普通固体制剂2015版微生物限度方法适用性试验报告

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2015版中国药典微生物限度解析

10ml；膜剂为100cm²；贵重药品、微量包
（MPN法） 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用
性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性检查、计数方法适用性试验。 1.4 供试品检查：检验量、供试品检查 1.5 结果判断 1.6 稀释液、冲洗液及培养基
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
30～35 ℃ 不超过3天
20～25 ℃ 不超过5天
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量50~100cfu ；同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果判定：
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70 %，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验【10版：方法验证】，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml

不同药品包装材料微生物限度检测方法适用性验证

不同药品包装材料微生物限度检测方法适用性验证朱莲花;凌蕾【摘要】目的 :选择适宜方法对多种直接接触药品的包装材料微生物限度进行检查,并对方法的适用性进行验证.方法 :对固体药用聚丙烯瓶等数种药品包装材料按照相应药品包装材料国家标准和中国药典2015年版四部附录通则的要求进行微生物限度方法适用性验证.结果 :金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、白色念珠菌和黑曲霉五种标准菌株在菌落计数法验证试验中的回收率为60%~150%,符合药典规定.在控制菌的方法验证试验中,均可检出相应的试验菌.结论 :选定的方法适用于不同的药品包装材料的微生物限度检测.【期刊名称】《上海医药》【年(卷),期】2017(038)009【总页数】3页(P73-75)【关键词】药品包装材料;微生物限度检查;适用性验证【作者】朱莲花;凌蕾【作者单位】上海市食品药品包装材料测试所上海 201203;上海市食品药品包装材料测试所上海 201203【正文语种】中文【中图分类】R951直接接触药品的包装材料及容器既具备了盛药品的功能，也因为其与药品的接触而可能影响药品的质量。

微生物污染是药品包装容器可能给药品质量带来的风险之一，因此，为了确保药品的安全有效，必须严格控制包装容器的微生物污染程度[1-2]。

药品包装材料微生物限度检验主要是通过对附着在容器或材料表面的微生物进行采集和检验[3-4]，而药品包装容器的材料组成成分、生产工艺、贮存条件等各种因素都会对附着的微生物数量和种类带来影响[5-6]。

同时，检验方法中对样品表面附着微生物的采集方法——即供试液制备过程中涉及的提取介质及具体制备方法都可能对微生物造成一定的损伤从而影响微生物生长，可能给检验的准确性带来影响。

微生物检验结果的准确性还受到其他多种因素的影响，如样本分布均匀性、样品溶液制备过程中微生物收集的有效性、检验方法的灵敏度等，这些内容一般已经在标准方法中有详细的规定从而确保检验方法的科学性。

2015年版中国药典微生物限度检查方法验证方案

2015年版中国药典微生物限度检查方法验证方案佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：1/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案起草部门：QC组签名：日期：审核部门：QC组签名：日期：部门：质量部签名：日期：批准质量负责人签名：日期：质量部颁发本文件根据需要应分发于以下部门：01 质量部下表用于记录修订/变更主要内容及历史。

佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：2/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案文件编号修订原因修订日期TS-VP-4201-00 按GMP（2010年修订版）要求新制定2015.10.22佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：3/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案目录1. 概述2. 验证目的和范围3. 组织及职责4. 验证进度计划表5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认7.验证项目和验证方法7.1试验菌株7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法8.偏差与漏项控制佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：4/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案9.验证报告会审佛山市华普生药业有限公司文件编码：TS-VP-4201-00页数：5/56 人工牛黄甲哨唑胶囊微生物限度检查方法验证方案1. 概述我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊，产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。

参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。

微生物限度检查方法及其验证报告(修改)

文档来源为:从网络收集整理.word 版本可编辑.欢迎下载支持.文件编号：73021微生物限度检查方法及其验证报告目录样品相关信息基本信息主要仪器设备和试验耗材信息主要使用的仪器设备试验用培养基试验用试剂试验用菌种试验环境无菌室洁净工作台生物安全柜试验方案验证试验目的微生物限度检查方法草案方法验证试验菌液制备计数培养基适用性检查控制菌检查用培养基使用性检查供试液制备方法验证菌落计数方法验证试验控制菌检查方法的验证方法验证结论供试品微生物限度检查结果样品相关信息基本信息（三批）1 1.12 2.1 2.2 2.3 2.4 3 3.1 3.2 3.3 4 4.1 4.25 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.5.15.5.2 5.6 6 1 1.12主要仪器设备和试验耗材信息2.1主要使用的仪器设备2.2试验用培养基2.2.1对照培养基2.2.2试验用培养基2.3试验用试剂2.4试验用菌种3试验环境《中国药典》2015版规定，微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。

