FDA大肠菌群和大肠杆菌检测方法
检测大肠杆菌的方法
检测大肠杆菌的方法
检测大肠杆菌的方法包括以下几种：
1. 化学方法：使用化学试剂检测大肠杆菌的生长产物，例如检测β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）或亚硝酸盐的产生。
2. 免疫学方法：使用抗原抗体反应来检测大肠杆菌的存在。
可以通过免疫层析试纸、酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光染色等技术进行检测。
3. 分子生物学方法：使用DNA提取和PCR扩增技术，通过特定基因的检测来确定大肠杆菌的存在。
常用的是检测16S rRNA基因。
4. 血液培养法：将样品接种到含有适合大肠杆菌生长的培养基上，经过一段时间后观察是否有菌落形成。
5. 基于大肠杆菌特定生理和生化特征的传统方法：根据大肠杆菌在营养琼脂培养基上形成金属光泽、产生气泡、使用L-色氨酸作为唯一氮源，以及产生酸和气体等特征来进行初步检验。
这些方法可以单独或结合使用来对大肠杆菌进行检测，并能够提供快速、准确的结果。
大肠杆菌标准检测流程
大肠杆菌标准检测流程一、样品采集。
这可是检测的第一步呢，就像找宝藏得先知道宝藏大概在哪一样。
采集样品的时候得特别小心，要选对地方。
如果是检测食品里有没有大肠杆菌，那就要从食品的不同部位采集，像苹果的话，表面和果肉都得取点样，可不能只取一个地方就完事儿了。
要是检测水呢，那也得取有代表性的水样，比如说从水的表层、中层和底层都取一点混合起来，这样检测出来的结果才更靠谱。
采集样品的时候工具也要干净无菌，不然就把杂菌带进去了，那检测结果可就乱套了。
二、样品处理。
采集好样品就得处理啦。
对于固体的样品，像是食物之类的，得把它弄碎成均匀的小颗粒，就像把一块大蛋糕掰成好多小碎块一样。
然后加入一些特定的液体，这个液体能让大肠杆菌从食物颗粒里跑出来，进入到液体里，方便我们后续检测。
对于液体样品呢，要是比较浑浊的，可能还得过滤一下，把那些大的杂质去掉，留下清澈一点的液体，这样大肠杆菌在里面就更显眼啦。
三、增菌培养。
处理好的样品就可以进行增菌培养喽。
这就像是给大肠杆菌盖个小房子，还提供好多好吃的，让它们快快繁殖。
把样品放到专门的培养基里，这个培养基就像是为大肠杆菌特制的营养大餐，里面有它们生长需要的各种营养成分。
然后把这个放了样品的培养基放到合适的温度下，一般是37摄氏度左右，这个温度对大肠杆菌来说就像春天的阳光一样温暖舒适，它们就会在里面开心地繁殖起来啦。
这个过程可能得持续一段时间，几个小时到一天不等，就看大肠杆菌们的心情啦，哈哈，其实是看它们繁殖的速度啦。
四、分离培养。
等大肠杆菌繁殖得差不多了，就要把它们从一堆细菌里分离出来。
这时候就用到平板啦。
把增菌后的样品接种到平板培养基上，然后用一种特殊的方法把它们均匀地涂开，就像画画一样把细菌均匀地涂在平板上。
然后把平板放到培养箱里继续培养。
在平板上，大肠杆菌会长成一个个小菌落，每个菌落就像是一个小家庭一样，都是由一个大肠杆菌繁殖出来的。
而且大肠杆菌的菌落有它自己的特点，比如说颜色、形状、大小之类的，通过这些特点我们就能初步判断是不是大肠杆菌啦。
食品微生物检验方法(ISOFDA)
所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2 ，报告EAPC/ml （g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度 。
所有平板的菌落数都超过100/cm2 ，计算平板的面积（直径为90mm 的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应 平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml（g）为＞ 65*100* 1/d。
大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预 示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指 示菌。近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测 作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、 葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落 可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平 板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重 量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。
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菌落总数测定几点要求
检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可 作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4 ℃ 放置，以便在计数检样时用作对照。
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大肠菌群的定义
