植物类黄酮(Flavonoid)试剂盒说明书
黄酮类(flavonoids)制剂的分析
5C 4 CC OH O
A
C 4C3C OH O
B
OH
OH C
铝盐：常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶 液，生成的络合物为黄色，并有荧光。
锆盐：多用2%二氯氧化锆甲醇液，生成黄 色的络合物
铅盐：常用1%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液， 生成黄-红色沉淀
镁盐：常用醋酸镁甲醇液，二氢黄酮、二 氢黄酮醇类可显天蓝色荧光。而黄酮、黄 酮醇及异黄酮类等则显黄—橙黄--褐色
（3）四氢硼钠（钾）反应(补充)
NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属性较高 的一种还原剂，与二氢黄酮类化合物产 生红色—紫红，其它黄酮类化合物均不 显色，可与之区别。
2、络合反应（与金属离子铝、铅、锆、镁等）
产生络合反应的条件必须具备下述条件 之一：A、5-羟基 B、3-羟基 C、邻二酚 羟基 都是羟基与4位羰基共同与金属离 子形成络合物的。
（4）分子中芳香核、共轭双键多则吸附力强，反 之吸附力弱
（5）分子中若没有游离酚羟基，其Rf值的大小主 要由所连糖的性质而定，糖数目越多Rf值越大。
3、纤维素薄层色谱 分离黄酮苷类较好
四、定量分析
（一）总黄酮的含量测定 比色法（可见分光光度法）
紫外分光光度法
由于黄酮类化合物均具有α-苯基色原酮 的基本结构，羰基与二个芳香环形成两 个较强的共轭体系，对紫外光区相应有 两个特征吸收。
（二）薄层色谱法
一般采用吸附薄层。
硅胶色谱分离弱极性化合物较好，聚 酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及 其苷类较为理想，而纤维素薄层适用 于分离多糖苷混合物。
1、 硅胶色谱
其Rf顺序如下： RCH3 > RH > ROCH3 > R-O-糖 > ROH
06药学黄酮类化合物
二、生物活性
2. 抗肝脏毒作用 (1) 水飞蓟素 异水飞蓟素 水飞蓟素,异水飞蓟素 异水飞蓟素, 次水飞蓟素等 次水飞蓟素等 治疗急、 治疗急、慢性肝 HO 炎,肝硬化及多种中毒 肝硬化及多种中毒 性肝损伤. 性肝损伤 (2) (+)-儿茶素 儿茶素 抗肝脏毒药物,对 抗肝脏毒药物 对 脂肪肝及因半乳糖胺或 CCl4等引起的中毒性 等引起的中毒性 肝损伤有一定效果. 肝损伤有一定效果
四、理化性质
4. 溶解性
(1) 游离的黄酮类化合物 游离的黄酮类化合物:
一般难溶或不溶于水, 易溶于甲醇、乙醇、 一般难溶或不溶于水 易溶于甲醇、乙醇、乙酸 乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中. 乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中 O a. 各类化合物自身基本结构的影响 * 黄酮、黄酮醇、查耳酮类 黄酮、黄酮醇、 O * 二氢黄酮、二氢黄酮醇类 二氢黄酮、 O * 异黄酮类 * 花色素类 O b. 取代基及取代位置的影响 * －OH, －OCH3, 异戊烯基 等 * 水溶性 7-OH或4’-OH > -OH在其他位置上 水溶性: 或 在其他位置上
• 定义：在很长的一段时间里，黄酮类化合 定义：在很长的一段时间里， 物是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物。 物是指基本母核为2 苯基色原酮类化合物。 类化合物 现泛指两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳 现泛指两个具有酚羟基的苯环通过 两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳 原子连成的一系列化合物。 原子连成的一系列化合物。 连成的一系列化合物
OH HO O CH3 HO HO OH O OH OH OH O OO O* OCH3
HO
O*
OH OH OH
*
OH O
橙皮苷
HO O O glc
二氢槲皮素
黄酮类化合物flavonoids
分布
• 黄酮类化合物广泛分布于水果、蔬菜、 茶、谷物、植物根茎、花中。还是茶 及黄芩、银杏、沙棘等众多中草药的 活性成分。
结构及命名
8 7 6
5
1
O
2
3
4
O
色原酮
2-苯基色原酮
C6-C3-C6
分类
根据B环连接位置、C环氧化程度、C环是否成环等将黄酮类 化合物分为以下七大类。
1、黄酮和黄酮醇 2、二氢黄酮和二氢黄酮醇 3、异黄酮和二氢异黄酮 4、查耳酮和二氢查耳酮类 5 、橙酮类 6、花色素和黄烷醇类 7、其他黄酮类
HO
O
OH OH O
山柰酚
OH
HO
O
OH OH
OH OH OH O
杨梅素
OH
HO
O
OH
OR OH O
R=H
槲皮素
R=芸香糖 芦丁
• 罗勒
罗勒
槐花
2、二氢黄酮和二氢黄酮醇
• 二氢黄酮及苷类：陈皮素、陈皮苷、苷草素、苷草苷
OH
RO
O
HO
O
OCH3
OR
OH O
R=H
陈皮素
R=芸香糖 陈皮苷
O
R=H
苷草素
• 杜俊瑶,辛彦.芹菜素对人卵巢癌细胞系CAOV3 细胞增殖周期的影响[J]. 中国使用妇科与产科杂志, 2008,24(6) : 456－458.
