土壤酶活活性测定方法
土壤酶活性
土壤酶活性土壤酶活性是土壤生物学中的一个重要指标，它能反映出土壤的活性水平，是衡量土壤健康状况的重要指标。
土壤酶活性能够反映土壤中所发生的生物化学反应和肥力变化，同时也能反映出土壤肥力状态，是研究土壤有机质变化的重要手段。
因此，土壤酶活性的研究分析对于科学研究土壤肥力、土壤可持续利用和环境保护具有重要的意义。
一、土壤酶活性的研究土壤酶活性的测定包括反映土壤有机质变化的酶组，如淀粉酶、半胱氨酸酶、脲酶、脱氢酶、过氧化物酶、还原酶等，这些酶在土壤中具有不同的结构和活动水平，可以反映出环境因子对其影响的程度。
土壤酶活性的度量能够探究土壤有机质和肥力的变化情况，从而提供科学的指导意见，研究土壤肥力的变化及其对作物生长发育的影响。
常用的测定方法有实验室沉淀法、放射性标记法、水解法、色谱法和试管反应法等。
二、土壤酶活性的调控土壤酶活性的变化受多种环境因子的影响，包括：土壤中的微生物类型和数量、土壤中温度、湿度、pH值等，还受到土壤有机质及其组分、种植植物种类等的影响。
土壤肥力调控方面，可以通过施用有机肥、化肥和微量元素肥料，以及改良土壤成分，减少农药和植物保护剂，控制土壤有机质组分，来优化土壤酶活性，从而提高农作物的产量和质量。
三、土壤酶活性的应用土壤酶活性的研究不仅有助于科学地解决土壤的有机质变化问题，而且在应用方面还有着重要意义。
目前，土壤酶活性的研究已经被广泛用于农业、园艺、植物保护、土壤调查和生态修复等领域。
首先，土壤酶活性的研究可以用于确定土壤质量及其可能的生物效应，从而为合理施肥、防治土壤污染、改良土壤环境及园林植物生长发育提供科学参考依据。
其次，对土壤酶活性的研究可以帮助我们更好地理解土壤的有机质积累和释放，促进土壤的优化、可持续利用和生态修复，为可持续农业发展提供有力支持。
四、结论土壤酶活性是衡量土壤健康状况的重要指标，它能反映出土壤的活性水平，是研究土壤有机质变化的重要手段。
研究土壤酶活性对于科学研究土壤肥力、土壤可持续利用和环境保护具有重要的意义。
土壤酶活性测定方法
土壤酸性磷酸酶活性的测定1．试剂配制(1)0.115M p-硝基苯磷酸钠溶液取10.67g p-硝基苯磷酸二钠（6HO,分子量为371.1），溶于pH4.5通用缓冲液中并稀释至2250ml.4摄氏度冰箱保存。
(2)通用缓冲液（pH4.5）（缓冲液久置会有沉淀）原液由以下成分组成:三羟甲基氨基甲烷12.1g顺丁烯二酸11.6g柠檬酸14g硼酸6.3g溶于500ml 1N NaOH（40g定容1L）中，加蒸馏水至1L。
取原液200 ml，再加入0.1N HCL 或浓HCL来调pH为4.5。
最后稀释至1L，即得。
(3)甲苯(4)0.5 mol/L Cacl2.2H2O溶液：36.75g Cacl2.2H2O定容500ml. (无水CaCl2: 11.1g定容200ml)(5)0.5 mol/L NaOH溶液：20g NaOH定容1L.2．测定步骤置于50ml三角瓶中，加4ml通用缓冲液（pH4.5）、0.25ml甲苯和1ml 0.115M p-硝基苯磷酸钠溶液,摇匀后，置于37℃恒温箱中1h。
培养结束后，加入1ml 0.5 mol/L氯化钙溶液和4ml 0.5 mol/L NaOH溶液，通过致密滤纸过滤到50ml容量瓶，用蒸馏水定容后在410nm处比色.3．计算方法土壤酸性磷酸酶的活性用单位时间内每克土中的对硝基苯酚的毫克数表示，W（mg·g-1·h-1）=M1/（m×t）式中：M1—标准曲线上查得样品中对硝基苯酚的质量（mg）；t —反应时间（h）；=1hm—样品土壤的重量（g）无土壤CK: 用1ml蒸馏水代替1g土壤；每批土样做2个；无基质CK: 用1ml蒸馏水代替1ml PNPP。
每个处理做1个。
标准曲线的制作：1）对硝基苯酚标液：1g对硝基苯酚定容1L，低温保存。
2）取标液0、1、2、3、4、5ml于0-6号硬质试管中，分别加pH6.5通用缓冲液4ml，Cacl2.2H2O 溶液1ml，NaOH溶液4ml，②混匀后，定量滤纸过滤到50ml容量瓶，定容后，再取各浓度标液1ml定容至50ml，以0号试管作为对照，在A410nm波长下测光吸收值，并记录光吸收值A410。
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。
本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。
蔗糖酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。
脲酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。
过氧化氢酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤去除杂质。
2. 准备含过氧化氢底物和其他试剂的反应体系。
3. 将土壤样品加入反应体系中，充分混匀后，在一定时间内反应。
4. 在反应结束后，通过添加硫酸钠溶液停止反应，阻止进一步的化学反应。
5. 使用紫外分光光度计测定样品的吸光度，根据结果计算过氧化氢酶活性。
五、过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶是一类重要的土壤酶，在土壤中参与有机物降解和氧化还原反应。
土壤酶的测定方法
一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。
1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。
称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。
使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN 的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。
在37℃恒温箱中培养24ｈ。
