中毒和眼部损伤。
3. 避免日晒暗视野显微镜的光学元件对阳光和紫外线敏感，因此要避免长时间暴露在阳光直射下。
在未使用时，应该盖好光学元件的保护罩，避免尘埃和光线的影响。
4. 防止电击在操作暗视野显微镜时，要保证插头接触良好，避免电器故障造成电击。
5. 防止水分进入暗视野显微镜的电路板和内部元器件十分敏感，如果进入水分可能会导致设备故障。
因此，在操作前，要确保工作环境干燥，并避免进水。
6. 避免振动和冲击使用暗视野显微镜时，要保持设备稳定，并避免大的振动和冲击，以免影响成像的清晰度。
7. 限制电源电压为了防止设备故障，必须使用符合规定并在说明书中标明的标准电源电压，不得随意更改。
保养规程1. 定期清洗暗视野显微镜的镜片、接口和调节钮应定期清洗，清洗时应注意使用特殊的清洁液，避免使用有机溶剂和强酸碱。
2. 避免磕碰设备在使用过程中要避免磕碰，维护时要放在平滑的水平面上进行维护。
3. 定期校准设备在使用一段时间后可能会出现偏差，此时需要进行校准，校准时需要按照说明书中的步骤进行操作。
浅析暗视野显微镜的故障问题及对应的解决方法 显微镜解决方案
浅析暗视野显微镜的故障问题及对应的解决方法显微镜解决方案暗视野显微镜也叫超显微镜，常用来察看未染色的透亮样品。
暗视野显微镜问题及解决方法1、问题：有充分的照明，使标本可见，或标本是可见的，但很微弱。
解决方案：灯电压可以被设置得太低，或灯泡可能没有充分的强度照射试样。
将电压上升到大约12伏（12伏，100瓦钨卤素灯泡）或更换光源，假如可能的话，与更大的强度。
假如不解决这个问题，检查台下冷凝器，以确保它正确的位置用适当大小的视场光阑。
此外，还要检查颜色和/或中性密度滤光片，偏光板，相位差板，或任何其他组件，可能会降低光照强度的光路，假如这个问题发生的高数值孔径反射式冷凝器，检查做出确定冷凝器ding级镜头正确涂油的显微镜载片上的底部。
假如浸没接触已被打破，重新申请了冷凝器的油和机架，直到顶端透镜完全浸在油中和底部的滑动接触。
2、问题：视场的中心降低光照强度，有一个暗点，但在外围的对象都亮起，显示正常。
解决方案：台下聚光器位置不正确或光站的目标是错误的大小。
当心机架冷凝器向上和向下，同时在视场中察看试样。
检查做出确定的冷凝器孔径和视场光阑设置打开位置。
假如这并不影响照明，更改视场光阑尺寸使其稍大或稍小，然后重新检查照明。
偶然显现此问题时使用过厚（大于标准一毫米）显微镜载玻片。
使用千分尺或一组表卡尺来确定厚度滑动和滑动/盖玻片组合。
假如滑动太厚，要么更改到正确的厚度的滑动或检查冷凝器，以确定它是否可以调整，以补偿不同厚度的幻灯片。
3、问题：灯往往有一个很短的寿命，灯泡内部有涂层的黑色蒸发的钨烧结。
解决方案：长时间在过高的电压，这确定会影响其寿命的灯泡已使用。
更换灯泡削减灯电压经过察看和/或试样的显微摄影。
4、问题：图像有明场暗区的中心的带或不带外周。
解决方案：这个问题是典型的台下冷凝器时，被错误地集中或场站太小。
恢复明场，并重新建立科勒照明的条件下，再重复暗场的过程中，确保冷凝器集中。
假如这没有帮忙，加添视场光阑的大小，直到建立适当的暗场条件，当使用目标具有太高的数值孔径为暗场聚光，也可能显现这个问题。
暗视野显微镜的原理
暗视野显微镜的原理
暗视野显微镜是一种高级显微镜，可用于观察透明或半透明样品，例如生物细胞、纤维素和聚合物等。