抗氧化作用
螫合金属离子 体外直接清除自由基 抑制NO的生成 抑制DNA氧化损伤 抑制放射损伤 抑制LDL氧化损伤 抑制脂质过氧化作用
孙秀琴,李荣华,唐涛.芹菜素抗氧化作用研究进展 [J]. 2009,47(27): 34-35.
• 宋昊刚,崔浩,赵君,等. 黄芩苷对家兔视网膜炎性水肿厚度影响的研究[J]. 国际眼科杂志, 2010,10(7) : 1274
植物类黄酮检测试剂盒(微板法)
植物类黄酮检测试剂盒(微板法)简介：类黄酮(Flavonoids)是植物重要的一类次生代谢产物，它以结合态（黄酮苷）或自由态（黄酮苷元）形式存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶等许多食源性植物中。
Leagene 植物类黄酮检测试剂盒(微板法)检测原理是类黄酮溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类黄酮，根据提取液的吸收光谱特性，可利用酶标仪在特定波长(325nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出类黄酮含量，主要用于植物组织或果实中类黄酮的提取以及定量检测类黄酮含量。
该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、类黄酮提取：①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。
②加入4℃预冷的Flavonoids Assay buffer，充分研磨或匀浆后转入10ml 离心管中。
用Flavonoids Assay buffer 冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管中，补加Flavonoids Assay buffer 至。
③4℃避光静置20min，期间摇动2~3次，然后用滤纸或纱布过滤至离心管中，滤液即为类黄酮粗提液。
2、稀释Flavonoids 标准溶液：取适量的Flavonoids 标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：加入物(μl)123456Flavonoids 标准(1mg/ml)306090120150300蒸馏水2702402101801500Flavonoids 浓度(mg/ml)0.10.20.30.40.513、加样：取96孔板，按照下表设置空白孔、对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。
如果样品中的类黄酮活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。
编号名称TP1111100T Storage试剂(A):Flavonoids 标准(1mg/ml) 1.5ml 4℃避光试剂(B):Flavonoids Assay buffer 2×500mlRT 避光使用说明书1份加入物(μl)空白孔标准孔测定孔Flavonoids Assay buffer200——系列Flavonoids标准(1~6号孔)—200—类黄酮粗提液——2004、测定：以酶标仪，以空白调零，测定系列标准孔、测定孔在325nm处吸光度。
植物类黄酮(Flavonoid)试剂盒使用说明
植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒使用说明分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1330规格：50管/24样产品内容：提取液：60%乙醇，自备。
试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在502nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在502nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
操作步骤：一、类黄酮提取将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，60℃，提取30min。
10000g，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待测。
二、测定操作表对照管测定管样本待测液（μL）200200试剂一（μL）5050混匀，25℃静置5min试剂二（μL）50混匀，25℃静置5min试剂三（μL）40040060%乙醇（μL）350350。
混匀，25℃静置15min，对照管调零，1mL玻璃比色皿，测定A502三、类黄酮含量计算公式标准曲线：y=6.2096x+0.0008，R2=0.9996类黄酮含量（mg/g）=（A502-0.0008）÷6.2096×V反总÷(V样÷V样总×W)=2.013×A502÷WV样总：加入提取液体积，2.5mL；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样品体积，0.2mL；W：样品质量，g注意事项：1、吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4269
植物类胡萝卜素含量检测试剂盒说明书微量法货号:UPLC-MS-4269规格:100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体×1瓶（自备）4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存溶液的配制：提取液：自备80%丙酮，将丙酮:蒸馏水（V:V）=4:1混合待用，提供一个125mL空瓶。