然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。
取滤液1mL 置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。
脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。
标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。
1h内在分光光度计上于578nm处比色。
土壤酶活性测定的实验步骤
土壤酶活性测定的实验步骤土壤酶的测定1.将三角瓶在稀释的硝酸（3-5%）或洗衣粉中浸泡24小时，然后刷洗，然后用蒸馏水湿润并在空气中干燥。
2.土样应细磨并袋装。
土壤量：2G+2.5G+5G+5G=14.5G，重复一次，14.5×2=29g一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫p323）1.试剂制备：(1)0.3%过氧化氢溶液：① （1:10030%过氧化氢和水）② （0.5mol H2O2+49.5ml蒸馏水）③ （1ml30%H2O2+99ml蒸馏水）（2）3N硫酸：（10ml硫酸+50ml水）（3）0.1N高锰酸钾溶液：（1.58gkmno4+100ml蒸馏水）2．操作步骤：将2G风干土壤放入100个三角形烧瓶中→ 40毫升蒸馏水和5毫升0.5毫升蒸馏水注入3%过氧化氢（现配备）→ 在往复式振动筛上振荡20分钟→ 添加5ml 3N硫酸（以稳定未溶解的H2O2）→ 用慢滤纸过滤→ 吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾滴定至淡粉色3．结果计算过氧化氢酶活性（m），20分钟后在1g土壤中以毫升0.1nkmno4表示：m=（a-b）×T，其中：a：空白消耗的0.1nkmno4毫升数b：滤液消耗的0.1nkmno4 ml T：高锰酸钾滴定的校正值备注：H2O2的酶活性是用容量法测定的：kappen（1913）首先介绍了在硫酸存在下用高锰酸钾滴定残余过氧化氢的方法。
根据H2O2与土壤相互作用过程中未分割H2O2的含量，采用容量法（常用高锰酸钾滴定未分割H2O2）2kmno4+5h2o2+3h2so4测定H2O2的酶活性→2mnso4+K2SO4+8H2O+5o2土壤h2o2酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用二、蔗糖酶（p278）滴定法1.试剂配制：（1） 20%蔗糖：（20克蔗糖+80毫升水或12.5克蔗糖+50毫升水）（2）甲苯（分析纯）(3)ph5.5醋酸盐－磷酸盐缓冲液0.5ml磷酸氢二钠12H2O（1/15m）+9.5ml磷酸二氢钾（1/15m）磷酸氢二钠12h2o(1/15m)：23.88gna2hpo4,，加h2o溶解，定容至100ml。
土壤蔗糖酶活性测定方法
土壤蔗糖酶活性测定1.原理采用3,5-二硝基水杨酸比色法。
该方法以蔗糖为基质, 基质在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖, 葡萄糖和3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸, 并在508nm波长下有最大吸光值。
2.测定方法①称取壤土0.15g、砂土0.3g、粘土0.1g风干土于10mL离心管中, 加入0.06 mL甲苯和1mL ph5.5磷酸缓冲液, 再加3mL 8%蔗糖溶液, 摇匀后加盖, 放进36~37℃的培养箱中进行培养24个小时；②培养完成后取出, 摇匀, 并于4000r/min离心5min；③取上层清液0.2ml于20ml玻璃管中, 并加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸, 再立即将玻璃管沸水浴中加热5min, 加热完毕后在自来水流下冷却3min；④将显色液体用蒸馏水稀释到5ml, 在508nm波长下比色, 记录吸光值。
3.蔗糖酶标准曲线的测定方法（1）葡萄糖标准溶液的配制a.饱和苯甲酸溶液的配制在洁净的烧杯中加入适量蒸馏水, 慢慢加入少量苯甲酸同时用玻璃棒搅拌, 直至苯甲酸溶解的同时出现析出的苯甲酸晶体为止。
b.标准葡萄糖溶液的配制称取500mg葡萄糖溶解于适量苯甲酸饱和溶液中, 并取100ml容量瓶用苯甲酸饱和溶液定容（5mg/ml）。
（2）.操作步骤a.取11支洁净20ml玻璃管编号0—10。
b.按下表加液编号: 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10葡萄糖母液（ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07饱和苯甲酸（ml）0.2 0.195 0.19 0.185 0.18 0.175 0.17 0.16 0.15 0.14 0.13葡萄糖浓度（mg/ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.060.07吸光值（A508nm）0 0.05 0.117 0.227 0.31 0.392 0.49 0.666 0.839 1.0061.176c.在玻璃管中各加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸溶液, 并立刻放入沸水浴中加热5min.加热后, 立刻将玻璃管在流动自来水下冷却3min.冷却完毕后, 用蒸馏水定容至5ml.d.将显色液在508nm波长下比色。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或者塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）与0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱与水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱与溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳固，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳固后，570nm比色绘制标准曲线。
