酶底物法系统

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菌落总数酶底物法

菌落总数酶底物法

菌落总数酶底物法菌落总数酶底物法是一种常用的微生物检测方法,广泛应用于食品、医药、化妆品等领域。

它通过检测样品中的微生物总数,评估样品的卫生质量和安全性。

简介菌落总数酶底物法是一种基于生物化学反应的检测方法,其原理基于菌落总数反映了样品中微生物的数量和活性。

该方法采用适当的培养基和菌落计数方法,将样品中的微生物培养出来,然后通过加入一种酶底物来产生测定所需的信号。

酶底物在水解反应中会产生发光、吸收或荧光等信号,从而实现对微生物总数的检测。

优点菌落总数酶底物法具有以下优点:1. 灵敏度高:该方法可以检测到微生物数量低至10 CFU/mL。

2. 精准度高:该方法可以精确地评估样品中微生物总数,避免了传统菌落计数方法的不足之处。

3. 操作简便:该方法操作简便,无需专业技能支持,适用于现场检测。

4. 时间短:该方法可以在较短的时间内完成检测,通常不超过245. 可靠性高:该方法经过多次验证,具有高度的可靠性和重复性。

应用菌落总数酶底物法广泛应用于以下领域:1. 食品安全:该方法可用于检测食品中的微生物总数,评估食品的卫生质量和安全性。

2. 医药行业:该方法可用于检测药品和医疗器械中的微生物总数,评估其卫生质量和安全性。

3. 化妆品行业:该方法可用于检测化妆品中的微生物总数,评估其卫生质量和安全性。

4. 环境监测:该方法可用于监测水、空气等环境中的微生物总数,评估环境的卫生质量。

总结菌落总数酶底物法是一种快速、可靠、灵敏的微生物检测方法,具有广泛的应用前景。

在实际应用中,需要根据不同样品的特点选择合适的培养基和菌落计数方法,以保证检测结果的准确性和可靠性。

同时,还需要严格遵守相关规定和标准,以确保样品的卫生质量和。

固定底物技术酶底物法技术参数

固定底物技术酶底物法技术参数

微生物固定底物技术酶底物法测定仪原理:科立得--DST酶底物法是可在24小时内快速定量和定性检测“总大肠菌群及大肠埃希氏菌及粪大肠菌群”,其原理是利用了MMO-MUG特异性培养基的呈色和荧光反应,该方法比传统的滤膜法和多管法的假阳性和假阴性发生率更低,培养时间更短。

技术特点:1、DST酶底物法试剂完全符合《生活饮用水标准检验方法》的MMO-MUG 培养基,采用固定底物技术(DST)酶底物法,Snap包装。

200个/包。

能够精确检出100ml水样中单个的活性总大肠菌群和大肠埃希氏菌,以及粪大肠菌群,假阴性率低。

每个单位试剂可抑制200万个异养细菌,假阳性率低。

能够消除传统方法中的主观判断影响,准确性高于滤膜法及多管发酵法。

2006年被列入到《生活饮用水标准检验方法》(GB/T5750.12-2006),是国标认可的MMO-MUG培养基;经美国环保署的认可作为24 小时检验出厂水与源水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群(粪大肠菌群)的方法;通过水与废水检验的标准方法分析化学工作者协会(AOAC) 、国际瓶装水协会(IBWA) 及欧洲瓶装水协会(EBWA)认证;中国、美国、加拿大、英国、德国、法国、日本、韩国、阿根廷、巴西、澳大利亚、新西兰、南非等50多国家及地区的饮用水,地表水,污水等检验标准。

年全球使用量超过数千万次,美国90%以上的实验室使用科立得试剂。

2、定量盘Quanti-tray或Quanti-tray 2000定量盘Quanti-tray(51孔定量盘),有50个标准孔格,1个大孔格。

无须稀释可检测200MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群Quanti-tray2000(97孔定量盘),有48个标准孔格,1个大孔格和48个小孔格,无须稀释可检测2419MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群3、无菌取样瓶含10%硫代硫酸钠10ml的无菌取样瓶,可定量100ml水样4、2009D程控定量封口机与符合《生活饮用水标准检验方法》固定底物技术(DST)酶底物法的MMO-MUG培养基配套使用的2009D程控定量封口机。

