第十章甾体激素类药物的分析

第十章甾体激素类药物 的分析
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2020/11/28
第十章甾体激素类药物的分析
•激素（Hormone，荷尔蒙）
• 是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生 物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官 的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌 出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、 糖尿病等。
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•醋酸泼尼•松苯丙酸诺龙
•（四）酮肟的生成
•苯丙酸诺龙缩氨脲 •m.p.约182℃（分解）
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•炔诺酮
•HONH2
•炔诺酮肟 •m.p.约195℃（分解）
第十章甾体激素类药物的分析
•（五）UV-ViS分光光度法
•原 理 •200-760nm有特征吸收。
•△４-3-酮
•苯环
•其他共轭结构
➢ 适用：肾上腺皮质激素。
➢ 能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制 AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。 其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可 用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.
•＋ 2Cu2+ + 4OH-
•＋ 2Ag+ + 2OH•醋酸去氧皮质酮
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•+ Cu2O + H2O
•+
•苯甲酸雌二醇
•H+ •红色
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第十章甾体激素类药物的分析
•5、卤元素的呈色反应 •呈蓝紫色
•有机氟 •有机氯
•有机破坏
•茜素氟蓝—硝酸亚铈
•Fˉ •Clˉ
•氯原子结合 在母核环上
•硝酸—硝酸银
•AgCl
•6、沉淀反应
•（1）与碱性酒石酸铜（斐林试液）的沉淀反应
•（2）氨制AgNO3（多伦试液）的沉淀反应 •（3）与AgNO3的沉淀反应
➢ 四氮唑盐反应还用于肾上腺皮质激素类药物 中杂质“有关物质”检查的显色剂。
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第十章甾体激素类药物的分析
•3.甲酮基的呈色反应
➢ 适用：具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类
药物。
•孕激素
➢ 能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反 应呈色。
•（1）甲酮基： •黄体酮 •亚硝基铁氰化钠 •其他甾体
•240nm左 右
•方 法
•280nm左右
•可规定最大吸收波长、A、吸收系数、A大/A小。
•示 例
溶剂•
曲安息龙 甲醇
丙酸倍氯米松 乙醇
浓度 20μg/ml
20μg/ml
结果判断
在238nm处 有最大吸收
在239nm处有最大吸收，A为 0.57～0.60，在239nm与 263nm
处的吸收度比值为2.25～2.45
• （一）肾上腺皮质激素
•C17–醇酮基 •（还原性）
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•天然皮质激素：氢化可的 松 ➢ 母核有21个碳原子
•△4–3–酮基 •（紫外吸收）
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•结构修饰
•提高结构稳定 性
•增强抗炎作用
•醋酸地塞米松
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•曲安息龙
•地塞米松磷酸钠
第十章甾体激素类药物的分析
第十章甾体激素类药物的分析
•概 述
➢ 基本结构
甾体激
•18
•12
•11
•13 •17
•19 •1
•C
•9
•D •16
•2
•A
•10•B
•14 •8
•15
•3
•5
•7
•4
•6
素类药物 均具有环 戊烷骈多 氢菲母核。
➢ 分类
•肾上腺皮质激素
•甾体激素 •性激素
•雌激素 •雄性激素 •蛋白同化激素
•孕激素
➢ A环为苯环，C3位上有 酚羟基，C17位上有β-羟基
结构不稳定，口服无 效
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•结构修饰
•可口服 •高效 •长效
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•炔雌醇 •戊酸雌二醇
•乙炔基引入，使 仲醇变叔醇，增 加空间位阻，阻 碍酶对药物的氧 化代谢，可口服
•17位羟基酯化， 酯在体内缓慢水 解，延效
➢ 口服被迅速破坏失效， 只能肌注
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•结构修饰
•口服、长效 •醋酸甲地孕酮（孕酮类孕激素）
•炔诺酮（睾酮类孕激素）
•炔诺孕酮（睾酮类孕激素）
