植物类黄酮(Flavonoid)试剂盒说明书
黄酮类(flavonoids)制剂的分析
5C 4 CC OH O
A
C 4C3C OH O
B
OH
OH C
铝盐：常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶 液，生成的络合物为黄色，并有荧光。
锆盐：多用2%二氯氧化锆甲醇液，生成黄 色的络合物
铅盐：常用1%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液， 生成黄-红色沉淀
镁盐：常用醋酸镁甲醇液，二氢黄酮、二 氢黄酮醇类可显天蓝色荧光。而黄酮、黄 酮醇及异黄酮类等则显黄—橙黄--褐色
（3）四氢硼钠（钾）反应(补充)
NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属性较高 的一种还原剂，与二氢黄酮类化合物产 生红色—紫红，其它黄酮类化合物均不 显色，可与之区别。
2、络合反应（与金属离子铝、铅、锆、镁等）
产生络合反应的条件必须具备下述条件 之一：A、5-羟基 B、3-羟基 C、邻二酚 羟基 都是羟基与4位羰基共同与金属离 子形成络合物的。
（4）分子中芳香核、共轭双键多则吸附力强，反 之吸附力弱
（5）分子中若没有游离酚羟基，其Rf值的大小主 要由所连糖的性质而定，糖数目越多Rf值越大。
3、纤维素薄层色谱 分离黄酮苷类较好
四、定量分析
（一）总黄酮的含量测定 比色法（可见分光光度法）
紫外分光光度法
由于黄酮类化合物均具有α-苯基色原酮 的基本结构，羰基与二个芳香环形成两 个较强的共轭体系，对紫外光区相应有 两个特征吸收。
（二）薄层色谱法
一般采用吸附薄层。
硅胶色谱分离弱极性化合物较好，聚 酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及 其苷类较为理想，而纤维素薄层适用 于分离多糖苷混合物。
1、 硅胶色谱
其Rf顺序如下： RCH3 > RH > ROCH3 > R-O-糖 > ROH
06药学黄酮类化合物
二、生物活性
2. 抗肝脏毒作用 (1) 水飞蓟素 异水飞蓟素 水飞蓟素,异水飞蓟素 异水飞蓟素, 次水飞蓟素等 次水飞蓟素等 治疗急、 治疗急、慢性肝 HO 炎,肝硬化及多种中毒 肝硬化及多种中毒 性肝损伤. 性肝损伤 (2) (+)-儿茶素 儿茶素 抗肝脏毒药物,对 抗肝脏毒药物 对 脂肪肝及因半乳糖胺或 CCl4等引起的中毒性 等引起的中毒性 肝损伤有一定效果. 肝损伤有一定效果
四、理化性质
4. 溶解性
(1) 游离的黄酮类化合物 游离的黄酮类化合物:
一般难溶或不溶于水, 易溶于甲醇、乙醇、 一般难溶或不溶于水 易溶于甲醇、乙醇、乙酸 乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中. 乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中 O a. 各类化合物自身基本结构的影响 * 黄酮、黄酮醇、查耳酮类 黄酮、黄酮醇、 O * 二氢黄酮、二氢黄酮醇类 二氢黄酮、 O * 异黄酮类 * 花色素类 O b. 取代基及取代位置的影响 * －OH, －OCH3, 异戊烯基 等 * 水溶性 7-OH或4’-OH > -OH在其他位置上 水溶性: 或 在其他位置上
• 定义：在很长的一段时间里，黄酮类化合 定义：在很长的一段时间里， 物是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物。 物是指基本母核为2 苯基色原酮类化合物。 类化合物 现泛指两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳 现泛指两个具有酚羟基的苯环通过 两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳 原子连成的一系列化合物。 原子连成的一系列化合物。 连成的一系列化合物
OH HO O CH3 HO HO OH O OH OH OH O OO O* OCH3
HO
O*
OH OH OH
*
OH O
橙皮苷
HO O O glc
二氢槲皮素
黄酮类化合物flavonoids
分布
• 黄酮类化合物广泛分布于水果、蔬菜、 茶、谷物、植物根茎、花中。还是茶 及黄芩、银杏、沙棘等众多中草药的 活性成分。
结构及命名
8 7 6
5
1
O
2
3
4
O
色原酮
2-苯基色原酮
C6-C3-C6
分类
根据B环连接位置、C环氧化程度、C环是否成环等将黄酮类 化合物分为以下七大类。
1、黄酮和黄酮醇 2、二氢黄酮和二氢黄酮醇 3、异黄酮和二氢异黄酮 4、查耳酮和二氢查耳酮类 5 、橙酮类 6、花色素和黄烷醇类 7、其他黄酮类
HO
O
OH OH O
山柰酚
OH
HO
O
OH OH
OH OH OH O
杨梅素
OH
HO
O
OH
OR OH O
R=H
槲皮素
R=芸香糖 芦丁
• 罗勒
罗勒
槐花
2、二氢黄酮和二氢黄酮醇
• 二氢黄酮及苷类：陈皮素、陈皮苷、苷草素、苷草苷
OH
RO
O
HO
O
OCH3
OR
OH O
R=H
陈皮素
R=芸香糖 陈皮苷
O
R=H
苷草素
• 杜俊瑶,辛彦.芹菜素对人卵巢癌细胞系CAOV3 细胞增殖周期的影响[J]. 中国使用妇科与产科杂志, 2008,24(6) : 456－458.
