花粉生活力测定(终)
花粉活力测定
TTC法[2,4]又称氯化三苯基四氮唑染色法(2 3, 5一triphenyl tetrazoliun chloride)。
氯化三苯基四氮唑即红四氮唑,作为非萌发分析花粉生话力的方法,速度快也比较精确地反映花粉的活力红四氮唑是标准的氧化还原色素,水溶液无色,遇到活细胞里的脱氢酶接受氯离子,还原后变红生成不溶于水的三苯甲赝,呈红色。
I-IK染色测定法：此法常用于鉴定不含淀粉的不育花粉,凡染成蓝紫色的为发育好、活力强的花粉,呈黄褐色的为发育不良的花粉。
过氧化物酶测定法具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱。
过氧化物酶测定法
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱［13］。
醋酸洋红法测定花粉活力[14]
取少量花粉置于载玻片上,然后滴加1滴1%的醋酸洋红溶液。
室温下静置5 min观察。
统计染成红色的花粉粒所占比率。
[13]赵鸿杰，乔龙巴图，殷爱华等．3种山茶属植物花粉活力测定方法的比较（Ｎ）．中南林业科技大学学报．2010，30（3）．
[14] 盖伟玲，盖树鹏，郑国生．牡丹新鲜花粉活力的快速测定(J)．育苗科技Seedling Cultivation．2011(5)。
实验四花粉生活力的测定
实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法;二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力;花粉生活力测定在杂交工作中很重要,尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时,花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程,因此在杂交前应检验花粉的生活力,以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败;三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾KI、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等;五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法;1. 形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态,根据花粉的典型性如具有正常的大小、形状、色泽等判断花粉的生活力,即形态正常的花粉有生活力,而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力;具体方法：将花粉置于载玻片上,在显微镜下观察3个不同视野,要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上,计算正常花粉粒占总数的比率;此法简便易行但准确性差,一般只用于测定新鲜花粉的生活力;2. 染色法1 碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多,而不正常的花粉则少;据此,可用化学物质染色,根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别;通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色,而发育不良畸形花粉则不积累淀粉,当I-KI染色时呈黄褐色;②I-KI溶液：取g KI溶于5～10mL蒸馏水中,然后加入g I2待全部溶解后,再加蒸馏水至200mL,贮于棕色瓶中备用;③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上,加一滴蒸馏水,用镊子使花粉散开,再加一滴I-KI溶液,盖上盖玻片置于显微镜下观察;凡被染色呈蓝色表示具有生活力,呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉;为了保证实验的准确性,要求观察不同的3个视野,求其平均值,统计花粉生活力;2 蓝墨水染色法①蓝墨水溶液：正常购买的蓝墨水稀释10倍;②具体方法：取少量花粉撒于载玻片上,加一滴蒸馏水,用镊子使花粉散开,再加一滴蓝墨水溶液,盖上盖玻片置于显微镜下观察;凡被染色呈无色时表示具有生活力,呈蓝黑色者为发育不良生活力弱的花粉;为了保证实验的准确性,要求观察不同的3个视野,求其平均值,统计花粉的生活力;3. 