液体培养基的制备及杀菌优秀课件

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食用菌液体菌种的制作PPT课件

食用菌液体菌种的制作PPT课件
四 实验内容与方法
c 将培养液分装到250mL的三角烧瓶中(80-100ml/瓶),再放入5-10颗玻璃珠,加塞,包扎,灭菌(121℃,30min) 3、接种:待培养液充分冷却至室温后,无菌操作从母种斜面铲取约1cm² 的菌丝体块(勿带过多的培养基),使菌丝面朝上悬浮于液面上; 4、培养:先25℃静止培养2d, 待接种菌块萌发长出新菌丝后,再 于摇床上振荡(150-180rpm)培养 3-4d,观察检测液体菌种的质量。
恒温培养箱;恒温摇床;超净工作台;灭菌锅;电炉(1台/组); 250mL三角烧瓶(1个/人);500mL或250mL烧杯、量筒(各1个/组);中长玻璃棒(1根/组),六层纱布(1块/组),接种钩、接种铲(各1支/组);小刀、棉塞、牛皮纸、橡皮筋; 食用菌母种(1支/组),马铃薯,葡萄糖,磷酸二氢钾,硫酸ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ,蛋白胨,氯化钠
食用菌液体菌种的制作
1、学习液体菌种制作的原理与方法; 2、掌握液体菌种的质量检测; 3、了解液体菌种在食用菌生产中的优点。
一 实验目的
液体菌种是指将食用菌的菌丝在一定的的培养条件下采用液体培养基使其生长增殖形成大量菌丝体或菌丝球,以作为食用菌栽培的原种或栽培种使用。液体菌种必须经显微镜检查后方可用于科研和生产。 液体菌种使用的培养基根据不同菌类营养要求的特点而设计,其主要成分为碳源、氮源、矿质元素与维生素。碳源常用蔗糖和葡萄糖;氮源主要是蛋白胨、酵母粉等;无机盐常添加硫酸镁、磷酸二氢钾等;维生素多用维生素B1。
三 实验器材
1、配方:马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.5g、蛋白胨2g、氯化钠0.1g,水1000mL,PH自然。 2、培养基制备: a 根据配方和用量称取适量去皮的马铃薯,切块(1cm³大小)后于烧杯中加入一定量的水,在电炉上加热煮沸30min(熟而不烂),用六层纱布过滤后将滤液补充至初始体积 b 按比例向滤液中加入配方中的其它各成份,搅拌(必要时可加热)使各成份充分溶解,(若溶液较浑浊可再过滤一次)再补充至初始体积,冷却(不烫手)

细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件

细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
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目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法,从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
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实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶,活性污泥或土壤或湖水1瓶, 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它:接种环、酒精灯、恒温箱。
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c. 第三次蒸煮之后基本无菌,但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h,确定无菌才能使用。
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实验程序4
(培养基和玻璃器材的灭菌方法)
过滤除菌法: 不能用加热灭菌的 液体物质(如维生 素、血清),一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
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第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
(培养基的配制方法和步骤) 3. 调pH值:用10% NaOH调pH至7.6,用精 密pH试纸对照。 4. 分装:将培养基分装于5支试管,其余全部 倒入250mL锥形瓶中,分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆,挂上标签,注明何种培养基。 6. 灭菌备用:培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h,确定无菌生长,方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它:培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。

