试验七荧光显微镜与暗视野显微镜的使用
实验七-1细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用(示范细胞形态观(共30张PPT)
3. 暗视野显微镜观察蛙血细胞（示范）
4. 观察人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片（HE染色）
五、注意事项
1. 荧光显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。 2. 使用荧光显微镜时要注意不要直接观察激
2. PBS漂洗2次，每次3 min;
3. 滴加DAPI溶液100 ul室温孵育30 min;
4. PBS漂洗3次，每次5min; 5. 滴一小滴甘油/PBS封片剂(pH8.5，PBS:甘油=1:9，v/v)封片; 6. 激光扫描共聚焦显微镜观察。
五、注意事项 暗视野显微镜要在光线尽量暗的环境下观察。
Confocal Principle 滴一小滴甘油/PBS封片剂(pH8.
Confocal Principle 甲醇、1‰ 丫啶橙、滤纸、吸管、载玻片 使用荧光显微镜时要注意不要直接观察激发光源，保护眼睛。 （示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用） 对细胞结构或组分的定性、定位、半定量研究。
每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面，这 个光学横短面总是有一定厚度的，又称为光学薄片。 由于焦点处的光强远大于非焦点处的光强，而且非 焦平面光被针孔滤去，因此共聚焦系统的景深近似 为零，沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描， 形成待观察样品聚焦光斑处二维的光学切片。把XY平面（焦平面）扫描与Z轴（光轴）扫描相结合， 通过累加连续层次的二维图像，经过专门的计算机 软件处理，可以获得样品的三维图像。
一、激光扫描共聚焦显微镜的成像基本原理
1. 普通荧光显微镜的不足
2.
使用荧光物质标记细胞中的特定成分或结构，不仅图
荧光显微镜荧光显微镜（Fluorescencemicroscope）及其操作
荧光显微镜荧光显微镜（Fluorescencemicroscope）及其操作荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。
它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。
是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
原理编辑本段回目录某些物质经一定波长的光（如紫外光）照射后，物质中的分子被激活，吸收能量后跃迁至激发态；当其从激发态返回到基态时，所吸收的能量除部分转化为热量或用于光化学反应外，其余较大部分则以光能形式辐射出来，由于能量没能全以光的形式辐射出来，故所辐射出的光的波长比激发光的要长，这种波长长于激发光的可见光部就是荧光(fluorescence)。
所谓荧光就是某些物质在一定波长光（如紫外光）的照射下、在极短时间内所发出的比照射光波长更长的可见光。
由此可见，被照射物质产生荧光必须具备以下两个条件：①物质分子（或所特异性结合的荧光染料）必须具有可吸收能量的生色团；②该物质还必须具有一定的量子产率和适宜的环境（如溶剂、pH、温度等）。
荧光显微术是利用荧光显微镜结可发荧光的物质进行观测的一种实验技术。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时, 就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如见光)，这种光就称为荧光。
有些生物体内的物质受激发光照射后可直接产生荧光, 称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不能产生荧光，但它吸收荧光染料后同样却能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后便可发出桔红色荧光。
荧光显微镜具特殊光源（多为紫外光光源），提供足够强度和波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光。
在视场中所所观察到的图像，主要是样品的荧光映像。
（一）光源现在多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15min。
荧光显微镜的原理和使用方法课件
目录
• 荧光显微镜简介 • 荧光显微镜的原理 • 荧光显微镜的使用方法 • 荧光显微镜的维护与保养 • 荧光显微镜的应用实例
01
荧光显微镜简介
荧光显微镜的发展历程
01
02
03
荧光显微镜的起源
19世纪末，随着光学和化 学的发展，荧光显微镜开 始出现。
荧光显微镜的发展
荧光灯泡表面不可直接触摸，清洁时 应使用软布或手套。
清洁载物台
用干燥的软布擦拭载物台，避免污渍 和划痕。
荧光灯泡的更换与保养
更换荧光灯泡
当荧光灯泡亮度降低或出现闪烁时，应更换荧光灯泡。更换时应关闭电源，并按照说明书正确操作。
保养荧光灯泡
荧光灯泡应在低电流下使用，避免频繁开关灯，以延长使用寿命。