培养基发芽法：人为的创造适合于花粉发芽的环境条件,以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱;1 培养基的制作与接种10%蔗糖+%硼酸+1%琼脂,溶于蒸馏水中,加热煮沸即可;将配好的培养基保持在40℃的水浴锅中保温,即不凝固;用玻璃棒蘸一滴培养基滴在载玻片的凹玻片内,然后用头发沾少量花粉条播;将载玻片放在垫有湿润滤纸的培养皿内或倒扣在培养皿上,并贴上标签花粉品种名称、姓名和日期,将培养皿放于25℃暗培养24h后统计发芽率;2 观察记数在显微镜下观察,每品种观察不同的3个视野,每个视野花粉粒数目≥20粒,求平均值,统计花粉的发芽率;花粉发芽的标准,以花粉管伸长超出花粉直径为准;四、作业1．绘出花粉发芽前、后的形态特征图;2．统计碘-碘化钾染色法和蓝墨水染色法测定花粉生活力的结果,并填写表1;3. 统计培养基发芽法测定花粉生活力的结果,并填写表2;4. 比较花粉生活力测定的不同方法,并分析引起花粉生活力差异的具体原因;表1 染色法测定花粉生活力结果统计表表2 培养基发芽法测定花粉生活力结果统计表。
花粉活力测定的3种办法
精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】-KI300ml。
???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力测定方法是一种评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的指标。
它通过采用定量和定性的方法来测定人体对花粉的反应和影响，以便为患者提供相应的治疗和干预措施。
下面我将详细介绍花粉生活力测定方法的原理和步骤。
首先，花粉生活力测定方法需要进行花粉源的采集和制备。
花粉源可以是空气中的自然环境采集或人工培养的花粉。
采集后，需要将花粉样本进行处理和制备，包括去除杂质和保持花粉的活力。
其次，花粉生活力测定方法中常用的技术是皮试和血清学检测。
皮试是一种常用的检测方法，主要通过在患者皮肤表面划一道小口，然后将一定浓度的花粉溶液滴在皮肤上，观察皮肤是否出现过敏反应，如红肿、瘙痒等。
这种方法简单快捷，可以初步筛查患者的过敏反应。
血清学检测是通过采集患者的血液样本，检测血清中花粉特异性IgE抗体水平来评估过敏反应的程度。
常用的检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA），这些方法可以检测到血液中特定花粉过敏原的抗体水平，并根据抗体浓度的高低来评估患者的过敏程度。
除了皮试和血清学检测，还可以进行生活质量评估。
这是一种主观的方法，通常通过问卷调查的方式，询问患者对花粉过敏的影响程度和日常生活质量的变化。
问卷通常包括患者的症状、疾病活动、工作和学习能力、社交活动和睡眠质量等方面的评估，以便评估花粉过敏对患者生活的影响。
最后，花粉生活力测定方法可以通过统计分析和数据处理来得出评估结果。
根据皮试和血清学检测的结果、生活质量评估和患者的症状表现等，可以综合评估花粉过敏的程度和生活质量的变化。
这些评估结果可以帮助医生为患者制定个性化的治疗方案，包括药物治疗、免疫疗法和生活调整等。
综上所述，花粉生活力测定方法是评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的一种指标。
通过采用皮试和血清学检测、生活质量评估等方法，可以全面分析患者的过敏反应和生活质量的变化，为患者提供针对性的治疗和干预措施。
这种方法对于花粉过敏的预防和管理具有重要的临床意义。
花粉生活力测定方法研究进展
花粉生活力测定方法研究进展摘要：总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词：花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体，在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象，也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中，研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难，为解决这一难题，保存花粉的活力成为重要手段，而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此，掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果，花粉生活力的检测方法可以分为四大类：①染色法；②萌发测定法；③田间授粉检测法；④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法1.1TTC染色法TTC即2,3,5-氯代三苯基四氮唑，它是一种氧化还原染料，水溶液无色。