酶底物法科立得产品培训39页PPT

酶底物法科立得产品培训39页PPT
水中微生物检测(新国标方法)
• 总大肠菌群/大肠埃希氏菌,耐热大肠菌群
固定底物技术酶底物法介绍
1
总大肠菌群 / 大肠埃希氏菌 及耐热(粪)大肠菌群
固定底物技术酶底物法
2
微生物检测的重要性
地震等自然灾害过后水体中会被大量微生物所污染,特别是粪 便污染,如水体中含有肠道病原菌株,并被人饮用则会爆发严 重疾病如泌尿系感染、菌血症和脑膜炎,少数肠道病原菌株可 引起急性腹泻。 通常人们用投放含氯消毒剂进行消毒,但消毒效果如何还需要 通过检测水体中是否含有总大肠菌群和大肠埃希氏菌来判断。
3, 优点
• 假阳性,假阴性底 • 操作简单,快速 • 定性,定量(51孔/97孔定量盘法) • 50多个国家和组织认证
世界卫生组织WHO,美国EPA,水与废水标准检验法…….
14
科立得 应用
➢ 饮用水 ➢ 源水 ➢ 瓶装水 ➢ 再生水
➢ 废水 ➢ 食品水 ➢ 畜牧用水
➢ 医疗用水
收录于“标准测试法”内 – APHA(美国公共卫生协会), US EPA,
12
β-葡萄糖醛酸酶
酶底物法大肠埃希氏菌 阳性反应原理
4-甲基-伞形葡萄糖苷酸
13
《生活饮用水标准检验方法》对酶底物法定义
1, 方法
本标准方法采用固定底物技术酶底物法 Defined Substrate Technology, DST
2,培养基:
采用Minimal Medium ONPG-MUG,简称 MMO-MUG培养基
粪(耐热)大肠菌群
➢菌落总数:1ml; ➢大肠菌100ml
➢细菌总数1ml, ➢总大肠菌群/耐 热大肠菌群 :100ml
➢1L

GB/T 14848-93地下水质量标准 GB 9667-2019,游泳场所卫生标 准

水中固定底物技术大肠菌群酶底物法检测系统

水中固定底物技术大肠菌群酶底物法检测系统

水中固定底物技术大肠菌群酶底物法检测系统一、产品技术参数1.程控定量封口机用于水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌,耐热大肠菌群,肠球菌的检测。

封口速度:51孔/97孔定量检测盘封口时间≤15秒/个预热时间:≤30min工作环境温度:-10℃—50℃工作电压:AC 220V±10%,50Hz无漏液,无破孔,符合水质大肠菌群酶底物法检测系统生产和销售的质量管理体系文件ISO9001,并要求在中国国家认证认可管理监督委员会中可以查找出。

2.手持式紫外分析仪带暗室(灯箱)带254,366nm双波长,可手持使用,与暗箱配套方便观察大肠埃希氏菌检测荧光,通过观察孔来判断是否显荧光。

3.酶底物法检测试剂为完全符合《生活饮用水标准检验方法》的培养基,包装上有可视窗口,便于观察试剂的物理性状判读在保质期内是否能正常使用,有切割口,便于打开而不会有粉末喷溅,每个试剂上有批号,到期时间,在有效使用期内具有可靠的稳定性。

4. 定量检测盘无漏液,无破孔。

封好的孔格能够耐受一定的压力,不会由于定量盘叠加受力造成孔与孔之间的串连以及破损。

51孔定量检测盘无须稀释可检测200MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群,97孔定量检测盘无须稀释可检测2419MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群,具有微生物定量检测盘的证明文件。