•口服、长效，17-OH作成庚 酸酯，注射一次可维持3个月
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•（四）雌激素
•天然的雌性激素：雌二 醇 ➢ 母核有18个碳原子
A环为3– OH苯环
雄性与蛋白 +
+
同Βιβλιοθήκη Baidu激素
雌性激素
+
+
孕激素 鉴别反应
+
+
UV、羰 还原性（碱 可成酯 基试剂、 性酒石酸酮、 氨基脲反 氨制
应 AgNO3）
与亚硝基铁氰 化钠、间二硝
基苯反应
UV、与 重氮苯磺 酸盐反应
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第十章甾体激素类药物的分析
•第二节 鉴别试验
•一、物理常数的测定
•C=O
•20位酮基
•1700cm
-1
•870cm-
•C1-H •双键
•1615cm
-1
•1665cm-
•3位1酮基
七、TLC法
八、HPLC
应用 甾体激素类药物原料与 甾体激素类药物原料与制剂
制剂的鉴别
的鉴别（如：醋酸曲安奈德
软膏、醋酸氟轻松软膏）
方法
对照品法
对照品法
要求供试品溶液所显主 要求在含量测定项下记录的
•（六）IR法 •原料药
•eg1:炔雌醇
•结构特征： • 酚羟基 • C17 –OH • C17 –乙炔基
•ν
•3300cm1
•3610cm-
1
•酚羟基
•1615cm-
1
•1590cm-1
•3505cm-1
•醇羟基
•1505cm-1
•苯环的骨架振动
•eg2：黄体酮
•结构特征： •△４-3-酮 •C17-酮基
无机氯原子
•硝酸—硝酸银 •AgCl
结合在母核 环上的氯原
氧破瓶坏燃烧法无机氯原子
子
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第十章甾体激素类药物的分析
•7、水解产物的反应
➢ 适用： 本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯
➢ 原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸 酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物 来鉴别。
➢ 结果： 醋酸酯水解后生成的醋酸可与乙醇反应，生 成有香气醋酸乙酯。 戊酸或己酸酯类水解后可生成有特臭的戊酸 或己酸，进行鉴别。
第十章甾体激素类药物的分析
•(2)官能团的呈色反应
•1、C3–酮基和C20–酮基
•（1）与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸 苯肼反应生成腙。
•（2）与羟胺或氨基脲分别生成具有一定熔点的肟 或缩氨脲。
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•HCl
•+
•室温下 长时间加 热
•黄色
•3，20-双腙
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•二、化学鉴别法
•三、制备衍生物测定熔点 •四、紫外分光光度法 •五、红外分光光度 •六、薄层色谱法 •七、高效液相色谱法
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第十章甾体激素类药物的分析
•第二节 鉴别试验
•二、化学鉴别法 •（一）呈色反应
•（1）与强酸的呈色反应 •强酸： H2SO4、H3PO4、HClO4、 HCl •原理：酮基先质子化，形成正碳离子，再与 HSO4-作用呈色。
•气相色谱法 •高效液相色谱
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第十章甾体激素类药物的分析
•一、HPLC法 •USP、BP、JP均采用
➢ 测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。
➢方法：RP－HPLC（内标法）
•eg：黄体酮的含量测定
•橙红色
•+2Ag +
C•H黑3C色OOH
第十章甾体激素类药物的分析
•醋酸泼尼松
•+
•+
•OH-
•四氮唑盐
•H2O
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•+
•+ CH3COOH
•深红色的三苯甲鐕
第十章甾体激素类药物的分析
•结论：
➢ 反应在碱性条件下（水解）进行。
➢ 三苯甲鐕于490nm处显示最大吸收，可用比 色法测含量。
2、HPLC法（自身对照法）
判定方法： 规定杂质峰数目
规定杂质峰面积
•≤图A中峰1面积的四分之三
•二、游离磷酸盐的检查
➢ 杂质来源：地塞米松磷酸钠生产过程中，由磷酸酯
化时残存的过量磷酸盐。
➢ 方法：对照品比色法 ➢ 原理：供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 钼蓝
740 ➢ 结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液nm
•（二）雄性激素和蛋白同化激素
•4位引入卤素或19位去 甲基或将A环结构改造 •均明显降低雄性作用， 增加蛋白同化作用
• △4–3–酮基
➢ 天然雄性激素：睾酮 ➢ 母核有19个碳原子
➢ A环中有△4–3–酮基结构
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第十章甾体激素类药物的分析
•结构修饰
•丙酸睾酮
•增加脂溶性，制成油注射剂 •可口服、延效
结果 斑点的颜色和位置与对 色谱图中，供试品峰的tR与
判断 照品溶液的主斑点相同
对照品峰的tR一致
•第三节 特殊杂质检查
•一、有关物质的检查