基本原理是[1]：当TTC渗入细胞后，遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子，由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物，由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤：①配制PH为7.17的磷酸缓冲液。
称取0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于100ml的蒸馏水中，调整pH为7.17。
②TTC溶液配制。
依据不同植物称取0.02～1.0g的TTC溶于100ml的磷酸缓冲液中，于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上，加上一滴TTC溶液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，然后放置于35℃的恒温箱中染色15～20min。
④镜检。
于10×10倍镜下观察，凡具有活力的花粉被染成红色，部分丧失活力的呈现粉红色，无色的是的或不育的花粉粒。
凌春英,肖恩等的研究[2]得出常温、黑暗条件下用TTC染色12h可达到较好的观察效果，并认为TTC法是大花蕙兰和墨兰花粉活力测定便捷、有效的方法。
花粉生活力测定的实验反思
花粉生活力测定的实验反思花粉生活力测定是一种常用的实验方法，用于评估花粉颗粒的活力和生长能力。
在这个实验中，我们通过观察花粉萌发的情况、花管的生长情况等指标，可以了解花粉的活力和生长情况。
在实验中，我们使用了不同处理方法，比较不同处理组的结果，以便评估不同处理对花粉活力的影响。
在这次花粉生活力测定的实验中，我们首先收集了待测花粉样本，并进行了一系列前期处理，如消毒、分离等。
接下来，我们将花粉分别置于培养基上，在适当的温度下进行孵育。
孵育结束后，我们对不同处理组的花粉进行观察和记录。
实验中我们设置了多个处理组，包括对照组和不同处理组。
通过对照组和不同处理组的比较，我们可以评估不同处理对花粉活力的影响。
在实验中，我们注意到一些结果和问题，需要进行反思和探讨。
首先，我们应该更加严格控制实验条件，以确保实验的结果可靠和可重复。
例如，在实验过程中，应该精确测量和控制培养基的温度，以确保花粉得到适宜的环境。
此外，我们还应该注意保持培养基的湿度，以防止花粉干燥而影响萌发和生长。
其次，在实验设计方面，我们可以考虑增加更多的处理组和样本量，以提高实验的准确度和可靠性。
通过增加处理组和样本量，我们可以更全面、更准确地评估不同处理对花粉活力的影响，避免个别差异对实验结果的影响。
另外，我们还可以在实验中引入一些新的指标和测定方法，以更全面地评估花粉的活力和生长能力。
例如，我们可以通过测量花粉管长度和分支数量来评估花粉的生长情况，从而更全面地了解花粉的生长能力。
此外，我们还可以通过使用显微镜等设备来观察花粉细胞的构造和内部变化，以进一步了解花粉的活力和生长情况。
最后，在实验中还可以引入一些对照方法，以帮助我们更好地评估花粉活力。
例如，我们可以在实验中设置阳性对照组和阴性对照组，以验证我们实验结果的准确性和可靠性。
通过与阳性对照组和阴性对照组的比较，我们可以确保我们测定的花粉活力是正确的，并排除其他因素对实验结果的影响。
总之，对于花粉生活力测定的实验，我们应该对实验结果进行反思和探讨，以提高实验的准确性和可靠性。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
实验：园艺植物花粉生活力测定
天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：
（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。
有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒的活力和生长能力，是衡量植物繁殖成功的重要指标。
花粉生活力测定方法是一种用来评估花粉质量和活力的技术手段，对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
传统的花粉生活力测定方法主要包括花粉染色观察法、花粉萌发率测定法和花
粉活力染色法。