培养基的制备与灭菌PPT课件

培养基的制备与灭菌PPT课件
由于微生物营养类型不同,应提供不同种类的培养基。在分离、培养 异养微生物时,对一般细菌常选用牛肉膏蛋白胨培养基,对放线菌常用 高氏合成I号培养基,培养酵母菌、霉菌则用麦芽汁或豆芽汁葡萄糖培 养基,有时也可常用马丁培养基分离霉菌。马丁培养基除含有霉菌所需 的各种营养物外,还有孟加拉红染料,能抑制放线菌和细菌,链霉素可 杀死或抑制细菌,但对霉菌均无害,所以这种培养基具有选择作用。
(2)溶解:在上述烧杯中加入所需水量(根据实 验需要可加入蒸馏水或自来水)搅匀,加热溶解。 应在药品全部溶解后加水补足加热过程所蒸发的 水分。配制固体培养基时,应将已配好的液体培 养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至琼 脂完全融化,并不断搅拌,以免糊底烧焦,最后 加水补足失去的水分;
(3)调PH值:用1N NaOH或1N HCl调PH至7.2,尽 量避免回调;
配制培养基时,按100 mL马铃薯浸汁加入葡萄糖 2克,琼脂1.5-2.0克。
4. 无菌水的制备
在每个250 mL锥形瓶内装99 mL自来水(或生理 盐水),在每个小试管内装4.5 mL自来水(或生 理盐水),塞上棉塞,15磅/寸2灭菌20分钟待用。
2021/3/9
授课:XXXቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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(二)培养基的分装及棉塞的制作
2021/3/9
授课:XXX
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3. 马铃薯葡萄糖培养基(分离霉菌用)
制法:将马铃薯去皮,并切成薄片,立即放入水 中。否则马铃薯易氧化变黑。每200克马铃薯加 自来水1000 mL。80℃温水浸泡1小时,用纱布过 滤,然后稀释到1000 mL。15磅/寸2灭菌20分钟, 即为20%的马铃薯浸汁,贮存备用。
2021/3/9
授课:XXX
4
四、实验内容

培养基的配制灭菌(共10张PPT)

培养基的配制灭菌(共10张PPT)
两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使 漏气。
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第7页,共10页。
4) 用电炉或煤气加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除
锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温
度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时,控
4) 用电炉或煤气加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。
15~30分钟进行灭菌。时间的长短可根据灭菌物品种类和数量的不
同而有所变化,以达到彻底灭菌为准。这种灭菌适用于培养基、工
1MPa(相当于15Ib/in2或1.
作服、橡皮物品等的灭菌,也可以用于玻璃器皿的灭菌。 待冷空气完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。
高压蒸汽灭菌的基本原理:将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 5℃,15~30min可达到彻底灭菌的目的。
手提式高压蒸汽灭菌锅的操作步骤 如要挑取处女蝇、不同品种杂交、子代性状检查,需要先做麻醉处理,有选择性转入接种瓶。
接种果蝇:拔出接种瓶、亲本瓶的棉塞,夹在指 6. 1) 首先将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。
一般培养基用0. 05kg/cm2),121.
缝中间,迅速将亲本瓶口倒扣在接种瓶上方,轻拍亲本 这种灭菌适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌,也可以用于玻璃器皿的灭菌。
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第3页,共10页。
4. 灭菌:置121℃高压蒸汽灭菌15分钟。
5. 培养酵母菌:待培养基冷却后,在培养基的表面
滴加1-2滴新鲜酵母液,放置1d待培养基表面干燥后再接
当锅内压力升到所需压力时,控制热源,维持压力至所需时间。

第二章 培养基的制备与灭菌 PPT课件

第二章 培养基的制备与灭菌 PPT课件

第二节 淀粉水解糖的制备
一、制备方法 原料:茹类(木茹、红茹)淀粉、玉米淀粉、小 麦淀粉、大米淀粉等。 1、酸解法:以酸为催化剂,在高温高压下将淀粉 水解转化为葡萄糖的方法; 优点:生产简易、设备简单、水解时间短、生产 能力大; 缺点:设备必须耐高温、高压及耐腐蚀,而且反应 过程中有副反应发生、转化率低;对原料要求 严格,颗粒大小要均匀,不宜过大;淀粉浓度也 不宜过高。
二、淀粉酸水解理论基础:
1、淀粉的水解反应(如图所示)
在酸的催化下,淀粉的颗粒结构被破坏, α-1,4糖 苷键及α-1,6糖苷键被切断,先变为糊精、低聚 糖、麦芽糖,最后才生成葡萄糖。淀粉水解的 中间产物—糊精,是若干种由葡萄糖单位组成 的低聚糖,具有旋光性、还原性、能溶于水,不 溶于酒精;随聚合度降低,遇碘呈现暗紫、紫、 红褐、暗红、红和浅红的变化。 总反应式: (C6H10O5)n+nH2O→nC6H12O6 (1)葡萄糖的理论收率:
2、葡萄糖的复合反应: 2C6H12O6→C12H22O11+H2O 两个葡萄糖分子经过α-1,6键聚合生成异麦芽糖 (68~70%)和经β-1,6键聚合成龙胆二糖(17~ 18%),另外生成其他复合二糖(12~15%); 葡萄糖复合反应的影响因素:
(1)淀粉浓度对复合反应的影响:淀粉乳浓度高,水 解所得葡萄糖浓度高,复合反应强烈,从而糖化 液的葡萄糖纯度下降(见表2-7);淀粉乳浓度过 低,生成葡萄糖也低,设备生产能力低,这是不利 的;工业生产中一般采用18~22%淀粉乳浓 度,pH为1.5,HCl量为绝干淀粉的0.5%,压力为 0.294MPa(表压)时水解20~25 min;糖化液纯度 为90%~92%。
第一节 培养基的原材料
一、培养基的营养成分及其功能; 1、碳源:是用来供给菌种生命活动所需的能量和 构成菌体细胞以及代谢产物的物质基础;是发 酵的主要原料之一。

