表达I型鸭甲肝病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒的构建

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Ｉ型鸭肝炎病毒）Ｐ基因，隆到质粒ｐＣ表达盒的多克隆位点Ｋｎ与Ｘａ之间，Ｖ１克ＴＬｐＩｂＩ构建含Ｌｃ及ＶＩ因的转ａＺＰ基移栽体质粒ｐ－ＬＶＩＴＣ－Ｐ。将此转移载体与鸭瘟病毒ＣＫＥ株共转染鸡胚成纤维细胞（Ｅ）经蓝斑克隆筛选和纯－Ｃ毒ＣＦ，化，了遗传性状稳定的表达Ｉ获得型鸭甲肝病毒Ｖ１因的重组鸭瘟病毒。Ｐ基关键词：甲肝病毒；鸭鸭瘟病毒；Ｋ基因；Ｐ基因；鸭瘟病毒ＴＶＩ重组中图分类号：８２６９０８Ｓ５．５：７文献标识码：文章编号：０５９４２１）６０２－１Ａ１０ — ４Ｘ（０００ — ０８４４
ｂａｓｏｉｅｔｎｗｉｅｔｉｔｎｅｚｍｅｎｅｓｒｄｎｔｄｌｏｅＴｙｍｅｎｆｄｇｓｉｔｒｓｃｏｎｙａｄｔｎｉｅｔｉｏｍｉｄｅｆｔＫｅｅｂｉｉｇｌｓｄｐＬ．ｉｇｏｈｒｉｈｎｅｈｇｎ，ｏｔｎｎｐａｍｉＴＣＵｓａｎｈｒｒｓｎｓｄａｃｒｉｇｔｔｙｅＩｄｃｅａｉｉｔｅｐｍｅｙｔｅｉｅｃｏｄｎｅｔｐｕｋｈｐｔｓｖｒｓＶＰｇｎｅｕｎｅｐｂｉｅｎｂｎ，ｔｅｉｓｈｚｏｈｉｔｕ１ｅｅｓｑｅｃｕｌｈｄｉＧｅｅａｋｈＶＰ１ｅｅｓｎｇｎＷａｍｐｉｅｒｍｅｐａｍｉ－ｓａｌｄｆｉｆｏｔｌｓｄＴＶＰ１ｓｅｌｔｄｃｏｅｎｏｂｔｅｅｔｅｐｌｃｏａｉｒｄＸｂｌｏｌｓｄｈａｔｍｐａｅａｌｎｄｉｔｅｗｅｎｔｏｙｌｎｌｓｅＫｐａａａｆｐａｍｉｎｈｈｔｎｐＣＬｔｕｏｔｉｉｇｔｅｐＣＬＶＰ１ｌｓｄｗｉＬｃａｄＴ，ｈｓｂａｎｈＴ－ｎｐａｍｉｔｈａＺｎＶＰ１ｅｅＴｅｏｓｕｔｄｔｎｆｒｖｃｏｗａｃｔｎｆｃｅｏｇｎ．ｈｃｎｔｃｅｒｓｅｅｔｒｒａｓｏｒｓｅｔｄｎａ
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ｐＤＮＡ— ａＺｈｅＣＭＶｒｍｏｅ，ｍｕｔｌｌｎｎｓｅ，Ｓ０ｎｄｔｅｃｍｐｅｅＬｃｇｎｅｐｅｓｏａｓｔｒｂｉｅｃＬｃ，ｔｐｏｔｒｌｐｅｃｏｉｇｉｓＶ４，ａｏｌｔａＺｅｅｘｒｓｉｎｃｓｅｔｗｅｅｏｔｎｄｉｔｈｅａ
摘要：扩增鸭瘟病毒（Ｐ）ＤＶ生长非必需区的ＴＫ基因，并在其中间引入ＢｌＩｇＩ酶切位点，再之克隆到ｐｔ９Ｕ１栽体，获得载体ｐＫＴ。用限制性内切酶从已有质粒ｐＤＡＬｃｃＮ — ａＺ上切下ＣＶ启动子、Ｍ多克隆位点、Ｖ０ＬｃＳ４及ａＺ的完整的基因表达盒，插入到ｐＫ的Ｔ基因中，ＴＫ获得质粒ｐＣ。ＴＬ用质粒ＴＶ１－Ｐ做模板，扩增出Ｉ型鸭甲肝病毒（以前称为血清
Ｃｏｍｍｅｉｎｏｍｍｂｍａｃｌｇｅｖｊ】ｌｃ嘲ｓｎｔｌｆＲ￣ｏｉｔＤｕｋＰａｕｎｓｂｌ，ｉｇＶＰｌ（ｅｏＹｍ－ｃｐｆｎｆＴｉＩＤｕｋＨｃａ￣Ｖｍｉ
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一
２８一
中国动物检疫
２１００年第２７卷第６期
持人：胡藕祥ｚｄｊ＠ｉａｏｇｗｙｓ．ｍｎｃ
表达Ｉ型鸭甲肝病毒Ｖ基因的Ｐ１重组鸭瘟病毒的构建
张瀚元 ’ ，左青山李明义黄保续。，，（．１东北农业大学，黑龙江哈尔滨１０３；．００２青岛易邦生物工程有限公司，５山东青岛２６３；６０２３中国动物卫生与流行病学中心，．山东青岛２６３）６０２
ｈｎｃｏｅｏｐｔｅｌｎｄｉｔＵＣ１ｖｃｏｏｏｔｉＴｖｃｏ．Ａｃｏｄｇｔｈｅｔｃｏｎｏｕｅｅｅｏｎｚｄｉｓｉｅｖｃｏｎ９ｅｔｒｔｂａｎｐＫｅｔｒｃｒｉｏｔｅｒｓｒｔｎｅｄｎｌａｒｃｇｉｅｓｅｎｔｅｔｒｎｉｉｓｔｈ