花粉染色观察法是将花粉染色后在显微镜下观察其形态和数量，从而评估花粉的活力和质量。
花粉萌发率测定法则是将花粉培养在适宜的培养基上，观察其萌发情况以评估花粉的活力。
花粉活力染色法则是利用染色技术来观察花粉内部的活力指标，如线粒体和细胞核的活跃程度。
随着科学技术的发展，现代的花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
比如，利用生物技术手段对花粉进行基因测序和分析，可以更准确地评估花粉的生活力和遗传信息。
同时，利用先进的显微镜和成像技术，可以对花粉的微观结构和形态进行更精细的观察和分析。
花粉生活力测定方法的发展不仅有助于科学家和植物育种者更好地了解植物的
繁殖机制和生长规律，也为农业生产和生态保护提供了重要的技术支持。
通过准确评估花粉的生活力，可以选择出高质量的花粉进行人工授粉或者种子生产，从而提高植物的繁殖成功率和产量。
此外，对花粉生活力的准确测定也有助于保护植物遗传资源，促进植物多样性的保护和利用。
总之，花粉生活力测定方法是一项重要的植物科学技术，它为我们深入了解植
物繁殖机制和提高农业生产效率提供了重要的技术手段和支持。
随着科学技术的不断进步，相信花粉生活力测定方法将会在未来发挥更加重要的作用。
花粉活力测定
花粉活力测定
一、实验原理：
TTC染色法——TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲潛（TTF）。
用TTC的水溶液浸泡花粉，使之渗入花粉内，如果花粉具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为红色的TTF；如果花粉死亡便不能染色；花粉生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据花粉染色的深浅程度可鉴定花粉的生命力。
二、实验仪器：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、毛笔、滤纸、培养皿、三角瓶、天平、烧杯、恒温箱、量筒、吸管
三、实验药品：0.5%TTC溶液、琼脂、硼酸、氯化钙、蒸馏水、蔗糖（浓度分别为5%、10%、15%、20%）
四、实验步骤：
TTC法：将采集到的花粉（虞美人、三色堇），取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC 溶液，搅匀后盖上盖玻片，并用清水做对照，置37℃恒温箱中，30min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
每片取3个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
五、实验结果：
TTC法：虞美人花粉活力——26.1%
三色堇花粉活力——23%
六、结果分析：
1、TTC法：三色堇花粉染色在30分钟时观察时基本没有染色，50分钟左右观察，才有明显染色的划分出现，原因可能是花粉对TTC的敏感度不同。
花粉生活力检测
植物花粉保存与花粉生活力的测定一、实验目的了解花粉生活力测定的一般方法，并掌握培养法测花粉生活力。
二、实验原理不同的植物成熟花粉的生命力长短不一，在自然状态下，成熟花粉有些存活仅数小时，有的课长达1个多月。
通过在干燥、低温、密封等的条件下保存，花粉的呼吸作用被抑制，生活力得以延长。
进行杂交人工授粉前，常对父母本花粉尤其是经过保存的花粉进行生活力测定。
其方法有：形态鉴定、TTC染色法鉴定、花芽萌芽鉴定等。
（1）形态鉴定除饱满、圆形的正常外，其他都不正常。
（2）TTC染色法鉴定脱氢辅酶存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（3）花芽萌发鉴定将花粉置于合适的培养基上进行培养，花粉即可萌发出花粉管，发芽率可作为花粉生活力的检测指标三、实验材料、药品和器具1、实验材料兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花2、药品和器具显微镜、凹式载玻片、培养皿、盖玻片、镊子、解剖针、蔗糖硼酸悬浮培养基四、实验内容1、花粉的保存（1）短期保存：低于4°C，冰壶中保存长期保存：（2）长期保存：干燥器中干燥24h，自由水含量低于1%，用石蜡封口，低于1°C的冰箱中保存2、花粉生活力的测定（花粉萌发鉴定法或称培养法）（1）用滴管滴1小滴蔗糖硼酸悬浮培养基于盖玻片上，注意不要滴到边缘，以免与载玻片凹面边缘接触。
(2)取兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花的雄蕊，将雄蕊在培养基里反复涂抹几次，让花粉散落在培养基表面。