5. 100ml无菌定量瓶/取样瓶内含硫代硫酸钠,可中和水中余氯,可定量100ml水样,溶解酶底物检测试剂。

瓶体通透性好,可判读阳性结果。

6. 51孔橡胶垫及97孔橡胶垫定量检测盘封口时底托。

7. 阳性标准比色盘每个阳性标准比色盘上都有到期日期、批号,有符合ISO9001质量合格体系的合格证书,用于辨别阳性结果,可以指示颜色变化或荧光变化的最低限。

8. 51孔及97孔定量盘MPN表可根据定量检测盘阳性孔格数来查询总大肠菌群和大肠埃希氏菌,耐热大肠菌群MPN值,且有95%置信区间。

酶法分析的基本原理和应用

酶法分析的基本原理和应用

酶法分析的基本原理和应用1. 概述酶法分析是一种常用的生化分析方法,利用酶在特定条件下对物质的特异性催化作用进行定量测定。

它具有高灵敏度、高选择性和实时监测等优点,因此在医学、食品安全、环境监测等领域得到广泛的应用。

2. 基本原理酶法分析的基本原理是利用酶催化底物与受体结合生成产物的特性,通过测量产物的数量来间接测定样品中目标物质的含量。

其原理主要包括以下几个方面:2.1 酶的选择性不同酶对底物的特异性结合和催化能力不同,可以选择与目标物质发生特异性反应的酶作为分析方法的基础。

例如,葡萄糖氧化酶可以催化葡萄糖的氧化反应,可以用于测定葡萄糖的含量。

2.2 底物与酶的反应底物与酶结合后形成底物-酶复合物,酶催化底物发生特定的反应,生成产物。

产物的数量与底物的浓度成正比关系,可以通过测定产物的数量来间接测定底物的含量。

2.3 受体结合和信号转导酶催化底物生成产物后,产物会与受体结合,触发一系列的信号转导过程。

这些信号转导过程可以通过荧光、吸光度、电化学或其他方法进行检测和定量。

3. 应用领域酶法分析具有广泛的应用领域,以下是几个常见的应用领域:3.1 医学诊断酶法分析在医学诊断中起到关键的作用。

例如,测定血清中的肝功能指标酶(如谷丙转氨酶)可以评估肝功能的健康状况;测定血液中特定酶的活性可以用于早期诊断某些疾病。

3.2 食品安全酶法分析可以用于食品安全领域,检测食品中的重金属、农药残留、催化剂等有害物质的含量。

例如,测定牛奶中的抗生素残留可以保障食品的安全。

3.3 环境监测酶法分析可应用于环境监测,检测水体中的污染物、土壤中的重金属、空气中的有害气体等。

通过测定目标分子的含量,可以评估环境的污染程度。

3.4 生物工程酶法分析在生物工程中也有广泛的应用。

例如,测定酶的活性可以用于评估工程菌株的合成能力,优化反应条件,提高产物的产量和纯度。

4. 优缺点酶法分析作为一种生化分析方法,具有以下优点:•高灵敏度和高选择性,可以进行低浓度目标物质的检测。

水质中微生物菌落总数酶底物法测定

水质中微生物菌落总数酶底物法测定

水质中微生物菌落总数酶底物法测定水质中微生物菌落总数的测定是评价水质指标的重要方法之一。

酶底物法是一种常用的测定方法,其原理是利用底物和微生物酶的反应产生的颜色或者光点来间接评估微生物菌落的数量。

本文将从实验原理、实验步骤和实验注意事项三个方面对酶底物法的测定方法进行详细介绍。

一、实验原理酶底物法测定水质中微生物菌落总数依赖于微生物菌落中的酶活性。

常用的酶包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、β-D-半乳糖苷酶等。

这些酶能够与底物反应产生颜色或产生显色物质,利用这些反应可以评估菌落数量。

二、实验步骤1.准备样品采集待测水样,并将其过滤,去除大颗粒杂质。

然后取一定体积的过滤液,通常为10 mL,作为实验样品。

2.酶底物添加将准备好的样品加入培养基中,然后添加相应的酶底物。

根据不同的酶选择相应的底物。

3.温育反应将培养基和底物混合均匀后,将培养皿孵育在适宜的温度下,通常为37摄氏度。

菌落中的酶与底物在一定时间内发生反应。

4.菌落计数在菌落与底物反应完成后,可以通过目视法或使用显微镜来对菌落进行计数。

三、实验注意事项1.样品的采集应当遵循卫生要求,避免外界污染。

2.过滤液的准备需要注意滤纸的选择,可以选择孔径较小的滤纸来去除大颗粒杂质。

3.酶底物的选择应根据微生物酶的特性进行合理选择,确保酶和底物之间有充分的反应。

4.温育反应的时间和温度需要根据菌落的特点进行调整,防止温度过高造成菌落损失。

5.菌落的计数需要有一定的经验和技巧,可以使用显微镜来提高计数的准确性。

总之,酶底物法是一种简单可行的测定水质中微生物菌落总数的方法。

通过选择合适的酶和底物,结合适当的温育条件,可以快速准确地评估水质中微生物菌落的数量。

在实际应用中,我们需要根据具体情况合理选择方法和参数,以获得准确可靠的测定结果。

酶底物法系统

酶底物法系统

西安立科环保科技有限公司水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍一、检测用途:酶底物法测定用途:用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群(耐热大肠菌群)和大肠埃希氏菌。

可用于检测水的类型:饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理:酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂,这两种试剂分别可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的β-葡糖醛酸酶分解代谢。

当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时,其使用β-半乳糖苷酶分解代谢ONPG,并使样品从无色变为黄色。

大肠杆菌使用β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时,能够发出荧光。

三、优势特点:酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法,酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法,目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场,以其方便快捷,假阳性低,适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法,酶底物法检测步骤大大减少,而且对实验环境要求不高,检测时间可减少到24小时,在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景,可及时检测,预防,最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。