抗氧化作用
螫合金属离子 体外直接清除自由基 抑制NO的生成 抑制DNA氧化损伤 抑制放射损伤 抑制LDL氧化损伤 抑制脂质过氧化作用
孙秀琴,李荣华,唐涛.芹菜素抗氧化作用研究进展 [J]. 2009,47(27): 34-35.
• 宋昊刚,崔浩,赵君,等. 黄芩苷对家兔视网膜炎性水肿厚度影响的研究[J]. 国际眼科杂志, 2010,10(7) : 1274
植物类黄酮检测试剂盒(微板法)
植物类黄酮检测试剂盒(微板法)简介：类黄酮(Flavonoids)是植物重要的一类次生代谢产物，它以结合态（黄酮苷）或自由态（黄酮苷元）形式存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶等许多食源性植物中。
Leagene 植物类黄酮检测试剂盒(微板法)检测原理是类黄酮溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类黄酮，根据提取液的吸收光谱特性，可利用酶标仪在特定波长(325nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出类黄酮含量，主要用于植物组织或果实中类黄酮的提取以及定量检测类黄酮含量。
该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、类黄酮提取：①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。
②加入4℃预冷的Flavonoids Assay buffer，充分研磨或匀浆后转入10ml 离心管中。
用Flavonoids Assay buffer 冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管中，补加Flavonoids Assay buffer 至。
③4℃避光静置20min，期间摇动2~3次，然后用滤纸或纱布过滤至离心管中，滤液即为类黄酮粗提液。
2、稀释Flavonoids 标准溶液：取适量的Flavonoids 标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：加入物(μl)123456Flavonoids 标准(1mg/ml)306090120150300蒸馏水2702402101801500Flavonoids 浓度(mg/ml)0.10.20.30.40.513、加样：取96孔板，按照下表设置空白孔、对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。
如果样品中的类黄酮活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。
编号名称TP1111100T Storage试剂(A):Flavonoids 标准(1mg/ml) 1.5ml 4℃避光试剂(B):Flavonoids Assay buffer 2×500mlRT 避光使用说明书1份加入物(μl)空白孔标准孔测定孔Flavonoids Assay buffer200——系列Flavonoids标准(1~6号孔)—200—类黄酮粗提液——2004、测定：以酶标仪，以空白调零，测定系列标准孔、测定孔在325nm处吸光度。
植物类黄酮(Flavonoid)试剂盒使用说明
植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒使用说明分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1330规格：50管/24样产品内容：提取液：60%乙醇，自备。
试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在502nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在502nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
操作步骤：一、类黄酮提取将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，60℃，提取30min。
10000g，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待测。
二、测定操作表对照管测定管样本待测液（μL）200200试剂一（μL）5050混匀，25℃静置5min试剂二（μL）50混匀，25℃静置5min试剂三（μL）40040060%乙醇（μL）350350。
混匀，25℃静置15min，对照管调零，1mL玻璃比色皿，测定A502三、类黄酮含量计算公式标准曲线：y=6.2096x+0.0008，R2=0.9996类黄酮含量（mg/g）=（A502-0.0008）÷6.2096×V反总÷(V样÷V样总×W)=2.013×A502÷WV样总：加入提取液体积，2.5mL；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；W：样品质量，g注意事项：1、吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4269
植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书微量法货号:UPLC-MS-4269规格:100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体×1瓶（自备）4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存溶液的配制：提取液：自备80%丙酮，将丙酮:蒸馏水（V:V）=4:1混合待用，提供一个125mL空瓶。
产品简介：类胡萝卜素(carotenoid)是一类重要的天然色素的总称，普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类的黄色、橙红色或红色的色素之中。
类胡萝卜素是体内维生素A的前体，同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、减轻心血管疾病及着色剂等作用。
植物的类胡萝卜素存在于各种黄色质体或有色质体内；如黄叶，黄色花卉，黄色和红色的果实和黄色块根等组织，样本通过溶剂萃取，分离提取类胡萝卜素，在440±10nm处有特殊吸收峰。
大部分高等植物和藻类微生物的叶绿体内也含有类胡萝卜素，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，而叶绿素a和叶绿素b既吸收红光又可吸收蓝紫光。
所以针对含叶绿体的组织，为排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卜素的干扰，根据经验公式先计算出叶绿素a和叶绿素b的含量，再进一步得出类胡萝卜素的含量；针对不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卜素的经验消光系数进行计算。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质）、天平、可调式移液枪、研钵/匀浆器、10mL离心管/试管、蒸馏水和丙酮。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、新鲜植物叶片（去掉中脉）或其他组织用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，称取约0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。
