[新版]药物的体外抗菌试验.ppt
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❖ 用于新药的初筛及临床的药敏试验。
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8
❖ 挖沟法： ❖ 1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种
各种试验菌，沟内加入药液。 ❖ 2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟
的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。
❖ 适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 同试验菌的抗菌作用。
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3
抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，在药物除去后微生物又能生长；
杀菌：即能杀死微生物，当药物除去后，微生物也不 能再生长繁殖。
两者并非绝对，只是在一定条件下相对而言。
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常用的体外抑菌试验
琼脂扩散法 滤纸片法
❖
挖沟法
连续稀释法
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5
琼脂扩散法
❖ 原理： 药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药
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联合抗菌试验的常用方法
一、纸条试验（paper stFra Baidu bibliotekip test）
即在已接种实验菌的平板表面垂直放置两条浸有一 种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱 或无影响来判断它们在联合应用时的效应。 图20-2是纸条实验的示意图。
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图20-2是纸条实验的示意图。图中A列的两纸条中只有一条含 有抗菌药物，另一条不含抗菌药物；B列的两纸条均含有抗菌
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抗菌试验的影响因素
❖ 1、试验菌： ❖ 用专门的供应机构提供的标准菌株。 ❖ 北京卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中
心。 ❖ 试验菌应合理保藏，用前加以纯化及生物学
特征鉴定。
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❖ 所用的试验菌株应处于对数生长期，因此期 的微生物对外界因素变化最敏感。
❖ 试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的 接种量成反比关系，故应选用适宜的接种量。
区域。 由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性
不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。
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6
❖ 滤纸片法： ❖ 制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置
于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。
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抗菌试验的影响因素
2、培养基
❖ 抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制，如链球 菌常用含血清的肉汤培养基，抗真菌药物试验需用 沙氏培养基。
❖ 培养基的酸碱度、电解质、还原性物质等均可影响 试验结果，实验时应尽可能排除各种影响实验结果 因素的掺入。
❖ 经无菌检查合格。 精品文库
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抗菌试验的影响因素
药物。
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二、棋盘格法（check board test）
是由于在试验时,含两种不同浓度药物的试管排列呈 棋盘状而得名,用以评价两种药物同时用不同浓度进 行联合试验时的抗菌活性。
实验时排列6排试管，每排6管，共36管使成方块，A 及B药各以液体培养基进行稀释，A药各稀释度纵行 定量加入各管，B药各稀释定量按横排加入，两药 同时作单独抗菌实验对照。然后加入定量菌液，经 培养后观察结果。
❖ 凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。
❖ 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最
小杀菌浓度（Minimal bactericidal
concentration，MBC）。
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液体连续稀释法
23
❖ 在实际工作中，往往可见到体外实验有 作用的药物，进入机体后由于各种原因而失 效，有的药物毒性很大也不能用于临床。
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3、抗菌药物 ❖ 药物的浓度、pH及含有的其他成分均可
影响试验结果，特别是中草药制剂往往含有 色素、杂质和鞣质等，这些均可造成错误结 果，应加注意。
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抗菌试验的影响因素
4、对照试验： ❖ 为精确判断实验结果，试验时应设各种对
照，包括试验菌对照、已知药物对照及溶剂 和稀释液对照等。
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10
❖ 琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不 高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一 般能用于定性或初步判断其作用的强弱。
❖ 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用 定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较 普遍 。
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连续稀释法
❖ 可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和 最低杀菌浓度（MBC）。可以用液体培养基， 也可用固体培养基。
❖ 1、在一系列的试管中用液体培养基将试验药 物作连续对倍稀释，使药物的浓度沿试管顺 序成倍递减。
❖ 2、再于各管中加入等量的实验菌，经 16～ 24 h培养后，与阴性及阳性对照管进行对照 观察。
❖ 3、将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂 平皿。如培养后重新长出试验菌，说明该药 仅有抑菌作用。如无菌生长则可以认为该药 物有杀菌作用。
微生物与药学的关系
❖ 1.某些微生物可以生产药物（微生物制药） ❖ 2.微生物可能会污染药品（药物的微生物检查） ❖ 3.某药物有能抑菌或是杀菌（药物的抗菌试验）
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1
药物的体外抗菌 试验
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2
药物的体外抗菌试验
❖ 用途： ❖ 抗菌药物的筛选、药物的抗菌谱测定及
临床药物敏感性试验等方面。
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联合抗菌试验
在药学中，常需要检查两种抗菌药物在联合应用时的
相互作用以及抗菌药物与不同PH值或不同离子溶液 的相互影响。
加强药物抗菌作用的为协同（synergism）； 减弱药物作用的为拮抗（antagonism）； 互相无影响的为无关（indifference）；