相比于普通的明视野显微镜，暗视野显微镜可以突破深度之限的问题，使得观察到的样品更为鲜明、清晰。
暗视野显微镜的原理是利用特殊的光路径来观察样品。
在显微镜中，一束光线从侧面通过器具，然后通过样品，最后到达目镜。
与明视野显微镜不同的是，暗视野显微镜中的光线从一个不同角度进入样品中，这种角度通常是天然的生物透明结构所反射或散射的反射角度，并且样品和背景颜色相反。
这种技术能够增强样品的影像，并且还可以捕获从样品表面垂直散射的光线。
暗视野显微镜的光路主要是由两个反相轴向的偏振器构成。
第一个偏振器位于射入的光线的路径上，它让只能沿着一个特殊轴传播的振动方向的光通过。
这束光线以某个角度扫过物品表面并被反射，散射出比较暗的光束。
而第二个偏振器在样品和镜片之间，它将筛选掉如同在编码电影影像中使用的那样的一个偏振方向的光线，这样只留下来了被样品反射出来的那些光，以便在通过目镜或摄像机来直接观察或捕捉。
这种显微镜的优点是它能够减少样品表明部分的不清晰尤其是不同折射系数等，其能够突破深度（thick）的限制，能够观察材料的三维超深层次结构。
实际上，这种显微镜还可以通过控制相位差来改变样品的分辨率。
暗视野显微镜在科学研究和医学诊断中都有广泛的应用。
它可以观察和分析细胞、细菌和微生物的内部结构、生态学和环境学与其它物理化学过程以及水、食物及其它物质对生命机制的影响。
总之，暗视野显微镜以其高精度、高清晰度、能有效地观察样品各种内部微小结构的特点，已经成为生物、化学学界研究中不可或缺的工具之一。
暗视野显微镜检查法
暗视野显微镜检查法暗视野显微镜又叫暗场显微镜，是一种通过观察样品受侧向光照射时所产生的散射光来分辨样品细节的特殊显微镜。
1、暗视野显微镜的原理和结构特点暗视野显微镜和一般的明视野显微镜区别在于二者的聚光器不同，暗视野显微镜装有一个中央遮暗的聚光器，使光线不能通过聚光器，而只能从聚光器四周边及未遮暗的部位斜射到载玻片的标本上。
因光线是斜射的，不能进入物镜，故观察的视野是暗的，而聚光器斜射到菌体上的光线，因光散射作用而使菌体发出亮光，反射到物镜内，这样在显微镜中可见到暗视野中明亮的物像。
暗视野显微镜主要用于检查未染色标本的形态和运动能力。
2、操作方法①使用研究用暗视野显微镜，或将普通光学显微镜上的聚光器取下，换上暗场聚光器。
②不论是使用干燥物镜还是油浸物镜，镜检时都应在聚光器的上透镜上加一大滴香柏油。
③将制作好的细菌悬滴标本片置于载物台上，上升聚光器至顶部使油与载玻片接触。
④放大光源。
⑤进行聚光器光轴调节及调焦。
用10*物镜找到被检物像，关小聚光器虹彩光圈至可在视野中看到视场光阑的轮廓，再上下缓慢调整聚光器，这样会使视场光阑的像变得清晰，如视场光阑不在场中央，利用聚光器外侧的两个调节钮进行调整，当亮光点调到场中央后，再将其开大，即可进行观察。
3、注意事项①暗视野观察所用物镜的数值孔径宜在1.00—1.25左右，太高反而效果不佳，最好是使用带视场光阑的物镜，转动物镜中部的调节环，可随意改变数值孔径的大小。
②要求使用的载玻片和盖玻片必须无划痕且无灰尘，物镜前透镜也必须清洁无尘。
载玻片与盖玻片的厚度应符合标准。
载玻片太厚，聚光器的焦点将落在载玻片内，达不到被检物体的平面上;使用油镜头时，由于物镜的工作距离很短，甚至无法调焦，从而看不到或看不清被检物体。
③镜检时室内要暗，如果没有这样的条件，应尽可能使用遮光装置，以阻止目镜周围的光线射入。