第二篇第一章第二节液体培养基制备及灭菌

第二篇第一章第二节液体培养基制备及灭菌


耕糟机:由双速电机、减速器、油压升降轴、耕糟臂、耕糟刀等组成。 耕糟转速0.4~0.5 ,排糟转速3~4 r/min。

耕糟臂有2、3、4臂(根据投料量),耕糟臂上每隔20~30cm装有垂直于 筛板的耕糟刀或波形切割刀。大型槽还有排糟臂,装挂可旋转角度的出 糟刀。

操作:泵送糖化醪后,开动耕糟机转3~5r,使糖化醪在槽内均
(一)淀粉质原料蒸煮糖化目的
1、糊化:由于淀粉质原料中含有的淀粉是存在于原料的细胞之
中,受到细胞壁的保护,难以溶解。蒸煮的目的是使植物组织 细胞膜破裂,淀粉受热、吸水膨胀,破坏晶状结构(未糊化前 对酶作用的抵抗力较强难以糖化),成为凝胶状态,此过程称 为糊化。 2、液化:通过添加液化酶,使长链淀粉转化为糊精、低聚糖。 糊化和液化常同时进行 3、糖化:通过添加糖化酶再将糊精、低聚糖转化为可发酵性糖。
第二节
一 二 三 四
培养基灭菌
培养基灭菌的目的、要求和方法 湿热灭菌的理论基础 影响灭菌的因素 培养基灭菌的流程及设备
一、 培养基灭菌的目的、要求和方法
1.培养基灭菌的定义 是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及 其孢子,或从中将其除去。工业规模的液体培养 基灭菌,杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 2.灭菌与消毒的区别 灭菌:用物理或化学方法杀死或除去环境中所有 微生物,包括营养细胞、细菌芽孢和孢子 消毒:用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿 内外的病源微生物
纤维素半纤维素水解

一、糖蜜原料的稀释与澄清
糖蜜是制糖厂的一种副产品,里面含有大量 的可发酵性糖,这些糖分在目前制糖工业技 术或经济核算上已不宜用结晶方法加以回收。
糖蜜浓度一般在80° Bx ,酵母不能直接利用, 需进行稀释、酸化、灭菌和增加营养盐等处 理过程。 35 Bx——1151(kg/m3) 80Bx——1412 (kg/m3)