以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例,比较三种方法,如表所示。

表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计方法优势:1.无需在无菌室内操作。

2.手工操作时间小于1分钟。

3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。

4.24小时即可完成定性定量分析,无需验证试验。

已经列入1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。

产品特点:1.colitech酶底物法检测试剂,LK定量检测盘/定量孔板,LK定量瓶出厂前均已灭菌,客户可以直接放心使用。

2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基,假阳性和假阴性均优于传统方法。

固定底物技术酶底物法 技术参数

固定底物技术酶底物法 技术参数

微生物固定底物技术酶底物法测定仪原理:科立得--DST酶底物法是可在24小时内快速定量和定性检测“总大肠菌群及大肠埃希氏菌及粪大肠菌群”,其原理是利用了MMO-MUG特异性培养基的呈色和荧光反应,该方法比传统的滤膜法和多管法的假阳性和假阴性发生率更低,培养时间更短。

技术特点:1、DST酶底物法试剂完全符合《生活饮用水标准检验方法》的MMO-MUG 培养基,采用固定底物技术(DST)酶底物法,Snap包装。

200个/包。

能够精确检出100ml水样中单个的活性总大肠菌群和大肠埃希氏菌,以及粪大肠菌群,假阴性率低。

每个单位试剂可抑制200万个异养细菌,假阳性率低。

能够消除传统方法中的主观判断影响,准确性高于滤膜法及多管发酵法。

2006年被列入到《生活饮用水标准检验方法》(GB/T5750.12-2006),是国标认可的MMO-MUG培养基;经美国环保署的认可作为24 小时检验出厂水与源水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群(粪大肠菌群)的方法;通过水与废水检验的标准方法分析化学工作者协会 (AOAC) 、国际瓶装水协会 (IBWA) 及欧洲瓶装水协会 (EBWA)认证;中国、美国、加拿大、英国、德国、法国、日本、韩国、阿根廷、巴西、澳大利亚、新西兰、南非等50多国家及地区的饮用水,地表水,污水等检验标准。

年全球使用量超过数千万次,美国90%以上的实验室使用科立得试剂。

2、定量盘Quanti-tray或Quanti-tray 2000定量盘Quanti-tray(51孔定量盘),有50个标准孔格,1个大孔格。

无须稀释可检测200MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群Quanti-tray2000(97孔定量盘),有48个标准孔格,1个大孔格和48个小孔格,无须稀释可检测2419MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群3、无菌取样瓶含10%硫代硫酸钠10ml的无菌取样瓶,可定量100ml水样4、2009D程控定量封口机与符合《生活饮用水标准检验方法》固定底物技术(DST)酶底物法的MMO-MUG培养基配套使用的2009D程控定量封口机。

