热原试验_演示文稿
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每日一话题 热原检查法 家兔热原试验
试验目的
将一定剂量的供试液(医疗产品的萃取液)，静
脉注入家兔体内，在规定的时间内观察家兔 体温升高的情况，以判定供试品是否具有潜 在的致热作用。 依据方法： GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器 具检验方法；中国药典2010； ISO 1099312:2005{GB/T16886.12-2005}.
白细胞崩解，释放内源性致热 源原—作用于体温调节中枢— 产热增加、散热减少—体温上 升
实验设备及材料
超净工作台、电热干燥箱、水浴
锅、天平、电子称、肛门体温计 （仪器设备需经国家相关部门检 定）、注射器、三角烧瓶、棉球、 家兔固定架、时钟等等。 所用试剂： 医用生理盐水、 75%乙醇、凡士林。
或0.6℃以上，或3只家兔体温升高 均低于0.6℃，但体温升高的总和达 1.3℃或1.3℃以上，应另取5只家兔 复试，检查方法同上。
结果判断
㈠在初试的3只家兔中，体温升高
均低于0.6℃，并且3只家兔体温升 高总和低于1.3℃；或在复试的5只 家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以 上的家兔不超过1只，并且初试、 复试合并8只家兔的体温升高总和 为3.5℃或3.5℃以下，均判为供试 品的热原检查符合规定。
试验前家兔的准备
（二）
以此两次体温的平均值作为该 兔的正常体温。当日使用的家兔， 正常体温应在38.0~39.6℃的范围内， 且各兔间的正常体温之差不得超过 1℃.
试验前器械的准备
注射器（带针头）及一切与供试品
溶液接触的器皿应是无菌、无热原， 如试管等应采用干热灭菌法置烘箱 中用250℃加热至少30分钟，也可 用其他适宜的方法除去热原。
的状况、试验室条件和操作的规范性。 家兔法检测内毒素的灵敏度为0.001μg/ml,试 验结果接近人体真实情况，但操作繁琐费时， 不能用于注射剂生产过程中的质量监控，且 不适用于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒 性药物制剂。
注意事项
（1）试验室内保持安静，避免强烈直射 阳光、灯光等刺激。 （2）试验过程中避免家兔骚动，保持体 温稳定。 （3）试验室、饲养室温度及其变化应符 合要求。 （4）试验过程中不得随意更换肛门体温 计。
供试液的制备
依据标准：ISO10993：12
（GB/T16886.12） 按0.2g:1ml（样品:生理盐水） 的比例进行萃取，条件为 37±1℃，时间为72±1小时。 萃取液应在2小时内使用完毕。
试验家兔饲养环境
1 在做热原检查前1~2日，供试用家兔
应处于同一温度环境中； 2 实验室和饲养室的温度相差不得大于 3℃，实验室的温度应控制在17~25℃； 3 在试验全部过程中，应注意室温的温 度变化不得大于3℃，防止动物骚动并 避免噪声干扰。
热原试验的应用
热原试验应用于药物及医疗产
品的检测（注射器、输液器、 输血器、引流管、手术器械等 等）
热原概念
热原：引入或释放到机体内后能引起恒
温动物体温异常升高的物质。它包括细 菌性热原、内源性高分子热原、内源性 低分子热原及化学热原等。细菌性热原， 是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内 毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆 菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革 兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚 至病毒也能产生热原。
试验前家兔的准备
（一）家兔在试验前至少1小时开始停止
给食并置于适宜的装置中，直到试验完 毕。应使用精密度为±0.1℃的测温装置 测量家兔体温。测温探头或肛温计插入 肛门的深度和时间各兔应相同，深度一 般约6cm，时间不少于1.5分钟，每隔30 分钟测量体温1次，一般测量2次，两次 体温之差不得超过0.2℃.