测定方法磷酸酶活性测定一、试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。
土壤酶活活性测定方法
土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
（二）试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg氮的标准液。
（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。
将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
（2）土壤中脲酶活性的测定称取10 g土壤置于100mL容量瓶中。
用2mL甲苯处理15分钟。
往瓶中加入10mL 10%尿素溶液和20mL柠檬酸缓冲液（pH6.7）。
仔细混合后，将瓶放在37℃恒温箱中，放置3 h。
与此同时，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定。
培养结束后，用热至38℃的水稀释至刻度。
摇匀，将悬液过滤。
吸取1mL 滤液于50mL容量瓶中，用蒸馏水加至10mL。
然后按标准曲线绘制的操作加入苯酚钠等试剂，显色，比色，最后根据标准曲线求出氨态氮含量。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定办法
土壤酶活性及微生物测定配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
七、八、实验步骤取5克过20目筛的风干土样于50毫升容量瓶中，用0.8(16滴)毫升甲苯处理，15分钟后，加入5毫升苯磷酸二钠溶液（6.75克苯磷酸二钠溶于水，并稀释至1升）和5毫升相应的缓冲液（碱性磷酸酶用pH10的硼酸缓冲液，中性磷酸酶用pH7.0的柠檬酸缓冲液，酸性磷酸酶用pH5.0的醋酸缓冲液）。
仔细混合后，将反应物置于37摄氏度恒温箱中培养12小时，然后用蒸馏水定容至刻度，摇匀过滤，用5毫升水代替基质以设置对照。
为了测定反应混合物中的酚量，取1毫升滤液于100毫升容量瓶中，加5毫升硼酸缓冲液（pH9.0），再加入3毫升2.5%的铁氰化钾和3毫升0.5%的4-氨基安替吡啉，摇动，溶液呈粉红色，然后再加水定容，待颜色褪到稳定时（约需20~30分钟），在分光光度计上于波长570纳米处测定溶液的光密度，根据用酚制备的标准曲线查出供试滤液中酚的含量。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法1、土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g 尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（）：184g柠檬酸和氢氧化钾（KOH溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（L）:苯酚溶于少量乙醇，力口2ml甲醇和丙酮，用乙醇稀释至100ml （A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（ml）。
三、操作步骤称取5g 土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10% 尿素溶液和20ml PH柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37C恒温箱培养24小时。
培养结束后过滤，过滤后取1ml 滤液加入50ml 容量瓶中，再加4ml 苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
20min后显色，定容。
1h内在分光光度计与578nm波长处比色。
（靛酚的蓝色在1h内保持稳定）。
标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。
测土壤酶活方法
测土壤酶活方法酶活性是评价土壤质量和生物活性的重要指标之一。
测定土壤酶活性可以帮助我们了解土壤中微生物的活动水平和土壤中有机物的分解能力，从而判断土壤的肥力和健康状况。
本文将介绍几种常用的测土壤酶活性的方法。
一、脲酶法测定土壤酶活性脲酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中脲酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
脲酶是一种催化尿素分解的酶，可以将尿素分解为氨和二氧化碳。
测定土壤中脲酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
脲酶法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有尿素和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的尿素，计算出脲酶的活性。
二、过氧化氢酶法测定土壤酶活性过氧化氢酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中过氧化氢酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可以将过氧化氢分解为水和氧气。
