黄酮的分离提取

4.小结：
• 实验中分别采用超声、回流、温浸、快速溶剂萃 取四种提取方法对甘草中总黄酮的提取效率进 行了对比研究，并对快速溶剂萃取法进行了提取 条件的选择和优化，以此来提高甘草中总黄酮得 率，确定最佳提取工艺。结果表明，快速溶剂萃 取法的提取效率要高于其它三种提取方法，平均 总黄酮提取量分别为快速溶剂萃取法(10.63 mg/g)>回流提取法(9.06 mg/g)>超声提取法(8.44 mg/g)>温浸提取法(7.65 mg/g)。其中快速溶剂萃 取法最佳提取条件为：提取时间为 7 min ，提取 温度为 120 ℃，提取次数为 1 次， 乙醇浓度为 70 %。
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黄酮类化合物的分离提取方法
1.传统提取方法：有机溶剂提取法、热水提 取法、碱性水或稀醇提取、系统溶剂提取 等 2.新型提取方法：超声波提取法、超临界流 体萃取法、酶法提取、双水相提取法、半 仿生提取法、模分离法、热压流体萃取法、 微波提取法等。 3.分离方法：硅胶柱层析、高效液相色谱法、 薄层色谱法等。
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温浸提取法：精密称取 2.0000 g 甘草粉末，加 80 %乙 醇 40 mL，浸泡提取三次，30min/次，提取温度为 25 ℃，过滤，合并收集滤液，减压旋转蒸发至干，定容于 50 mL容量瓶中，用紫外分光光度计按之前所述的方法 测定其吸光度值，以芦丁为标准品计算总黄酮的含量。 快速溶剂萃取法：精密称取 2.0000 g 甘草粉末，选用 80%乙醇为萃取溶剂，用快速溶剂萃取仪萃取，静态萃 取时间为 10 min，循环次数为 3 次，冲洗体积 60%， 萃取压力1500 psi，萃取池 34mL，萃取温度为 120 ℃， 过滤，合并收集滤液，减压旋转蒸发至干，定容于 50 mL 容量瓶中，用紫外分光光度计按之前所述的方法测 定其吸光度值，以芦丁为标准品计算总黄酮的含量。
5.微波提取法 微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异， 使基体物质 中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热， 从而使被提取物质从基 体或体系中分离，进入介电常数较小， 微波吸收能力相对差的提取剂。 这种 方法的优点是对提取物具有较高的选择性、 提取率高、 提取速度快、 溶剂用 量少、 安全、 节能、 设备简单。
1.超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临 界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良 好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。 吉首大学的李 志平等人对超临界二氧化碳萃取技术从菌陈蒿中提取黄酮 类化合物进行了研究，研究表明，与溶剂提取法相比，这 种方法具有操作简单、提取率高、后续分离易于进行的特 点，菌陈蒿总黄酮的提取率最高可达 3.875%。
3.结果与讨论：
• 不同方法提取甘草中总黄酮的对比研究结果表明，快速溶剂萃取法作 为一种较为新颖的提取方法，在对甘草中总黄酮的提取过程中得到了 最佳的提取效果，所得到的总黄酮的含量最高，是一种较为优选的提 取方法。因此，对快速溶剂萃取法的提取条件进行进一步的优化。选 用正交试验法，选定提取时间，提取温度，提取次数和乙醇浓度作为 考察的 4 个因素，每个因素各取 3 个水平，采用 L9（34）正交进行 试验，以总黄酮含量为评价指标，采用分光光度法进行测定，考察的 因素和实验结果如表所示。
黄酮类可看作是 2- 苯基色原酮的一系列衍生物, 目前黄酮类化合物是泛指 具有 15个碳原子的多元酚化合物。芳环 ( A环、B环 ) 之间以一个三碳链 ( C环 ) 相连, 用 C6- C3- C6表示。其中 C环部分可以是脂链, 也可以与 B环 部分形成六元或五元的氧杂环。
黄酮类化合物的作用
1.对心血管系统的作用 2.抗肝脏毒作用 3.抗炎作用 4.雌性激素样作用 5.抗菌及抗病毒作用 6.泻下作用 7.解痉作用