酶催化反应机制探索底物识别和催化步骤解析

酶催化反应机制探索底物识别和催化步骤解析

酶催化反应机制探索底物识别和催化步骤解析酶催化反应是生命体内许多生化过程中不可或缺的部分。

在这些反应中,酶作为催化剂,通过调控底物的结构和活性,促进化学反应的进行。

底物识别和催化步骤是酶催化反应中的两个关键步骤,对于揭示酶的催化机制具有重要意义。

底物识别是酶催化反应的第一步,也是决定催化效率和特异性的关键因素。

酶能够识别和结合特定的底物分子,其方法主要包括亲和性和特异性。

首先,通过亲和性,酶与底物相互吸引并形成酶底物复合物。

这种亲和性主要是由酶的活性位点与底物分子之间的非共价键相互作用所决定的。

例如,氢键、离子相互作用和疏水相互作用等。

酶活性位点的结构和化学性质决定了底物的结合方式和强度。

其次,通过特异性,酶能够选择性地识别和结合特定的底物,使得酶催化反应具有高度的专一性。

底物识别不仅涉及到酶与底物的结合,还与底物的结构和构象密切相关。

酶通过底物结构的识别,决定其催化活性的发挥和反应路径的选择。

酶识别底物的原则主要包括键合性、空间构相和对过渡态的稳定。

酶可以针对底物中的特定官能团或基团进行识别和结合,从而促进催化反应的进行。

例如,某些酶可以通过识别底物的特定氨基酸序列和立体结构,选择性地催化这些底物的转化。

底物识别后,酶接下来进入到催化步骤。

酶催化步骤的解析是揭示酶催化机制的关键。

催化步骤大多涉及酶与底物之间的化学反应,如酸碱催化、亲核加成、氧化还原、配位等。

酶通过调整底物的电荷状态、构象和键能状态,使得底物的转化能垒降低,反应速率加快。

催化步骤涉及到酶-底物相互作用、中间态的形成和解离等过程。

酶催化反应的速率不仅取决于酶与底物的结合能力,还取决于酶-底物复合物形成后的过渡态状态和催化步骤的速率常数。

酶催化反应的机制不仅与酶的结构有关,还与催化反应涉及到的酶辅因子和辅助物质相关。

酶辅因子是必要的辅助物质,它可以与酶和底物共同参与反应,从而改变催化反应的速率和选择性。

酶辅因子的种类很多,包括金属离子、辅酶和辅基等。

粪大肠菌群酶底物法

粪大肠菌群酶底物法

粪大肠菌群酶底物法
粪大肠菌群酶底物法是一种通过检测粪便中大肠菌群的酶活性来评估肠道菌群组成和功能的方法。

粪便中的大肠菌群是肠道中常见的一类细菌群落,对肠道的健康和功能有重要的影响。

大肠菌群酶底物法通过添加特定的底物到粪便样品中,检测粪便中的大肠菌群所产生的酶活性。

常用的底物包括羧甲基纤维素(CMC)、乳糖、氨苯酚、硫酸盐等。

通过测定底物在一定时间内被粪菌酶水解的程度来评估粪便中大肠菌群的酶活性。

酶活性水平可以反映大肠菌群的代谢活性和功能状态。

例如,乳糖酶底物法可以评估粪便中乳糖酶的活性,从而判断乳糖不耐受或乳糖酶缺乏的情况。

粪大肠菌群酶底物法可以用于研究肠道菌群的结构和功能的变化,如肠道菌群的失调、肠炎、肠道感染等情况。

它可以为评估肠道健康和指导肠道疾病的治疗提供参考。

固定底物技术酶底物法技术参数

固定底物技术酶底物法技术参数

固定底物技术酶底物法技术参数微⽣物固定底物技术酶底物法测定仪原理:科⽴得--DST酶底物法是可在24⼩时内快速定量和定性检测“总⼤肠菌群及⼤肠埃希⽒菌及粪⼤肠菌群”,其原理是利⽤了MMO-MUG特异性培养基的呈⾊和荧光反应,该⽅法⽐传统的滤膜法和多管法的假阳性和假阴性发⽣率更低,培养时间更短。

技术特点:1、DST酶底物法试剂完全符合《⽣活饮⽤⽔标准检验⽅法》的MMO-MUG 培养基,采⽤固定底物技术(DST)酶底物法,Snap包装。

200个/包。

能够精确检出100ml⽔样中单个的活性总⼤肠菌群和⼤肠埃希⽒菌,以及粪⼤肠菌群,假阴性率低。

每个单位试剂可抑制200万个异养细菌,假阳性率低。

能够消除传统⽅法中的主观判断影响,准确性⾼于滤膜法及多管发酵法。

2006年被列⼊到《⽣活饮⽤⽔标准检验⽅法》(GB/T5750.12-2006),是国标认可的MMO-MUG培养基;经美国环保署的认可作为24 ⼩时检验出⼚⽔与源⽔中总⼤肠菌群和⼤肠埃希⽒菌或耐热⼤肠菌群(粪⼤肠菌群)的⽅法;通过⽔与废⽔检验的标准⽅法分析化学⼯作者协会 (AOAC) 、国际瓶装⽔协会 (IBWA) 及欧洲瓶装⽔协会 (EBWA)认证;中国、美国、加拿⼤、英国、德国、法国、⽇本、韩国、阿根廷、巴西、澳⼤利亚、新西兰、南⾮等50多国家及地区的饮⽤⽔,地表⽔,污⽔等检验标准。

年全球使⽤量超过数千万次,美国90%以上的实验室使⽤科⽴得试剂。

2、定量盘Quanti-tray或Quanti-tray 2000定量盘Quanti-tray(51孔定量盘),有50个标准孔格,1个⼤孔格。

⽆须稀释可检测200MPN/100ml总⼤肠菌群和⼤肠埃希⽒菌或粪⼤肠菌群Quanti-tray2000(97孔定量盘),有48个标准孔格,1个⼤孔格和48个⼩孔格,⽆须稀释可检测2419MPN/100ml总⼤肠菌群和⼤肠埃希⽒菌或粪⼤肠菌群3、⽆菌取样瓶含10%硫代硫酸钠10ml的⽆菌取样瓶,可定量100ml⽔样4、2009D程控定量封⼝机与符合《⽣活饮⽤⽔标准检验⽅法》固定底物技术(DST)酶底物法的MMO-MUG培养基配套使⽤的2009D程控定量封⼝机。

军团菌酶底物法操作规程

军团菌酶底物法操作规程

军团菌酶底物法操作规程军团菌酶底物法(Legionella Enzyme Substrate Method)是一种用于检测军团菌的方法,其原理是利用军团菌分泌的特定酶(比如磷酸酶)对某个底物的特异性作用,通过观察底物的颜色变化来判断样品中是否存在军团菌。