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼 性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学 方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为 食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些 细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步 的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗 称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和 阴沟肠杆菌等。
FDA大肠菌群和大肠杆菌检测方法
大肠菌群的定义大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌的定义大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。
大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为++--或-+--的细菌。
与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。
卫生学意义大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。
食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。
近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
大肠杆菌的生物学特性基本形态：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。
约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。
多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特性：大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
大肠菌群及大肠杆菌检测方法
出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法Method for examination of coliform ，fecal coliform and escherichia coli in food for exportSN 0169 —92代替ZB X09 002 —861 主题内容与适用范围本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。
本标准适用于出口食品的检验。
2 设备和材料2.1吸管：1mL，具O.ImL刻度；5mL和10mL，具1mL刻度。
2 2 水浴箱：44.5 ±.5C。
2.3 培养箱：36±1C, 44.5 ±.5C。
2.4冰箱：0〜5 C和-15〜-20Co2.5 均质器。
2.6乳钵和研棒。
2.7 平皿：直径90mm o2.8 天平：感量0.1g o2.9显微镜。
2.10稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。
2.11 玻璃珠：直径约5mm o2.12菌落计数器。
3 培养基及试剂3.1月桂基硫酸盐胰蛋白（LST）肉汤。
3.2煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤。
3.3 EC肉汤。
3.4 伊红美蓝琼脂（EMB）o3.5营养琼脂斜面。
3.6色氨酸肉汤。
3.7 MR-VP 培养基。
3.8 Korser氏枸椽酸盐肉汤。
3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）o3.10 Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液。
3.11生理盐水。
3.12革兰氏染色液。
3.13 Kovacs氏靛基质试剂。
3.14甲基红指示剂。
3.15 Voges—pros kauer（V —P）试剂。
4 样品制备4.1以无菌操作取有代表性的样品。
如有包装则用75%乙醇在开口处擦拭后取样。
若不能及时检验，应将冷冻样品置于-15C保存；非冷冻而易腐的食品，应置于4C冰箱保存。
检验前冷冻样品可于2—5C 18h内解冻，或在45C以下15min内解冻。
4.2 不同食品样品匀液的制备4.2.1 液体食品以灭菌吸管取样25mL 放入装有225mL 稀释剂的灭菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠），以30cm 幅度、于7s 内振摇25次（或以机械振荡器振摇），制成1 : 10的样品匀液。
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌(Escherichia coli)是一种革兰氏阴性的厌氧菌，常常被用作指示性微生物来评估食品和水源的卫生质量。
以下是常见的大肠杆菌检验方法：
1. 培养基方法：将样品接种在包含大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上，如大肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)和EC培养基等。
大肠杆菌能够利用琼脂中的乳糖发酵产生酸，导致培养基呈现红色或粉红色。
此外，EC 培养基还包含了可以检测大肠杆菌β-葡萄糖苷酶的亚甲基红试剂，如果大肠杆菌存在，则培养基呈现金属光泽。
2. 确认方法：对落有培养基上的鲜艳深色菌落进行进一步确认。