常见故障排除与维修
20世纪初，荧光显微镜技 术逐渐成熟，并广泛应用 于生物学、医学等领域。
荧光显微镜的改进
随着科技的进步，现代荧 光显微镜在分辨率、成像 质量、自动化等方面不断 得到提升。
荧光显微镜的基本组成
光源
发出特定波长的光，激 发样品中的荧光物质。
滤色片
选择性地透过特定波长 的光，阻挡其他波长的
光。
物镜
将样品中的荧光图像放 大，并传递给目镜或摄
电源故障
检查电源插头是否松动，电源线 是否破损。如有问题，应更换电
源线或修理电源插座。
图像模糊
可能是镜头污染或载物台移动造成 的。应清洁镜头和载物台，确保其 表面干净无痕。
荧光灯泡不亮
可能是灯泡损坏或电路故障。应检 查灯泡是否正常，如有问题应更换 ；同时检查电路是否正常，如有故 障应及时维修。
05
荧光显微镜的调试
【2017年整理】荧光显微镜及其操作
荧光显微镜(Fluorescence microscope)及其操作荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。
它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。
是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
目录•原理•荧光显微镜标本制作要求•使用荧光显微镜的注意事项•荧光图像的记录方法原理某些物质经一定波长的光（如紫外光）照射后，物质中的分子被激活，吸收能量后跃迁至激发态；当其从激发态返回到基态时，所吸收的能量除部分转化为热量或用于光化学反应外，其余较大部分则以光能形式辐射出来，由于能量没能全以光的形式辐射出来，故所辐射出的光的波长比激发光的要长，这种波长长于激发光的可见光部就是荧光(fluorescence)。
所谓荧光就是某些物质在一定波长光（如紫外光）的照射下、在极短时间内所发出的比照射光波长更长的可见光。
由此可见，被照射物质产生荧光必须具备以下两个条件：①物质分子（或所特异性结合的荧光染料）必须具有可吸收能量的生色团；②该物质还必须具有一定的量子产率和适宜的环境（如溶剂、pH、温度等）。
荧光显微术是利用荧光显微镜结可发荧光的物质进行观测的一种实验技术。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时, 就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如见光)，这种光就称为荧光。
有些生物体内的物质受激发光照射后可直接产生荧光, 称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不能产生荧光，但它吸收荧光染料后同样却能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后便可发出桔红色荧光。
荧光显微镜具特殊光源（多为紫外光光源），提供足够强度和波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光。
在视场中所所观察到的图像，主要是样品的荧光映像。
（一）光源现在多采用200W的超高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15min。
荧光显微镜使用说明书
荧光显微镜使用说明书1. 引言荧光显微镜是一种高级显微镜，它通过荧光染料和荧光体来观察生物样本。
本说明书将向用户介绍荧光显微镜的基本操作和注意事项。
2. 设备使用前的准备在开始使用荧光显微镜之前，请确保以下准备工作已经完成：2.1 样本准备- 准备待观察的生物样本，并进行适当的固定和染色处理。
- 使用适当的荧光染料标记待观察的目标结构，比如细胞核或细胞器。
- 确保样本处于干燥且无尘的环境中，以免影响显微镜观察效果。
2.2 显微镜设置- 将荧光显微镜放置在水平且稳定的台面上，避免震动。
- 连接电源线并确保电源稳定。
- 打开显微镜主机，并调节照明系统到适当的亮度。
- 确保镜头已正确安装并调节到焦点位置。
3. 操作步骤3.1 调节荧光滤光片- 根据所使用的荧光染料种类，选择相应的滤光片组合。
请参考荧光染料厂家提供的荧光光谱信息。
- 将滤光片安装到显微镜的滤光器单元上，确保滤光片与光源相匹配。
3.2 焦距调整- 放置已准备好的样本到显微镜的载物台上，并使用载物台调节样本水平位置。
- 通过调节镜头的焦距轮和对焦杆，使样本逐渐变得清晰可见。
3.3 荧光成像- 使用显微镜的放大倍率调节旋钮，逐渐增加放大倍率以观察细节。
- 通过调节显微镜的聚光镜或荧光照明系统，确保样本受到均匀且适当的荧光照明。
- 使用取景器或相机从目镜观察孔观察并记录样本图像。
4. 注意事项- 在操作显微镜时，请务必小心轻放，避免撞击或其他损坏。
- 建议在室温下使用荧光显微镜，避免极端温度或湿度对设备造成不利影响。
- 使用前请确保手部清洁，避免在样本处理过程中引入杂质。
- 镜头润滑剂可能对荧光染料造成负面影响，请避免使用含润滑剂的显微镜油。
- 使用完毕后，请关闭显微镜并拔出电源线。
5. 故障排除如果在使用荧光显微镜过程中遇到问题，请尝试以下解决方案：5.1 样本无法观察到荧光信号- 检查荧光滤光片是否正确安装。
- 检查荧光染料是否已正确标记在待观察的结构上。
显微镜的七种观察方式
