血球计数板的使用.ppt
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血球计数板的使用通用课件
在数据解读过程中，某些异常值可能被忽 略或误判，这会影响最终结果的准确性。
05
血球计数板的发展趋势与展望
技术创新与改进
自动化技术
通过引入自动化技术，提高血球 计数板的计数效率和准确性，减
少人为误差。
高分辨率成像
采用高分辨率成像技术，使计数 板能够捕捉更细微的结构和细胞
特征。
智能化分析
利用人工智能和机器学习算法， 实现血球计数板的智能化分析，
提高分析效率和准确性。
应用领域的拓展
临床诊断
血球计数板在临床诊断中发挥着重要作用，随着技术的不断改进 ，其在临床上的应用将更加广泛。
生物研究
血球计数板在生物学、免疫学和病理学等领域的研究中也有广泛应 用，未来将有更多相关领域得到拓展。
药物研发
血球计数板在药物研发过程中可用于监测药物对血细胞的影响，为 新药研发提供有力支持。
操作经验不足
新手操作员可能由于经验不足而忽略 某些操作细节，导致计数结果不准确 。
缺乏培训
未接受过血球计数板使用培训的人员 可能不了解正确的操作步骤和注意事 项，导致操作不规范。
忽略操作细节
某些操作员可能过于自信，忽略了一 些看似微不足道的细节，如清洁计数 板或确保镜筒对准等，这些细节都可 能影响计数的准确性。
未来发展方向
1 2 3
标准化与规范化
未来血球计数板的发展需要进一步标准化和规范 化，以确保不同设备之间的可比性和互操作性。
个性化医疗
随着个性化医疗的发展，血球计数板将更加注重 个体差异和特殊需求，为患者提供更加精准的诊 断和治疗方案。
跨界融合
未来血球计数板的发展将与其他医疗设备和技术 进行跨界融合，形成更为完整的医疗解决方案， 提高医疗服务的整体水平。
血球计数板使用课件-高二上学期生物人教版(2019)选择性必修2
连续培养7天，每天用显微镜和血球计数板 计数出酵母菌种群密度。（显微计数法）
实验步骤
① 将10mL无菌马铃薯培养液或肉汤培养液加入试管中； ② 将酵母菌接种入试管中的培养液中混合均匀； ③ 将试管在28℃条件下连续培养7d； ④ 每天取样计数酵母菌数量； 每天同一时间计数
⑤ 分析结果，得出结论。
逐个计数很困难，采取抽样检测的方法。
现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个 小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 ▲个／mL
解析 ：酵母细胞个数／1mL＝ 80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数 ＝n/ 80×400×10000×10＝5n×105
• 例3（2008江苏高考31．）
（4）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液
解析 ：根据公式：5×400×10000×10＝2×108
• 例2：检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法 检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管 吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余 液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳 液体的总体积为0．1 mm3。
1．镜检计数室。在加样前先对计数板的计数室进行镜检。 若有污物，则需清洗，吹干后才能进行加样； 2．加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用 的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边 缘，让培养液自行缓缓渗入（防止产生气泡）；充入细胞悬 液的量不能太多，多余培养液需用滤纸吸去，盖玻片上的培 养液也需用滤纸吸取。 3．计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到 计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下 找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。 每一天要在同一时间计数。
《血球计数板使用》课件
01
02
03
04
计数结果应及时记录并核对， 确保数据的准确性和完整性。
对于异常数据应进行复核或重 新取样，避免误差的积累。
在数据解读时应结合实际情况 进行分析，避免片面或主观的
判断。
对于误差的控制应采取有效的 措施，如采用合适的取样方法
、提高操作技能等。
04
血球计数板应用实例
临床应用实例
诊断疾病
《血球计数板使用》PPT课件
目录
• 血球计数板简介 • 血球计数板操作步骤 • 血球计数板使用注意事项 • 血球计数板应用实例 • 血球计数板的发展趋势与展望
01
血球计数板简介
血球计数板的结构
血球计数板由一块载玻片和两个 盖玻片组成，载玻片上刻有方格 ，每个方格分为9个中格，共计
162个小格。
04
稀释样本
将待测样本进行适当稀释，以 便于计数。
染色处理
根据实验要求，对稀释后的样 本进行染色处理。
滴加样本
使用吸管或移液器将染色后的 样本滴加到血球计数板的凹槽
中。
覆盖盖玻片
轻轻覆盖盖玻片，确保没有气 泡产生，然后进行显微镜检查
。
数据分析阶段
显微镜检查
使用显微镜观察血球计 数板，记录各种血细胞
提高医疗效率
降低医疗成本
血球计数板的智能化和自动化将大大 提高医疗效率，减轻医护人员的工作 负担。
血球计数板的优化和普及将降低医疗 成本，减轻患者经济负担，促进医疗 服务的普及和公平。
促进医疗技术创新
血球计数板的发展将推动医疗技术的 不断创新和发展，提高医疗质量和安 全性。
THANK YOU
感谢各位观看
药物研发
血球计数板的使用
•
• 样品中的菌数/ml= •
A1+A2+A3+A4+A5
80
X
?