典型的确认方法包括革兰染色、目测观察形态特征、氧化发酵试验和测试产气杆菌酶试验。
3. PCR检测方法：利用聚合酶链反应(PCR)技术，从样品中扩增大肠杆菌特异性基因片段（如16S rRNA基因），然后通过凝胶电泳检测扩增产物。
4. 快速方法：如免疫层析试纸法和光学组织测定法。
免疫层析试纸法利用抗大肠杆菌抗体与大肠杆菌特异性抗原结合生成可视化结果。
光学组织测定法利用大肠杆菌的β-葡萄糖苷酶水解比色底物产生颜色变化。
这些方法都可用于检测大肠杆菌在食品和水源中的存在及其数量。
在进行检验时，应严格遵守相关的操作规程和实验室操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。
大肠菌群及大肠杆菌检测方法
大肠菌群及大肠杆菌检测方法简介大肠菌群是指人和动物肠道中存在的一群细菌的总称，其中大肠杆菌是大肠菌群中的一种重要成员。
大肠杆菌是一种革兰阴性杆菌，属于肠道的常见菌群，对人体有益，并且在环境和食品中也常见。
然而，大肠杆菌也有一些致病的菌株，如致泻性大肠杆菌，会导致食物中毒和胃肠道感染。
大肠菌群检测方法大肠菌群的检测方法主要分为培养法和分子生物学方法两大类。
培养法：传统的大肠菌群检测方法是基于培养菌株的数量来进行评估。
这种方法通过将样品培养在选择性培养基上，利用大肠杆菌产生的特殊代谢产物来进行鉴定。
这一方法简单易行，成本较低，但存在一些局限性，如培养时间长，只能检测活菌，对于非培养性细菌较为困难。
分子生物学方法：分子生物学方法包括PCR和实时荧光定量PCR等技术，不依赖细菌的生长特性，能够快速准确地检测大肠菌群。
PCR是通过扩增大肠菌群的16SrRNA基因，然后通过电泳等方法进行检测和定量。
实时荧光定量PCR是一种更快速、灵敏和准确的检测方法，利用荧光探针技术可以实时监测扩增反应的过程，并定量测定大肠菌群的数量。
这种方法具有高度特异性和灵敏性，可以检测非活菌和少量菌。
大肠杆菌的检测方法主要分为传统培养法和分子生物学方法两种。
传统培养法：大肠杆菌的传统培养方法是将样品在选择性培养基上进行培养，利用大肠杆菌产生的代谢产物进行鉴定，并通过菌落数进行定量。
这种方法操作简单，成本较低，但存在一些问题，如需要较长时间培养（通常需要24-48小时），偶尔出现培养落阳性假阳性结果。
此外，该方法只能检测到特定培养条件下的大肠杆菌，并不能检测到非培养性或者少量存在的大肠杆菌。
分子生物学方法：分子生物学方法是通过扩增大肠杆菌特异基因或基因片段来进行检测。
常见的方法有PCR和实时荧光定量PCR。
PCR方法通过扩增大肠杆菌特异基因（如uidA基因）来进行检测，并通过电泳等方法进行鉴定。
实时荧光定量PCR是一种更快速灵敏准确的方法，可以实时监测扩增反应的过程，并定量测定大肠杆菌的数量。
检测大肠菌群的方法
检测大肠菌群的方法
大肠菌群的检测方法可以包括以下几个方面：
1. 培养方法：可以采用传统的培养方法，将样本在含有特定培养基的培养皿上进行培养，并在适当条件下培养出大肠菌群。
然后通过形态特征、生理特性以及生物化学反应等来鉴定大肠菌群。
2. 分子生物学方法：包括PCR、实时荧光PCR、测序等技术。
通过特定引物扩增大肠菌群的特异基因片段，比如16S rRNA基因或者其他特定的核酸片段，然后通过序列比对和进化关系分析来确定大肠菌群的存在和数量。
3. 免疫学方法：可以使用特异性抗体进行检测，如免疫荧光染色、酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法，通过检测特定抗原的存在来判断大肠菌群的存在。
4. 生化方法：通过检测样品中特定的代谢产物来间接判断大肠菌群的存在，比如检测大肠菌产生的气体（如氢气、二氧化碳等）、产酸性物质等。
这些方法可以根据具体的需求和实验条件选择合适的方法进行大肠菌群的检测。
食品微生物检验方法(ISOFDA)
在生理盐水中自凝；
大肠菌群及大肠杆菌测定 ——MPN法检验流程（FDA BAM）
检样50g+450ml稀释液
适当十倍稀释样品
选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液， 每个稀释度接种三管LST肉汤（每管9mlLST肉汤并加有导管），
每管接种1mL 35℃ ，24 ± 2h ~48 ± 2h
检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可 作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4 ℃ 放置，以便在计数检样时用作对照。
大肠菌群的定义
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼 性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学 方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为 食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些 细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步 的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗 称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和 阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌的定义
大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科， 归属于埃希氏菌属。