本公司微生物限度室、阳性对照室、生物安全柜及超净工作台洁净度检测无特殊情况下每季度进行一次。

3.1无菌室无菌室按《医药工业洁净厂房设计规范》GB50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对10000级洁净度要求。

3.2超净工作台超净工作台按《医药工业洁净厂房设计规范》GB50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。

超净工作台沉降菌检测记录3.3生物安全柜生物安全柜按《生物安全实验室建筑技术规范》GB50346-2011监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。

生物安全柜沉降菌监测记录4试验方案按《中国药典》2015年版第四部：（通则1105）非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、（通则1106）非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、（通则1107）非无菌药品微生物限度标准及（通则1121）抑菌效力检查法规定，本品微生物限度标准为：1g供试品中，需氧菌总数不得过lOOOcfu,霉菌和酵母菌总数不得过lOOcfu，大肠埃希菌不得检出。

2015版微生物限度检查方法验证方案

验证文件扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司目录一、验证概述 (2)1.验证对象 (2)2.验证原因 (2)3.验证目的 (2)4.验证要求 (2)二、验证组织机构和职责 (3)1.职责 (3)2.组织机构 (4)三、验证风险评估及范围 (6)1.严重性（S） (6)2.可能性（O） (7)3.可检测性（D） (8)4.风险优先数量等级判定（RPN） (9)四、验证实施计划 (35)五、验证准备 (36)1.验证依据 (36)2.验证条件 (36)六、验证内容 ......................................... 错误!未定义书签。

七、验证异常情况处理 (54)八、验证结论 (55)九、再验证周期 (56)十、附件 (56)一、验证概述1.验证对象本次验证的对象为阿戈美拉汀片（25mg）微生物限度检查法。

2.验证原因对阿戈美拉汀片（25mg）微生物限度检查法进行适用性验证。

3.验证目的确认阿戈美拉汀片（25mg)微生物限度检查法的可靠性。

4.验证要求验证过程需严格按方案中规定的步骤进行。

对于验证过程中出现的所有偏差，应查明原因并得到有效处理后，验证方可进入下一步骤。

二、验证组织机构和职责1.职责1.1.质量受权人—验证文件的批准。

—组织验证工作的实施及各部门的协调，保证验证工作有序的进行。

1.2.质量管理部—现场监督保证整个操作过程按照验证计划进行。

—负责验证方案的审核，及操作过程中对验证文件修订的审核工作。

—验证文件的归档工作。

—按照验证方案要求对操作过程中的样品抽样检测。

—涉及到的仪器仪表的校验，以及一些相关的化验工作。

1.3.质量控制实验室—负责验证文件的起草工作。

—负责验证文件的审核工作。

—验证方案起草人员现场对操作过程进行指导。

—对验证实施过程中资料和数据进行汇总并完成验证报告。

—需要时与相关部门的协调工作。

1.4.供应部按照验证物资采购计划进行物资采购。

2.组织机构2.1验证领导小组2.2.验证实施小组三、验证风险评估及范围根据SOP6-00001《验证管理规程》对验证的相关要求，对检测过程中可能影响检测结果的因素进行风险分析。

2015版中国药典微生物限度

1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑵ 水不溶性非油脂类供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或 pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基制备成 1:10 供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如 0.1%的聚山梨酯 80，使供试品分散均匀。若需要，调节供试液 pH 值至 6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步 10倍系列稀释。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
或cm²）。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真菌菌落数）；
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养5 ~7天，观察菌落生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15，则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。