产品简介：类胡萝卜素(carotenoid)是一类重要的天然色素的总称，普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类的黄色、橙红色或红色的色素之中。
类胡萝卜素是体内维生素A的前体，同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、减轻心血管疾病及着色剂等作用。
植物的类胡萝卜素存在于各种黄色质体或有色质体内；如黄叶，黄色花卉，黄色和红色的果实和黄色块根等组织，样本通过溶剂萃取，分离提取类胡萝卜素，在440±10nm处有特殊吸收峰。
大部分高等植物和藻类微生物的叶绿体内也含有类胡萝卜素，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光，而叶绿素a和叶绿素b既吸收红光又可吸收蓝紫光。
所以针对含叶绿体的组织，为排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卜素的干扰，根据经验公式先计算出叶绿素a和叶绿素b的含量，再进一步得出类胡萝卜素的含量；针对不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卜素的经验消光系数进行计算。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质）、天平、可调式移液枪、研钵/匀浆器、10mL离心管/试管、蒸馏水和丙酮。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、新鲜植物叶片（去掉中脉）或其他组织用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，称取约0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。
2、加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL离心管或试管中。
植物查尔酮合成酶(chalconesynthase)活性比色法定量检
植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物查尔酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A缩合反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂后，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定植物裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等查尔酮合成酶的活性检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景查尔酮合成酶（chalcone synthase；CHS；EC2.3.1.74）是聚酮体合成酶（polyketide synthase；PKS）大家属中的一员，是启动类黄酮（flavonoid）化合物合成通路中第一步关键酶，形成植物系统性获得性抗性（systematic acquired resistance；SAR）的基础。
查尔酮合成酶存在于细菌、植物和真菌中。
在所有裸子植物（gymnosperm）和被子植物（angiosperm）的各种不同发育阶段中的不同组织中表达。
查尔酮合成酶为同源二聚体，分子量为40至4000Kd，由环境压力，包括UV照射、伤口、病原菌袭击等诱导，通过丙二酰辅酶A脱羧基反应（decarboxylation）、与香豆酰辅酶缩合、聚酮体链延展（chain elongation）、中间产物环状化（cyclization）和芳构化（aromatization）产生查尔酮，一种类黄酮化合物前体，作为化学信使，由此生成各种后续继发性代谢化合物，参与抗病原微生物例如异黄酮植物保护素（isoflavonoid phytoalexin）、花青素花色素化、抵御环境压力（UV光保护）、花粉育性（pollen fertility）、抗氧化、共生根系结瘤（symbiotic root nodulation），以及作为抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤和抗真菌的药物作用。
6.黄酮类化合物FLAVONOIDS
豆科植物 槐米中含 有芦丁和 槲皮素。
３．二氢黄酮类(flavanones)
柚皮素（Naringenin）：来源于芸香科植物柚 (Citrus paradisi Macfadyen)的果实；分子式 C15H12O；分子量 272.25
结构式：
4．二氢黄酮醇类(flavanonols)
水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮 木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝 炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。
2. 铅盐
1%PbAc2 或碱式醋酸铅水液。生成黄 红色沉淀。 醋酸铅可沉淀具有邻二酚羟基或兼有 3OH, 4=O或5-OH, 4=O者。 碱式醋酸铅可沉淀具有一般酚类化合物。
3. 锆盐: 2%氯氧化锆甲醇液
4. 镁盐 醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进行。 二氢黄酮（醇）类显天蓝色荧光，若具有C5-OH， 色泽更明显。 而黄酮、黄酮醇及异黄酮类则显黄-橙黄-褐色。 5. 氯化锶(SrCl2) 使具有邻二酚羟基的黄酮显绿-棕色-黑色沉淀。
7. 清除人体自由基作用
黄酮类化合物多具有酚羟基，易氧化 成醌类而提供氢离子，故有显著的抗氧 特点。