大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产 气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验 ）为++--或-+--的细菌。
与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括 五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌 （EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠 杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。
食品微生物检验方法 (ISOFDA)
内容提要
菌落总数检测 大肠菌群及大肠杆菌
检测 金黄色葡萄球菌检测 沙门氏菌检测 单核细胞增生李斯特
大肠菌群检验方法及操作方法
大肠菌群检验方法及操作方法1、什么是大肠菌群：指一群需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。
2、大肠菌群的组成：大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和阴沟肠杆菌。
3、大肠菌群的测定意义◆粪便污染的指标菌：大肠菌群或粪大肠菌群◆以大肠菌群作为粪便指标菌原因：1)在粪便中数量最大；2)在外环境中存活的时间与致病菌大体相同；3)检测方法简便容易。
◆大肠菌群的测定意义：1)判断食品中否受到粪便污染。
2)有利于控制肠道传染病的发生和流行。
3)有利于控制食品在生产加工、运输、保存等过程中的卫生状况。
4、大肠菌群的生物学特性1 形态与染色：革兰氏染色阴性，无芽胞杆菌。
2 发酵乳糖产酸产气3 培养特性：在EMB琼脂上的典型菌落:呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽；4 在麦康凯琼脂上的典型菌落：呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润。
5、大肠菌群检验方法及操作方法◆国家标准：◆三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→证实试验(乳糖发酵试验)◆行业标准：◆两步法：推测试验→证实试验表1 大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征MPN法简介Most Probable Number Method最大可能数•对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。
•MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。
6、粪大肠菌群的检验•粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在44.5℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
•于LST中36℃培养48h内产气，并于EC内培养44℃24h产气的一群细菌；在胰蛋白胨肉汤中于44.5℃，24h 内产生吲哚的耐热大肠菌群。
检验方法：7、检验注意事项1）从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。
大肠菌群的检验方法
大肠菌群的检验方法
大肠菌群是指人体肠道内的一类细菌群落，对人体健康有着重要的影响。
检验大肠菌群的方法主要包括以下几种：
1. 粪便培养法，通过采集患者的粪便样本，将其培养在含有特定营养物质的培养基上，利用培养基的选择性和差异培养特性，可以筛选出大肠菌群中的细菌，并对其进行鉴定和计数。
2. 分子生物学方法，包括PCR（聚合酶链式反应）、16S rRNA 基因测序等技术，通过检测特定基因序列或者DNA指纹图谱来确定大肠菌群的成分和数量。
3. 生化检测法，通过测定粪便中的各种生化指标，如pH值、氨氮含量等，来间接反映大肠菌群的代谢活动和数量。
4. 荧光原位杂交技术（FISH），利用荧光探针对大肠菌群中的特定细菌进行染色和检测，可以直观地观察其在肠道内的分布和数量。
5. 免疫学检测法，通过检测粪便中的特定抗原或抗体水平，来
间接反映大肠菌群的情况，如检测肠道病原菌的抗原或特定免疫球蛋白的水平。
总的来说，不同的检测方法各有优势，可以综合应用以获得更全面和准确的大肠菌群信息。
这些方法可以帮助医生评估肠道菌群的健康状况，指导治疗和调整饮食，对于维护肠道健康和预防疾病具有重要意义。
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，可以帮助我们了解
肠道健康状况，及时发现和预防一些疾病。
目前，常见的大肠菌群
检测方法包括肠道菌群分析、粪便菌群检测、肠道菌群DNA测序等。
这些方法各有特点，下面将逐一介绍。
首先，肠道菌群分析是通过采集粪便样本，利用生物信息学技
术对肠道菌群进行分析。
这种方法可以快速、准确地了解肠道内的
微生物组成，包括细菌、真菌、病毒等。
通过肠道菌群分析，可以
发现肠道菌群失衡的情况，及时进行调理和治疗。
其次，粪便菌群检测是通过对粪便样本进行培养和鉴定，来检
测肠道内的细菌种类和数量。
这种方法可以直观地了解肠道内的细
菌情况，包括有益菌和有害菌的比例，从而评估肠道健康状况。
同时，粪便菌群检测还可以帮助医生判断肠道疾病的类型和严重程度，为治疗提供依据。
最后，肠道菌群DNA测序是通过对肠道菌群的DNA进行测序分析，来了解肠道内微生物的种类和基因信息。
这种方法可以全面地
揭示肠道菌群的多样性和功能特点，有助于深入研究肠道微生物与
宿主健康的关系，为个性化治疗提供参考依据。
