自己翻译的罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

自己翻译的罗氏t u n e l 检测细胞凋亡试剂盒说

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罗氏tunel检测细胞凋亡试剂盒说明书

注意：Label溶液含有甲次砷酸盐和二氯化钴，严禁吸入和食入。

反应悬浮物收集于密闭、不易碎、有明确标识的容器中，按有毒废物处理。

需要自己配置的其他物品：

产品概述：

特异性：TUNEL反应优先标记凋亡产生的DNA链断裂，从而辨别凋亡与坏死、以及由抑制细胞生长的药物或放射线产生的primary DNA链断裂

实验干扰：假阴性：在某些型式的凋亡细胞中DNA链断裂可能缺失或不完全。

空间位阻，如细胞外元件可能阻止TdT到达DNA断裂处。两种情况

均能产生假阴性。

假阳性：在坏死晚期，可能产生大量的DNA片段

DNA链断裂也可能在具有高增殖和代谢活动的细胞中出现。两种情况均能产生假阳性。为确认细胞死亡的凋亡型式，应认真进行每种

细胞的形态学检查

凋亡过程中产生的形态学改变尤其特征形式，因此，对于可以结果

进行解释时，细胞形态评估是一项重要的参数

样本：细胞离心涂片和细胞涂片

在chamber slides上培养的黏附细胞

冰冻或福尔马林固定、石蜡包埋样本

分析时间：2-3小时，除外培养、固定和渗透

检测次数：一个试剂盒50T

试剂盒存储/稳定性：未开封试剂盒储存于-15～-25℃可稳定至标签上标明的效

优点：

优点特点

灵敏在单个细胞水平检测细胞凋亡的早期间断

特异对坏死来说，优先标记凋亡

快速分析时间短（2-3h）

简便试剂稳定、优化，没有稀释步骤

灵活适合于固定细胞核组织，允许堆积、贮存和转运样本

双染可以鉴定细胞凋亡的类型和阶段

对于大量的批号来说，每一批号均进行了功能检测Function-tested功

能检查

步骤和所需材料：

1 流程图：

2 样品准备

黏附细胞、细胞涂片和细胞离心涂片

需准备的其他试剂：Washing buffer：磷酸盐缓冲液（PBS）

Blocking buffer封闭溶液：甲醇稀释的3% H2O2

Fixation solution固定溶液：PBS配制的4%多聚甲醛，ph ，新鲜配制

Permeabilisation solution 渗透液：%Triton1）X-100溶

于%柠檬酸钠溶液中，新鲜配制

步骤：下表描述了细胞固定、内源性过氧化物酶封闭和细胞渗透过程。

组织部分

福尔马林-包埋组织

福尔马林包埋组织的预处理：可按4种不同的方式预处理。如用蛋白酶K，不

含核酸酶，浓度、孵育时间和温度应按组织类型

优化

注意：只用罗氏应用科学的蛋白酶K，因其经检

测不含核酸酶，核酸酶可导致假阳性。

另外3中替代方法在下表中描述（step 2）

需准备的其他试剂：二甲苯和乙醇（浓度：95%，90%，80%，70%，溶于双蒸水

中）

Washing buffer：PBS

蛋白酶K，不含核酸酶，工作浓度：[10-20ug/ml，溶于

10mM Tris/HCL中，]

替代处理方案

※渗透溶液：%Triton1）X-100，溶于%柠檬酸钠的，新鲜配制

※胃蛋白酶*（%%，溶于盐酸中，ph2）或胰蛋白酶*，

HCL，不含核酸酶

※0.1M柠檬酸缓冲液，ph6，微波照射

步骤：下表描述了用蛋白酶K（不含核酸酶）和3中替代方法预处理福尔马林-包埋组织的方法

冰冻组织处理（略）

3 标记草案

开始之前

准备TUNEL反应混合液：每一对管子（小瓶1：酶溶液，小瓶2：标记溶液）足

以用于50ul反应体系的10张片子，和2个50ul标

记溶液的阴性对照。

注意：TUNEL反应混合液应于用前临时配制，不能储

需准备的其他试剂：微球菌核酸酶或

DNase I，重组，级别1*

黏附细胞、细胞涂片、细胞离心涂片和组织标记草案

需准备的其他设备和试剂：Washing buffer：PBS

湿盒

Parafilm石蜡封口膜或盖片

困难组织标记草案（略）

信号转换

需要准备的其他设备和试剂：Washing buffer：PBS

湿盒

Parafilm石蜡封口膜或盖片

DABA底物或POD替代底物

光镜镜检封固剂

4. 附件：