④在进行油镜镜检时，由于油内的杂质和气泡的漫反射，会妨碍视场的镜检效果，所以要求尽可能地除掉油内的杂质和气泡。
暗视野显微镜
一、相差显微镜的结构原理及应用 二、偏光、暗视野显微镜的原理及应用 三、荧光显微镜的原理及应用 四、激光共聚焦扫描显微镜的原理及应用 五、细胞膜渗透性测定 六、液泡系活体染色及观察 七、线粒体活体染色及观察 八、细胞原生质体制备以及叶绿实验细胞生物学实验一相差显微镜的结构原理及应用二偏光暗视野显微镜的原理及应用三荧光显微镜的原理及应用四激光共聚焦扫描显微镜的原理及应用五细胞膜渗透性测定六液泡系活体染色及观察七线粒体活体染色及观察八细胞原生质体制备以及叶绿体的原位观察实验二偏光暗视野实验二偏光暗视野显微镜的原理及应用显微镜的原理及应用暗视野显微镜装有暗视野聚光器的显微镜由于采取特殊的照明方式能够在暗背景上呈现明亮的像分辨率较高小于5nm比普通光镜高40倍可以用来观察未染色的活体微生物或者胶体颗粒
暗视野显微镜-----装有暗视野聚光器的显微镜， 由于采取特殊的照明方式，能够在暗背景上呈 现明亮的像，分辨率较高，小于5nm，比普通 光镜高40倍，可以用来观察未染色的活体微生 物或者胶体颗粒。
以丁达尔效应为基础，常用于微生物，胶体化学，观察 单细胞有机体，硅藻，放线虫类，细菌等具有线性结 构的物体：鞭毛、纤维。浮游生物，悬浮细胞，精子， 梅毒螺旋体等，不适合观察染色的标本 只能看到物体的存在和应用，看不到内部的细微结构
试剂和器材： 蒸馏水 暗视野显微镜 载玻片 牙签 滤纸条 指甲油
盖玻片
（二）结构： 结构特点: 使用中央遮光板或暗视野聚光器（常用 的是抛物面聚光器），使光源的中央光束 被阻挡。不能由下而上地通过标本进入物 镜。从而使光线改变途径，倾斜地照射在 观察的标本上，标本遇光发生反射或散射， 散射的光线投入物镜内，因而整个视野是 黑暗的。
（三）操作： 1、样品制备：蒸馏水一小滴→ 载玻片 →牙 签取口腔上皮细胞→混匀→盖上盖玻片 → 吸 去多余水→ 封片 2、装暗视野聚光器，若用油浸系时，需在载 玻片与聚光器之间滴油 3、标本置于载物台上 ，用10倍物镜聚焦 升高聚光器直至出现一个清晰的光点，将其调 中 4、换用高倍时，需注意其数值孔径应低于聚 光器的数值孔径（N.A.）
暗视场显微镜
暗视场显微镜
使用特殊的暗视场聚光镜使照明光线偏移而不进入物镜，只有样品的散射光进入物镜。
因而在暗背景上得到亮的像，与暗视场照明相反，照明的光线直接到达成像平面的，称明视场照明。
暗视场显微镜主要用于观察结构和折射率变化有关的物体，如硅藻、放射虫类、细菌等具有规律结构的单细胞生物以及细胞中的线状结构，如鞭毛、纤维等。
用暗视场显微镜还可观察到物镜分辨极限以下的质点，但不适用于观察染色的标本。
暗视野显微镜检查是一种检查梅毒螺旋体的方法。
暗视野，顾名思义即是显微镜下没有明亮的光线，它便于检查苍白的螺旋体。
这是一种病原体检查，对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。
早期皮肤粘膜损害(一期、二期霉疮)可查到苍白螺旋体。
一期梅毒苍白螺旋体多在硬下疳的硬结、溃疡的分泌物和渗出液中存在，肿大的淋巴结穿刺也可检出。
二期梅毒苍白螺旋体可在全身血液和组织中检出，但以皮肤检出率最高。
早期先天性梅毒，可以通过皮肤或粘膜损害处刮片发现梅毒苍白螺旋体。
最近，通过羊膜穿刺术获得孕妇的羊水，以其作暗视野显微镜观察，对先天性梅毒有诊断价值。