显微镜的七种观察方式一．明视野观察（Bright field BF）明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。
二．暗视野观察（Dark field DF）暗视野实际是暗场照明发。
它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。
因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。
暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。
若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。
m..m 暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。
它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。
暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02—0.004三．相差镜检法（Phase contrast PH）在光学显微镜的发展过程中，相差镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。
我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本.相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。
这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。
相差图片相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。
光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ（波长），如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。
在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：1. 环形光阑（annular diaphragm）位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。
简述荧光显微镜的使用流程
简述荧光显微镜的使用流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法荧光显微镜是一种用于观察荧光物质的显微镜，它利用物质受激发后发出的荧光来进行观察和分析。
荧光显微镜在生物学、医学、材料科学等领域有着广泛的应用，下面我们来详细了解一下荧光显微镜的使用方法。
1. 样品准备。
在使用荧光显微镜之前，首先需要准备好待观察的样品。
样品的准备包括固定、染色等步骤，确保样品的完整性和清晰度。
在进行染色时，需要选择适合的荧光染料，以便观察到清晰的荧光信号。
2. 调节荧光显微镜。
接下来是调节荧光显微镜的步骤。
首先要打开显微镜的电源，然后调节照明系统，确保样品能够受到足够的激发光。
接着调节物镜和目镜，使其对焦并调整放大倍数，以获得清晰的观察效果。
3. 观察样品。
当荧光显微镜调节好后，就可以开始观察样品了。
在观察过程中，要注意调节荧光滤光片，以选择合适的激发光和荧光信号的观察。
观察时要避免光线干扰，保持观察环境的暗度，以获得清晰的荧光图像。
4. 图像记录与分析。
观察到感兴趣的荧光信号后，可以进行图像记录与分析。
使用相机或者荧光成像系统，记录下清晰的荧光图像。
接着可以利用图像分析软件进行图像处理和分析，以获取更多的信息和数据。
5. 仪器保养。
在使用完荧光显微镜后，要进行仪器的保养工作。
包括清洁镜头、调整光路、关闭电源等步骤，确保仪器的正常运行和延长使用寿命。
总结。
荧光显微镜的使用方法并不复杂，但需要注意细节和步骤的顺序。
正确的使用方法可以帮助我们获得清晰的荧光图像，从而更好地进行观察和分析。
希望本文对您在使用荧光显微镜时有所帮助，谢谢阅读！。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜是一种先进的显微镜，它可以使被观察的样本能够发出荧光，从而看到更细胞更宏观的结构。
下面我们一起来了解一下荧光显微镜的使用方法。
1、准备工作
首先，在使用荧光显微镜之前，需要先将镜头清洗干净，以免影响成像效果。
同时，还需要将待观察的样品取出，进行样品的准备工作，例如培养细胞、切片等等。
2、调节镜头
将样品放入显微镜之后，要调节镜头，以获得最佳的成像效果。
首先要将物镜与样品对焦，然后调节荧光滤光片、激发滤光片和物镜的焦距，直到获得最佳的观察效果。
3、拍摄图像
在调节好镜头后，可以使用荧光显微镜来观察和拍摄图像。
观察荧光发射时要避免光线过强，否则会造成图像发虚。
此时需要适当地调节荧光滤光片的重叠程度来获得最佳的成像效果。
4、对图像进行处理
荧光显微镜所拍摄的图像可以根据需要进行处理。
可以使用图像软件来调整图像的对比度、亮度等参数，以产生更清晰、更鲜艳的图
像效果。
同时，可以通过颜色调整功能根据需要来调整图像颜色，如将荧光标记变成不同颜色的。