下面是军团菌酶底物法的操作规程。

1. 材料准备- 军团菌培养基:准备适当浓度的军团菌培养基,含有可溶性底物。

- 冷藏保存的军团菌引种:保证引种活性。

2. 样品准备- 收集待测样品:收集需要检测的水样、环境样品等。

- 制备样品悬浮液:将样品加入适量的无菌的缓冲液中(比如PBS),摇匀使样品均匀分散。

3. 样品处理- 选择合适的稀释度:根据样品特性,选择适当的稀释度,保证样品在检测范围内。

- 稀释样品:根据选择的稀释度,将样品稀释到适当浓度。

4. 反应体系制备- 准备阴性对照:取等体积的培养基作为阴性对照。

- 准备阳性对照:取军团菌培养基,加入适量的军团菌引种悬浮液,调整浓度。

根据需要,可选择不同菌株的阳性对照。

- 准备试验样品:取一定体积的稀释后的样品悬浮液。

5. 反应体系操作- 预热培养基:将培养基置于37摄氏度的恒温水浴中预热。

- 加入反应物:依次向培养基中加入适量的阴性对照、阳性对照和试验样品。

确保加入的量与反应基于军团菌培养量之间成一定的比例。

6. 反应体系孵育- 孵育温度:将反应体系置于37摄氏度的恒温箱中孵育。

- 孵育时间:根据实验要求以及样品的特性,确定孵育时间。

一般来说,24小时后可以观察到反应的结果。

需要注意的是,不同的底物可能需要不同的孵育时间。

7. 结果判断- 结果观察:观察培养基中的底物是否发生颜色变化。

阳性样品将呈现颜色变化,而阴性对照则不会有明显变化。

- 结果判定:根据颜色变化和阳性对照的对比,判断样品中是否存在军团菌。

8. 结果记录和解读- 记录观察结果:将观察到的结果记录下来,包括样品和对照的颜色变化情况。

- 结果解读:根据颜色变化对样品进行解读,如阳性、阴性或可疑。

p450酶探针底物法

p450酶探针底物法

p450酶探针底物法P450酶是一类重要的酶系统,广泛存在于生物体内,特别是动物和植物的肝脏和肾脏中。

它们对于多种生物化学反应的催化作用具有关键性的调控作用,包括维生素和荷尔蒙合成、药物代谢和毒物清除等。

为了更好地了解P450酶的活性和底物特异性,科学家们开发了一种被称为P450酶探针底物法的研究方法。

一、P450酶的特点P450酶是一类催化酶,其催化作用需要辅助因子——还原对活化酶,如辅助蛋白NADPH还原酶和膜上的磷酸己糖异构酶等。

P450酶通过与底物发生氧化反应,将底物转化为一系列的代谢产物。

酶的活性及酶底物结合的特异性是研究P450酶的关键。

二、P450酶底物法的原理P450酶底物法是一种常用的研究P450酶活性和特异性的方法。

在P450酶底物法中,研究人员会合成一系列底物化合物,并通过与P450酶反应来评估酶的催化效率和底物特异性。

这些底物化合物通常是结构相似但不同的化合物,研究人员通过改变不同的官能团,来研究酶的底物结合位点和反应活性。

三、P450酶底物法的应用1. 研究酶的催化机制:通过合成一系列底物化合物并测试与P450酶的反应,可以揭示酶的催化机制和底物结合位点。

2. 评估药物代谢:P450酶是药物代谢的重要调控因子,通过P450酶底物法可以评估特定药物和酶的相互作用,预测药物代谢率和代谢产物。

3. 研究毒物代谢:P450酶也参与毒物的代谢和解毒过程,使用P450酶底物法可以研究毒物代谢途径和产物。

4. 探索新药开发:通过P450酶底物法,可以筛选和评估候选化合物在P450酶中的代谢活性和稳定性,帮助开发新药。

5. 鉴定环境污染物:P450酶在生物体对环境污染物的降解中扮演重要角色,P450酶底物法可以用于鉴定和评估环境污染物的毒性和降解效率。

四、P450酶底物法的实验步骤1. 合成底物化合物:根据研究目的设计和合成一系列底物化合物,选择合适的官能团和结构修饰。

2. 验证底物结合位点:利用蛋白质结晶学等方法,确定底物与P450酶的结合位点。

p450酶探针底物法

p450酶探针底物法

P450酶探针底物法的原理与应用简介 P450酶是一类重要的氧化酶,广泛存在于许多生物体中,包括植物、动物和微生物。

P450酶能够催化多种化学反应,如氧化、脱氢、脱酶和羟化等。

因此,P450酶在生物转化、药物代谢和毒物清除等领域具有重要的应用价值。