X 稀释倍数
注意事项:
• 1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母 凝聚沉淀。 • 2、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细 胞大小的一半时，即可作为两个菌体计 数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母 细胞。 • 3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的 上方线及左方线上的菌体。
•计数室刻度有2种 •一种是 25中格X16小格 另一种为 16中格X25小格 •它们都是由400个 小格组成。
• 血球计数板的分区与分格
* * # #
# * *
#
#
• 例一 • 1大格=16中格 • =16 X 25小格 • =400小格
ห้องสมุดไป่ตู้
例二 1大格=25中格 =25 X 16小格 =400小格
结果记录：
• 微生物名称 总菌数 个/ml
第一个 第二个 第三个 第四个 第五个 中格 第一次 中格 中格 中格 中格
第二次 第三次
平均
血球计数板的构造（25×16）
放大后的网格
放大后的计数室
• 4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方 线及左方线上的菌体。 • 5、计算方法： • 样品中菌数/ml=? • 若本实验采用25 x 16规格，要计数的全部小 格即?个小格。 • 设：每个中方格的菌数为A，则 • 每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80 • 计数室的容积？
微生物血球计数板直接计数法
此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行 测定。它观察在一定的容积中的微生物的个 体数目，然后推算出含菌数，包括死活细胞 均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。 这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形 态个体较大的菌体或孢子。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法
血球计数板是一种常用的实验仪器，用于计算血球数量。
具体的计数方法如下：
1. 准备工作：首先，确保血球计数板干净，无污染。
可用洗涤剂和双蒸水进行清洗和冲洗，然后用无纹纸巾擦干。
2. 取血样：使用无菌针头采集一定量的血液样本，通常使用的样本量为0.02毫升。
3. 加样：将血液样本滴入血球计数板的计数区。
滴落的血液应均匀地分布在计数区的每个小方格内。
4. 观察：视觉放大镜或显微镜的帮助下，通过目镜观察计数区的血球数量。
5. 计数：随机选择若干个小方格，计算这些方格中血球的数量。
一般使用的计数面积为3个或4个方格。
6. 计算：将所选方格中的血球数量相加，然后乘以血球计数板的稀释倍数和倒干涉系数。
根据计算公式，可得出血球的浓度，常用单位为每立方毫米的血液中血球的数量。
7. 结果：将最终计算出的血球浓度记录下来，并报告给相关的医务人员或研究人员。
使用血球计数板进行血球计数时，需要严格按照操作规程进行，
避免出现污染或操作错误。
在完成计数后，要及时清洗血球计数板，以备下次使用。
生化实验血球计数板法
• 2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀 释。
• 3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（ 终浓度0.04%）
• 4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞.