培养基的制备及消毒与灭菌ppt实用资料

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《基础生物学实验》精品课程
• 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时,灭菌锅内冷空 气的排除是否完全极为重要,因为空气的膨胀 压大于水蒸气的膨胀压,所以,当水蒸气中含 有空气时,在同一压力下,含空气蒸气的温度 低于饱和蒸气的温度。
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不能灭菌的物质:
• 硝化丙烷 、硝化甘油、硝化纤维,含氮硅酯。 • 三硝基苯、三硝基甲苯、苦味酸、和其它爆炸性
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牛肉膏蛋白胨培养基的制备
❖ 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基;
❖ 牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维 生素;
❖ 蛋白胨主要提供氮源和维生素; ❖ NaCl提供无机盐; ❖ 在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝
固剂; ❖ 用稀酸稀碱将其pH调至中性或微碱性。
• 要检查压力表上的指数为“0Mpa”后才能打开 锅盖。
• 外来物质(金属、液体)不能堵塞通风孔,否则 会引起装置故障、起火、短路。
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一般培养基用0.1Mpa,121.5℃,15~ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度 及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等 具体情况而有所改变。例如含糖培养基用 0.06Mpa,112.6℃灭菌,然后以无菌操作手 续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的 培养基以0.1Mpa,121.5℃灭菌20min即可, 而盛于大瓶内的培养基最好以0.1Mpa, 122℃灭菌30min。
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半合成培养基
❖ 在以天然有机物作为微生物营养来源的同时,适 当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基 叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养 基上生长,应用广泛。
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为安装安全阀和压力表,物料出口管伸入罐内300-400mm,使罐 内留有一定的空间。从罐中部6引出部分糊化醪去制备液体液被加热的温度。
3、加热器
• 它由三层直径不同的套管组成。 内层和中层管上都钻有很多小 孔,各层套管用法兰连接。
• 粉浆流过中层管,高压加热蒸 汽从内外两层管的小孔内喷出, 使热粉浆加热,这种形式汽液 接触均匀,加热较全面,可在 很短时间内使粉浆达到规定的 蒸煮温度。
糖蜜 出口
(2)立式糖蜜连续稀释器
A
A
➢ 主体:圆筒形器身,上下封头锥形。
1
➢ 结构:下部有两个连接管,—个进糖蜜,
2
另一个进热水,流过最下边的一个中心有
圆形孔的隔板后,糖液又与冷水混合。
冷水
糖蜜
热水
里面有7-8块具有半圆形缺口的隔板交
错配置,这样液体呈湍流运动,使糖蜜和
水更好地混合。
➢ 隔板间距125mm,糖液允许速度为 0.08-0.1m/s。
h --装满系数,一般取0.8~0.85;
酸化桶个数:
VT n= V
式中:V--每个澄清罐的体积,m3。
二、淀粉质原料的蒸煮糖化设备
(一)蒸煮糖化的目的
淀粉为白色无定形的结晶粉末,有圆形、椭圆形和多角形三种形状。
蒸煮目的: 1、借助蒸煮时的高温作用,破坏原料中淀粉颗粒的外皮,使其内容 物流出,呈溶解状态变成可溶性淀粉,以便糖化剂作用。 2、高温高压灭菌。
A-A 图 2-30 立 式 糖 蜜 连 续 稀 释 器
1-隔 板 2-固 定 杆
(3)错板式连续稀释器