另外还有降血脂、血糖，抗动脉粥样 硬化及抗癌抗突变等作用。
8.抗肿瘤作用
抗癌新药Flavopiridol的发现与研制
Flavopiridol是一种源于植物（CDYSOXYLUM BINECTARIFERUM）的黄酮类化合物。目前正被 用于十几项一期和二期的癌症临床试验。最近，不 同的研究者证实其对艾滋病也有异于其他药物的疗 效。它的早期发现得益于工业界对自然产物的研究 兴趣。在从树皮中提取出纯化合物后，前 HOECHST公司又进行了结构与人工合成的研究。 由此建立了一系列同型物，包括Flavopiridol的专利。
类黄酮糖基转移酶（UFGT）试剂盒说明书
类黄酮糖基转移酶（UFGT）试剂盒说明书紫外分光光度法：50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：类黄酮是植物次生代谢产物，糖基化是类黄酮基本结构形成的最主要的修饰反应之一，提高了类黄酮苷元的化学稳定性，这一过程主要由类黄酮糖基转移酶催化的，使类黄酮-OH与UDPG反应，是黄酮合成途径中的关键酶。
测定原理：类黄酮糖基转移酶催化花青素与尿苷二磷酸葡萄糖反应产生花青苷，主要以矢车菊素3-葡萄糖苷（C3G）形式存在，用HPLC检测产物可反映类黄酮糖基转移酶的酶活性。
自备实验用品及仪器：天平、研砵、离心机、恒温水浴锅、100目筛、高校液相色谱、针头过滤器（水系、0.22μm）、滤膜（水系、0.45μm）、耐水C18柱（4.6×250mm）、样品瓶、甲酸、甲醇（色谱级）、超纯水试剂组成和配制：提取液：液体50m L×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加全部试剂三溶解。
试剂二：液体5m L×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体8m L×1瓶，4℃保存。
标准品：标准品×1支，-20℃保存。
样本处理：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：2~5的比例（建议称取约0.5g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
实验前的准备工作：1、检测产物制备对照管测定管样本（μL）100 100试剂二（μL）100试剂一（μL）150充分混匀，30℃反应30min试剂一（μL）150试剂二（μL）100 充分混匀，10000g，4℃，离心10min，取上清过0.45μm水系滤头，待检测。
2、将500 mL超纯水和500 mL甲醇用0.45 μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。
（注：蒸馏水用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。
3、流动相的配制：流动相A为1.6%甲酸水溶液；流动相B为1.6%甲酸甲醇溶液。
黄酮类化合物的提取方法与功能应用研究
黄酮类化合物（flavonoid）是广泛存在于自然界的一大类化合物，是具有色酮环与苯环为基本结构的一类化合物的总称，其数量列为天然酚类化合物之首，大多数具有颜色[1]。
在高等植物体中常以游离态或与糖成苷的形式存在，在花、叶、果实等组织中多为苷类，而在木质部组织中则多为游离的苷元[2]。
可以分类为黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、黄烷酮类等。
广义的范围还包括查耳酮、嗅酮、异黄烷酮及茶多酚，是一类生物活性很强的化合物,具有降低心肌耗氧量、防治血管硬化等作用；同时也是一种天然抗氧化剂,具有抗衰老、增强机体免疫力、抗癌防癌的功效,在医药、食品等领域具有广阔的应用前景。
1 黄酮类化合物的基本结构与生理功能黄酮类化合物是植物合成的一类次生代谢产物，基本结构中的两个芳香环（C6）由1个C3单位联结成15碳化合物。
在自然界中，黄酮类化合物大多数以苷类的形式存在，由于糖的种类、连接位置、苷元等不同，可形成各种各样的黄酮苷。
种类不同的黄酮苷在基团上被进一步修饰后产生了自然界中种类繁多的黄酮类化合物[3]。
黄酮类化合物的生理功能多种多样。
黄酮类化合物对高血压引起的头痛、头晕、耳鸣等症状有明显的疗效,尤以缓解头痛为显著。
黄杞总黄酮具有一定的活血化瘀、降血脂、降血糖和提高免疫功能的作用；山楂叶总黄酮可有效防治心血疾病、清除氧自由基、降脂、利尿和增强黄酮类化合物的提取方法与功能应用研究张晓荣 杨 蓉（西北农林科技大学测试中心 陕西 杨凌 712100）摘 要：介绍了黄酮类化合物的提取方法、生理功能及在医药、保健食品等方面的应用研究，预测了黄酮类化合物的开发应用前景，旨在为黄酮类化合物的深入研究提供参考。
关键词：黄酮类化合物 提取方法 生理功能作者简介：张晓荣（1976-），女，陕西富平人，讲师，博士研究生，主要从事食品营养与安全研究与教学工作。
E-mail:******************。
耐缺氧能力等。
大豆（Glycine max）异黄酮有类雌激素及防治骨质疏松的作用,并对多种肿瘤具有抗癌作用[4-5]。
植物类黄酮检测试剂盒(比色法)
植物类黄酮检测试剂盒(比色法)简介：类黄酮(Flavonoids)是植物重要的一类次生代谢产物，它以结合态（黄酮苷）或自由态（黄酮苷元）形式存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶等许多食源性植物中。
Leagene 植物类黄酮检测试剂盒(比色法)检测原理是类黄酮溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类黄酮，根据提取液的吸收光谱特性，可利用分光光度计在特定波长(325nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出类黄酮含量，主要用于植物组织或果实中类黄酮的提取以及定量检测类黄酮含量。