• 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染 呈无色透明状。
• 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细 胞总数+死细胞总数）×100%
血球计数板法
0.10 mm：表示盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm。
1/400 mm2：表示每个小格的面积。 （XB.K.25含义：中间的大格，分成了25个中格，每个中格又分 成16个小格。）
1个 大格
方法与步骤
• 1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻 片。从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计 数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网 后，再转换高倍镜观察并计数。
• 3、如用16 X 25计数板，只计四个角上中方格的 菌数。若是25 X 16的计数板，除计数四个角上的 中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样 品重复计数2~3次。计数时应不时调节焦距，才 能观察到不同深度的菌体。
• 4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线 上的菌体。
• 5、计数方法：
•
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下
拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
• 步骤：1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水 研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用 时。用PBS稀释至0.4%。（也可买Gibco的成品）;
稀释倍数
• 由于动物细胞比细菌体积大，可以直接计 数大格中的数目。每个大格的容积为0.1ul ，设1个大格中总细胞数为A，稀释倍数为B ，则：
• 3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（ 终浓度0.04%）
• 4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞.
• 5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染 呈无色透明状。
• 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细 胞总数+死细胞总数）×100%
血球计数板法
0.10 mm：表示盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm。
1/400 mm2：表示每个小格的面积。 （XB.K.25含义：中间的大格，分成了25个中格，每个中格又分 成16个小格。）
1个 大格
方法与步骤
• 1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻 片。从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计 数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网 后，再转换高倍镜观察并计数。
• 3、如用16 X 25计数板，只计四个角上中方格的 菌数。若是25 X 16的计数板，除计数四个角上的 中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样 品重复计数2~3次。计数时应不时调节焦距，才 能观察到不同深度的菌体。
• 4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线 上的菌体。
• 5、计数方法：
•
台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下
拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。
• 步骤：1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水 研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用 时。用PBS稀释至0.4%。（也可买Gibco的成品）;
稀释倍数
• 由于动物细胞比细菌体积大，可以直接计 数大格中的数目。每个大格的容积为0.1ul ，设1个大格中总细胞数为A，稀释倍数为B ，则：
实验八 血球计数板的使用
四、实验内容与操作步骤
(一)血球计数板的使用 一
1. 计数样品制备：按无菌操作要求，用1mL无菌吸管自稀释 倍的酵母菌 计数样品制备：按无菌操作要求， 无菌吸管自稀释10倍的酵母菌 无菌吸管自稀释 培养液试管中吸取菌液1mL移人 移人9mL无菌水中，充分混匀，即得稀释 无菌水中， 培养液试管中吸取菌液 移人 无菌水中 充分混匀， 100倍的计数样品。原则以每个小格菌数为 倍的计数样品。 个为宜来记数进行稀释。 倍的计数样品 原则以每个小格菌数为5-10个为宜来记数进行稀释。 个为宜来记数进行稀释 2. 清洗计数板：将血球计数板及专用的厚盖玻片用药棉沾取 ％酒精轻轻 清洗计数板：将血球计数板及专用的厚盖玻片用药棉沾取95％ 擦洗，然后用自来水冲洗，再让其自然晾干或吸水纸吸干。 擦洗，然后用自来水冲洗，再让其自然晾干或吸水纸吸干。 3. 滴加菌液：将盖玻片盖在计数板的方格网上，用无菌吸管 或无菌玻棒 滴加菌液：将盖玻片盖在计数板的方格网上，用无菌吸管(或无菌玻棒 或无菌玻棒) 吸取少许稀释100倍的酵母菌液，从盖玻片的一端注入，使菌液沿二玻 倍的酵母菌液， 吸取少许稀释 倍的酵母菌液 从盖玻片的一端注入， 片间渗入，勿使菌液流到盖玻片或两边平台上， 片间渗入，勿使菌液流到盖玻片或两边平台上，多余的菌液则用吸水纸 吸去。 吸去。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
五、思考题
1．计算每毫升(每克 所测样品的含菌数 ．计算每毫升 每克 所测样品的含菌数? 每克)所测样品的含菌数 2．用血球计数板测定微生物细胞数量有何 ． 优缺点?