中国药典2015版-微生物限度检查解析

菌种的传代、保藏与管理
控制程序
菌种来源
菌种的保管
菌种的复活
菌种确认
菌种的储存和领用
菌种的销毁及领用记录
菌种传代、保存、使用及销售记录
菌种名称：传代日期菌种来源菌种编号：传代支数菌种生长培养基培养温度时间保存温度保管人：发出日期发出方式日期：购买单位
《中国药典》2015年版-微生物限度标准修订解析
标准修订内容修订思路1 《中国药典》2010年版一、二、三部限度标准的相关内容合并。修订思路2 参考EP7.0，USP35，JP X V标准，修订中国药典的微生物限度标准。
标准修订内容
参考欧美日药典标准 <1>修订菌数标准表达方式：指数形式10ncfu，最大可接受限度值遵守2倍规则： 101cfu：可接受的最大菌数为 20； 102cfu：可接受的最大菌数为 200； 103cfu：可接受的最大菌数为 2000：依此类推。 <2>检查指标：需氧菌总数：TAMC（替代细菌数）----胰酪大豆胨琼脂培养基耐胆盐的格兰阴性菌（替代大肠菌群） <3>检查制剂分类：齿龈、皮肤制剂原辅料、中药提取物、中药饮片的控制呼吸道制剂耐胆盐格兰阴性菌的控制
增加新概念
• • • • • 1.MPN法使用范围：含菌量较低的供试品细菌总数测定 2.“分散均匀”：并非一定要溶解 3.偏差调查概念引入当检验结果出现超常或超标时需要进行偏差调查调查范围：人、机、料、法、环
控制菌检查法修订解析
本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法---新增内容

1.板蓝根颗粒微生物限度检查检验方法验证方案(2015年版)

1.板蓝根颗粒微生物限度检查检验方法验证方案(2015年版)G M P文件湖北****药业有限公司1.概述1.1板蓝根颗粒是《中国药典》2015年版一部品种，批准文号：国药准字Z42020660，其处方由板蓝根组成，具有清热解毒，凉血利咽之功效，用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀；急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者。

有效期：18个月。

1.2根据剂型与产品处方判断，板蓝根颗粒的微生物限度检查内容应包括需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数、大肠埃希菌检查；根据板蓝根颗粒的成分和历史验证数据分析，该产品无明显的抑菌活性，拟采用“平皿法”进行微生物限度检查，采用“常规法”进行控制菌检查。

2.目的确认所采用的方法适用于该产品的微生物计数，以确保测定方法的可靠性，确保检验结果的准确可靠。

若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。

3.依据《中国药典》2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”、“非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”、“非无菌产品微生物限度标准”。

4.范围本验证方案适用于公司板蓝根颗粒微生物限度检查检验方法的适用性试验。

5.职责5.1验证领导小组5.1.1负责验证方案的审批。

5.1.2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。

5.1.3负责验证数据及结果的审核。

5.1.4负责验证报告的审批。

5.1.5负责发放验证证书。

5.2质量部5.2.1负责验证所需的培养基、样品、菌液、缓冲液等的准备。

5.2.2负责取样及对样品的检验。

5.3项目验证小组5.3.1负责拟订验证方案。

5.3.2负责验证方案的实施和收集各项验证试验记录，并对试验结果进行分析后，起草验证报告，报验证领导小组。

6.验证实施条件6.1验证方案培训：在验证实施前，应对参与验证的人员进行验证方案以及与验证相关的文件进行培训，确保相关人员掌握了验证的相关要求与知识。

6.2微生物限度检测室：检验所使用的检测室应经过HVAC系统确认，并符合要求。

《中国药典》2015年版微生物测定修订情况

常州药检
一、微生物计数法
分别接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，每一试验菌株平行制备2个平皿，30～35℃培养不超过3天。同时，用相应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，每一试验菌株平行制备 2个平皿，30～35℃培养不超过5天。同时，用相应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。
常州药检
一、微生物计数法计数培养基适用性检查
菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，不得超过5代。
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
常州药检
一、微生物计数法
取其新鲜培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。黑曲霉制备时在缓冲液或氯化钠溶液中加入0.05%（v/v）聚山梨酯80。菌液在室温下2小时内使用，2～8℃时可在24h内使用，黑曲霉孢子悬液可2～8℃保存，在验证过的贮存期内使用。
MPN法
常州药检
一、微生物计数法
平皿法：包括倾注法和涂布法。每株菌每种培养基至少制备2个平皿，以算术平均值计算。使用涂布法应采用适宜的方法使培养基表面干燥，且每个平皿接种的供试液不少于0.1ml。
常州药检
一、微生物计数法
薄膜过滤法：一般取相当于1g（ml、10cm2）的供试品，（若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量）加至适量稀释液中，混匀，过滤。用适量冲洗液冲洗。每株菌每种培养基至少制备一张滤膜。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
常州药检