(3)迅速将盖玻片翻转，放置于凹式载玻片上，让培养基悬浮在凹式载玻片的凹面处，注意不要让培养基接触凹面边缘。
(4)每一个植物做两个重复，放置在显微镜下观察花粉形态。
20min后，观察并花粉发芽状况。
五、实验结果将实验结果填入花粉生活力测定实验记录表处理重复视野Ⅰ视野Ⅱ合计花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%兰花毛豌豆重复Ⅰ70 65 92.8 65 60 92.3 135 125 92.6 重复Ⅱ80 76 95.0 74 70 94.6 154 146 94.8 合计150 141 94.0 139 130 93.5 289 271 93.8葛藤重复Ⅰ40 35 87.5 35 30 85.7 75 65 86.7 重复Ⅱ42 36 85.7 38 31 81.6 80 67 83.8合计82 71 86.6 73 61 83.6 155 137 88.4六、注意事项1、用滴管向盖玻片滴培养基时，要尽量滴在盖玻片中央，要避免液体培养基接触载玻片凹面边缘部分。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物繁殖的重要媒介，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
近年来，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也得到了不断的改进和完善。
传统的花粉生活力测定方法主要包括离体花粉萌发试验、花粉染色观察、花粉活力染色观察等。
这些方法虽然可以初步判断花粉的生活力，但存在着操作繁琐、结果不稳定、时间周期长等问题，限制了其在实际应用中的发展。
近年来，随着生物技术和显微镜技术的不断进步，新型的花粉生活力测定方法逐渐被引入。
比如，利用荧光显微镜观察花粉萌发情况，结合数字图像处理技术进行分析，可以快速、准确地测定花粉的生活力。
另外，利用生物标记技术对花粉进行标记，然后观察其在植物受精过程中的行为，也可以对花粉的生活力进行评估。
除了显微镜技术和生物标记技术，分子生物学技术在花粉生活力测定中也发挥了重要作用。
通过分析花粉中的基因表达情况、蛋白质组成等，可以更直观地了解花粉的生活力情况，为植物繁殖提供更准确的数据支持。
综上所述，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
新型的测定方法不仅提高了测定的准确性和稳定性，同时也为植物繁殖和生长研究提供了更多的可能性。
相信随着科学技术的不断进步，花粉生活力测定方法将会更加完善，为植物繁殖和生长研究带来更多的突破和进展。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下保持生活状态并完成受精的能力。
花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义。
下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。
1. 离体培养法。
离体培养法是一种常用的花粉生活力测定方法。
首先需要收集新鲜花朵，取出花药，然后将花药中的花粉颗粒悬浮在含有营养物质的培养基上进行培养。
在适宜的温度和湿度条件下，观察花粉颗粒的萌发和生长情况，从而判断花粉的生活力。
这种方法简单易行，能够直观地观察花粉的生活状态。
2. 着色法。
着色法是另一种常用的花粉生活力测定方法。
该方法使用活性染料或染色剂对花粉颗粒进行染色，然后观察染色后的花粉颗粒对染色剂的反应情况。
通过观察染色颗粒的颜色变化和形态特征，可以判断花粉颗粒的生活力。
这种方法操作简便，结果直观，适用于大规模的花粉生活力测定。
3. 离体染色法。
离体染色法是一种较为精细的花粉生活力测定方法。
该方法首先将花粉颗粒置于含有染色剂的培养基中进行染色，然后观察染色颗粒的颜色变化和形态特征。
通过观察染色颗粒的反应情况，可以准确地判断花粉颗粒的生活力。
这种方法需要较为精细的操作和观察，但结果准确可靠。
4. 离体培养-染色法。
离体培养-染色法是一种结合了离体培养和染色法的花粉生活力测定方法。
该方法首先将花粉颗粒进行离体培养，然后在培养基中加入染色剂进行染色，最后观察染色颗粒的反应情况。
通过结合离体培养和染色的方法，可以更准确地判断花粉颗粒的生活力。
这种方法需要较为复杂的操作，但结果具有较高的准确性。
总结。
花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义，而不同的测定方法各有优劣。