中格
25X16规格 规格
一个中格的小格
在进行观察计数 时，由于菌体在血球 计数板上处于不同的 空间位置， 空间位置，要在不同 的焦距下才能看到。 的焦距下才能看到。 所以观察时必须不断 调节微调螺旋方能数 到全部菌体， 到全部菌体，防止遗 漏。如菌体位于小格 的线上， 的线上，计数时则数 上线不数下线， 上线不数下线，数左 线不数右线，这样做， 线不数右线，这样做， 即可减少误差。 即可减少误差。酵母 菌的芽体细胞达到母 细胞大小一半时， 细胞大小一半时，即 可作为两个菌体计算， 可作为两个菌体计算， 每个样品应重复计数2每个样品应重复计数 3次(每次数值差数不应 次 每次数值差数不应 过大，否则应重测)再 过大，否则应重测 再 取其平均值。 取其平均值。
1血球计数板操作规程
耶赛明（南通）保健有限公司目的 Purpose规范计数板的标准操作，确保设备的操作有章可循。
范围 Scope适用于计数板的日常使用。
职责 Responsibility质检部的检验员负责遵守该规程，质检部负责人负责监督与管理。
内容Procedure1 概述1.1 测定微生物细胞和动物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
1.2 显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等1.3 血球计数板1.3.1 是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
1.3.2 中间平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方网格（图1）。
图1：血细胞计数板构造（一） 图2：血细胞计数板构造（二）1.3.3 每个方网格分为9个大方格，正中间的大方格为计数室，计数室内的刻度有两种：一种是每个计数室内分为16个中方格（中方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格（图2）；另一种是每个计数室内分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数室内都由400个小方格组成。
1.3.4 计数室边长为1mm，则计数室的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
1.3.5 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物或细胞的数量，再换算成每毫升样液（或每克样品）中微生物或细胞的数量。
已知：1cm3体积=10mm×10mm×10mm=1000mm3=1ml；所以：1cm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。
血球计数板的使用(1-2)
直接法——血球计数板法
原理：将1mm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中均 匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换算成 单位体积中的细胞数。 适用范围：个体较大细胞或颗粒，如血球、酵母菌等。不 适用于细菌等个体较小的细胞，因为（1）细菌细胞太小， 不易沉降；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距 离。 特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌 悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。
• 生长繁殖很难区分，测量方法局限
常以细胞数目增加（繁殖）衡量生长
一般所指生长是群体生长
描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况，需 选用不同的测定指标。 （一）微生物细胞数目的检测法 直接法（血球计数板法） 间接法（平板计数法、膜过滤法） （二）微生物生长量和生理指标测定法 直接法（干重法，测体积法） 间接法（比浊法，生理指标法）
专业名称：食品药品监督管理 课程名称：食品微生物检测技术
课前总结
• 单细胞微生物 生长 — 细胞质量增加、体积增大 繁殖 — 细胞分裂，数目增加
• 丝状微生物 生长 — 菌丝伸长、分枝 繁殖 — 孢子或菌丝断裂，数目增加
个体生长与群体生长
• 个ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ生长
个体繁殖
群体生长
• 群体生长
个体生长 + 个体繁殖
特点：快速、简便；但易受干扰。
间接法——生理指标法
测含氮量 蛋白质是细胞的主要物质，含量稳定，而氮是蛋白质的主要成分，通
过测含氮量就可推知微生物的浓度。 一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%，根据其
含氮量再乘以6.25，就可测得粗蛋白的含量。 其他方法
含碳、磷、DNA、RNA、耗氧量、消耗底物量、产二氧化碳、产酸、 产热、粘度等，都可用于生长量的测定。
血球计数板的使用-图文