普通固体制剂2015版微生物限度方法适用性

普通固体制剂2015版微生物限度方法适用性试验报告XX制药有限公司第 2 页共 10 页微生物限度方法适用性试验报告文件编号：XXXXXXX制药有限公司微生物限度方法适用性试验报告起草人_____________ 部门____________ 日期___________ 审核人_____________ 部门____________ 日期___________ 批准人_____________ 日期__________ _1、概述本公司主要产品之一，本产品已进行批量生产并已进行工艺验证,微生物检验相对稳定，由于《中华人民共和国药典》2015年版对微生物限度检查方法改变，其产品的微生物检验方法和培养基发生改变，可能影响检验结果的准确性。

为确保检测方法的准确性及适应性，测定方法的可靠性进行验证，根据样品特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

2、验证依据：《中华人民共和国药典》2015版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、1107非无菌药品微生物限度标准。

3、验证目的建立该产品的微生物限度检查方法，并对其有效性进行评价，确保试验方法的完整性，保证检验结果的可靠性。

4 、验证小组成员及职责5、主要验证用仪器仪表的校验结果：确认人：日期：6、验证用菌种及培养基7、试验菌悬液制备7.1 需氧菌总数计数方法适用性试验、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验菌株培养接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35℃培养3天；接种白色念珠菌、黑曲霉于胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30-35℃培养5天，用于需氧菌总数计数方法适用性试验。

接种白色念珠菌、黑曲霉于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20-25℃培养5天，用于霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加人3～5ml含0.05% (m l/m l)聚山梨酯8 0的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将孢子洗脱。

2015版微生物计数培养基适用性验证报告.doc

非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性验证文件编号： XXXX 起草人职位签名日期审核人职位签名日期批准人职位签名日期文件分发部门目录1. 目的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 12. 参照准⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 13. 目⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 14. 工作小及⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 15. 材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 26. 程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 37. 周期⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 48. 附件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 41、验证目的：需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数用培养基应进行培养基的适应性检查，本次验证的目的是为了确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数的测定。

2、参照标准：《中国药典》 2015 年版四部3、验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性验证4.验证小组及职责4.1 验证小组组长姓名职务/ 职称部门QA部部长质量部组员姓名职务/ 职称部门质量控制实验室主任质量部微生物化验员质量部微生物化验员质量部4.2 验证职责人员职责验证组长负责组织审核验证项目的验证方案、组织项目的具体验证实施、督促验证小组成员按照方案的要求做好验证记录、起草验证报告、整理验证档案；当漏项或偏差发生时，负责对其评估并报验证委员会批准；组织相关的培训。

验证组员质量控制实验室主任：负责制定确认方案及报告的起草微生物化验员：负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠5.试验材料5.1 验证所用培养基：名称胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基沙氏葡萄糖琼脂对照培养基5.2 验证用菌株培养验证菌株代次金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003铜绿假单胞菌 CMCC（B）10104枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501白色念珠菌CMCC（F）98001黑曲霉CMCC（F）980035.2.仪器设备：来源批号培养基培养温度培养时间胰酪大豆胨琼脂培养基30— 35℃18— 24 小时胰酪大豆胨琼脂培养基30— 35℃18— 24 小时胰酪大豆胨琼脂培养基30— 35℃18— 24 小时沙氏葡萄糖琼脂培养基20— 25℃2—3 天沙氏葡萄糖琼脂培养基20— 25℃5-7 天5.2.1. XXXXX 立式压力蒸汽灭菌器5.2.2.XXXX 水平流净化工作台5.2.3.XXXXXX 干燥箱5.2.4.XXXXX 型霉菌培养箱 (20 ～25℃)5.2.5. XXXXX 电热恒温培养箱 (30 ～35℃)5.3.稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液6.试验过程6.1 菌液制备取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物，加入 3-5ml 含 0.05%（ml/ml ）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液 ,将孢子洗脱，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（m l/ml ）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

微生物限度检测方法验证操作规程(2015年版)