暗视野显微镜检查法的原理
暗视野显微镜检查法的原理
暗视野显微镜是一种显微镜检查方法，可以观察无色或透明细胞和组织。
其原理基于相位差显微镜的原理。
在普通的透视显微镜中，光线通过物镜镜头和载物中的细胞或组织，然后进入目镜观察。
由于无色细胞或组织对光的吸收和散射较弱，使得它们在背景光线中很难被观察到。
暗视野显微镜采用了相位差显微镜的技术，通过在光路中插入一个透明光柱形容器，在光的传播路径中引入了一个光程差。
当光通过细胞或组织时，细胞或组织的不同部分会对光的相位和振幅产生不同程度的影响，从而产生相位差。
在目镜观察时，通过调整相位差环的位置和大小，使得细胞或组织的不同部分之间的相位差被抵消，仅留下由于样品的不均匀性产生的相位差。
这使得无色细胞或组织与背景光线产生对比，从而使它们更容易被观察到。
暗视野显微镜可以提供高对比度的图像，使得观察者可以更清晰地看到无色或透明细胞和组织的细节。
这种显微镜适用于多种生物学和医学应用，如观察活体细胞、细胞培养、组织切片等。
暗光显微镜用途
暗光显微镜用途
暗视野显微镜在多个领域都有应用，以下列举一些主要用途：
1. 观察未染色的透明样品：暗视野显微镜常用来观察未染色的透明样品。
由于这些样品与周围环境的折射率相似，它们在一般明视野下不容易看清楚。
暗视野显微镜通过阻挡直接照射到样本细节的直射光，只观察反射或衍射光，从而提高了样品与背景之间的对比度，使得样本的细节和特征更加清晰可见。
2. 医学检验学：在医学检验学中，暗视野显微镜常被用来观察人体体液中的螺旋体、尿管形、结晶或各种粒子。
例如，它常用于检查苍白螺旋体，这是一种病原体检查，对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。
3. 胶体化学：在胶体化学领域，暗视野显微镜可用于观察原虫、细菌的鞭毛、伪足运动。
数码暗视野显微镜安全操作及保养规程
数码暗视野显微镜安全操作及保养规程数码暗视野显微镜是一种高科技的显微镜，能够将微小物体放大数百倍，极大地方便了人们的观察与研究工作。
但是在使用之前，我们需要了解安全操作以及保养规程，以确保设备的长期稳定使用效果。
安全操作规程1. 佩戴适当的防护设备在使用数码暗视野显微镜之前，必须佩戴适当的防护设备。
这包括眼镜、手套、口罩等防护装备，以避免可能的伤害。
同时，在操作过程中，需要注意手部和眼部的安全，确保不会被反弹的样品击中。
2. 保持显微镜干燥数码暗视野显微镜的电子设备对水分非常敏感。
在使用之前，应确保显微镜工作区域的干燥，并避免水分进入设备内部。
在操作过程中，避免在水汽或者潮湿的环境中使用显微镜。
3. 避免暴露于强光下数码暗视野显微镜是根据光学原理工作的，对于强烈的光源非常敏感。
在使用之前，应确保显微镜工作环境光线柔和且均匀。
同时，应避免将显微镜暴露在强光源下，以避免设备受损。
4. 禁止自行拆卸数码暗视野显微镜是一种精密仪器设备，禁止未经专业人员授权的自行拆卸行为。
如果需要对设备进行维修或者清理，应该联系专业人员进行操作，以避免设备损坏。
5. 测量前校准设备在进行测量之前，应该对设备进行校准操作。
这包括调节显微镜的放大倍数、对焦等操作。
只有正确的使用和校准，才能保证数据的准确性和结果的可靠性。
6. 关闭电源并断开连接在使用完毕之后，应该及时关闭电源并断开连接。
这不仅可以保护设备，还可以节约能源和电费。