对每个样品计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2 N3=(n3-1+n3-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3
N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
x个 = N/(5×16) ×16×25个
1cm3
(1mm × 1mm × 0.1mm÷1000)cm3
x = N/(5×16) ×16×25个× 1cm3 × 1000÷ (1mm × 1mm × 0.1mm)
=50000 N
②用血球计数板对藻细胞进行计数 的方法与步骤：
ⅰ检查计数室 先用显微镜对计数板的计数室进行镜检是否干净
如果规格为25格×16格的计数板统计计数池中央 大方格内四角及中央中格内(即80个小方格)的单 胞藻数，并记录。
计数时，小心移动载物台，从上到下，由左及右 又由右及左依次计数各小格内的细胞数。一般可 采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则 处理。凡压方格的上线和左线的细胞，统一算此 方格内的细胞，而压方格的下线和右线的细胞， 统一不算此方格内的细胞。
。若有污物，则需用清水清洗，吹干，用擦镜纸 擦拭干净。
盖玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用时用 眼科镊取出，放在滤纸上吸水，用擦镜纸擦拭干 净。
将盖有盖玻片的计数板放在显微镜的载物台上， 调焦，用低倍镜找到计数区检查是否干净。
从试管中吸出培养液进行计数之前，要将 试管轻轻震荡几下，这样使单胞藻分布均 匀，防止单胞藻凝聚沉淀，提高计数的代 表性和准确性，求得的培养液中的单胞藻 数量误差小。
《血球计数板使用》课件
血球计数板使用心得：如何提高计数准确性和效率
血球计数板使用心得：如何避免常见错误和问题
感谢观看
汇报人：PPT
计数室：有网格线，便于计数细胞
网格线：横竖交叉，形成小方格，便于定位细胞
计数室底部：有凹槽，便于液体流动和细胞分布均匀
计数室侧面：有刻度，便于测量细胞大小和数量
血球计数板的原理
血球计数板是一种用于计数血液中红细胞、白细胞和血小板的工具。
血球计数板的原理是利用光学显微镜观察血液样本，通过计数板上的网格线来计算血液中的细胞数量。
血球计数板使用前需要清洁，避免污染
血球计数板使用过程中，避免用力过猛，以免损坏
血球计数板使用后，需要及时清洗，避免细菌滋生
血球计数板使用过程中，如果出现计数不准确，需要重新调整计数板位置或更换计数板
血球计数板使用实例
05
实验方案设计
实验注意事项： a. 确保血样和染色剂的浓度合适 b. 避免血样和染色剂的污染 c. 确保显微镜的焦距和照明条件合适 d. 计数时要准确、细致，避免遗漏或重复计数
细胞染色
准备血球计数板和染色液
将染色液倒入血球计数板中
将血液样本滴入染色液中
轻轻搅拌，使血液样本与染色液充分混合
静置一段时间，使细胞染色
观察染色后的细胞，进行计数和分类
计数操作
准备血球计数板和血液样本
将血液样本滴入血球计数板
轻轻晃动血球计数板，使血液均匀分布
观察血球计数板，记录红细胞、白细胞和血小板的数量
血球计数板的网格线分为主网格线和次网格线，主网格线用于计数红细胞和白细镜和血液样本，通过观察和计数来获取血液中的细胞数量。
血球计数板的种类
手动血球计数板：需要人工操作，适合初学者使用
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N2=(n2-1+n2-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n2-1
n2-2
N2=(n2-1+n2-2)/2
N3=(n3-1+n3-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n3-1
n3-2
N3=(n3-1+n3-2)/2
将计数板及盖玻片用流水冲洗，擦干，重 复上述步骤，对每个样品可计数三次，再 取其平均值。
x个 = N/(5×16) ×16×25个
1cm3
(1mm × 1mm × 0.1mm÷1000)cm3
x = N/(5×16) ×16×25个× 1cm3 × 1000÷ (1mm × 1mm × 0.1mm)
=50000 N
②用血球计数板对藻细胞进行计数 的方法与步骤：
ⅰ检查计数室 先用显微镜对计数板的计数室进行镜检是否干净。
注意，当藻液浓度高时，为了便于计数，可 将藻液用消毒海水稀释后进行计数。
在计数有鞭毛或有运动性的藻类时，可先吸 取定量的藻液，滴加鲁哥氏碘液（1000毫升 藻类用15毫升的鲁哥氏液固定）进行固定， 然后添加消毒海水稀释后计数。
将计数板连同盖玻片一起取下，用细口胶 头滴管吸取稀释后的摇匀的单胞藻悬液， 迅速将吸管尖靠在计数池上盖玻片的边缘， 略挤胶头滴管让培养液利用液体的表面张 力，自行渗入。
N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2 N3=(n3-1+n3-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3
将同一样品的计数结果，取平均值。代入下式， 求算单胞藻的密度：