➢ 杂质来源：原料、中间体、异构体、降解产物以
及试剂和溶剂。
➢ 其他甾体：有些杂质与该甾体激素药物结构类似，
也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激 素类药物的质量控制中，“其他甾体”的限度检查显 得很重要。
•结论： •成腙反应中
➢ C3–酮基空间位阻最小， 最易起反应，室温下先生 成单腙。
➢ C20–酮基受C18甲基的 空间位阻影响，反应较 慢，需加热或较长时间 放置，才完成反应。
➢ C11–酮基受C18、C19位甲基 甲基的阻碍，不发生反应。
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第十章甾体激素类药物的分析
•2、C17–α–醇酮基的呈色反应（还原性）
的吸光度。
•三、有机溶剂残留量的检查
•eg：地塞米松磷酸钠
➢ 杂质来源：地塞米松磷酸钠生产中，使用大量 甲醇和丙酮。
➢ 方法：GC色谱法
➢ 结果判断：不得出现甲醇峰，甲醇含量≤0.3％
•
丙酮规定不得过≤5.0%
•四、硒的检查
➢ 杂质来源：地塞米松、氟轻松和曲安奈得等甾体激
素类药物，在生产中使用二氧化硒(SeO2)脱氢工艺，
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第十章甾体激素类药物的分析
•三、制备衍生物测熔点
•（一）酯的生成
•+ •
+ KOH
•（二）酯的水解
•m.p.为201℃
•丙酸睾丸素
•醇制KOH •睾丸素
• 水解 •m.p.为150℃~ 156℃
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•（三）缩氨基脲的生成
•H2NCONHNH2
•蓝紫色 •淡橙色或不显色
☻黄体酮专属性反应。
•（2）亚甲基的反应：
•硫酸普拉睾酮
• 乙醇 •间二硝基苯
•氢氧化钠
•紫红色
•结论：
➢ 与亚硝基铁氰化钠反应称为碱性硝普钠反应。
➢ 在碱性条件下进行。
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第十章甾体激素类药物的分析
•4.酚羟基的呈色反应
➢ 适用：雌激素类药物。 ➢ 能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮 染料。
药物可能引入杂质硒。
➢ 方法：药物 •氧瓶燃烧 •二氨基萘比色法测定 378
➢ 结果判断：供试品溶液的吸光度不n得m大于硒对照溶
液的吸光度（0.005％～0.01％） 。
•五、雌酮 六、乙炔基
•第四节 含量测定
• 常用方法
•容量法
•四氮唑盐比色法
•比色法
•异烟肼比色法
•荧光法
•铁-酚试剂比色法
•紫外分光光度法
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•甲睾酮
•增加位阻，难代谢氧化， 稳定性增强
•可口服
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•蛋白同化激素
➢ 母核有18或19个碳原子
•苯丙酸诺龙
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•4-氯醋酸睾丸 素
第十章甾体激素类药物的分析
•（三）孕激素
•C17-α-甲酮基
•△4–3–酮基
•天然孕激素：黄体酮
➢ 母核有21个碳原子
➢ 适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、炔诺酮）。 ➢ 机理：
•+
•↓•+•HNO3
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•NaOH滴定， 电位法指示终
点
第十章甾体激素类药物的分析
•（4）与HNO3-AgNO3的沉淀反应
➢ 适用：甾体激素类药物C21位上有氯原子取代，如丙 酸氯倍他索。
➢ 机理：
有机氯原 子
水解 加热
•苯甲酸雌二醇
•3位羟基酯化， 酯在体内缓慢 水解，延效
第十章甾体激素类药物的分析
•人工合成代用品：非甾体化合物
No Image
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•高效、长效
•己烯雌二酚
第十章甾体激素类药物的分析
•二、特殊官能团与分析方法
△4–3–酮
肾上腺皮质 +
激素
C17–α–醇 酮基
+
C17–β– 羟基
C17–甲酮基
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第十章甾体激素类药物的分析
•与硫酸显色反应
显 色 荧光 加水稀释 氢化可的松 棕黄色至红色 绿色 黄色至橙黄色
炔雌醇
橙红
黄绿 玫红絮状↓
炔雌醚 泼尼松 泼尼松龙 地塞米松 苯甲酸雌二醇
橙红 黄→橙 深红 淡红棕色 黄绿色
黄绿
红色↓
— 黄色渐变蓝绿色
—
灰色絮状↓
—
颜色消失
蓝色
淡橙色
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➢ 检查方法：（具有一定分离能力） 1、TLC法（自身对照法）
判定方法：规定杂质斑点数目
规定杂质斑点颜色
eg：氢化可的松中其他甾体的检查 供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 浓度：3.0mg/ml 对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1） 60μg/ml 层析：供试液 对照液 点样、展开、斑点检出。 判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主 斑点比较，不得更深。