结果判断
㈡ 在初试的3只家兔中，体温升高0.6℃
或0.6℃以上的家兔超过1只；或在复试的 5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上 的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只 家兔的体温升高总和超过3.5℃，均判为 供试品的热原检查不符合规定 当家兔体温升高为负值时，均以0℃计。
展望
检查结果的准确性和一致性取决于试验动物
试验家兔的选择
1. 未曾用于热原检查的家兔； 2. 或供试品判定为符合规定，但组内升温达 0.6℃的家兔； 3. 或3周内未使用的家兔，均应在检查供试品 前3~7日内预测体温，进行挑选。挑选试验用 家兔的条件与检查供试品时相同，仅不注射药 液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次 体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最 低相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查 用。
记录表格
试验前体温(℃) 编号 体重 （kg） 1 1 2.0 2 X 1 2 3 4 5 6 试验后体温(℃) 体温上升 (℃)
2
3
2.3
1.8
wk.baidu.com
试验家兔的选择
㈠家兔应健康，雌雄不限，体重
1.7kg以上，雌兔应无孕。预测 体温前7日即应用同一饲料饲养， 在此期间内，体重应不减轻，精 神、食欲、排泄等不得有异常现 象(科学饲养)。
试验家兔的选择
㈡ 用于热原试验后的家兔，如供试品判
定为符合规定，至少应休息48小时方可 再本试验用，其中体温升高0.6 ℃ 以上 的家兔，至少休息两周后以上。如供试 品判定为不符合规定，则组内全部家兔 不再使用。每一家兔的使用次数，用于 一般药品的检查，不应超过10次。
热原引起机体发热机理
外源性致热原多为大分子物质，特别是
细菌内毒素分子量非常大，不能通过血 脑屏障直接作用于体温调节中枢，而是 通过激活血液中的中性粒细胞、嗜酸性 粒细胞和单核一吞噬细胞系统，使其产 生并释放内源性致热原，通过下述机制 引起发热。
热原引起机体发热机理
热原—白细胞(WBC)—吞噬—
试验方法
取适用的家兔3只，测定其正常体温 后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规 定剂量(10ml/kg)并温热至约38℃的供 试品溶液，然后每隔30分钟按前法测 量其体温1次，共测6次，以6次体温 中最高的一次减去正常体温，即为该 兔体温的升高温度。
试验方法
如3只家兔中有1只体温升高了0.6℃
试验目的
将一定剂量的供试液(医疗产品的萃取液)，静
脉注入家兔体内，在规定的时间内观察家兔 体温升高的情况，以判定供试品是否具有潜 在的致热作用。 依据方法： GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器 具检验方法；中国药典2010； ISO 1099312:2005{GB/T16886.12-2005}.
白细胞崩解，释放内源性致热 源原—作用于体温调节中枢— 产热增加、散热减少—体温上 升
实验设备及材料
超净工作台、电热干燥箱、水浴
锅、天平、电子称、肛门体温计 （仪器设备需经国家相关部门检 定）、注射器、三角烧瓶、棉球、 家兔固定架、时钟等等。 所用试剂： 医用生理盐水、 75%乙醇、凡士林。
或0.6℃以上，或3只家兔体温升高 均低于0.6℃，但体温升高的总和达 1.3℃或1.3℃以上，应另取5只家兔 复试，检查方法同上。
结果判断
㈠在初试的3只家兔中，体温升高
均低于0.6℃，并且3只家兔体温升 高总和低于1.3℃；或在复试的5只 家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以 上的家兔不超过1只，并且初试、 复试合并8只家兔的体温升高总和 为3.5℃或3.5℃以下，均判为供试 品的热原检查符合规定。
试验前家兔的准备
（二）
以此两次体温的平均值作为该 兔的正常体温。当日使用的家兔， 正常体温应在38.0~39.6℃的范围内， 且各兔间的正常体温之差不得超过 1℃.