为了研究P450酶的催化机制和筛选潜在的抑制剂或激动剂,科学家们发展了一种称为P450酶探针底物法的技术。

P450酶探针底物法的原理 P450酶探针底物法是一种用于研究P450酶催化活性的方法。

其基本原理是利用P450酶对底物的选择性催化反应,通过量化产物的生成来评估酶活性。

这种方法通常使用氧化底物反应作为P450酶的底物,通过测定底物转化产物的浓度来评估酶的活性。

实验步骤 1. 溶解P450酶底物和辅因子:将P450酶底物和辅因子溶解于合适的缓冲溶液中,以形成酶反应体系。

2. 加入P450酶:将预先制备的P450酶加入酶反应体系中,并进行酶反应。

3. 反应停止和样品处理:通过添加适当的试剂停止酶反应,并对反应体系进行处理,以去除未反应的底物和其他杂质。

4. 产物测定:使用高效液相色谱或其他适当的技术测定底物转化产物的浓度。

应用领域 P450酶探针底物法在许多领域有着广泛的应用,其中包括: 1. 药物代谢研究:通过使用不同的底物,可以评估P450酶对药物的催化活性,帮助研究人员了解药物在体内的代谢途径和代谢产物的生成情况。

2. 毒物学研究:通过评估P450酶对毒物的催化活性,可以了解毒物的代谢途径和毒性产物的生成情况,从而帮助评估毒物的毒性程度。

3. 新药筛选与开发:通过评估P450酶对候选药物的催化活性,可以预测药物在体内的代谢情况和可能的代谢产物,帮助筛选和开发更安全有效的药物。

4. 环境污染物研究:通过评估P450酶对环境污染物的催化活性,可以了解其在生物体内的代谢过程和降解途径,为环境保护和污染治理提供科学依据。

总结 P450酶探针底物法是一种重要的研究P450酶催化活性的方法。

酶促反应底物

酶促反应底物

酶促反应底物酶既可以作为催化剂,也可以作为另一个化学反应的反应物。

底物为参与生化反应的物质,可为化学元素、分子或化合物,经酶作用可形成产物。

一个生化反应的底物往往同时也是另一个化学反应的产物。

特定的底物会在特定的酶作用下,合成或分解。

酶促反应动力学(kinetics of enzyme-catalyzed reactions):酶反应动力学主要研究酶催化的反应速度以及影响反应速度的各种因素。

在探讨各种因素对酶促反应速度的影响时,通常测定其初始速度来代表酶促反应速度,即底物转化量<5%时的反应速度。

1.底物浓度对反应速度的影响:⑴底物对酶促反应的饱和现象:由实验观察到,在酶浓度不变时,不同的底物浓度与反应速度的关系为一矩形双曲线,即当底物浓度较低时,反应速度的增加与底物浓度的增加成正比(一级反应);此后,随底物浓度的增加,反应速度的增加量逐渐减少(混合级反应);最后,当底物浓度增加到一定量时,反应速度达到一最大值,不再随底物浓度的增加而增加(零级反应)。

⑵米氏方程及米氏常数:根据上述实验结果,Michaelis & Menten 于1913年推导出了上述矩形双曲线的数学表达式,即米氏方程:ν= Vmax[S]/(Km+[S])。

其中,Vmax为最大反应速度,Km为米氏常数。

⑶Km和Vmax的意义:①当ν=Vmax/2时,Km=[S]。

因此,Km等于酶促反应速度达最大值一半时的底物浓度。

②当k-1>>k+2时,Km=k-1/k+1=Ks。

因此,Km可以反映酶与底物亲和力的大小,即Km值越小,则酶与底物的亲和力越大;反之,则越小。

③Km可用于判断反应级数:当[S]<0.01Km时,ν=(Vmax/Km)[S],反应为一级反应,即反应速度与底物浓度成正比;当[S]>100Km时,ν=Vmax,反应为零级反应,即反应速度与底物浓度无关;当0.01Km<[S]<100Km时,反应处于零级反应和一级反应之间,为混合级反应。

pseudalert 酶底物法

pseudalert 酶底物法

pseudalert 酶底物法酶底物法,也称为毒酶底物法(Pseudalert method),是一种常用于检测水中假单胞菌属(Pseudomonas)的方法。

该方法基于假单胞菌属菌种能够将底物---乙酰谷氨酰对氨基苄标准底物(Ac-Gly-Gly-Arg-7-Amino-4-Methylcoumarin)水解为产生荧光的苯胺。