➢ 主体:立式圆筒 ➢ 结构:圆筒内有10-15块档板成 600角设置; ➢ 功能特点:糖蜜和水从稀释器的上 部流下,经器内各挡板的作用,糖蜜 反复改变流向,使糖蜜和水均匀混合。
(4)胀缩式糖蜜连续稀释器
糖化的目的:
糖化的作用也就是把溶解状态的淀粉、糊精转化为能够被生物细胞利 用的可发酵性物质,降低醪液的粘度,有利于酵母的发酵和酵液的输 送。
二、淀粉质原料的蒸煮糖化设备
(二)蒸煮设备
在我国生物发酵厂,将加热器(喷射加热器)、后熟器、冷 却器(真空冷却器)和糖化锅组成了连续蒸煮糖化流程。提 高了生产能力和出酒率,降低了煤耗,改善了劳动条件,提 高产品质量。
液体培养基的制备及杀菌优秀 课件
第二节 液体培养基的制备及杀菌设备
一、 糖蜜原料的稀释与澄清 二、 淀粉质原料的蒸煮糖化设备 三、 啤酒生产中麦芽汁的制备 四、 液体培养基的灭菌
一、糖蜜原料的稀释与澄清
糖蜜是甘蔗厂或甜菜糖厂的副产品,又称废糖蜜,俗称桔水。因其本 身就含有相当数量的可发酵性糖(蔗糖),无需糖化,可直接供酵母发 酵生产酒精、甘油、丙酮丁醇、柠檬酸、谷氨酸、食用酵母及液态饲料 等。由于原糖蜜的浓度一般都在800Bx以上,胶体物质(果胶质、焦糖 和黑色素)与灰分多,产酸细菌多,所以糖蜜酒精发酵前需进行稀释、 酸化、灭菌、澄清、添加营养盐等处理过程。
1、间歇式稀释设备
间歇稀释在稀释罐内进行,稀释罐为敞口容器,内安有搅拌装 置或用通风代替搅拌,使糖蜜与水能达到均匀的稀释(目前工厂 已经不使用了) 。
如果工厂原有糖化锅设备,一般利用糖化锅作为稀释设备。
2、糖蜜连续稀释设备
(1)水平式糖蜜连续稀释器
➢ 主体:圆筒形水平管子,设置多个管口。 ➢ 结构:沿管长方向设置若干隔板和一块筛板。隔板上的孔上下交 错地配置,以改善糖液流动形式。隔板固定在两根水平杆上,能与 杆一起装卸,以便清理,并可以从管子中取出来。 ➢ 动力特点:没有搅拌器,节省动力,安装时通常出口的一端向下 倾斜。 ➢ 功能特点: 同时可进行稀释,加营养盐等操作。
熟 器
连续糖化罐
特点:蒸煮温度可高、可低,节省能耗;设备结构简单操作容 易控制;采用真空冷却器冷却,提高效率,降低费用。
2、蒸煮罐
结构主体:圆筒与封头焊成 易损部件:下封头 罐径: D/H = 3-5
粉浆由罐底进料口压入,被加热蒸汽管喷出的蒸汽迅速加热到蒸煮 温度,加热达到要求的物料经罐顶出料口流出入后熟罐。此罐保持 压力为0.3~0.35MPa(表压)。
➢主体:立式变径圆筒
➢特点: 中间几次突然收缩直径,糖
液在器内因器径的改变使流速随 之发生改变,促进了糖液的均匀 混合。
(5)变管径式糖蜜连续稀释器
➢ 主体:立式变径圆筒
➢ 特点: 由几种不同管径的直管段连接而成,
作用原理与胀缩式稀释器相同。
一、糖蜜原料的稀释与澄清
3、糖液的酸化澄清设备
➢ 酸化目的: 防止杂菌的繁殖,加酸可以使其中的Ca离子生成硫酸钙沉
淀粉质原料通过蒸煮以后,把颗粒状态的淀粉变成了溶解状态的糊精, 如果这时的糊精还不能被细胞直接利用,还必须采取添加糖化剂(麸 曲、液体曲、糖化酶)的办法,把醪液中的淀粉、糊精转化为可发酵 性糖等物质,作为生物细胞的碳源发酵产生酒精。
淀粉水解的过程: 淀粉 糊精 低聚糖
麦芽糖 葡萄糖
工业生产上将可溶性淀粉、糊精转化为葡萄糖的过程,就叫做糖化。
淀,从而加速糖蜜中胶体物质与灰分一道沉淀而除去。同时 调整稀糖液的酸度,使适于酵母的生长。
➢ 澄清目的: 酸化后加热使蛋白类物质变性沉淀。
糖蜜原料的澄清方法有以下几种: 1)加酸通用处理法 2)加热加酸沉淀法 3)絮凝剂澄清处理法
酸化澄清多采用间歇设备。
酸化桶的总体积:
T
VT =
Q×t
h
m3
式中:Q--每小时需澄清的糖液量,m3 /h ; t--每次澄清时间,h ;
(0Bx:糖度(白利度),表示糖液中固形物浓度的单位,指的是100 克糖溶液中,所含固体物质的溶解克数。)
一、糖蜜原料的稀释与澄清
稀释的目的:通过加水降低糖蜜的浓度,并通过加酸提高酸度,有利 于酵母繁殖和形成絮状沉淀,并通过排除沉淀物去除杂质、杂菌,达 到澄清的目的。
1、间歇式稀释设备 2、连续稀释器
连续蒸煮有低温长时间的罐式连续蒸煮,中温的柱式连续蒸 煮和高温短时间的管式连续蒸煮。
对连续糖化的要求主要是使糊化醪与曲液充分混合,在一定 温度下维持一定时间,并保持流动状态,以便于酶的作用。
1、罐式连续蒸煮流程








粉浆泵



真空冷却器


液 体 曲水

原料混合用水

一 个
液体曲贮罐

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