最新药物分析教案——第四章 药物检查法

第四章药物检查法第一节概述主要内容：主要讲授药物的一般杂质检查和特殊杂质检查，并介绍固体制剂的含量均匀度检查法和溶出度测定法。

杂质定义：是指药物中存在的无治疗作用或影响疗效，甚至对人体健康有害的物质。

杂质分类：分为一般杂质和特殊杂质一般杂质：指自然界中分布较广，容易引入的杂质，如酸、碱、水分，重金属等。

检查方法：一般在药典附录中。

特殊杂质：在个别药物生产，贮存过程中引入的，如阿司匹林中的水杨酸。

检查方法：一般放在药典的正文中。

杂质检查的意义：药物中含有杂质是影响药物纯度的主要因素，杂质增多，不但可以使药物含量和活性降低，毒副作用增加，而且还可能使药物发生理化常数，外观性状的变化，因此有必要对杂质做检查。

但杂质检查要求不能太高，要求太高，会增加生产成本，同时我们讲要求也不能太低，太低，会影响药物的疗效，影响健康，人就不安全了。

所以杂质检查必须在有利于生产的前提下，不影响疗效，不影响健康，制订恰当的检查项目和限度。

明确应该检查什么？量是多少？药物中的杂质是影响药物纯度的因素，所以我们讲杂质检查，也叫纯度检查。

第二节药物中杂质的来源和杂质限量计算一、药物中杂质的来源1、生产过程中引入A、原料不纯B、有一部分原料没有反应完全C、反应中间产物和副产物在精制时没有除净D、与生产器皿接触均会不同程度地引入杂质例：用水杨酸为原料合成阿司匹林，由于反应不完全，可能引入水杨酸杂质，或者反应中间产物，使用金属器皿，可引入铁、铜、锌等金属杂质。

2、贮存过程中引入药物在贮存过程中受温度、湿度、日光、空气、微生物等外界条件的影响，发生水解、氧化、分解、聚合、并异构化、发霉等变化，产生杂质。

例：阿司匹林水解产生水杨酸维生素C见光→氧化→颜色变黄麻醉用乙醚→日光→氧化→有毒的过氧化物四环素→酸性条件下→发生差向异构化，毒性增高，如梅花K胶囊事件微生物污染→发霉→引起内毒素，如输液反应？上海某厂生产的输液，细菌无处不在。

二、杂质限量药物中只要不对人体有害，不会影响疗效和药物的稳定性，允许有一定量的杂质存在。

一般我们不测定其准确含量（到底有多少量）我们只测定其最大允许量（有没有超过最大允许量）→所以杂质检查，我们也称为限度检查。

杂质限量定义：是指药物中所含杂质的最大允许量，通常用大于、小于或等于百分之几或百万分之几表示，% PPM操作：取一定量待检杂质的纯品或对照品（中国生物制品检定所提供）配成标准溶液，同时取一定量供试品配成供试品溶液，经同样处理后，比较结果。