这种荧光产物可以通过荧光测定仪来测量,并根据测量结果来确定水样中假单胞菌属的存在。

酶底物法是一种快速、准确且可靠的水质检测方法,特别适用于水处理、环境监测和食品工业等领域。

其原理简单易懂,操作方便快速,非常适合快速筛选假单胞菌属菌株。

下面将详细介绍酶底物法的实施步骤:1.准备样品:收集需要检测的水样。

可以是自然环境中的水体,也可以是有可能受到污染的水源,如自来水、游泳池水或工业废水等。

确保样品的质量和卫生。

2.制备培养基:使用假单胞菌属菌株生长所需的培养基。

通常使用含蛋白胨、琼脂和盐等成分的培养基,可自制或购买。

3.培养假单胞菌属菌株:取一定量的样品,将其接种到含有培养基的琼脂培养皿(Petri dish)中。

将接种皿孵育在适宜的温度下,例如在37摄氏度下孵育24小时。

4.准备试剂:按照试剂盒说明书中的指导,准备好乙酰谷氨酰对氨基苄标准底物的浓度。

5.进行分析:取一定量的培养皿上的培养物,转移至小容器中。

加入适量的试剂,混匀后立即加载到荧光测定仪中。

6.测量结果:将样品放置在荧光测定仪中,根据仪器的操作说明进行测量。

测量时需要规定适当的激发波长和发射波长。

7.结果解释:通过测量结果得到含有假单胞菌属菌株的样品中产生的荧光强度。

根据事先设定的阈值,判断样品中是否存在假单胞菌属菌株。

荧光强度高于阈值可以确定样品中存在假单胞菌属。

8.分析数据:根据测量结果,可以进行统计学分析,计算出水样中假单胞菌属的数目。

可以利用相关软件进行数据处理和绘图,得到详尽的结果。

总之,酶底物法是一种高效的检测假单胞菌属菌株的方法。

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西安立科环保科技有限公司
水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍
一、检测用途:
酶底物法测定用途:用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群(耐热大肠菌群)和大肠埃希氏菌。

可用于检测水的类型:饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理:
酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂,这两种试剂分别可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的β-葡糖醛酸酶分解代谢。

当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时,其使用β-半乳糖苷酶分解代谢ONPG,并使样品从无色变为黄色。

大肠杆菌使用β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时,能够发出荧光。

三、优势特点:
酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法,酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法,目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场,以其方便快捷,假阳性低,适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法,酶底物法检测步骤大大减少,而且对实验环境要求不高,检测时间可减少到24小时,在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景,可及时检测,预防,最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。

以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例,比较三种方法,如表所示。

表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计
方法优势:
1.无需在无菌室内操作。

2.手工操作时间小于1分钟。

3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。

4.24小时即可完成定性定量分析,无需验证试验。

已经列入
1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。

产品特点:
1.colitech酶底物法检测试剂,LK定量检测盘/定量孔板,LK定量瓶出厂前均已灭菌,客户可以直接放心使用。

2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基,假阳性和假阴性均优于传统方法。

3.colitech酶底物法检测试剂经大量客户实验室使用和验证,表明与传统方法多管发酵法和滤膜法具有方法一致性和可比性。

准确/可信
●使用MPN法进行定量检测,可直接检测100毫升水样中1~2419MPN(个)目标细菌
●精确检出100ml水样中单个的活性大肠杆菌群和大肠埃希氏菌,假阴性低
●每个单位试剂可抑制上百万个异养细菌,假阳性低
●无需验证试验,准确性高于滤膜法及多管发酵法
●符合中国国家标准GB/T5750.12-2006《生活饮用水检验标准》
简单/快捷
●检测时间不超过24小时,无需确证试验
●简单培训就能轻松使用,手工操作少于一分钟
●不会因为过滤阻塞(滤膜法)或异养细胞的干扰(多管发酵法)而产生数据误差●无需玻璃器皿清洗及菌落计数,减轻实验人员工作量
●适用于大量样品的批量快速检测
四、配件以及技术方案:
针对酶底物法检测的原理采购相应的设备。

用途如下:
程控定量封口机:用于定量检测盘的封口。

酶底物检测试剂:用于选择性检测水中的目标细菌。

51或97定量检测盘:用于判断目标微生物数量。

100毫升定量瓶/取样瓶:专业的为水样与试剂提供溶解环境。

紫外手持式紫外分析仪带暗室:测定大肠埃希氏菌时用于在暗室中观察荧光。

五、操作方法:
第一步:将水样加入100ml取样瓶中,加入酶底物法检测试剂,拧紧盖子摇匀至完全溶解。

第二步:将样品加到定量检测盘中。

第三步:使用程控定量封口机对定量检测盘进行样品分配及封口
第四步:将封口好的定量检测盘放在36±1℃,如需测定粪大肠菌群(耐热大肠菌群)则将培养箱设定为44.5℃,培养24h.
第五步:对照比色盘数阳性(显黄色,或荧光)格子数,按照使用的检测盘类型,分别查51孔或者97孔MPN表得出100毫升中大肠菌群的菌群数。

对照MPN 表出数据。

第六步:根据稀释倍数最终结果按公式计算结果
大肠菌群(个/L)=MPN值×稀释倍数×1000mL/100mL。

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