该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织2、 研钵或匀浆器3、 离心管4、 滤纸或纱布5、 比色杯6、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 类黄酮提取：①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。
②加入4℃预冷的 Flavonoids Assay buffer ，充分研磨或匀浆后转入10ml 离心管中。
用Flavonoids Assay buffer 冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管中，补加Flavonoids Assay buffer 至。
③4℃避光静置，期间摇动2~3次，然后过滤至离心管中，滤液即为类黄酮粗提液。
2、 稀释Flavonoids 标准溶液：取适量的Flavonoids 标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：编号 名称TP1113 50T Storage试剂(A): Flavonoids 标准(1mg/ml) 5ml 4℃ 避光 试剂(B): Flavonoids Assay buffer 500mlRT 避光 使用说明书1份加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 Flavonoids标准(1mg/ml) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1蒸馏水0.9 0.8 0.6 0.6 0.50 Flavonoids浓度(mg/ml) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1 3、加样：按照下表设置空白管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。
中草药提取物中总黄酮含量测定_易昌华
中草药提取物中总黄酮含量测定易昌华 贺建华 湖南农业大学动物科技学院戴求仲 湖南省畜牧兽医研究所中草药是我国特有的中医的理论与实践相结合的产物,是一类兼有营养和药用双重作用,具有直接杀灭或抑制细菌和增强免疫能力的功能,且能促进营养物质消化吸收的无残留、无耐药性的天然药物。
近年来,随着饲料工业的不断发展和人们对肉类食品安全意识的不断提升,中草药饲料添加剂的研制和开发的力度日益增强。
研究表明中草药植物提取物含有黄酮类化合物、生物碱、多糖、挥发油、鞣质、有机酸等生物活性物质。
它可以通过这些生物活性物质来达到杀菌、抑菌,调节机体免疫功能和新陈代谢,提高畜禽健康水平的效果。
黄酮类化合物(flavonoid)又称黄酮体、黄碱素,是在植物界中分布较广的一类成分,在生理学、医学和营养学上具有一定的应用价值,具有抗氧化、抗炎、抗变态反应和提高机体免疫力等功能。
黄酮类化合物在饲料工业中的应用也越来越广泛,如抗氧化剂、促生长剂、甜味剂、天然色素等。
但对中草药植物提取物中黄酮类成分分析的研究较少。
笔者对中草药植物提取物中的总黄酮的含量的分析测定方法进行了初步研究,以期为对中草药植物提取物的进一步的研究、开发提供参考。
1 材料和方法1.1 材料分析用样品为用不同有机溶剂提取的复配中草药植物提取物(膏状)。
1号样为乙醇提取物,2号样为甲醇提取物(膏状)。
试验分析用芦丁标准品购于中国医药集团上海化学试剂公司。
所有分析用试剂均为分析纯。
1.2 方法1.2.1 标准曲线的绘制准确称取于120e 干燥至恒重的无水芦丁(作收稿日期:2003-01-08黄酮标准对照)9.5mg,用60%的乙醇定容于50mL 容量瓶中,摇匀,得到浓度为0.19mg/mL 的标准品溶液,作为贮备液备用。
准确量取此液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL 于25mL 容量瓶中,分别加5%亚硝酸钠和10%硝酸铝溶液各0.3mL,放置6m in 。
总黄酮含量检测试剂盒说明书
总黄酮含量检测试剂盒说明书(货号：NM-W-0120 微量法100T/48S)一、产品简介：总黄酮，即黄酮类化合物；是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性和抗病虫害方面有重要作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。
二、试剂盒组分与配制：三、需自备的仪器和用品：酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、30-50目筛、无水乙醇、蒸馏水。
四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备℃ 组织样本：称取约0.1g新鲜样本；或者称取约0.02g烘干样本（将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的提取液（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h，12000rpm，25℃离心10min，取上清待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。
℃ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、标准溶液的配制：把10mg/mL标准品母液用提取液稀释成1、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05mg/mL3、预实验上机操作：℃ 酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm。