注意：同样处理是指加同样的溶剂，同样量的溶剂稀释到同一容量等。

杂质限量计算：杂质限量 % = 允许杂质存在的最大限量/供试品的量⨯100% 杂质限量 % = 允许杂质存在的最大限量/供试品量⨯106 供试品中杂质限量=标准溶液体积⨯标准溶液浓度杂质限量用L 表示；体积用V 表示；浓度用C 表示； 则公式为：.%100%V CL Ms =⨯ 或6.%10V CL Ms =⨯（1）药品中杂质限量的计算 L举例 1：检查对乙酰氨基酚中的氯化物，取对乙酰氨基酚2.0g ，加水100ml ，加热溶解，冷却，滤过，取滤液25ml ，依法检查氯化物，所产生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml （每1ml 相当于10ug 的Cl -）制成的对照液比较，不得更浓，问氯化物的限量？6. 5.010/10%100%100%0.01%2.0/100 2.5V C ml ug ml L Ms g ml ml-⨯⨯=⨯=⨯=⨯（2）标准溶液体积的计算 V举例2：检查葡萄糖中的重金属，取葡萄糖4.0g ，加水23ml 溶解，加醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml ，依法检查重金属，含重金属不得超过百万分之无，问应取标准铅溶液（每1ml 含铅10ug ）多少毫升？66.510 4.021010/L S g V ml C g ml--⨯⨯===⨯（3）供试品克数的计算 S举例3：中国药典规定检查砷盐时，应取标准砷溶液2.0ml （每1ml 相当于1ug 的AS ）制备的标准砷斑，今依法检查溴化钠中的砷盐，规定含砷量不得超过0.0004%，问应取供试品多少克？66.110/ 2.00.5410C V g ml ml S g L --⨯⨯===⨯ （4）标准溶液浓度的计算 C举例4：精密称取三氧化二砷0.1320g ，置1000ml 容量瓶中，加NaOH 溶液（1→5）5ml ，溶解，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml ，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，临供试品沉淀 颜色 斑点 . . . 等等比浊法 比色法 大小比较颜色深浅比较用前，精密量取贮备液10.00ml ，置1000ml 量瓶中，加稀硫酸10ml ，用水稀释至刻度，摇匀，即配成标准砷溶液，求砷贮备液的浓度和标准砷溶液的浓度（ug/ml ）？ 讲解：NaOH 溶液（1→5）：NaOH1.0g 加水使成5ml 的溶液。

乙醇-水（1：5）：乙醇和水混合，以1：5体积比混合。

砷贮备液浓度=62320.132010100/1000Asug As O ug ml ml⨯⨯=标准砷溶液的浓度=10100/1/1000ml ug mlug ml ml⨯=要求：复杂计算举例：今取溴化钠0.5g ，检查砷盐，与标准砷溶液2.0ml 制备的标准砷斑比较，不得超过规定限量（0.0004%）。

.0.50.0004%1/2.0L S g C ug ml V ml⨯=== （5）特殊杂质限量计算举例5：取磷酸可待因0.10g ，按中国药典（1995）检查吗啡限量的比色法配成供试品溶液，用无水吗啡2mg ，加盐酸（9→100）配成100ml 标准溶液，取此标准溶液5.0ml ，按同一方法制成对照液检查结果，供试品溶液与对照品溶液比较，不得更深，求磷酸可待因中吗啡的限量是多少？32 5.0.100100%0.10%0.1010mgmlC V ml L S mg⨯==⨯=⨯第三节 一般杂质的检查定义：一般杂质是指在自然界中分布比较广泛，在多种药物的生产或贮存过程中容易引入的杂质。

检查方法：一般在药典的附录中加以规定。

一般杂质的检查项目有：PH 值，溶液的澄清毒，颜色、氯化物、硫酸盐、重金属等……本章主要掌握各杂质检查的方法、原理、反应条件及试验注意点等！！！一、氯化物检查法 1、检查意义氯化物极易引入，虽然微量氯化物对人体无害，但检查氯化物含量，可以考察药品的纯杂程度，也就是说，控制氯化物的量，可以提高或保证药品的纯度，因此，我们认为氯化物是一种“指示性杂质”。

2、检查原理和反应条件方法：黑色背景下，垂直向下观察，比浊讲解：纳氏管（介绍）加硝酸作用：为什么加硝酸，不加盐酸、硫酸或其他酸？1、 可消除SO 32-、CO 32-、PO 43-、C 2O 42-、BO 2- 等杂质离子的干扰；2、 可加速氯化银沉淀的生成；3、 可改善氯化银浑浊的均一性，提高检查准确毒。

在50ml 溶液中以含硝酸10ml 为宜，过多会增大氯化银的溶解度而降低反应灵敏度。

试验注意点：1、 为了控制氯化银见光分解，应在暗处放置5min ；2、 如供试品是碱性，应先中和为中性，再作检查；3、 如供试品中含I -、Br -，应先除去I -、Br -；碘化银沉淀不溶于稀氨水，而氯化银沉淀可溶于稀氨水，然后可用碱恢复，再按常规检查氯化物；Br -离子则可加入H 2O 2，氧化成Br 2，然后蒸除。