荧光显微镜在生命科学研究中有着广泛的应用，通过使用荧光标记技术，可以观察细胞内某些分子的转运、相互作用行为等生物学现象。
但荧光显微镜的使用需要非常谨慎，因为光线过强会对样品造成伤害，影响样品的生长和繁殖。
因此，在使用荧光显微镜之前，必须详细阅读说明书，了解荧光显微镜的使用要点，严格遵守操作规程，以确保实验的成功。
实验室安全正确使用实验室中的荧光显微镜设备
实验室安全正确使用实验室中的荧光显微镜设备实验室是进行科学研究和实验的重要场所，而荧光显微镜作为其中一种常用的实验设备，被广泛应用于细胞学、生物学、医学等领域的研究。
然而，正确使用荧光显微镜设备以及保证实验室安全是至关重要的。
本文将详细介绍实验室中正确使用荧光显微镜设备的注意事项和安全措施。
一、准备工作在开始使用荧光显微镜设备之前，必须完成一系列的准备工作，以确保设备的正常运行以及实验室的安全。
首先，需要检查设备的电源是否正常，确保设备的接线正确并且地线接好。
其次，应检查显微镜镜头的清洁程度，如有污物应使用干净的纸巾擦拭。
最后，要确保实验室的通风设施完善，以提供良好的工作环境。
二、操作步骤正确的操作步骤可以确保得到准确的实验结果，并且减少实验中的意外发生。
下面将介绍使用荧光显微镜设备的正确操作步骤。
1. 打开设备：先将显微镜底座及照明设备打开，然后启动荧光光源。
注意，在打开设备之前，要确认手上没有湿润的材料，以免触电。
2. 标本制备：根据实验需求，将待观察的标本处理好，并在载玻片上划线，以确保在显微镜下找到感兴趣的区域。
3. 调焦：使用显微镜的对焦机构，将显微镜对焦到最清晰的观察位置，根据需要调整焦距。
4. 切换镜头：根据需要选择适当的镜头，一般使用低倍镜头进行初始观察，需要放大时再切换到高倍镜头。
在切换镜头时，应确保手部干燥，以免镜头滑动。
5. 调整光线：根据实验需要调整照明光强度，避免过强的光线损伤标本或者对观察产生干扰。
6. 确认结果：通过观察显微镜下的影像，确认实验所得结果，并及时记录。
三、实验室安全措施荧光显微镜设备使用过程中，需要遵守实验室的安全规范，以确保实验人员和设备的安全。
1. 戴好个人防护装备：在进行实验时，必须佩戴好实验室要求的个人防护装备，如实验手套、防护眼镜等。
2. 防止样品污染：在操作过程中，要注意避免将样品污染到实验室环境中，以免对其他实验造成干扰。
3. 避免触碰设备：在使用荧光显微镜设备时，应避免触碰设备的电线、插头等部分，以免触电。
荧光显微镜操作手册说明书
荧光显微镜操作手册说明书荧光显微镜是一种重要的显微镜，常用于生物医学研究、细胞生物学、遗传工程和药物研发等领域。
本操作手册将详细介绍荧光显微镜的使用方法和注意事项，以帮助用户正确、高效地操作荧光显微镜。
在开始操作之前，请确保仔细阅读本手册，并按照指示进行操作。
材料准备在使用荧光显微镜之前，需要准备以下材料：1. 标本或样品：根据实验的需要，准备好荧光标记的细胞、组织或其他待观察的物质。
2. 封片：将标本放置在封片上，以便于放置到显微镜观察。
3. 荧光染料：根据实验需求，选择适当的荧光染料，并按照说明书的要求进行染色。
操作步骤以下是荧光显微镜的基本操作步骤：1. 准备显微镜：a. 检查显微镜是否处于正常工作状态，确保电源连接正常。
b. 调整光源的亮度，以便于观察样品。
c. 确认滤光片的波长与荧光染料的激发波长相匹配。
2. 样品安装：a. 将封片放置在显微镜的物镜台上，并通过样品夹固定。
b. 调节物镜的焦距，以获得清晰的视野。
3. 荧光设置：a. 根据荧光染料的激发波长，选择合适的滤光片，并将其安装在显微镜上。
b. 调节荧光染料的激发光源，确保样品被充分激发。
4. 观察：a. 使用目镜对准感兴趣的区域，并调节放大倍数，以获得所需的放大效果。
b. 使用荧光滤光片，观察样品的荧光发射情况。
c. 调节显微镜的对焦，以获得清晰的图像。
注意事项为了保证操作的准确性和安全性，请遵守以下注意事项：1. 操作前请佩戴个人防护装备，如实验手套和护目镜。
2. 避免直接暴露在荧光光源下，以免眼睛受伤。
3. 调节荧光染料激发光源的强度时，逐渐增加光线强度，以避免损坏样品。
4. 操作完成后，请关闭显微镜和荧光光源，并将其清洁干净。
维护保养及时进行维护保养可以延长荧光显微镜的使用寿命和保证其正常工作。
以下是一些建议的维护保养步骤：1. 定期清洁显微镜的透镜和物镜，避免灰尘和污垢的影响。
2. 注意橡胶密封件的保养，防止老化和松动。
实验荧光显微镜的使用演示文稿
现在是29页\一共有51页\编辑于星期六
反射荧光显微镜原理
吸收滤色镜
分色镜 物镜
标本
现在是30页\一共有51页\编辑于星期六
汞灯
激发滤色镜
反射荧光显微镜的构造
吸收滤色镜
紫外线 保护罩
激发滤色镜 孔径光栏（FS） 视场光栏（AS）
分色镜
汞灯
现在是31页\一共有51页\编辑于星期六
荧光素的特性
荧光素
激发波长 发射波长
DAPI
372
456
AMC A
350
450
Hoe chst 33258
365
465
FITC
490
520
Acridine O range 4 9 0
590
Acridine Ye llow
470
550
C Y3
552
565
TRITC
541
572
Propidium Iodide 5 3 0
转变为高能状态，再回到低能状态时释放出 的光。
即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