总的来说，大肠菌群检测方法多种多样，可以从不同角度全面
了解肠道内微生物的情况，有助于预防和治疗相关疾病。
在选择检
测方法时，需要根据具体情况和需求进行综合考虑，以获得最准确、全面的检测结果。
希望本文介绍的内容对大家有所帮助，谢谢阅读！。
FDA方法大肠杆菌和大肠菌群计数方法（中文）
FDA方法大肠杆菌和大肠菌群计数方法(海博译)大肠杆菌和大肠菌群计数方法Enumeration of Escherichia coli and the coliform章节内容：•传统检测大肠菌群和大肠杆菌的方法•LST-MUG法检测冷藏和冷冻食品中的大肠杆菌（除双壳类软体动物制品外）•瓶装水检测方法•贝类和贝类肉制品检测方法•柑桔类水果汁中大肠杆菌检测方法•大肠菌群和大肠杆菌计数的其他方法•参考文件大肠埃希氏菌，以前常称大肠杆菌，于1885年由德国儿科医生Theodor Escherich发现，广泛存在于人类和温血动物的肠道中，是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群，维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌。
大肠埃希氏菌属肠杆菌科，肠杆菌科包括许多种细菌，致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、和耶尔森氏菌。
虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌，但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时，可引起肠外感染。
某些血清型可产生毒素，为致病性大肠埃希氏菌，可引起人类腹泻。
1892年，Shardinger建议把大肠杆菌作为粪便污染的指标。
由于大肠杆菌广泛存在于人类和动物中，而在其他地方少见。
再者，大肠杆菌能发酵葡萄糖（以后改为为乳糖）产生气体。
与已知的非产气致病菌容易区别开来。
因此，大肠杆菌的检测已成为水和食品的近期粪便污染指标，表明可能含有致病菌。
肠道中柠檬酸盐菌，克雷伯氏菌和肠杆菌能发酵乳糖，与大肠杆菌的生物型非常相似，使得把大肠杆菌作为健康威胁的指标，在实际应用中很复杂。
于是，大肠菌群这个术语用来描述这类肠道菌，大肠菌群不是一个分类学上的定义，而是一个工作定义，指的是一群在35℃培养48h，产酸产气的，革兰氏阴性的芽孢杆菌。
1914年，每国公共健康协会把大肠菌群作为一个重要的卫生标准。
虽然大肠菌群很容易检测到，但不一定与粪便污染有关系，因为在自然环境样品中也常存在。
于是，粪大肠菌群就作为粪便污染的指标。
首先由Eijkman提出，指的是在高温下发酵乳糖，是总大肠菌群的亚群，同时也称为耐热大肠菌群。
大肠杆菌检测方法
大肠杆菌检测方法首先，最常用的大肠杆菌检测方法之一是培养法。
这种方法通过将样本在特定的培养基上培养，利用大肠杆菌的生长特性进行鉴定。
培养法的优点是简单易行，可以在实验室条件下进行，同时可以对大肠杆菌进行定量检测。
然而，培养法需要较长的时间，通常需要24小时以上才能得到结果，因此不适用于需要快速检测的场合。
其次，分子生物学方法也是一种常用的大肠杆菌检测方法。
这种方法利用PCR技术或核酸杂交技术，通过检测大肠杆菌的特定基因序列来进行鉴定。
分子生物学方法具有高度的特异性和灵敏性，可以在较短的时间内得到结果，适用于快速检测的需求。
然而，这种方法需要相对复杂的实验操作和设备，对操作人员的技术要求较高。
另外，免疫学方法也是一种常见的大肠杆菌检测方法。
这种方法利用抗原与抗体之间的特异性结合来进行鉴定，包括ELISA法和免疫层析法等。
免疫学方法具有高度的特异性和灵敏性，可以在较短的时间内进行大批量的检测。
然而，这种方法需要相对复杂的实验操作和设备，对操作人员的技术要求较高。
最后，生化方法也是一种常用的大肠杆菌检测方法。
这种方法通过检测大肠杆菌的代谢产物或酶活性来进行鉴定，包括大肠杆菌培养基法和大肠杆菌快速检测试纸法等。
生化方法具有操作简便、快速灵敏的特点，适用于现场快速检测的需求。
然而，这种方法的特异性和准确性相对较低，需要结合其他方法进行验证。
综上所述，针对大肠杆菌的检测方法有多种选择，每种方法都有其优点和局限性。
在实际应用中，应根据具体的检测需求和实验条件选择合适的方法，以确保检测的准确性和可靠性。
希望本文介绍的内容能为相关人员提供参考，对大肠杆菌的检测工作有所帮助。
大肠杆菌的检测方法
大肠杆菌的检测方法
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，常用于食品安全和水质检测，以下是常见的大肠杆菌检测方法：
1. 营养琼脂平板法：将样品接种于含有大肠杆菌生长所需营养成分的琼脂平板上，培养一定时间后，观察平板上是否有典型的大肠杆菌菌落形成。
2. MPN法：通过连续稀释法，将样品分别接种到含有大肠杆菌生长所需营养成分的培养基中，根据样品最终的阳性管数，使用MPN表进行计算，得到大肠杆菌的数量。
3. PCR方法：利用特定引物和酶对大肠杆菌的DNA进行扩增反应，通过检测PCR产物是否存在来判断是否存在大肠杆菌。
4. 发酵管法：将样品接种到含有大肠杆菌发酵底物的管内，根据产气情况判断是否存在大肠杆菌。
5. 荧光定量PCR法：通过特定的引物和荧光标记探针，结合实时荧光PCR技术，可定量检测大肠杆菌的存在情况。
这些方法可以根据实际需要选择不同的检测方法进行大肠杆菌的检测。
实验二 食品中大肠菌群的检验
③另取1mL灭菌吸管，按②操作依次做10倍递增稀释液，每
稀释一次，换用一支1 mL灭菌吸管。
2）乳糖发酵实验 接种1mL待检样品于乳糖胆盐 发酵管内。接种3个稀释度，每一 稀释度接种3管，置（36土1)℃
汤），36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是