2、加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL离心管或试管中。
植物查尔酮合成酶(chalconesynthase)活性比色法定量检
植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A缩合反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂后，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定植物裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等查尔酮合成酶的活性检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景查尔酮合成酶（chalcone synthase；CHS；EC2.3.1.74）是聚酮体合成酶（polyketide synthase；PKS）大家属中的一员，是启动类黄酮（flavonoid）化合物合成通路中第一步关键酶，形成植物系统性获得性抗性（systematic acquired resistance；SAR）的基础。
查尔酮合成酶存在于细菌、植物和真菌中。
在所有裸子植物（gymnosperm）和被子植物（angiosperm）的各种不同发育阶段中的不同组织中表达。
查尔酮合成酶为同源二聚体，分子量为40至4000Kd，由环境压力，包括UV照射、伤口、病原菌袭击等诱导，通过丙二酰辅酶A脱羧基反应（decarboxylation）、与香豆酰辅酶缩合、聚酮体链延展（chain elongation）、中间产物环状化（cyclization）和芳构化（aromatization）产生查尔酮，一种类黄酮化合物前体，作为化学信使，由此生成各种后续继发性代谢化合物，参与抗病原微生物例如异黄酮植物保护素（isoflavonoid phytoalexin）、花青素花色素化、抵御环境压力（UV光保护）、花粉育性（pollen fertility）、抗氧化、共生根系结瘤（symbiotic root nodulation），以及作为抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤和抗真菌的药物作用。
6.黄酮类化合物FLAVONOIDS
豆科植物 槐米中含 有芦丁和 槲皮素。
３．二氢黄酮类(flavanones)
柚皮素（Naringenin）：来源于芸香科植物柚 (Citrus paradisi Macfadyen)的果实；分子式 C15H12O；分子量 272.25
结构式：
4．二氢黄酮醇类(flavanonols)
水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮 木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝 炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。
2. 铅盐
1%PbAc2 或碱式醋酸铅水液。生成黄 红色沉淀。 醋酸铅可沉淀具有邻二酚羟基或兼有 3OH, 4=O或5-OH, 4=O者。 碱式醋酸铅可沉淀具有一般酚类化合物。
3. 锆盐: 2%氯氧化锆甲醇液
4. 镁盐 醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进行。 二氢黄酮（醇）类显天蓝色荧光，若具有C5-OH， 色泽更明显。 而黄酮、黄酮醇及异黄酮类则显黄-橙黄-褐色。 5. 氯化锶(SrCl2) 使具有邻二酚羟基的黄酮显绿-棕色-黑色沉淀。
7. 清除人体自由基作用
黄酮类化合物多具有酚羟基，易氧化 成醌类而提供氢离子，故有显著的抗氧 特点。
另外还有降血脂、血糖，抗动脉粥样 硬化及抗癌抗突变等作用。
8.抗肿瘤作用
抗癌新药Flavopiridol的发现与研制
Flavopiridol是一种源于植物（CDYSOXYLUM BINECTARIFERUM）的黄酮类化合物。目前正被 用于十几项一期和二期的癌症临床试验。最近，不 同的研究者证实其对艾滋病也有异于其他药物的疗 效。它的早期发现得益于工业界对自然产物的研究 兴趣。在从树皮中提取出纯化合物后，前 HOECHST公司又进行了结构与人工合成的研究。 由此建立了一系列同型物，包括Flavopiridol的专利。
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货号：MS1506 规格：100管/96样植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
测定原理：
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在510nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器：
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：60%乙醇，自备。
试剂一：液体1mL×1管，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1管，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
类黄酮提取：
将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.02g，加入2mL提取液，60℃振荡提取2h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
类黄酮含量计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996
类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02×V样÷(V样÷V样总×W)
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= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W
V样总：加入提取液体积，2.5mL； V样：反应中样品体积，0.108mL； W：样品质量，g b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 2.51x+0.0007，R2 = 0.9996
类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷2.51×V样÷(V样÷V样总×W)
= 0.797×（ΔA -0.0007）÷W
V样总：加入提取液体积，2mL；V样：反应中样品体积，0.108mL；W：样品质量，g
最低检出限为10µg/g。
第2页，共2页。