4、 如供试品中有KMnO 4，加乙醇脱色后检查； 5、 供试品如有颜色，则采用内消色法如糖浆、中药制剂等二、硫酸盐检查法 1、检查原理白色浑浊试剂：BaCl 2标准溶液：K 2SO 4溶液 酸：HCl ，盐酸检查中所产生的浑浊程度与硫酸盐杂质的含量，硫酸钡微粒大小有关，所以应严格控制试验条件：1、酸度：规定50ml溶液中加入稀盐酸2ml，PH 12、BaCl2浓度：25%BaCl2试液，产生的浑浊度较稳定3、标准K2SO4溶液用量：以1.0~5.0ml为宜，供试品取用量应相匹配4、加入BaCl2试液后，应立即摇匀；5、黑色背景下，从上而下观察。

三、硫化物检查法1、检查原理供试品中的硫化物与稀盐酸在80~90℃作用10min，生成硫化氢气体，与醋酸铅试纸作用生成黑色的硫化铅斑点，称为硫斑。

与标准硫化钠溶液比较，Na2S2、仪器装置D旋塞、E盖子之间有醋酸铅试纸颈长：18CM3、试剂配制醋酸铅试纸制备：取醋酸铅10g →加新煮沸过的冷水溶解→加醋酸溶解→加新沸冷水至100ml →滤纸条浸湿后取出→ 100℃干燥，即得新煮沸冷水：为了防止水中少量的CO2、S2-等。

标准硫化钠溶液制备：Na2S 1g →加水200ml →测定后→稀释每1ml含硫5ug的标准溶液为什么要测定后稀释：因硫化钠易潮解，→所以要测定其实际含量4、检查操作→加水10ml、稀盐酸10ml →迅速装好导气管C →80~90℃水浴10min →比较硫斑颜色注意：试验前导气管应事先装好醋酸铅试纸。

四、硒盐检查法1、检查原理有机药物→有机破坏→硝酸溶液吸收→盐酸羟胺还原（氧瓶燃烧）比较A供〈A标试验注意点：1、有机破坏完全，否则影响试验结果2、显色剂二氨基萘易氧化，以新配制为宜3、PH严格控制在2±0.2以内4、反应时间应为100min5、提取溶剂环己烷量必须一致五、氰化物检查法氰化物有剧毒，所以甲丙氨酯、苯妥英钠等药物应检查氰化物限量检查方法有二种：第一方法：改进普鲁士蓝法仪器装置如硫化物检查装置，不同之处在于将醋酸铅试纸改为碱性硫酸亚铁试纸检查原理：酸为弱酸：酒石酸亚铁氰根取下试纸，加FeCl3+HCl，5min内不显绿色或蓝色普鲁士蓝如：供试品中CN-〉5ug，就会出现绿色或蓝色。

试验注意点：1、反应条件应为弱酸性，一般用酒石酸2、小火加热微沸1min，保证HCN向上挥发3、供试品如能分解产生CN-，则不能使用此法，如硝普钠第二法：气体扩散—三硝基苯酚锂法仪器装置如P39 4-3检查原理：反应在室温下暗处放置过夜O2NOLiNO2NO2ON+NHNO2NC CNOOO异红紫酸锂，在500nm波长处有最大吸收与标准KCN溶液比较试验注意点；1、溶液PH值应为2.45~8.40 →不影响HCN的生成和扩散2、溶液体积应为5ml3、反应温度应为25℃，反应时间应为15小时4、三硝基苯酚锂试液应为1ml，反应完全后，加水2ml稀释5、做空白试验六、铁盐检查法1、检查原理采用硫氰酸盐检查铁盐红色可溶性硫氰酸铁配位化合物标准铁盐溶液：硫酸铁铵FeNH4（SO4）2.12H2O2、反应条件（1）、用稀盐酸调节酸性在中性或碱性溶液中，三价铁离子易发生水解棕色水合羟基铁离子或红棕色氢氧化铁沉淀所以要调节酸性一般：50ml溶液中加稀盐酸4ml为宜注意：调节酸性可以使用其他酸，但不能使用氧化性酸，如HNO3，如果必须使用，则在使用后将硝酸除净。