现在是10页\一共有51页\编辑于星期六
荧光的性质
保持固有的荧光特性
n荧光波长＞激发波长
n荧光强度极小于激发光的强度
n有不同程度的衰减 n荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效 率
现在是11页\一共有51页\编辑于星期六
暗场聚光镜
现在是6页\一共有51页\编辑于星期六
汞灯箱
激发滤色镜
透射荧光显微镜原理
目镜
透射荧光显微镜原理
吸收滤色镜
物镜
暗场聚光镜
显微镜七种观察方式
（五）微分干涉观察方法
4 应用： 无色透明活体标本的细微结构，无 色荧光标本，染色标本，显微操作 等
*
DIC-PH
*
DIC-PH
*
（六）浮雕相衬显微镜
6 调节
1. 10X 物镜调节柯勒照明 2. （可以参照偏光观察方法，先调节偏光
镜正交） 3. 拿走标本，取下目镜，观察物镜后焦平
面 4. 将起偏镜、物镜方DIC棱镜和检偏镜放
*
多重染色标本的多色观察
FITC+Texas Red+DAPI
*
三色滤色镜的特性曲线
激发
分色
吸收
*
双重染色标本的单色和双色观 察
WU
WIB
DUAL BAND
DAPI+FITC
WIBA
WIG
*
WIB
FITC+PI
单色滤色镜的特性曲线
*
双色滤色镜的特性曲线
*
现行显微镜特点和各种滤色镜
*
自由组合 激 发块
470
550
CY3
552
565
TRITC
541
572
*
Propidium Iodide 530
615
滤色镜的特性
激发
分色
吸收
激发块型号 —— U-MWIBA
U- 通用型(BX/IX)
M- mirror unit, 激发块组
W- SW / W / N-超宽带/ 宽带 / 窄带激发
I- 使用干涉镀膜滤光片,激发/发射效率更高,
*
(三)相差பைடு நூலகம்察方式
2 特点 鉴定活体细胞最实用、最经济的方法 3 缺点 需要光强高 切片不能太厚(2~10um) 盖片、载片需符合标准 最好配用单色滤光镜 操作较麻烦 荧光效果不如明场物镜
荧光显微镜的基本使用方法
Microscopes with an upright-style frame are capable of producing fluorescence illumination either through episcopic or diascopic optical pathways, although the latter is rarely used today. Epi-illuminators usually consist of a mercury or xenon lamphouse coupled to a vertical illuminator that is positioned above the main frame in a separate assembly. The microscope nosepiece and transmitted light components (diascopic illuminator, condenser, field diaphragm, filters, etc.) are built into the main frame, while fluorescence components are housed in the vertical illuminator. These illuminators often contain a revolving or sliding turret that houses four to six "cubes" that contain a mixture of interference filters including a barrier filter, dichroic mirror, and an excitation filter. As illustrated above, light emitted from the lamp positioned in the episcopic lamphouse passes through a collector lens and then the field and aperture diaphragms before entering the first interference filter in the cube set, the emission filter. This light is then directed through the objective and onto the specimen by a special dichroic mirror that reflects certain wavelengths while passing others. Secondary fluorescence, emitted by fluorophores residing in the specimen, travels back through the objective and the dichroic mirror before passing through a barrier filter and into the microscope eyepieces or camera system.