同时，在存储设备之前，需要将显微镜上的各个零配件清洁干净，并将其放置在安全的地方，以避免损坏和丢失。
保养规程1. 定期清洁设备数码暗视野显微镜在使用过程中，可能会吸入粉尘、细菌等物质，这些可能对设备的稳定性和数据的准确性产生负面影响。
因此，需要定期对设备进行清洁，包括镜头、显示屏和其他部件等。
2. 避免过度颠簸数码暗视野显微镜是一种精密仪器，需要在使用和运输过程中避免过度晃动和颠簸。
在运输设备时，应该注意包装是否牢固，最好在运输前将设备进行固定，以避免设备在运输过程中受到损坏。
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一、目的要求
1．了解暗视野显微镜的基本原理及用途。
2．学习并掌握使用暗视野显微镜观察微生物样品的基本技术。
二、基本原理
暗视野显微镜的构造主要是采用一种特殊的聚光器，在聚光器的下方中央为圆形黑盘所遮，光仅由周缘进入，使光会聚于载玻片上，并斜照物体，物体经斜射照明后，发出反射光可进入物镜，这样，造成显微镜视野黑暗，而其中的物体明亮。
如无暗视野显微镜时，只需将明视野显微镜上的聚光器取下，换上暗视野聚光器即可；也可在明视野显微镜聚光镜头上附一中央遮光板(黑色的X光片包装纸，用剪刀剪成直径小于聚光镜直径大约0.8-1cm，用少许镜油轻轻粘附于聚光镜头上，使光源的光线能从周围透过即可应用)。
三、器材
暗视野显微镜，载玻片，盖玻片，无菌生理盐水。
四、操作步骤
1．选厚薄在1．0—1．2mm的干净载玻片一块，按常规方法取标本制成等渗盐水涂片，加盖玻片（注意切勿有气泡存在）。
2．安装暗视野聚光器或中央遮光板，将聚光镜光圈调至1．4。
3．光源的光圈孔调至最大。
4．在聚光器上放一滴香柏油，将标本置载物台上，旋上聚光器使油与载玻片接触（不能有气泡发生）。
5．进行聚光器光轴调节与调焦。
水平移动聚光器，使聚光器光轴与显微镜光轴位于一条直线上。
调节聚光器的高度，首先在载玻片上出现一个中间有一黑点的光圈，最后为一光亮的光点，光点愈小愈好，由此点将聚光器上下移动时均使光点增大。
6．换上所需目镜和高倍镜，缓慢上升物镜进行调焦，至视野中心出现发光的样品。
7．按普通显微镜方法操作仔细观察玻片。
五、光学显微镜的保养
1. 严格按照有关操作规则使用显微镜，避免因使用不当造成损毁。
2. 显微镜
在储存和使用过程中，普遍存在着生霉起雾问题，霉和雾会使显微镜的视场模糊，
分辩率下降。
为了使显微镜保持良好的工作状态，延长使用寿命，显微镜的工作环境应保持清洁、干燥、防尘。
3. 显微镜在每次使用完毕后应及时做好清洁工作，特别是目镜、物镜等容易污染的光学部件，如发现表现表面有灰尘、指纹、脏物等，应及时用镜头纸清洁干净。
4. 显微镜工作室最好能安装空调、抽湿及防尘装置。
5. 如发现光学部件内部有生霉等现象，最好及时联系有关厂家派人清洁、维修。
六、注意事项
1．进行暗视野观察时，聚光镜与载玻片之间滴加的香柏油要充满，否则照明光线于聚光镜上面进行全面反射，达不到被检物体，从而不能得到暗视野照明。
2．在进行暗视野观察标本前，一定要进行聚光镜的中心调节和调焦，使焦点与被检物体一致。
3．由于暗视野聚光镜的数值孔径都较大（ NA=1．2—1．4），焦点较浅，因此，过厚被检物体无法调在聚光镜焦点处，一般载玻片厚度为1．0mm左右，盖玻片厚度宜在0．16mm以下，同时载玻片、盖玻片应很清洁，无油脂及划痕，否则都会严重地扰乱最终的像。