作用二者之和为累加（addition）。
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❖ 挖沟法： ❖ 1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种
各种试验菌，沟内加入药液。 ❖ 2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟
的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。
❖ 适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 同试验菌的抗菌作用。
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抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，在药物除去后微生物又能生长；
杀菌：即能杀死微生物，当药物除去后，微生物也不 能再生长繁殖。
两者并非绝对，只是在一定条件下相对而言。
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常用的体外抑菌试验
琼脂扩散法 滤纸片法
❖
挖沟法
连续稀释法
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琼脂扩散法
❖ 原理： 药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药
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联合抗菌试验的常用方法
一、纸条试验（paper stFra Baidu bibliotekip test）
即在已接种实验菌的平板表面垂直放置两条浸有一 种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱 或无影响来判断它们在联合应用时的效应。 图20-2是纸条实验的示意图。
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图20-2是纸条实验的示意图。图中A列的两纸条中只有一条含 有抗菌药物，另一条不含抗菌药物；B列的两纸条均含有抗菌
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抗菌试验的影响因素
❖ 1、试验菌： ❖ 用专门的供应机构提供的标准菌株。 ❖ 北京卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中
心。 ❖ 试验菌应合理保藏，用前加以纯化及生物学
特征鉴定。
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❖ 所用的试验菌株应处于对数生长期，因此期 的微生物对外界因素变化最敏感。
❖ 试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的 接种量成反比关系，故应选用适宜的接种量。
区域。 由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性
不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。
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❖ 滤纸片法： ❖ 制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置
于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。
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抗菌试验的影响因素
2、培养基
❖ 抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制，如链球 菌常用含血清的肉汤培养基，抗真菌药物试验需用 沙氏培养基。
❖ 培养基的酸碱度、电解质、还原性物质等均可影响 试验结果，实验时应尽可能排除各种影响实验结果 因素的掺入。
❖ 经无菌检查合格。 精品文库
21
抗菌试验的影响因素
药物。
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二、棋盘格法（check board test）
是由于在试验时,含两种不同浓度药物的试管排列呈 棋盘状而得名,用以评价两种药物同时用不同浓度进 行联合试验时的抗菌活性。
实验时排列6排试管，每排6管，共36管使成方块，A 及B药各以液体培养基进行稀释，A药各稀释度纵行 定量加入各管，B药各稀释定量按横排加入，两药 同时作单独抗菌实验对照。然后加入定量菌液，经 培养后观察结果。
❖ 凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。
❖ 以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最
小杀菌浓度（Minimal bactericidal
concentration，MBC）。
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液体连续稀释法
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❖ 在实际工作中，往往可见到体外实验有 作用的药物，进入机体后由于各种原因而失 效，有的药物毒性很大也不能用于临床。
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3、抗菌药物 ❖ 药物的浓度、pH及含有的其他成分均可
影响试验结果，特别是中草药制剂往往含有 色素、杂质和鞣质等，这些均可造成错误结 果，应加注意。
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抗菌试验的影响因素
4、对照试验： ❖ 为精确判断实验结果，试验时应设各种对
照，包括试验菌对照、已知药物对照及溶剂 和稀释液对照等。
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❖ 琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不 高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一 般能用于定性或初步判断其作用的强弱。
❖ 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用 定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较 普遍 。
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连续稀释法
❖ 可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和 最低杀菌浓度（MBC）。可以用液体培养基， 也可用固体培养基。
❖ 1、在一系列的试管中用液体培养基将试验药 物作连续对倍稀释，使药物的浓度沿试管顺 序成倍递减。
❖ 2、再于各管中加入等量的实验菌，经 16～ 24 h培养后，与阴性及阳性对照管进行对照 观察。
❖ 3、将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂 平皿。如培养后重新长出试验菌，说明该药 仅有抑菌作用。如无菌生长则可以认为该药 物有杀菌作用。
微生物与药学的关系
❖ 1.某些微生物可以生产药物（微生物制药） ❖ 2.微生物可能会污染药品（药物的微生物检查） ❖ 3.某药物有能抑菌或是杀菌（药物的抗菌试验）
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1
药物的体外抗菌 试验
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药物的体外抗菌试验
❖ 用途： ❖ 抗菌药物的筛选、药物的抗菌谱测定及
临床药物敏感性试验等方面。
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联合抗菌试验
在药学中，常需要检查两种抗菌药物在联合应用时的
相互作用以及抗菌药物与不同PH值或不同离子溶液 的相互影响。
加强药物抗菌作用的为协同（synergism）； 减弱药物作用的为拮抗（antagonism）； 互相无影响的为无关（indifference）；
作用二者之和为累加（addition）。