显微镜的七种观察方式
显微镜的七种观察方式一．明视野观察（Bright field BF）明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。
明视野二．暗视野观察（Dark field DF）暗视野实际是暗场照明发。
它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。
因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。
暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。
若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。
m..m 暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。
它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。
暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02—0.004暗视野三．相差镜检法（Phase contrast PH）在光学显微镜的发展过程中，相差镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。
我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本.相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。
这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。
相差图片相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。
光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ（波长），如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。
在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：1. 环形光阑（annular diaphragm）位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。
细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用
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LSCM的基本特点
•观察方式：以荧光为主
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荧光素的特性
荧光素
激发波长 发射波长
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实验七-2
激光扫描共聚生焦物w显秀w微w-.专镜bb心在io做o生.生co命物m科学中的应用
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实验目的与要求
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3. 共聚焦扫描显微镜在生命科学研究中的应用
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荧光显微镜的优点和用途
荧光显微镜操作说明
荧光显微镜操作说明荧光显微镜（Fluorescence Microscope）是一种用于观察荧光标记生物分子的显微镜。
荧光显微镜具有高灵敏度和高分辨率的特点，适用于细胞生物学、分子生物学、微生物学、免疫学等领域的研究。
本操作说明将介绍荧光显微镜的基本结构、操作步骤以及一些常见的注意事项。
一、荧光显微镜的基本结构荧光显微镜主要由以下几个部分组成：1. 光源系统：荧光显微镜通常使用荧光灯作为光源，荧光灯发出的紫外光经过滤波器后被用于激发样品中的荧光发射。
2. 物镜系统：荧光显微镜使用高倍物镜进行观察，一般有10x、20x、40x、60x、100x等不同倍率的物镜，可以根据需要选择合适的物镜进行观察。
3. 荧光滤光片组：荧光滤光片组由激发滤光片、切分镜和发射滤光片组成，用于选择特定波长的激发光和荧光发射光，以增强信号和抑制背景噪音。
4. 检测系统：荧光显微镜的检测系统包括物镜、光学透镜、眼镜和CCD相机等，用于接收和记录荧光发射的图像。
二、荧光显微镜的操作步骤1. 准备样品：将待观察的样品制备好，可以是细胞、组织或标记了荧光染料的生物分子。
确保样品放置在适当的载玻片上，并加上合适的封片或封装剂。
2. 打开荧光显微镜：首先，确认荧光灯是否打开并运行正常。
然后，按下启动按钮，打开荧光显微镜的电源。
3. 调节照明：调节照明系统以获得适当的亮度和对比度。
根据样品的需要，可以调整照明强度和滤光片的位置。
4. 切换滤光片：根据样品的特点和所需的荧光发射波长，选择合适的激发滤光片、切分镜和发射滤光片。
确保滤光片的位置正确，以获得所需的荧光发射信号。
5. 调节焦距和倍率：使用适当倍率的物镜进行观察，并通过调节焦距和对焦机构以获得清晰的图像。
如果需要更高的放大倍率，可以更换为更高倍率的物镜。
6. 观察样品：将载玻片放置在显微镜的样品台上，并通过移动样品台和调整操纵旋钮来观察样品。
使用眼镜或连接到计算机的CCD相机来记录荧光发射的图像。