离体培养法简单易行，适用于初步的花粉生活力测定；着色法操作简便，适用于大规模的花粉生活力测定；离体染色法结果准确可靠，适用于精细的花粉生活力测定；离体培养-染色法结合了离体培养和染色的优点，结果具有较高的准确性。
选择合适的花粉生活力测定方法，可以为植物的育种工作提供有力的支持。
花粉生活力的测定
一
悬滴 法 在 载玻 片 上滴 一 滴 培养 液 ，再把 花 粉 撒 在 其 上 ，然后放 入 培 养皿 中 以限制 液 滴 蒸发 进 行
培 养 ， 培 养 后 的 花 粉 直 接 置 于 显 微 镜 下 观 测 和 统
计。
、
染 色 法
室 温下 放 置 １ 一 ｌ ０ ５分钟 ，凡 被 染 成 红 色 的 花 粉 ，
其 生 活 力 较 强 ， 淡 红 色 次 之 ，无 色 的 为 不 具 活 力 的 花 粉 或 不 育花 粉 。 Ｔｒ 溶 液 的 配 制 ： 用 ２ Ｈ ７ ２ 的 磷 酸 缓 冲 ｃ Ｍ ｐ ． 液 配 制 成 １ 的 Ｔ Ｃ溶 液 。 ％ Ｉ
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Ｉ Ｉ 液 的 配 制 ： 取 ２克 Ｋ 溶 于 １ —Ｋ 溶 Ｉ ０毫 升 蒸
花 粉 生 活 力 的 测 定
馏 水 中 ， 加 入 １克 Ｉ， 待 全 部 溶 解 后 ，再 加 蒸 馏 水 ： 定 容 到 ３０毫 升 。 ０
３ Ｆ Ｒ测定 方 法 ．Ｃ
根 据 淀 粉 遇 碘 变 蓝 的 特 性 ，从 蓝 色 的 深 浅 程 度 来 判 断 花粉 粒 中淀粉 的 含量 ．进 而 确定 花 粉粒 活性 的 高 低 。 染 色 时 可 将 花 粉 置 于 载 玻 片 上 ．滴 上 １ — ２滴 Ｉ Ｉ 液 ，具 较 强 活 力 花 粉 呈 蓝 黑 色 ，较 弱 —Ｋ 染
后 ，可 被 呼 吸代谢 中的 还原 酶 所 还原 ，并 由无 色 的
氧 化 型 变 成 红 色 的 还 原 型 。 染 色 时 取 少 数 花 粉 置 于 载 玻 片 上 ， 加 １ ２滴 Ｔ ｃ 溶 液 ， 盖 上 盖 玻 片 ， — ｒ 在
花粉生活力测定
不同时间萌发率图
时间 冰箱保存 3 6 65.60% 49.60%
平均萌发率
常温保存 48.90% 39.40%
9 12
15 18 21 24 27 30
47% 45.40%
37% 30.10% 26.90% 22% 16.20% 10.20%
33.20% 29.50%
29.30% 21.50% 15.20% 10.30% 9.60% 8.23%
三、实验用品
1、材料 正在开花的植株花粉（大樱桃 美早） 2、器具 盖、载玻片 凹式载玻片 培养皿 滴管 镊子 吸 水纸 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜 3、药品 蒸馏水 硼酸 蔗糖 琼脂 六偏磷酸钠
四、内容与方法（花粉萌发）
（一）培养法： 1、配置培养基 取100ml蒸馏水中，加1~2g（即1%~2%）琼脂煮开， 使之溶解，然后再加入一定量的蔗糖或葡萄糖和0.01g 硼酸，制成不同浓度（5%、10%、15%、20%）的蔗 糖琼脂培养基。 2、制片 用玻棒蘸少许培养基，趁热滴入凹形载玻片，放置片 刻，待凝固后，撒上少许花粉粒。注意要均匀，不可 过多，否则，在显微镜下，不易分清数目。 3、培养 将制好的玻片放于培养皿，下面垫有滤纸，加入少量 水，以保持湿度。将培养皿盖好，置于20~25℃恒温 箱中。22 ℃
谢谢大家！
六 结论
柱状图：不同温度保存相同时间下，冰箱 保存的萌发率高于常温保存 随时间增长两者萌发率都呈下降趋势 折线图：3-6天内冰箱保存萌发率下降较快 出现平缓的趋势，可能是实验存在误差 没有达到预期的效果，冰箱保存应该生活 力时间更长
六 实验的不足之处
文献查阅检准率和检全率不够 试验方案不完备 存放花粉时存在外围环境影响 试验时散花粉太多，计数时误差太大 数据记录不规范
花粉生活力测定(终)
生活 力(%)
1 2 3 4 5
花粉发芽率=发芽花粉总数/花粉总数*100
★ 优点：能够统计出百分率，准确度高 ★ 缺点：操作相对复杂，而且花粉发芽条件与实际不完全相 符易受培养基配方的影响导致结果的偏差。
【注意事项】
1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼
酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。 2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速
用玻璃棒混合盖上盖玻片。