试验前器械的准备
注射器（带针头）及一切与供试品
溶液接触的器皿应是无菌、无热原， 如试管等应采用干热灭菌法置烘箱 中用250℃加热至少30分钟，也可 用其他适宜的方法除去热原。
的状况、试验室条件和操作的规范性。 家兔法检测内毒素的灵敏度为0.001μg/ml,试 验结果接近人体真实情况，但操作繁琐费时， 不能用于注射剂生产过程中的质量监控，且 不适用于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒 性药物制剂。
注意事项
（1）试验室内保持安静，避免强烈直射 阳光、灯光等刺激。 （2）试验过程中避免家兔骚动，保持体 温稳定。 （3）试验室、饲养室温度及其变化应符 合要求。 （4）试验过程中不得随意更换肛门体温 计。
供试液的制备
依据标准：ISO10993：12
（GB/T16886.12） 按0.2g:1ml（样品:生理盐水） 的比例进行萃取，条件为 37±1℃，时间为72±1小时。 萃取液应在2小时内使用完毕。
试验家兔饲养环境
1 在做热原检查前1~2日，供试用家兔
应处于同一温度环境中； 2 实验室和饲养室的温度相差不得大于 3℃，实验室的温度应控制在17~25℃； 3 在试验全部过程中，应注意室温的温 度变化不得大于3℃，防止动物骚动并 避免噪声干扰。
热原试验的应用
热原试验应用于药物及医疗产
品的检测（注射器、输液器、 输血器、引流管、手术器械等 等）
热原概念
热原：引入或释放到机体内后能引起恒
温动物体温异常升高的物质。它包括细 菌性热原、内源性高分子热原、内源性 低分子热原及化学热原等。细菌性热原， 是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内 毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆 菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革 兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚 至病毒也能产生热原。
试验前家兔的准备
（一）家兔在试验前至少1小时开始停止
给食并置于适宜的装置中，直到试验完 毕。应使用精密度为±0.1℃的测温装置 测量家兔体温。测温探头或肛温计插入 肛门的深度和时间各兔应相同，深度一 般约6cm，时间不少于1.5分钟，每隔30 分钟测量体温1次，一般测量2次，两次 体温之差不得超过0.2℃.
结果判断
㈡ 在初试的3只家兔中，体温升高0.6℃
或0.6℃以上的家兔超过1只；或在复试的 5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上 的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只 家兔的体温升高总和超过3.5℃，均判为 供试品的热原检查不符合规定 当家兔体温升高为负值时，均以0℃计。
展望
检查结果的准确性和一致性取决于试验动物
试验家兔的选择
1. 未曾用于热原检查的家兔； 2. 或供试品判定为符合规定，但组内升温达 0.6℃的家兔； 3. 或3周内未使用的家兔，均应在检查供试品 前3~7日内预测体温，进行挑选。挑选试验用 家兔的条件与检查供试品时相同，仅不注射药 液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次 体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最 低相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查 用。
记录表格
试验前体温(℃) 编号 体重 （kg） 1 1 2.0 2 X 1 2 3 4 5 6 试验后体温(℃) 体温上升 (℃)
2
3
2.3
1.8
wk.baidu.com
试验家兔的选择
㈠家兔应健康，雌雄不限，体重
1.7kg以上，雌兔应无孕。预测 体温前7日即应用同一饲料饲养， 在此期间内，体重应不减轻，精 神、食欲、排泄等不得有异常现 象(科学饲养)。
试验家兔的选择
㈡ 用于热原试验后的家兔，如供试品判
定为符合规定，至少应休息48小时方可 再本试验用，其中体温升高0.6 ℃ 以上 的家兔，至少休息两周后以上。如供试 品判定为不符合规定，则组内全部家兔 不再使用。每一家兔的使用次数，用于 一般药品的检查，不应超过10次。
热原引起机体发热机理
外源性致热原多为大分子物质，特别是
细菌内毒素分子量非常大，不能通过血 脑屏障直接作用于体温调节中枢，而是 通过激活血液中的中性粒细胞、嗜酸性 粒细胞和单核一吞噬细胞系统，使其产 生并释放内源性致热原，通过下述机制 引起发热。
热原引起机体发热机理
热原—白细胞(WBC)—吞噬—
试验方法
取适用的家兔3只，测定其正常体温 后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规 定剂量(10ml/kg)并温热至约38℃的供 试品溶液，然后每隔30分钟按前法测 量其体温1次，共测6次，以6次体温 中最高的一次减去正常体温，即为该 兔体温的升高温度。
试验方法
如3只家兔中有1只体温升高了0.6℃