2.不同方法提取黄酮： ① 超声提取法：精密称取 2.0000 g 甘草粉末，加 80%乙醇 40 mL，在 100 W 超声波清洗器中提取 三次，30 min/次，提取温度为 50℃，过滤，合并 收集滤液，减压旋转蒸发至干，定容于 50 mL 容 量瓶中，用紫外分光光度计按 之前所述的方法测 定其吸光度值，以芦丁为标准品计算总黄酮的含 量。 ② 回流提取法：精密称取 2.0000 g 甘草粉末，加 80%乙醇 40 mL，回流提取三次，30 min/次，提 取温度为 100 ℃，过滤，合并收集滤液，减压旋 转蒸发至干，定容于 50 mL容量瓶中，用紫外分 光光度计按 之前所述的方法测定其吸光度值，以 芦丁为标准品计算总黄酮的含量。
二、甘草中黄酮类成分提取方法：
甘草黄酮类成分提取方法的基本原理大都是通过 物理或化学方法破坏甘草的细胞壁，然后根据甘 草黄酮的极性或溶解性的不同以达到分离提取的 目的。
常用的方法：
超声提取法 回流提取法 温浸提取法 快速溶剂提取法
三、实验流程：
1.标准曲线的制定：
精密称取芦丁对照品 10.00mg 置于 50 mL 容量瓶中，加适量 80%乙 醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，配制成 0.2 mg/mL 的芦丁标准溶液。 精确吸取芦丁对照品溶液 2 mL，加 80 %的乙醇至 5 mL，然后加入 5%的 NaNO2溶液 1 mL，室温下放置 6 min，再加入 10 %的 Al(NO3)3 1 mL，混匀，室温下放置 6 min，加入 4 %的 NaOH 10 mL，用水稀释 至 25 mL，混匀，室温下放置 15 min，在分光光度计上扫描波长从 400-600 nm 之间的吸光度，结果在 510 nm 检测波长处有最大吸收值。 精密量取芦丁对照品溶液 0，0.6，1.2，1.8，2.4，3.0 mL，分别 置于10 mL 容量瓶中，然后加入 5%的 NaNO2溶液 0.3 mL，室温放置 6 min，再加入 10%的 Al(NO3)3 0.3 mL，混匀，室温放置 6 min，加入 4 %的 NaOH 4 mL 控制适量 PH 值，加水至刻度，摇匀，放置 15 min 后，用紫外可见分光光度计在 510 nm 处进行测定。绘制标准曲线， 用最小二乘法经线性回归，求得回归方程为： y=15.066x+0.0063，R2=0.9996，R=0.9998
黄酮类化合物的分离提取
概要
• 简介 • 黄酮分离提取方法的介绍 • 甘草中黄酮的分离提取及优化
简介
黄酮类化合物也称黄碱素, 是广泛存在 于自然界的一大类化合物, 大多具有颜色。 在植物界主要分布在双子叶植物中, 在裸子 植物中也有较多分布, 而菌类、藻类、地衣 类等低等植物中少见。黄酮类化合物在植 物体中的分布尤以花、果、叶部位为多。 它在植物体内大多与糖结合成甙的形式存 在, 也有部分以游离状态的甙元存在。由于 最先发现的黄酮类化合物都具有一个酮式 羰基结构, 又呈黄色或淡黄色, 故称黄酮。
甘草中黄酮化合物提取方法
一、甘草中主要成分：
甘草的主要有效成分为多种三萜类化合物和多种 黄酮类化合物，另外，甘草中还含 有香豆素类、氨基酸类、生物碱、雌激素和有机 酸等多种成分。甘草中的黄酮类成分有黄酮类， 黄酮醇类 ，二氢黄酮类 ，查耳酮类 ，异黄酮类 ， 异黄烷类 ，异黄烯类 ，二氢异黄酮类 ， Coumestan 类，3-Arylcoumarin 类。
2.酶解法 酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性， 破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。佛山科技技术学院的黄 剑波等人采用纤维素酶辅助法从甜茶中提取黄酮类化合物，黄酮类物质 的提取率为91%，提取纯度为54%。 3.半仿生法 半仿生法是将药料先用一定 pH 的酸溶液提取,继以一定 pH 的碱溶液提 取, 提取液分别过滤、浓缩,制成制剂, 模拟口服给药及药物经胃肠道转运 的原理, 为经消化道给药的中药试剂设计的一种提取工艺。根据仿生学原 理, 人体胃、小肠、大肠的体液酸度最佳 pH 分别为 2.0, 7.5, 8.3。将干 燥样品粉末, 依次加入 pH 分别为 2.0, 7.5, 8.3的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲 溶液作为提取液, 在 70。C下回流, 提取 3次, 合并提取液, 定容, 测定。
4.超生波提取法 超声波提取法提取黄 酮类物质，是目前比较新 的方法。原理是利用超声 波在液体中的空化作用加 速植物有效成分的浸出提 取，另外，还利用其次效 应，如机械振动、扩散、 击碎等，使其加速被提取 成分的扩散、释放。超声 波提取法具有设备简单， 操作方便，提取时间短， 产率高，无需加热，同时 有利于保护热不稳定成分， 省时，节能，提取率高的 优点。