微生物限度检测方法验证操作规程1 目的确认所采用的方法适合于该产品的微生物限度检测。

2 依据《中国药典》2015版。

3 范围所有需进行微生物限度检测的产品。

4 责任4.1验证小组负责检验方法验证/确认方案的起草、验证/确认方案的实施。

4.2验证委员会负责验证/确认方案的审批，验证/确认结论的审核。

5 程序5.1 由验证小组提出验证申请，验证方案编制完成后，填写《确认和验证方案审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证方案编制人对验证小组其余人员进行培训后，方可按验证方案试验。

5.2 试验完成后及时编制验证报告，并填写《验证报告审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证报告结论才可实施。

6 内容6.1 概述通过验证以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及控制菌的检查。

根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方案进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。

若符合，按验证的方法和条件进行产品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。

6.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法的验证6.2.1 验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]黑曲霉[CMCC（F）98 003]白色念珠菌[CMCC（F）98 001]6.2.2 验证用菌液制备6.2.2.1接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。

取上述培养物各1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。

6.2.2.2 接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中，于20～25℃培养2～3天。

微生物限度检查操作规程(中国药典2015版四部通则)

霉菌与酵母菌总数、控制菌得检查。

二、引用标准：《中国药典》２015年版（通则1１05-1106）三、目录1。

微生物限度标准2.设备、仪器及用具3。

消毒液、稀释剂、试液及培养基4。

检查总则(通则1105：非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法,通则1106非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法）5。

微生物计数法检查6.控制菌检查法7．实验技术8、附件１.微生物限度标准非无菌药用原料及辅料得微生物限度标准(2)．目测霉变者以不合格论。

（３）。

“无”为标准依据或无相应规定。

准依据或无相应规定.2.设施、仪器及用具2、１、设施：2、１、1．微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查得要求。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染得措施不得影响供试品中微生物得检出。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

２、1、2．其她设备:高压蒸汽灭菌器;细菌培养箱(3０~3５℃);霉菌培养箱(２5～2８℃)；电炉(或其她适宜得加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱(250~３00℃)；电冰箱。

生化试剂储存箱。

2、2仪器及器皿2、2、1。

菌落计数器；显微镜（15０0X）;电子天平或药物天平（感量0、1ｇ）;ｐH 系列比色计。

2、2、2．玻璃器皿：锥形瓶(2５０~３００ml,内装玻璃珠若干)、研钵（玻璃或陶瓷制,∮10～12ｃm)、培养皿（∮9 ｃm）、量筒(１00ml）、试管（1８×180ｍm）及塞、吸管（1ml分度0、01，10ml分度0、１)、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。

2、2、3新购得玻璃器皿得清洁:先用流水冲洗，浸泡于1％~２%盐酸（工业用）液中约2～6小时，除去游离碱质，再用流水冲洗.用于化学分析得玻璃仪器,需用重铬酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗2～3次，晾干备用。

2、3用过得玻璃器皿：2、3、1未被病原微生物污染得器皿：可随时洗涤.用清水冲洗(或浸泡)，除容量仪器外，可用毛刷与肥皂粉，内外刷洗，再用清水涮洗干净,晾干备用.容量仪器宜用清洁液浸泡或涮洗，再用流水冲洗,最后以纯化水涮洗2～3次.试管及培养皿:先正放或直立于高压蒸汽灭菌器内,经1２1℃灭菌30 分钟.趁热倾出培养物，再以清水或用毛刷及肥皂粉刷洗,最后以流水涮净。

2015年版中国药典微生物限度检查法

1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要，调节供试液 pH 值至 6 ～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌〔CMCC（B)10 104〕枯草芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 501〕白色念珠菌〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时