测定土壤中过氧化氢酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
过氧化氢酶法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有过氧化氢和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的过氧化氢，计算出过氧化氢酶的活性。
三、醋酸红法测定土壤酶活性醋酸红法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中醋酸红酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
醋酸红酶是一种催化醋酸红分解的酶，可以将醋酸红分解为醋酸和二氧化碳。
测定土壤中醋酸红酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
醋酸红法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有醋酸红和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的醋酸红，计算出醋酸红酶的活性。
测定土壤酶活性可以通过脲酶法、过氧化氢酶法和醋酸红法等方法来进行。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法综合引言：土壤酶活性是指土壤中特定酶在一定时间内分解特定底物的能力，是评估土壤生态系统功能和土壤肥力状况的重要指标。
土壤酶活性测定方法是研究土壤酶活性的关键手段之一、本文将综合介绍常用的土壤酶活性测定方法，包括蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法。
一、蔗糖酶活性测定方法：蔗糖酶是一种重要的有机磷酸酶，广泛存在于土壤中，能够水解蔗糖为葡萄糖和果糖。
测定土壤蔗糖酶活性可以反映土壤中酶的数量和活性。
1.提取土壤酶液：将土壤与玻璃棒研磨均匀，用0.5mol/L甘油缓冲液（pH6.8）溶解土壤，离心沉淀，得到土壤酶液。
2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入蔗糖底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应30分钟，用酒精停止反应，加入硫酸，取样测定比色液的吸光度。
3.统计分析：根据比色液吸光度与标准曲线对照，计算出土壤蔗糖酶活性。
二、过氧化氢酶活性测定方法：过氧化氢酶是一种氧化还原酶，能够催化过氧化氢分解为氧气和水。
测定土壤过氧化氢酶活性可以反映土壤中氧化还原反应的发生情况。
1.提取土壤酶液：将土壤与甘油缓冲液混合，加入液氮使其冷冻破碎，离心沉淀得到土壤酶液。
2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入过氧化氢底物和缓冲液，在25℃恒温振荡下反应一定时间，停止反应后加入酒精，用紫外分光光度计测定吸光度。
3.统计分析：根据吸光度与过氧化氢递减曲线对照，计算出土壤过氧化氢酶活性。
三、脲酶活性测定方法：脲酶是一种解脲酸酯的酶，能够水解尿素为氨和二氧化碳。
测定土壤脲酶活性可以反映土壤中氮循环的情况。
1.提取土壤酶液：将土壤与脲酸酯缓冲液混合，用玻璃棒研磨均匀，离心沉淀得到土壤酶液。
2.酶活性测定：将一定量的土壤酶液加入脲酶底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应一定时间，反应停止后加入酒精，用比色法测定吸光度。
3.统计分析：根据吸光度与标准曲线对照，计算出土壤脲酶活性。
结论：以上就是蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法的综合介绍。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法，主要用于评估土壤中各种酶的活性水平，以了解土壤肥力、有机质分解和养分循环等生态过程的状况。
常见的土壤酶活性测定方法包括呼吸酶活性、脲酶活性、过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性等。
以下是常用的几种土壤酶活性测定方法：
1.呼吸酶活性测定法
呼吸酶活性是衡量土壤微生物活性和有机质分解的一种指标。
方法基于土壤微生物呼吸作用的过程，通过测定土壤呼吸二氧化碳释放速率来评估土壤微生物活性。
常用的测定方法有浸提法、插管法和接触式法等。
2.脲酶活性测定法
脲酶在土壤中参与尿素的分解过程，是一个重要的氮素转化酶。
脲酶活性的测定方法通常利用碳酸二乙酯在酶的作用下水解成二乙酰胺，通过测定产物的吸光度或荧光强度来评估脲酶活性。
3.过氧化氢酶活性测定法
过氧化氢酶是土壤中对过氧化氢具有催化降解作用的一种酶。
测定过氧化氢酶活性的方法常采用比色法或荧光法。
其中，比色法是通过过氧化氢与乳酸铁催化反应产生的底物和酶催化下的反应速率相关的颜色变化来测定酶活性。
而荧光法则是通过过氧化物与具有荧光基团的底物反应产生荧光信号来测定酶活性。
4.过氧化物酶活性测定法
过氧化物酶包括过氧化物歧化酶和过氧化氢酶，是土壤中分解有毒过氧化物的关键酶。
测定该酶活性的方法主要有过氧化氢法和氧化还原法。
过氧化氢法利用过氧化氢催化底物的氧化反应来测定过氧化物酶活性，而氧化还原法则是通过直接测定底物与过氧化物酶反应后产生的电流或电势差来评估酶活性。
以上是常见的几种土壤酶活性测定方法，通过测定土壤中相关酶活性的变化，可以评估土壤生物学特性并指导土壤改良和管理措施的制定。
几种常用的土壤酶活性意义及测定
几种常用的土壤酶活性意义及测定土壤酶是土壤中的重要组成部分，它们参与了土壤的有机质分解、养分转化等重要生态过程。
土壤酶活性的意义在于指示土壤的生物活性和健康状况，能够反映土壤的肥力和生态功能。
因此，研究土壤酶活性对于评价土壤质量和改善土壤生态环境具有重要意义。