℃ 操作表：4、正式实验：℃ 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用提取液适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；℃ 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；℃ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。
Chapter 4 黄酮类化合物 flavonoids
Chapter 4 黄酮类化合物flavonoidsnootkatin-7-O-glucoside astilbin落新妇甙5. Isoflavone异黄酮异黄酮类母核为3-苯基色原酮的结构cyanidin矢车菊素基本母核的C环无羟基，1位氧原子以烊盐形式存在。
12、biflavonoids双黄酮类(两分子黄酮衍生物聚合而成的二聚物)一．性状1.形态most crystal（多为结晶）---aglycone,glycoside with few saccharides, few amorphouspowder (glycoside)（无定形粉末）----含糖基多的苷2. Color黄酮类化合物大多为黄色，其颜色主要与分子中是否存在交叉共轭体系，助色团的种类，数目及取代位置有关。
■flavone, Flavonol and their glycosides show grayish-yellow（灰黄）to yellow, chalcone（查耳酮）show yellow to orange, for the cross conjugative system（交叉共轭体系）.■Flavanone二氢黄酮, flavananol 二氢黄酮醇and isoflavone异黄酮are colorless because the absence of cross conjugative system.■The flavone（黄酮）, flavonal（黄酮醇）with 7-OH 7-OCH3 or 4’-OH ,4’-OCH3, p-πconjugative, extend conjugative system（共轭系统延长）, deepen the color.■Anthocyanidin（花色素）show different color at different PH value, PH<7 red, PH=8.5 紫色, PH>8.5 blue.ⅡOptical rotation 旋光性■flavanone . flavanonol .flavanol（黄烷醇）. isoflavanone and their derivatives have optical rotation for the asymmetric carbon atom（不对称碳原子）. Other aglycones of flavonoids haven’t optical rotation.■The glycosides of flavonoid（黄酮苷类）have optical rotation for the saccharide, levo-rotatory （左旋）Ⅲ. Solubility 溶解性（1）游离黄酮类化合物①Flavone, flavonol and chalcone are plane molecular and have big intermolecular tractive force, so they difficulty dissolve in water.A环和B环与羰基形成一个大π键，而具有平面性。
浙江植物类黄酮测检测试剂盒介绍
浙江植物类黄酮测检测试剂盒介绍检测原理试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被的微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。
颜色的深浅和样品中的类黄酮(Flavonoids)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3、植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。
4、保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品酶标仪（450nm）高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，终结果乘以5才是样本实际浓度。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1.25、2.5、5、10、20 mg/L 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
黄酮类化合物
2、碱性：吡喃酮环上氧原子具有未共用电子对
黄酮类成分 碱 性
H+
H2O
黄酮类化合物 + 铝盐试剂 鲜黄色（有荧光） ， ， ， 4 -OH黄酮醇和7，4 -二OH黄酮醇显天蓝色荧光
5-羟基黄酮铝络合物
黄酮醇铝络合物
锆盐 – 枸橼酸反应：（此反应常用于检识C3和C5有无-OH）
C3—OH黄酮类 + 锆盐试剂 C5—OH黄酮类 + 锆盐试剂 2%枸橼酸 黄色 黄色 （不褪色） 2%枸橼酸 黄色 褪色
双苯吡酮类基本结构：
1、）颜色与形态 二氢黄酮、二氢黄酮醇为无色结晶 其他黄酮类： 呈黄色或淡黄色结晶体。 颜色与结构的关系：
（1）羟基或甲氧基在5、6、 3` 位时，对着色 影响较小；在7 ，4`位时，使颜色加深；（2）C2-C3为单键时为无色（3）异黄酮呈淡黄或无色 （4）花色素在不同PH碱液呈不同颜色
带II
MeOH max
