大肠杆菌及其检验
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2、分离
3、生化试验
1）三糖铁琼脂(TSI) 2）靛基质 3）半固体 4）pH7.2尿素琼脂 5） KCN肉汤
TSI低层+，H2SKCN -，尿素 -
4、生化试验 5、结果报告
综合以上生化试验、血清学试验作出报告。
五、大肠杆菌 O157:H7的检验
4、生化试验
1） 靛基质试验 2） MR-VP试验 3） 柠檬酸利用试验
5、结果报告
大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖 产酸产气,生化试验为＋＋－－或－＋－－ ， 再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克 (毫升)样品中大肠杆菌MPN值。
四、致泻性大肠杆菌的检验
1、增菌
以无菌手续称取检验25g，加在225mL营养肉 汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂 磨碎。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌 肉汤内，于42℃培养18h。
3、EMB平板
❖ 取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平 板,36±1℃培养24±2h。
❖ 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型 菌落。
❖ 如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌 落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可 疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼 脂斜面上,36±1℃培养18～24h。
大肠杆菌及其检 验
一、大肠杆菌的生物学特性
1、简介 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科， 归属于埃希氏菌属，大肠杆菌为人和动物肠道中的 常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道 外感染。
2、形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革 兰氏阴性杆菌
3、培养特性 ❖ 由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺
盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。 ❖ 最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能
生长，生长温度范围为15-46℃。
（1）光滑型 （2）粗糙型
4、生化反应
大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽 胞、甘露醇、木胶糖、阿拉伯胶等产酸产气。
血性结肠炎
三、大肠杆菌的检验方法
1、样品制备 以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释 剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～ 2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研 磨的方法代替)。从制备样品匀液至稀释完毕, 全过程不得超过15min。
2、LST和EC初步筛选
❖ 对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释 液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月 示)(LST)肉汤,每管接种1mL。将接种管置于36±1℃培 养48±2h。 ❖ 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生, 用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤 管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管 在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。
一般包括四种：
❖ 肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：引起婴幼儿和ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ游者 腹泻，出现轻度水泻，也可呈严重的霍乱样症状。
❖ 致病性大肠杆菌（EPEC）：是婴儿腹泻的主要病原 菌，有高度传染性，严重者可致死；成人少见。
❖ 出血性大肠杆菌（EHEC）：O157：H7 ❖ 侵袭性大肠杆菌（EIEC）：引起散发性或暴发性出
5、抗原构造
比较复杂，主要由菌体O抗原、鞭毛H抗原、夹膜K抗原 组成。
6、抵抗力
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟 或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。
在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪 便中存活更久。
二、致泻性大肠杆菌简介
某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，与人 类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠 杆菌（enterovirulent E. coli ）。
3、生化试验
1）三糖铁琼脂(TSI) 2）靛基质 3）半固体 4）pH7.2尿素琼脂 5） KCN肉汤
TSI低层+，H2SKCN -，尿素 -
4、生化试验 5、结果报告
综合以上生化试验、血清学试验作出报告。
五、大肠杆菌 O157:H7的检验
4、生化试验
1） 靛基质试验 2） MR-VP试验 3） 柠檬酸利用试验
5、结果报告
大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖 产酸产气,生化试验为＋＋－－或－＋－－ ， 再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克 (毫升)样品中大肠杆菌MPN值。
四、致泻性大肠杆菌的检验
1、增菌
以无菌手续称取检验25g，加在225mL营养肉 汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂 磨碎。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌 肉汤内，于42℃培养18h。
3、EMB平板
❖ 取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平 板,36±1℃培养24±2h。
❖ 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型 菌落。
❖ 如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌 落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可 疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼 脂斜面上,36±1℃培养18～24h。
大肠杆菌及其检 验
一、大肠杆菌的生物学特性
1、简介 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科， 归属于埃希氏菌属，大肠杆菌为人和动物肠道中的 常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道 外感染。
2、形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革 兰氏阴性杆菌
3、培养特性 ❖ 由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺
盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。 ❖ 最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能
生长，生长温度范围为15-46℃。
（1）光滑型 （2）粗糙型
4、生化反应
大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽 胞、甘露醇、木胶糖、阿拉伯胶等产酸产气。
血性结肠炎
三、大肠杆菌的检验方法
1、样品制备 以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释 剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～ 2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研 磨的方法代替)。从制备样品匀液至稀释完毕, 全过程不得超过15min。
2、LST和EC初步筛选
❖ 对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释 液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月 示)(LST)肉汤,每管接种1mL。将接种管置于36±1℃培 养48±2h。 ❖ 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生, 用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤 管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管 在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。
一般包括四种：
❖ 肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：引起婴幼儿和ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ游者 腹泻，出现轻度水泻，也可呈严重的霍乱样症状。
❖ 致病性大肠杆菌（EPEC）：是婴儿腹泻的主要病原 菌，有高度传染性，严重者可致死；成人少见。
❖ 出血性大肠杆菌（EHEC）：O157：H7 ❖ 侵袭性大肠杆菌（EIEC）：引起散发性或暴发性出
5、抗原构造
比较复杂，主要由菌体O抗原、鞭毛H抗原、夹膜K抗原 组成。
6、抵抗力
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟 或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。
在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪 便中存活更久。
二、致泻性大肠杆菌简介
某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，与人 类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠 杆菌（enterovirulent E. coli ）。