本文将介绍几种常用的土壤酶活性意义及测定方法。
一、脲酶活性脲酶是一种氧化酶，广泛存在于土壤中。
它能催化脲类化合物的分解，参与土壤氮的生物循环过程。
脲酶活性可以反映土壤中的氮转化能力和有机质的分解速率。
脲酶活性的测定常用碘酸钠法和银盐法，可以通过测定脲酶催化反应产生的碘或银色沉淀的数量来评估脲酶的活性水平。
二、过氧化氢酶活性过氧化氢酶存在于土壤中的微生物和植物中，它是一种氧化还原酶，能够催化过氧化氢的分解。
过氧化氢是土壤中常见的活性氧化物，它对土壤微生物和植物的生长发育具有毒害作用。
过氧化氢酶活性的测定可以用过氧化氢法和双酚A法，其原理是利用过氧化氢催化反应的颜色变化或双酚A氧化反应的速率来评估过氧化氢酶的活性。
三、脱氢酶活性脱氢酶包括脱氢酶、脱氢酶、过氧化酶等，广泛存在于土壤中的微生物中。
它们能够催化有机物的氧化还原反应，参与土壤中有机质的降解分解过程。
脱氢酶活性的测定可以用间苯二酚法、尼羧酸法和氨基酸反应法等方法，通过测定产生的颜色变化、吸光度变化或氨基酸含量的变化来评估脱氢酶的活性水平。
四、葡萄糖酶活性葡萄糖酶是一种分解葡萄糖的酶，广泛存在于土壤中的微生物和植物中。
它能够催化葡萄糖的氧化反应，参与土壤中有机质的分解和碳的循环过程。
葡萄糖酶活性的测定可以用邻苯二酚法、硫酸酚法和氨基酸反应法等方法，通过测定产生的颜色变化、吸光度变化或氨基酸含量的变化来评估葡萄糖酶的活性水平。
土壤酶活性的测定方法多种多样，选择适合的方法要考虑到土壤样品的特性、目标酶的特性和测定的灵敏度。
通过研究土壤酶活性，可以了解土壤中的生物活性和功能，为土壤质量评价、生态环境保护和土壤养分管理提供科学依据。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法土壤酶活性测定方法一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法1. 试剂配制（1）2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。
（2）3，5-二硝基水杨酸溶液1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超过7天）。
（3）1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g N a2HPO4·12H2O 溶于1000mL蒸馏水中。
（4）1/15M 磷酸二氢钾1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。
（5）pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) （6）8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。
（7）甲苯。
（8）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。
然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄糖母液（10mg还原糖/ml）。
取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准葡萄糖液（1mg/ml）；2. 操作步骤（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。
用蒸馏水补足至10mL。
加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。
最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶活性测定：称5.00g土样，置于50mL三角瓶中，注入15.0mL 8%蔗糖溶液，5.0mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法土壤中的微生物是维持土壤生态系统健康的重要组成部分，土壤酶活性则可以作为评价土壤肥力和生物活性的重要指标。
因此，在土壤微生物量和土壤酶活性测定方面的研究非常重要。
本文将介绍几种常用的土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法。
一、土壤微生物量测定方法1.铺平法：将土壤样品铺平在玻璃板上，使用显微镜对土壤中的微生物进行直接观察和计数。
这种方法的优点是简单易行，但需要大量的时间和人力。
2.累积碳法：通过测定土壤中的有机碳含量来间接估算土壤微生物量。
有机碳水平与微生物量密切相关，所以可以通过测定土壤中的有机碳来推测微生物的数量和活性。
3.培养法：将土壤样品接种到适当的培养基上进行培养，然后通过菌落计数或直接计数来估算微生物的数量。
这种方法适用于数量较多的微生物，如细菌和真菌。
4.傅里叶变换红外光谱法（FTIR）：通过测量土壤样品的傅里叶变换红外光谱，分析土壤中的微生物量。
该方法具有快速、准确、非破坏性等优点。
1.浊液法：通过观察测定液中的混浊度来测定土壤中的脲酶、过氧化氢酶等氧化酶的活性。
这种方法简单易行，但对于不同种类的土壤酶效果不一样。
2.比色法：采用酶底物与酶催化产物之间的化学反应，通过测定反应产物的颜色来估算土壤酶活性。
比色法可以用于测定脱氢酶、脱氢酶、脱氧核苷酸酶等酶的活性。
3.荧光法：将有机物和荧光试剂一起加入土壤样品中，经过反应后，在荧光分析仪中测定产生的荧光强度来测定土壤酶的活性。
荧光法适用于测定蔗糖酶、酚氧化酶和脱氢酶等酶的活性。
4.比浊法：通过加入酶底物后，观察土壤样品的混浊度来测定土壤中酶的活性。
比浊法适用于黄酶、脱氢酶等酶的活性测定。
5.电导法：通过测定土壤样品溶液中的电导率变化来估算土壤中酶的活性。
电导法适用于磷酸酶和脱氢酶等酶的活性测定。
总结起来，土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法多种多样，选择合适的方法需要考虑样品特性和实验条件等因素。