否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，
如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复
发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。
LST结果判断
大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充 满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。如 果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以 用手轻轻打动试管。
阳性管 10ml 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1ml 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 0.1ml 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 3 6 9 3 6 9 12 6 9 12 16 9 13 16 19 4 7 11 15 7 11 15 19 MPN 10ml 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 阳性管 1ml 2 2 2 2 3 3 3 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 0.1ml 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 11 15 20 24 16 20 24 29 9 14 20 26 15 20 27 34 21 28 35 42 29 36 44 MPN 10ml 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 阳性管 1ml 3 0 0 0 0 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 0.1ml 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 53 23 39 64 95 43 75 120 160 93 150 210 290 240 460 1100 1100+ MPN
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测是一种常用的微生物研究方法，用于研究人体肠道中的菌群组成和功能。
以下是一些常用的大肠菌群检测方法：
1. 16S rRNA测序：该方法通过测定菌株中16S rRNA基因的
序列来鉴定和分类细菌。
将样品中的DNA提取出来，扩增
16S rRNA基因片段，并进行高通量测序。
通过与数据库中的
序列比对和分类鉴定，可以确定样品中存在的细菌种类和相对丰度。
2. 培养方法：该方法是传统的细菌鉴定方法，通过将样品接种于不同的培养基上，利用菌落形态、生理生化反应等特征来鉴定和分类细菌。
然而，由于肠道菌群的复杂性和细菌的难以培养性，该方法无法检测到所有细菌。
3. 定量PCR：该方法利用聚合酶链反应（PCR）技术，通过
测定特定菌群的基因数量来评估其相对丰度。
选择特定的引物，针对目标细菌进行扩增，并利用荧光标记物进行定量测定。
这种方法通常用于检测特定细菌种群，如某种致病菌的存在。
4. 包括定量PCR在内的多种分子生物学方法：除了定量PCR，还可以利用其他分子生物学方法如荧光原位杂交、DNA探针
和实时荧光PCR等，来检测大肠菌群的组成和丰度。
这些方法可以单独或结合使用，根据研究目的和需求选择合适的方法。
值得注意的是，大肠菌群检测方法也在不断发展演进
中，新的高通量测序技术和分析方法的出现，使得我们对大肠菌群有了更深入的认识。
美兰试验和大肠杆菌生化鉴定试验方案
一、美兰试验1.试剂：亚甲基蓝水溶液：0.01g/300ml美兰、乙醇、四氯乙烷、醋酸、蒸馏水。
2.仪器：试管：20mm*200mm水浴锅：可恒温到38℃显微镜、测微尺、大头针、载玻片、数字式微量注射器3.步骤3.1试验准备美兰染色液的配制：在圆底烧瓶中加入54ml 乙醇、40ml四氯乙烷，加热至70℃，加入1.2g 美兰，强烈摇动，使之迅速溶解，冷却后，徐徐加入 6ml醋酸，然后塞上密封塞，放于棕色瓶中，贮存于干燥冷暗处备用。
每次倒出一定量放在染色缸里使用。
（1）吸取10ml牛奶于灭菌试管中，在水浴中加热到38℃，再加入亚甲基蓝溶液1ml,混匀。
（2）将试管放入水浴中，每30min观察一次褪色情况，并记录每个样品褪色时间。
褪色时间相当于每毫升牛乳中的细菌总数20min >2*107次方20-40 1.0*107-2.0*107次方40-1h 5.0*106-1.0*1061-2h 4.0*106-5.0*1062-3h 3.0*106-4.0*1063-4h 2.0*106-3.0*1065-5.5h 5.0*105-1.0*1055.5-6.5h 3.0*105-5.0*1056.5-7.5h 1.0*105-3.0*105>7.5h <1.0*105细菌总数平板计数1试剂:Terrific肉汤(又称TB培养基)配制每升培养基，在900ml去离子水中加入：胰化蛋白胨 12g酵母提取物 24g甘油 4ml摇动容器使溶质完全溶解。
然后在15psi(1.05 kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min。