N小格平均每小格内的细胞数=N/(5×16) 设每毫升中有x个单胞藻
x个 1cm3
N小格×16×25个 (1mm × 1mm × 0.1mm÷1000)cm3
1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3
20mm×20mm×0.25mm=100mm3
25×16型的计数板
计数池中央的大格又 被双线划分成25个中 格，其中的每个中格 又被单线划分成16个 小格，中央大方格由 25×16=400个小方格 组成。
在血球计数板上，刻 有一些符号和数字(见 图一)，其含义是： XB-K-25为计数板的型 号和规格，表示此计 数板分25个中格； 0.10mm为盖上盖玻片 后计数室的高； 1/400mm2表示计数室 面积是1mm2，分400 个小格，每小格面积 是1/400 mm2。
如果一个小方格内单胞藻过多，难以数清，应当 对培养液进行稀释以便于单胞藻的计数。
具体方法是：摇匀试管，取1mL单胞藻培养液， 加入成倍的无菌水（消毒海水）稀释，稀释n倍后， 再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。 以每小方格内含有4—5个单胞藻细胞为宜。特别 是在培养后期的样液需要稀释后计数。
血球计数板的使用
①血球计数板的原理和构造 ②方法与步骤
①血球计数板的原理和构造
Ⅰ构造 血球计数板是一种专门用于计算较大单细
胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻 片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下 凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两半，每半边上面刻有一个方格网。方 格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一 个大方格为计数室。这一大方格的长和宽 各为1mm，深度为0.1mm，其容积为 0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计 数板。
对每个样品计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2 N3=(n3-1+n3-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3
N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
把中央大方格的中方格再分 成小方格的分割线并不只 局限于中央大方格内，而 是一直延伸到正方形凹槽 的边缘，所以在其延长线 上的4个大方格中分割线 显得密集。
25×16型的计数板一 般计数四个角和中央 的五个中方格 （5×16=80个小方格） 的细胞数。
Ⅱ血球计数板的原理
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算，
如果规格为25格×16格的计数板统计计数池中央 大方格内四角及中央中格内(即80个小方格)的单 胞藻数，并记录。
计数时，小心移动载物台，从上到下，由左及右 又由右及左依次计数各小格内的细胞数。一般可 采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原 则处理。凡压方格的上线和左线的细胞，统一算 此方格内的细胞，而压方格的下线和右线的细胞， 统一不算此方格内的细胞。
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
若有污物，则需用清水清洗，吹干，用擦镜纸擦 拭干净。
盖玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用时用 眼科镊取出，放在滤纸上吸水，用擦镜纸擦拭干 净。
将盖有盖玻片的计数板放在显微镜的载物台上， 调焦，用低倍镜找到计数区检查是否干净。
从试管中吸出培养液进行计数之前，要将 试管轻轻震荡几下，这样使单胞藻分布均 匀，防止单胞藻凝聚沉淀，提高计数的代 表性和准确性，求得的培养液中的单胞藻 数量误差小。
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算，将计数板及盖玻片用流水 冲洗，吹干，擦净，重复上述步骤，对每 个样品计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
N2=(n2-1+n2-2)/2
样品流入的量以充满盖玻片下面的空间为 宜，盖玻片下面不能有气泡存在，否则会 造成计数不准。多余的藻液会流入H形的凹 沟中。
样品添加到计数池后，静置5min。使藻细胞沉降， 否则，细胞呈悬浮状态，不处于同一平面上，给 计数造成不便。待单胞藻全部沉降到计数室底部 后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下 找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察，仔 细调焦，同时调节光栅，必要时调节光源和反光 镜角度，直至细胞和纵横格线都清楚。计数并记 录。