盐析法1

温度的影响
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pH对β的影响
蛋白质起始浓度的影响
二次盐析
盐析操作
3 等电点沉淀实例
①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝8.9，可 先于pH 3.0左右进行等电点沉淀，除去共存的许多酸性蛋白 质(pI=3．O)。工业生产胰岛素(pI＝5.3)时，先调pH至8.0 除去碱性蛋白质，再调pH至3.0除去酸性蛋白质(同时加入一 定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。 ②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调pH 4.0后出现含碱 性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。用pH 9.0的0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液重新溶解，加入20～40%饱和度的硫 酸铵分级，离心收集的沉淀Tris-HCl缓冲液再次沉淀，即得 较纯的碱性磷酸酯酶。
盐析沉淀基础
Cohn方程式logS=β-KsI Ks盐析 β盐析 二次盐析
图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图
不同蛋白质的溶解度曲线
蛋白质的盐析分布曲线
溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b)
盐析影响因素
对β影响 对Ks影响
盐种类 盐浓度 温度 pH值
无机盐种类的影响
图7 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃） (○)NaCl; (▼)KCl; (◘)MgSO4; (▲)NH4)SO4; (●)Na2SO4; (□)K2SO4; (■) 柠檬酸三钠
4 有机溶剂沉淀原理图
有机溶剂沉淀实例
5 选择性热变性沉淀实例
酵母干粉中加入0.066 mol/L磷酸氢二钠溶液， 37℃水浴保温2 h，室温搅拌3 h，离心收集 上清液，升温至55℃，保温20 min后迅速冷 却离心去除热变性蛋白，上清液中多为热稳 定性较高的醇脱氢酶。
6 其他沉淀法
（1）非离子型聚合物沉淀法 ） （2）聚电解质沉淀法 ） （3）金属离子沉淀法 ）
（4）亲和沉淀 亲和沉淀
第五章
盐析法
蛋白质的理化性质的回顾
活性蛋白
非活性蛋白
理化性质
溶解度
提取方法
2. 盐析沉淀
盐析沉淀步骤
加沉淀剂方式
陈化条件
脱盐处理
盐析机理示意图
盐析的机理
①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶 解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度， 破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降； ②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降； ③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水 分子的极化，使水活度降低。