240—280 nm 由A环的苯甲酰 基系统电子跃迁所 引起的吸收。
2、从UV光谱推测黄酮类化合物的结构类型
下一张
3、A环、B环上含氧取代基对UV光谱的影响
4、利用诊断试剂推断黄酮类羟基的位置 （1）常用的诊断试剂 a.. NaOMe b . NaOAc c . NaOAc/ H3BO3 d . AlCl3或AlCl3/ HCl (2)推断方法 将“ 样品 + MeOH” 和“ 样品 + MeOH + 诊断试剂 ” 两者光 谱作比较,根据带I的位移 推测羟基的位置。（P158）
• 分离黄酮苷元时，主要靠吸附作用，苷 元上酚羟基的数目越多，越难洗脱。 • 分离黄酮苷时，主要靠分子筛性质，按 分子量由大到小的顺序出柱。
黄酮类鉴定试剂
黄酮类鉴定试剂（1）盐酸－镁粉试剂检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物。
取lml样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红－紫色为阳性反应。
（2）Shinoda试剂采用含2％锌粉（W／W）－硅胶薄层板，展层后喷20％盐酸溶液，黄酮（醇）类呈红紫色。
（3）三氯化铝试剂检查具有邻二酚羟基或3－羟基、4－酮基或5－羟基、4－酮基的黄酮类化合物。
1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。
喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。
也可在滤纸上和试管中进行。
（4）中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。
饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。
取1ml样品的乙醇溶液，加1～2滴试剂，产生黄色沉淀。
（5）锆－柠檬酸试剂检查具3－羟基或5－羟基的黄酮类化合物。
溶液I：2％二氯氧锆甲醇溶液。
溶液Ⅱ：2％柠檬酸甲醇溶液。
取1mg样品，用甲醇溶解，加入溶液I lml，呈鲜黄色示有3－羟基或5－羟基；再加入溶液Ⅱ1m1，黄色不褪，示有3－羟基；黄色褪去，加水稀释后变为无色，示无3－羟基，但有5－羟基。
也可在滤纸上进行，得到的锆盐络合物多呈黄绿色，并具荧光。
（6）氨性氯化锶试剂检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。
溶液I：1％氯化锶甲醇溶液。
溶液Ⅱ：氨蒸气饱和的甲醇溶液。
取1mg样品的甲醇溶液，加入3滴溶液I，再加3滴溶液Ⅱ，产生绿－棕－黑色沉淀为阳性反应。
（7）醋酸镁试剂检查黄酮类、二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物。
1％醋酸镁甲醇溶液。
在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液，挥去醇后，点l滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。
显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌。
（8）硼氢化钾试剂检查二氢黄酮类化合物。
2％四氢硼钾的甲醇溶液。
取样品1～2mg溶于甲醇中，加等量试剂lml后，加数滴盐酸，呈红-紫红色为阳性反应。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
货号：MS1506 规格：100管/96样植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
测定原理：
在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在510nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器：
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：60%乙醇，自备。
试剂一：液体1mL×1管，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1管，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
类黄酮提取：
将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.02g，加入2mL提取液，60℃振荡提取2h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
类黄酮含量计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996
类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02×V样÷(V样÷V样总×W)
第1页，共2页
= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W
V样总：加入提取液体积，2.5mL； V样：反应中样品体积，0.108mL； W：样品质量，g b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 2.51x+0.0007，R2 = 0.9996
类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷2.51×V样÷(V样÷V样总×W)
= 0.797×（ΔA -0.0007）÷W
V样总：加入提取液体积，2mL；V样：反应中样品体积，0.108mL；W：样品质量，g
最低检出限为10µg/g。
第2页，共2页。