每种方法都有其优点和局限性，研究者应根据需要选取合适的方法进行测定。
土壤酶的测定方法
土壤酶的测定方法土壤酶是指存在于土壤中的各种生物所分泌的酶。
它们在土壤中起着关键的生物地球化学功能，包括有机质分解、养分循环和抑制有害物质等。
由于土壤酶的活性会受到环境因素的影响，因此准确测定土壤酶活性对于了解土壤生态系统的功能和健康状态至关重要。
测定土壤酶活性的方法有多种，下面将介绍几种常用的方法。
1.pH酶效应法pH酶效应法利用不同pH条件下土壤酶活性的变化来测定。
该方法通常使用缓冲液调节土壤pH，然后测定不同pH下的酶活性。
酶活性与pH变化的关系可以反映土壤酶的稳定性和耐受性。
2.酶活法酶活法是测定土壤中特定酶活性的一种常用方法。
常见的酶活性测定有蔗糖酶、脱氢酶和过氧化物酶等。
该方法通常在实验室条件下进行，通过添加特定底物并测定反应产物来测定酶活性。
3.酶基质法酶基质法是利用添加特定底物并测定底物降解产物的方法来测定土壤酶活性。
常见的酶基质法有蔗糖基质法、硝酸盐还原酶基质法和过氧化物酶基质法等。
该方法通常在实验室条件下进行，通过添加特定底物并测定底物降解产物来测定酶活性。
4.比色法比色法是利用特定化学反应物质与酶活性相关产物发生反应产生颜色变化来测定酶活性的方法。
常见的比色法有3,5-二硝基水杨酸盐法、PCP法和甲醛法等。
该方法通常是测定土壤酶活性的一种快速、简单和经济的方法。
以上介绍的方法只是常用的几种，实际上还有许多其他方法可以用来测定土壤酶活性。
需要注意的是，不同的酶活性测定方法适用于不同的酶和底物，因此在选择方法时应根据具体情况进行选择。
综上所述，测定土壤酶活性是了解土壤生态系统功能和健康状态的重要手段之一、通过选择合适的方法，可以准确测定土壤酶活性，为土壤管理和保护提供科学依据。
土壤的淀粉酶测定方法
土壤的淀粉酶测定方法
土壤的淀粉酶测定方法有多种，其中常用的方法包括碘液滴定法、酶活性测定法和分子生物学方法等。
1. 碘液滴定法是最常用的方法之一，通过将土壤样品与碘液反应，然后使用滴定管滴定还原的碘的量来测定淀粉酶的活性。
2. 酶活性测定法则是利用特定的底物和指示剂来测定淀粉酶的活性。
3. 分子生物学方法则是通过检测淀粉酶基因的存在和表达来间接评估淀粉酶的活性。
此外，还有实验试剂的选择和操作步骤等注意事项，例如所有试剂除注明者外，均为分析纯;实验用水为蒸馏水或去离子水或相当浓度的水。
在具体操作过程中，需要将适量土壤样品加入10倍体积的蒸馏水，搅拌均匀。
然后，将样品过滤，收集滤液。
在滤液中加入适量的淀粉溶液，搅拌均匀。
将混合液置于恒温器中，保持适宜的温度(如30℃)，一定时间后(如30分钟)，加入适量的碘试剂，观察颜色的变化。
根据颜色变化和标准比色卡比较，计算出淀粉酶活的单位。
土壤酶活活性测定方法
土壤酶活活性测定方法酶活性是指酶在一定时间内单位体积或质量产生的酶催化反应产物的数量。
酶活性在土壤中起着关键作用，因为它们能够将无机和有机物质转化为可供植物吸收的形式。
常用的土壤酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等。
下面将介绍常见的土壤酶活活性测定方法：1.脲酶活性测定：脲酶能够催化尿素的水解，生成氨和二氧化碳。
用于测定土壤脲酶活性的方法是通过在土壤样品中加入一定浓度的尿素，经过一定时间后，测量生成的氨量来评估脲酶活性水平。
2.过氧化氢酶活性测定：过氧化氢酶是一种重要的抗氧化酶，能够将过氧化氢分解为氧气和水。
测定土壤中过氧化氢酶活性的方法是在土壤样品中加入过氧化氢底物，经过一定时间后，通过测量反应体系中氧气释放速率来评估过氧化氢酶活性水平。
3.蔗糖酶活性测定：蔗糖酶是一种能够催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖的酶。
测定土壤中蔗糖酶活性的方法是在土壤样品中加入一定浓度的蔗糖，经过一定时间后，测量生成的葡萄糖和果糖的量来评估蔗糖酶活性水平。
4.碱性磷酸酶活性测定：碱性磷酸酶是一种能够催化有机磷酸盐水解为无机磷酸盐的酶。
测定土壤中碱性磷酸酶活性的方法是在土壤样品中加入一定浓度的磷酸酯底物，经过一定时间后，通过测量反应体系中无机磷酸盐生成的速率来评估碱性磷酸酶活性水平。
除了以上几种常见的土壤酶活性指标外，还有其他一些指标可以用于评估土壤酶活性，如脱氢酶、葡萄糖氧化酶等。
具体选择测定方法应根据实际需求和研究目的来确定。
总结起来，土壤酶活活性测定方法是通过测定土壤中特定酶活性水平来评估土壤质量和生态系统功能的一种手段。
常见的土壤酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等。
选择适当的测定方法需要考虑实际需求和研究目的。
土壤酶活性的测定
土壤酶活性的测定1.土壤样品采集与制备取根际土壤为土壤样品，同时挖取根系周围0-20cm和20-40cm土样，分层充分混合后作为非根际土壤样品。
充分混匀后取样，用于土壤酶活性测定的土壤经风干后，过1mm筛，测定多酚氧化酶活性土样过0.25mm筛。
供微生物分析的鲜土样装入已消毒过的密封塑料袋，带回实验室，磨细过2mm筛后，置于4℃冰箱内保存备测土壤微生物种群、数量等。
2.土壤酶活性的测定方法2.1.土壤脲酶比色法测定多酚氧化酶、过氧化物酶活性采用邻苯三酚比色法测定；过氧化氢酶活性采用高锰酸钾滴定法；碱性磷酸酶活性采用磷酸苯二钠比色法（2）测定操作步骤：称2g过1mm筛风干土，置于100mL三角瓶中，注入40mL蒸馏水和5mL 0.3%过氧化氢溶液，振荡(120次/分钟)20分钟。
随即加入3N硫酸5mL，稳定未分解的过氧化氢并终止反应。
用慢速型滤纸过滤瓶中的土壤悬浊液，吸取25nil滤液，用0.01N高锰敏钾滴定至淡粉红色终点。