马来酸氟伏沙明微生物限度检查方法适用性试验

文件名称微生物限度检查方法适用性试验生效日期有效期至-- 审批及颁发部门签名日期起草质量控制部审核质量控制部质量保证部批准质量负责人会审部门签名日期部门签名日期/ / /分发Copy-1/文件名称微生物限度检查方法适用性试验生效日期有效期至--目录一、目的 (4)二、范围 (4)三、职责 (4)1 部门职责 (4)1.1 质量控制部 (4)1.2 质量保证部 (4)2 人员职责 (4)四、术语 (5)五、内容 (5)1 概述 (5)2 风险评估 (5)2.1 目的 (5)2.2 评估范围 (5)2.3 风险管理工具的使用 (6)2.4 风险评估结论 (7)3 验证项目 (7)4 验证前提条件确认 (8)4.1 相关文件及人员培训确认 (8)4.2 使用的仪器仪表有效性确认 (8)4.3 培养基及冲洗液有效性确认 (9)4.3.1 培养基有效性确认 (9)4.3.2 冲洗液有效性确认 (9)5 方法适用性试验 (10)5.1 菌液制备 (10)5.2 计数方法适用性试验 (10)5.3 控制菌检查适用性试验 (15)文件名称微生物限度检查方法适用性试验生效日期有效期至--6 偏差及漏项的处理 (17)7 附件清单 (17)8 验证结果及评定 (17)9 验证周期 (18)六、附录 (18)七、相关文件 (18)八、参考文件 (18)九、变更历史 (18)文件名称微生物限度检查方法适用性试验生效日期有效期至--一、目的按照2015版《中国药典》（ChP2015)微生物限度检查方法的要求对马来酸氟伏沙明进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于本公司生产的马来酸氟伏沙明的微生物限度检查。

二、范围适用于新工艺生产的马来酸氟伏沙明微生物限度检查。

三、职责1 部门职责1.1 质量控制部1.1.1 负责起草验证方案，及验证的实施。

1.1.2 负责验证过程中的偏差调查与处理。

1.1.3 收集各项验证数据、验证记录，形成验证报告。

微生物限度检查适用性检查报告

×××药业有限公司×××第 1 页共 11 页×××微生物限度方法适用性试验报告文件编号：×××药业有限公司×××微生物限度方法适用性试验报告起草人_____________ 部门____________ 日期___________审核人_____________ 部门____________ 日期___________审核人_____________ 部门____________ 日期___________批准人_____________ 日期__________ _目录1.验证小组成员及职责-------------------------------第04页2.验证用仪器仪表的校验-----------------------------第04页3.验证用菌种及培养基-------------------------------第04页4.需氧菌总数、霉菌及酵母菌计数方法验证适用性的确认-第05页5.大肠埃希菌检验方法验证确认-----------------------第06页6.耐胆盐革兰阴性菌检验方法验证确认-----------------第07页7.验证过程出现中出现数据偏差及分析处理措施---------第08页8.验证报告-----------------------------------------第09页1 、验证小组成员及职责2、验证用仪器仪表的校验结果：确认人：日期：2、验证用菌种及培养基3、需氧菌总数及霉菌及酵母菌总数计数方法适用性试验记录药品生产质量管理文件4、大肠埃希菌检查方法适用性试验记录备注：“+”为检出，“-”为未检出。

5、耐胆盐革兰阴性菌适用性定量试验记录：6、耐胆盐革兰阴性菌适用性定性试验方法记录页7、验证过程出现中出现数据偏差及分析处理措施××××××微生物限度方法适用性试验报告第 11 页共 11页8、验证报告药品生产质量管理文件。

