组织学常规制片基本技术PPT课件

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此液渗透迅速。适用于一般 细胞学研究。固定后不经水洗, 即入95%酒精脱水或直接入纯酒 精,可缩短制片时间。
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Zenker氏液
配方:升汞 5g;重铬酸钾 2.5g; 冰醋酸 5 ml;蒸馏水 100 ml。
为组织学、细胞学及病理学 常用的固定剂,多用于固定一般 组织。固定时间24小时,加热固 定可以加快渗透作用。固定后流 水冲洗12小时,并在以后的脱水 过程中除去汞盐沉淀。
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固定剂
单纯固定剂 ✓ 甲醛 渗透力强,固定均匀,对组织收缩
少。经甲醛固定的组织,细胞核染色甚 佳,胞质着色较差。除单独使用外,常 与其他药品配成混合液,效果更佳。
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氧化汞
俗称升汞,剧毒,必须严格 保管和注意使用。穿透力慢, 适于固定薄块组织。能沉淀一 切蛋白质,升汞可增加对酸性 燃料的亲和力,如卡红等。
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固定的对象和方法
小块组织固定法 注射、灌注固定法 蒸汽固定法
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固定剂的性质和条件
✓ 迅速渗入组织而固定细胞质。 ✓ 有较强的渗透力。 ✓ 避免死后变化。 ✓ 避免过度膨胀或收缩。
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注意事项 ✓ 组织必须新鲜 ✓ 组织的厚度 ✓ 防止因固定发生变形 ✓ 用量 ✓ 时间 ✓ 促使固定
如用酒精脱水,一般经水洗的小块组织可 从50%开始,依次经过70%、80%、95% I、 95%II、100% I 和100% II,每一级酒精脱水时间 约为30分钟。
简便的酒精稀释法:无论任何浓度的酒精稀释时,
需稀释到多大浓度就取多少毫升酒精,然后用蒸 馏水加至该酒精原有浓度即可。例:将95%酒精 稀释为70%浓度时,则将95%酒精70毫升倒入量 筒中,然后加入蒸馏水至总量95毫升即可。
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常用脱水剂
✓ 酒精 为常用的脱水剂。脱水能力强, 并能使组织硬化,能较好地与二甲 苯透明剂相融合。其缺点是易使组 织收缩,变脆。在一般脱水过程中, 采用循序渐进的方法,逐步升级, 经一系列的不同浓度的酒精,使组 织中的水分逐渐被酒精所替代。
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✓ 丙酮 脱水作用比乙醇强,但对组织块的收缩
较大,价格较高,一般少用。主要用于快速脱 水或固定兼脱水。
组织经固定和水洗后,含有大量的 水分,而水和苯及石蜡根本不相融合, 所以组织在透明前必须经过脱水这一环 节。就是用某些溶剂逐步将组织块吸收 的水分置换出来,以利于透明剂和石蜡 等的渗入,这一过程就叫做脱水,使用 的药品为脱水剂。
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种类
✓ 非石蜡溶剂的脱水剂 ✓ 石蜡溶剂的脱水剂]
• 方法
将脱水剂配成各种浓度,自低到高 浓度循序进行。
✓ 正丁醇 脱水能力较弱,但能与水、乙醇及石
蜡相混合,故这种脱水的组织块可直接浸蜡包 埋。这种脱水剂兼透明剂的最大优点是很少引 起组织块的收缩与变脆。正丁醇在使用时易挥 发,吸入后能发生头痛,使用时应注意安全。
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时间:脱水时间应根据组织的体积和厚度而定,
组织在纯酒精中脱水时间不能过长,过长则组织 过度硬化变脆,不易切片。此外,脱水的时间与 固定液的种类也有关。
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简便的酒精稀释法: 无论任何浓度的酒精稀释时,
需稀释到多大浓度就取多少毫升酒精, 然后用蒸馏水加至该酒精原有浓度即 可。例:将95%酒精稀释为70%浓度 时,则将95%酒精70毫升倒入量筒中, 然后加入蒸馏水至总量95毫升即可。
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透明
目的
一、组织块透明的目的是便于浸蜡包埋,但组 织块脱水后其内部的脱水剂与石蜡不相溶,还必 须用石蜡诱导剂过度,这种物质能够同时溶解于 脱水剂及包埋剂中,它能逐渐渗入组织最终将脱 水剂完全排出,诱导剂渗入后,组织块往往呈透 明状故称之为“透明”。这种药剂称为透明剂。 二、切片透明的目的是有利于光线的透过,便 于显微镜的观察。当组织块中全部为透明剂占有 时,光线可以透过,组织可呈现不同程度的透明 状态。
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其他常用的混合固定液有中性甲醛 固定液、甲醛-乙醇固定液、Helly固定液 等。
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洗涤
目的
组织在固定后一定要把渗入组织里 面的固定液洗去,防止组织中留有较多 的固定液而影响脱水剂,甚至可在组织 中发生沉淀或结晶而影响观察。
常用方法
✓ 固定剂以水配制的 ✓ 固定剂含乙醇的
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脱水
目的和原则
组织学常规制 片基本技术
1
组织学制片方法
切片法 非切片法 1.分离标本 2.活体标本 3.涂片标本
2
4.磨片标本 5.整体封藏标本 6.铺片标本 7.组织印片
3
4
巨噬细胞(macrophage)
5
Biblioteka Baidu
精子
6
石蜡切片HE染色制片方法
• 动物致死和取材
致死方法:麻醉、空气栓塞、股动脉放血 等。
7
HE染色
8
• 取材
顺序:先腹腔(肝脏、胆囊、 肾、肾上腺、胰腺、脾、胃、 十二指肠、空肠、回肠、结 肠),然后取胸腔和盆腔内的 器官组织。
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取材关键
✓ 材料新鲜 ✓ 勿使组织块受挤压 ✓ 组织块力求小而薄 ✓ 选好组织块的切面 ✓ 尽量保持组织的原有形态 ✓ 保持材料的清洁
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固定和固定液
固定:借助化学药品使组织和细 胞中的有机和无机成分凝固成沉 淀,防止发生死后组织变化,以 保持其生活时状态的过程。此药 品称为固定剂。
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目的和意义
✓ 保持组织和细胞与正常生活时的形态相似。
✓ 使细胞内的各种成分转变成不溶性物质。
✓增加组织硬度,便于组织切片。
✓ 防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有 的形态结构。
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常用混合固定剂
Bouin氏液
配方:苦味酸饱和水溶液 75 ml; 甲醛 25 ml;冰醋酸 5m。此液临 用时配制。
为一种常用良好的固定液, 渗透力强,对组织固定均匀,收缩 较小,染色效果好。一般组织固定 12-24小时。
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Carnoy氏液
配方:纯酒精 60 ml;冰醋酸 10 ml;氯仿(三氯乙酸) 30ml。
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醋酸 又名乙酸、冰醋酸,为无色 透明液体,有刺激性气味。 醋酸的渗透力强。经单纯醋 酸固定的组织,可不经水洗, 直接入酒精脱水。用作固定 剂的醋酸浓度一般在0.3-5%。
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苦味酸 黄色粉末结晶。能沉淀蛋白
质,对脂肪类脂无效,渗透力 较弱,一般很少单独使用。
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乙醇 又名酒精,为无色液体,可 与水在任何比例下相混合。 一般用作固定液的浓度为 95%或纯酒精。 其他常用的单纯固定剂还有 重铬酸钾、铬酸、四氧化 锇、丙酮、三氯乙酸等。
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