结果计算：设滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量(mL数)为B滴定25而原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量(mL数)为A高锰酸钾滴定度的校正值为T=(A-B)×T/2等于20分钟土壤的过氧化氢酶活性(mL 0.lmol KMnO4/g)2.2.脲酶采用靛酚蓝比色法操作步骤：取2.5g风干土，置于50mL三角瓶中，加0.5mL甲苯，15min后加5mL 10%尿素液和10mL pH6.7柠檬酸盐缓冲液。
摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
过滤后取0.5mL滤液注入25mL容量瓶中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。
氮的标液：精确称取0.4717g硫酸按溶于水并稀释至1000mL，则得1mL含0.1mg氮的标准液。
绘制标准曲线时，可将此液稀释10倍供用。
标线绘制：取稀释的标准液l、3、5、7、9、11、13mL，移于50rnl容量瓶中，然后加入蒸馏水至20mL。
再加4mL苯酸钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。
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土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
（二）试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg氮的标准液。
（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。
将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
（2）土壤中脲酶活性的测定称取10 g土壤置于100mL容量瓶中。
用2mL甲苯处理15分钟。
往瓶中加入10mL 10%尿素溶液和20mL柠檬酸缓冲液（pH6.7）。
仔细混合后，将瓶放在37℃恒温箱中，放置3 h。
与此同时，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定。
培养结束后，用热至38℃的水稀释至刻度。
摇匀，将悬液过滤。
吸取1mL 滤液于50mL容量瓶中，用蒸馏水加至10mL。
然后按标准曲线绘制的操作加入苯酚钠等试剂，显色，比色，最后根据标准曲线求出氨态氮含量。
以每克土壤在37℃下24h酶解尿素释放的NH3-N 的毫克数来表示脲酶活性。
土壤蛋白酶活性测定方法：铜盐比色法（一）方法原理本法基于以精胶为基质，酶解后所释放的氨基酸使其与铜盐反应形成蓝色复合物。
用比色测定颜色深度，计算出氨基酸含量，来度量酶的活性。
（二）试剂1）1%精胶2）甲苯3）铜-磷酸盐溶液：①27.3g CuCl2·H2O溶于 1 L水；②64.5g Na2HPO4·12H2O溶于500mL 水，加入7.2g NaOH，稀释至1L；③57.21g Na2B4O7溶于1.5L 水，加入100毫升0.1 mol/L HCL稀释至2L，使用按照1：2：2的体积分数前将上述①、②、③混合。
4）甘氨酸标准溶液的配制：取267.9mg甘氨酸溶于蒸馏水，稀释至 1 L （1mL含50µg NH3-N）。
（三）操作步骤（1）标准曲线绘制取0、5、10、15、20 mL 甘氨酸标准溶液，用蒸馏水加至20 mL，然后加入20 mL 新配制的铜-磷酸盐溶液。
显色后，用分光光度计在650nm处测定，绘制标准曲线。
（2）土壤蛋白酶活性测定称取5g土壤置于100mL 三角瓶中，加入甲苯2mL ，放置15 min，加入20mL 1%精胶溶液，于37℃恒温培养24h，于此同时，以水代替基质作为对照。
培养结束后，将悬液过滤，取10mL 滤液，加水10mL，铜-磷酸盐溶液20mL。
显色后，用分光光度计在650nm处测定，根据标准曲线求出NH3-N含量。
以每克土壤在37℃下24h酶解蛋白质释放的NH3-N的质量（µg）表示蛋白酶活性。
土壤磷酸酶测定方法：磷酸苯二钠法（一）方法原理本法基于以磷酸苯二钠为基质，酶解释放出的酚，使其与氯代二溴对苯醌亚胺试剂反应生色。
用比色法测定出游离的酚量，用以表示磷酸酶活性。
（二）试剂配制1）0.5％磷酸苯二钠（用缓冲液配制）；2）pH5醋酸盐缓冲液、pH7柠檬酸盐缓冲液、pH9.4硼酸盐缓冲液；3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10mL 96％乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。
保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用；4）酚的标准溶液：酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中；酚工作液——取10mL 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01毫克酚）；5）甲苯；6）0.3％硫酸铝溶液。
（三）操作步骤（1）标准曲线绘制取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、0.0018、0.0022和0.0026mg·g-1浓度的酚标准溶液梯度。
30min后比色测定。
绘制标准曲线。
（2）土壤磷酸酶的测定称取5g风干土置于200mL三角瓶中，加2.5mL甲苯，轻摇15min后，加入20mL 0.5％磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用醋酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h。
后于培养液中加100mL 0.3％硫酸铝溶液并过滤。
吸取3mL滤液于50mL容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。