微生物限度检查方法适用性验证方案

微生物限度检讨办法实用性实验计划验证计划组织与实行微生物限度检讨办法实用性实验工作应由质量治理部分负责组织,质量治理部分有关人员构成验证小组,介入实行.计划草拟计划审核计划同意目录一、概述二、验证目标和风险评估三、验证内容四.办法剖断五.再验证周期六.参考文献七.成果评价及结论1.概述：微生物限度检讨法系检讨非划定灭菌制剂及其原料.辅料受微生物污染程度的办法.检讨项目包含需氧菌数.霉菌数和酵母菌数及掌握菌检讨.当树立产品的微生物限度检讨法时,应进行需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法的实用性实验和掌握菌检讨办法的实用性实验,以确认所采取的办法合适于该产品的需氧菌.霉菌和酵母菌数的测定和掌握菌检讨.按照中国药典2015版,需氧菌.霉菌和酵母菌及掌握菌均采取平皿法进行办法实用性实验.2.实验目标和风险评估：验证目标：确认所采取的需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法及掌握菌检讨办法合适我公司所临盆产品的微生物限度检讨.风险评估：3.验证内容：3.1.造就基起源：确认人：确认日期：3.2.检讨用造就基配制办法：确认人：确认日期：3.3.应用仪器确认人: 确认日期：3.4.验证实验用菌种：确认人：确认日期：3.5实验办法：取供试品10 ml加至100ml→1:10供试液.需氧菌.霉菌和酵母菌.掌握菌采取通例法.3.6菌液的制备：取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.大肠埃希菌.枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵,参加胰酪大豆胨液体造就基中置30～35℃造就箱中造就18～24h,取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.大肠埃希菌.枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体造就物1ml参加％无菌氯化钠溶液中,制成10-1 的菌液,依法10倍稀释至10～7,分取各菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面造就物,参加沙氏葡萄糖液体造就基中置20～25℃造就箱中造就24～48h,取白色念珠菌的沙氏葡萄糖液体造就物1ml参加％无菌氯化钠溶液中,制成10-1 的菌液,依法10倍稀释至10～7,取菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.取黑曲霉的新颖造就物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上,20-25℃造就5-7天,参加3-5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱.取1ml参加含0.05%聚山梨酯80的9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中,制成10-1的菌液,依法10倍稀释至10～7,取,取菌悬液1ml注入平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基25ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法造就计数,取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用.3.7需氧菌.霉菌和酵母菌计数办法实用性实验：供试液制备：取供试品10 ml,加至100ml→1:10供试液.实验前提：需氧菌造就温度：30～35℃3～5天造就箱：霉菌和酵母菌造就温度：20～25℃ 5～7天造就箱：3.7.3实验办法：.1实验组：3.7.3.1.1分离取供试液9.9ml,分离铜绿假单胞菌.金黄色葡萄球菌.枯草芽孢杆菌,混匀后取个中1ml注皿,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,置30～35℃或造就箱中造就不超出3天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿.3.7.3.1.2分离取供试液9.9ml,分离白色念珠菌.黑曲霉菌液,混匀后分离取个中1ml注皿,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基20ml,置30～35℃或造就箱中造就不超出5天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿.另分离取个中1ml注皿, 倾泻温度不超出45℃的沙氏葡萄糖琼脂造就基20ml,置20～25℃或造就箱中造就不超出5天,计数,每株实验菌平行制备2个平皿. .2菌液对比组：分离取稀释液9.9ml,分离菌液,按实验组操纵,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基,置与实验组雷同前提下造就, 计数.每株实验菌平行制备2个平皿..3供试品对比组：取供试液1ml,倾泻温度不超出45℃的胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基,置与实验组雷同前提下造就, 计数.每株实验菌平行制备2个平皿.实验成果～2规模内.比值=实验组菌落数～供试品对比组的菌落数*对比组菌落数实验次数：1 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：2 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：3 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：1 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：2 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期实验次数：3 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期3.7.5结论:磨练人：日期：复核人：日期：掌握菌微生物检测办法实用性实验：.1实验办法：3.8.1.1实验组：取供试液10ml及不大于100cfu大肠埃希菌菌液参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30～35℃造就18-24小时, 取上述造就物1ml接种至100ml麦康凯液体造就基中,42～44℃造就24-48小时.取麦康凯液体造就物划线接种于麦康凯琼脂造就基平板上30～35℃造就18-72小时.实验组应发展优越.3.8.1.2阴性对比组：取稀释剂10ml,参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30～35℃造就18-24小时,阴性对比应无菌发展.3.8.1.3阳性对比组：取不大于100cfu大肠埃希菌菌液参加胰酪大豆胨液体造就基中,置30～35℃造就18-24小时, 取上述造就物1ml接种至100ml麦康凯液体造就基中,42～44℃造就24-48小时.取麦康凯液体造就物划线接种于麦康凯琼脂造就基平板上30～35℃造就18-72小时.阳性对比组应发展优越.实验成果：实验次数：1 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：2 供试品批号:磨练人：日期：复核人：日期：实验次数：3 供试品批号:结论：磨练人：日期：复核人：日期：4. 办法剖断：本品按《中国药典》2015年版（1105）.（1106）非无菌产品微生物限度检讨项下：“微生物计数法”“掌握菌检测法”进行实验.细菌数测定可用.霉菌.酵母菌数测定可用.掌握菌,可用.5.再验证周期：当产品的微生物限度检讨办法转变.产品组分.工艺转变时,应进行再实验. 6.参考文献：中国药典2015版7．成果评价及结论：验证尺度,该实用性实验办法接收 .审核人/日期：同意人/日期：。