当溶液冷至60℃或60℃以下时加入100ml无菌的0.17mol/L KH2PO4，0.72mol/L K2HPO4溶液[该溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解2.31g KH2PO4和12.54g K2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100ml并在15psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min。
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大肠菌群的定义
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌的定义
大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。
大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为++--或-+--的细菌。
与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。
卫生学意义
大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。
食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。
近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
大肠杆菌的生物学特性
基本形态：
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。
约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。
多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特性：
大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。
大肠菌群及大肠杆菌测定
——MPN法检验流程（FDA BAM）
1、检样50g+450ml稀释液
2、适当十倍稀释样品
3、选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管LST肉汤（每管9mlLST肉汤并加有导管），每管接种1mL。
在35℃下，培养24 ± 2h ~48 ± 2h。
4、（1）没有产气管→报告阴性
（2）有产气管：①接种BGLB肉汤管→查MPN表报告结果（大肠菌群）
②接种EC肉汤→在44.5±0.5 ℃ （水浴培养）24 ± 2h ~48 ± 2h。
→产气管接种EMB平板（35℃、18~24h），从EMB平板上挑取5个可疑菌
转接到PCA斜面，进行革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接种LST复检产气
→查MPN表报告结果（大肠菌群）。
大肠菌群测定——MPN法检验几点说明
MPN检索表：
MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。
初发酵和证实试验：
1）两步法进行了两次乳糖发酵试验。
初发酵和证实实验所用培养基不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在37℃分解乳糖产酸产气”。
2）初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为阴性。
有数据表明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证实试验相差较大。
因此，在实际检测工作中，证实试验是必需的。
产气量与倒管：
在乳糖发酵试验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡（有时比小米粒还小），有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。
实验表明，大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。
如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能有气体产生，而应作进一步试验。
大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别
EMB平板典型大肠杆菌菌落特征：
中心黑色或紫红色，有或无绿色金属光泽
大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别
EMB是一种弱选择性培养基，一些球菌也可在该培养基上生长；l高压灭菌可使得美蓝还原从而使培养基的颜色呈不均一橘黄色，轻轻摇动培养基可以恢复原有的正常紫色，倾注平板前应先摇匀；
大肠杆菌在该培养基上并不一定总是呈现绿色的金属光泽；
该培养基受可见光易使其中的成分氧化，储存及培养细菌时都应在避光条件。
大肠杆菌测定——革兰氏染色
基本步骤：
将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗；
滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；
滴加95%乙醇脱色约15～30s,直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗；
滴加番红复染液，复染1min，水洗、待干、镜检。
结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。