用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在风光光度计上于660nm处比色。
磷酸酶活性，以37℃下24h后1g土壤中释放处的酚的毫克数表示。
土壤蔗糖酶测定方法：3,5- 二硝基水酸比色法（一）方法原理蔗糖酶酶解所生成的还原糖与3,5- 二硝基水酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水酸。
颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
（二）试剂1）酶促反应试剂：基质5%蔗糖（用pH5.5磷酸缓冲液配制）；甲苯2）葡萄糖标准液（1mg/mL）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱约12小时。
准确称取500mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至500mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。
若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
3）3,5- 二硝基水酸试剂（DNS试剂）将5.0g3,5-二硝基水酸溶于200mL2N NaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混匀。
再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000mL。
暗处保存备用。
（三）测定步骤（1）标准曲线绘制分别吸1 mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS试剂3mL混匀，于沸水浴中准确反应5min（从试管放入重新沸腾时算起），取出立即泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶测定称取5 g土壤，置于100mL三角瓶中，加10 mL水、1mL甲苯。
摇匀土壤均匀分散后，放置15分钟，加入15mL5%蔗糖-磷酸缓冲液。
摇匀、塞紧，放于37℃恒温箱中，培养24h。
按此操作，用不加土壤的基质和150℃干热灭菌1h的土壤进行对照试验。
培养结束后，用滤纸过滤，取1mL滤液，按绘制标准曲线方法，测定并由标准曲线其中还原糖含量。
土壤蔗糖酶活性，以1g土壤在37℃时，24h释放出的葡萄糖毫克数来表示。
过氧化氢酶测定(容量法)1. 试剂配制a. 0.3％过氧化氢溶液：按1:100将30%H2O2用水稀释b. 3N 硫酸c. 0.1N 高锰酸钾（1/5KMnO4）溶液：称取化学纯高锰酸钾3.161g，溶于1升无CO2蒸馏水中，贮于综色瓶中，备用。
2. 操作步骤（1）取2g风干土，置于100mL三角瓶中，并注入40mL蒸馏水和5mL 0.3％H2O2溶液。
（2）同时设置对照，即三角瓶中注入40mL蒸馏水和5mL 0.3％过氧化氢溶液，而不加土样。
（3）将三角瓶放在振荡机上振荡20min后，加入5mL3N硫酸，以稳定未分解的过氧化氢。
再将瓶中悬液用慢速滤纸过滤。
吸取25mL滤液，用0.1N高锰酸钾滴定至淡粉红色终点。
3. 结果计算用于滴定土壤滤液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为B，用于滴定25mL原始的过氧化氢混合液所消耗的高锰酸钾量（毫升数）为A。
（A-B）×T即为过氧化氢酶活性。
以20min后1g土壤的0.1N高锰酸钾的毫升数表示。
式中T为高锰酸钾滴定度的校正值。
（就是最后换算成每克，所以还要测土壤含水量）高锰酸钾溶液标定称取0.2g（准至0.0001g）于105~110℃烘至恒重的基准草酸钠。
溶于100mL（8+92）硫酸溶液中，用配制好的高锰酸钾溶液[c（KMnO4）=0.1mol/l]滴定，近终点时加热至65℃，继续滴定至溶液呈粉红色保持30s，同时作空白试验。
高锰酸钾溶液标准浓度按下式计算c（1/5KMnO4）=m/（V1-V2）*0.06700式中c（1/5KMnO4）=—高锰酸钾标准液之物质的量浓度，mol/L；m——草酸钠之质量，g；V1——高锰酸钾溶液之用量，mL；V2——空白试验用高锰酸钾溶液之用量，mL；0.06700——与1.00mL高锰酸钾溶液c（1/5KMnO4）=1.000mol/l相当的以克表示的草酸钠的质量。
脱氢酶测定（比色法）取20g土壤于50ml三角瓶中，加0.2g碳酸钙。
混匀后加2ml1%三苯基四唑氯化物，再加水至最大持水量的90%，在恒温恒湿培养箱中（30℃，相对湿度70%）培养24h。
培养结束后，加25ml甲醇，振荡5min，过滤。
再用甲醇多次洗涤漏斗上的土壤，直至获得无色滤液。
合并滤液和洗液并定容50ml或100ml，在分光光度计上于460nm处比色。
标准曲线的绘制：吸取10ml分别含20—300微克的三苯基四唑氯化物溶液，加10mgNaHSO3还原，显色后在分光光度计上于460nm处比色测定并绘制标准曲线。
酶活性表示及计算：以20g土壤中氢离子的微升数表示。
X=av*150.35式中：a——1ml滤液中甲醇的毫克数（查标准曲线）V——滤液体积（ml）150.35——将甲醇量换算成氢的体积（微升）的系数多酚氧化酶活性的测定——邻苯三酚比色法（1）标准曲线的绘制取重铬酸钾标准溶液，用0.5mol/LHCl稀释成各种不同浓度。
定容后，在分光光度计上于430nm处比色测定。
以光密度值为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。
（2）操作步骤称取1g风干土壤样品（过0.25mm筛），置于50mL三角瓶中，然后注入10mL1%邻苯三酚溶液，将瓶含物摇荡后放在30℃恒温箱培养2h。
取出后加4mLPH4.5柠檬酸—磷酸缓冲液，再加35mL乙醚，用力摇荡数次，萃取30min。