（2）将载玻片置于恒温箱中（35~40℃）约15~20分钟。 （3）在显微镜下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生 活力的呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 （4）观察和测定结果：每片观察3个视野，并统计具有生活力的 花粉的百分率。
3、碘－碘化钾法
以碘－碘化钾溶液 （ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘 化钾溶于 100ml 蒸馏
可知花粉有无活性。实验中甲液成分为联苯胺，α-萘酚、碳酸 钠，乙液成分为过氧化氢。
过氧化氢酶
H2 O2 + 酚
醌 +H2O
（无色）
（红色、玫瑰红色）
将适量花粉置于载玻片上 先滴1滴甲液，再滴1滴乙液
充分反应
显微镜下镜检计数，红色的为有活力的花粉
★优点：染色法用时短，见效快 ★优点：颜色判断易受个人因素影响，导致结果有较大差 别。
视野3
培养 基配 方
花粉 发芽 萌发 总数 数(个） 率(%) (个）
发芽数 (个）
萌发 率(%)
1 2 3 4 5
花粉活力测定观察记载表
视野1
品种 染色 方法 花粉 染色 生活 总数 数(个） 力(%) (个）
视野2
花粉 花粉 染色 生活 总数 总数 数(个） 力(%) (个） (个）
实验一 花粉生活力的测定
【思考题】 1 用染色法计算花粉生活力（3个视野）。用 发芽法计算花粉生活力（3个视野）。 2 同一品种花粉用不同方法测定时其生活力 高低的结果分析。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO4，KNO3。
（2）培养基发芽法 a．培养基的制备：在250 mL的烧杯中加 入90 mL蒸馏水，再加入1g的琼脂，在酒精 灯上加热，使之完全熔解，然后加入10g蔗 糖，制成10％的糖液（如有可能，可配置 同含糖量的培养基，进行比较试验）。 注意用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀， 有条件时还可加入微量柱头渗出液、维生 素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
植物花粉的贮藏与花粉生活力测定
为保持花粉的生活力，最好将装好的花粉放入冰箱内或放入装有无水氯化钙的干燥器中，如没有以上设备，也可把装有花粉的小瓶放入盛有石灰的箱子里，保持湿度25%以下，放在阴凉、干燥黑暗处，这样可短时期内贮藏。
原理：花粉在贮藏期间的稳定性与花粉壁外层的性质和贮藏期花粉原生质的代谢有关。贮藏期内花粉可溶性糖类和有机物消耗少，则能在较长时期内保持生活力。影响花粉生活力的外界因子主要是相对湿度、温度和气体环境及花粉本身的含水量。在贮藏花粉时需要创造一个干燥、低温、低氧的环境，使得花粉处于几乎不活动或休眠的状态。
六、花粉生活力的测定
直接测定方法
1. 将花粉直接授在同种植株的雌蕊柱头上，并做好隔离工作，然后观察结实情况；如发育正常收到种子，即证明花粉有生活力。
2. 花粉在柱头上发芽 （1）将花粉直接授在清洁的同种植株的雌蕊柱头上，并做好隔离工作，隔1至3天采集已授过花粉的柱头，用FAA固定液或60℃温水中固定15分钟以上。（2）染色制片 将固定的花柱取出，用1%的苯胺兰水溶液（将1克苯胺兰溶于100毫升蒸馏水中）染色24小时，把花柱撕开，放在载玻片上，盖上盖玻片，用大拇指轻压、镜检、观察、若花粉有生活力，即可见染成蓝色的花粉管深入柱头组织，若花粉无生活力则看不到花粉管深入柱头组织现象。
间接测定法（此法是借人为创造条件使得花粉发芽来鉴别是否有生活力）
1. 培养基法 100毫升蒸馏水加入1至2克琼脂加热溶解，在加入葡萄糖或蔗糖制成5%、10%、15%、20%浓度的培养基趁热分别倒入培养皿中，冷凝后呈固体培养基，然后用解剖针粘取少量的花粉，均匀撒在培养基上。将播种好的培养基放在20~25℃恒温箱中，24小时或更长一点时间即可镜检观察其发芽情况。
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3、碘－碘化钾法
以碘－碘化钾溶液 （ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘 化钾溶于 100ml 蒸馏 水）染色后于显微镜 下观察。
有活力
无活力
五、结果与分析
➢ 1、将培养基法和染色法两种方法测得的结果 列表记录，并计算花粉的生活力。
➢ 2、比较测定花粉生活力三种方法的优缺点。 ➢ 3、绘制一花粉粒发芽形态图。
实验五 花粉发芽试验和 生活力的测定
指导教师：姜喜 2014.6.19
一、实验目的
学习和掌握果树发芽 试验和花粉生活力测 定的技术。
花粉
二、实验原理
果树杂交工作中，往往会遇到父母本花期不遇，必须采 集花粉短暂贮藏，经贮藏的花粉及其生活力如何，必须 经过测定，以保证杂交效果。
正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活 力。
花粉发芽试验观察记载表
品种
培养 基配
方
视野1
视野2
视野3
花粉 总数 (个）
发芽 数(个）
萌发 率(%)
花粉 总数 (个）
发芽 数(个）
萌发 率(%)
花粉 总数 (个）
发芽数 (个）
萌发 率(%)
1
2
3
4
5
花粉活力测定观察记载表
视野1
视野2视野3品种染色方法花粉 总数 (个）
染色 数(个）
生活 力(%)
➢花粉发芽率=发芽花粉总数/花粉总数*100
★ 优点：能够统计出百分率，准确度高 ★ 缺点：操作相对复杂，而且花粉发芽条件与实际不完全相 符易受培养基配方的影响导致结果的偏差。
【注意事项】
1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼 酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速 度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素 对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发， 本法适用于易于萌发的植物花粉活力的测定。
4h
密
集
24 h
（二）花粉生活力的测定
1 过氧化物酶法：
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过 氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色 可知花粉有无活性。实验中甲液成分为联苯胺，α-萘酚、碳酸 钠，乙液成分为过氧化氢。
H2O2 + 酚 过氧化氢酶 醌 +H2O
（无色） （红色、玫瑰红色）
将适量花粉置于载玻片上
先滴1滴甲液，再滴1滴乙液
充分反应
显微镜下镜检计数，红色的为有活力的花粉
★优点：染色法用时短，见效快 ★优点：颜色判断易受个人因素影响，导致结果有较大差
别。
【注意事项】
滴加甲液和乙液后，会 产生大量的气泡，待 气泡基本消失后方可 观察。
统计生活力的方法同前。
2 TTC法：
TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花 粉呼吸过程中脱氢酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF。
有活力
（1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1~2滴配制液， 用玻璃棒混合盖上盖玻片。 （2）将载玻片置于恒温箱中（35~40℃）约15~20分钟。 （3）在显微镜下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生 活力的呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 （4）观察和测定结果：每片观察3个视野，并统计具有生活力的 花粉的百分率。
花粉 总数 (个）
染色 数(个）
生活 力(%)
花粉 总数 (个）
染色数 (个）
生活 力(%)
1
2
3
4
5
四、实验方法与步骤
（一）花粉发芽试验
配置培养基 （ 1%琼脂+0.01%硼酸+ 5%-20%蔗糖 ）
煮沸溶化
用玻棒分装与凹玻片中
播撒花粉
置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时
保持湿度
镜检计数
➢显微镜 ➢隔一定时间检查一次 ➢随机调查5个视野，若发现花粉已发芽时，就记录花粉粒总 数和发芽数，算出平均值，将观察结果填入表内。 ➢花粉发芽的标准：以花粉管伸长超出花粉直径为准。若花 粉发芽率在5%以下，为极弱，不能采用。
花粉生活力的高低直接影响植物授粉、受精乃至坐果。
三、实验材料与用具
1、材料: 正在开花的植株花粉 2、器具:
盖玻片 载玻片 培养皿 滴管 镊子 解剖针 吸水纸 水浴锅 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜
3、药品:
蒸馏水 硼酸 蔗糖 琼脂 联苯胺 α-奈酚 碳酸钠 过氧化氢 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 氯化三苯基四氮