外周血循环肿瘤细胞检测技术进展 ppt课件

CTCs的临床意义
疗效监测和预后判断
➢ CTCs可以直接提示癌症患者对治疗的反应 ➢ 持续升高的CTCs提示肿瘤对治疗反应差 ➢ 恶性肿瘤患者CTCs的出现均提示预后不良 ➢ 治疗后CTCs出现与患者复发相关
Ignatiadis M, et al. J Clin Oncol. 2007. 25(33): 5194-202 Liu MC, et al. J Clin Oncol. 2009. 27(31): 5153-9 Rack BK, et al. J Clin Oncol. 2010. 28(15): 1003
CTCs的临床意义
转移复发的早期预警
➢ 肿瘤转移是肿瘤发生发展的终末期，也是肿瘤病 人死亡的主要原因
➢ 目前常规检测肿瘤转移的方法主要影像学方法 ➢ 肿瘤转移的早期发生在细胞水平即便高分辨率的
影像学方法也无法侦测 ➢ CTCs检测可为潜在的转移提供线索，为早期针对
性治疗提供可能
Cristofanilli M, et al. JAMA. 2010. 303(11): 1092-3 Budd GT, et al. Clin Cancer Res. 2006. 12(21): 6403-9
CTCs特点
• 外周血含量低：1～10个CTC/mL血液﹠1 个 CTC/109 个血细胞；
• CTCs特性、形态及细胞标志随着内环境改 变而改变，无统一鉴定标准。
CTห้องสมุดไป่ตู้的 检测步骤
富集
检测
CTC富集方法
物理学
免疫学
免疫/化学
根据细胞 大小进行 富集
以特异性 抗体经抗 原抗体吸 附筛选
免疫细胞 化学结合 纳米材料
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
循环肿瘤细胞 （circulating tumor cells, CTCs）
➢ 1896年Ashworth在患者外周血中发现与原发肿瘤细 胞 体积和形态相似的细胞；
➢ 目前CTCs定义为自发或因诊疗操作脱离实体瘤原发 灶或转移灶进入外周血循环的一类肿瘤细胞。
Hayes DF, et al. Clin Cancer Res. 2006. 12(14 Pt 1): 4218-24 Cristofanilli M, et al. N Engl J Med. 2004. 351(8): 781-91
CTCs的临床意义
个体化治疗的指导
➢ 个体化治疗方案的制定根据病灶的生物学特性 ➢ 转移灶的生物学特点与原发灶细胞存在差异 ➢ 针对CTCs的分析有助于为临床治疗提供个体化信息
Ashworth TR. Aust Med J, 1869, 14: 146-147 Allard WJ, Matera J, Miller MC, et al. Clin Cancer Res, 2004, 10: 6897-6904
研究CTCs的临床意义
➢ TNM分期的重要补充 ➢ 疗效监测和预后判断 ➢ 个体化治疗的指导 ➢ 转移复发的早期预警 ➢ 血循环转移的机制
Stoecklein NH, et al. Int J Cancer. 2010. 126(3): 589-98 Alix-Panabieres C, et al. Clin Chem. 2013. 59(1): 110-8 Alix-Panabieres C, et al. Annu Rev Med. 2012. 63: 199-215
CellSearchTM（免疫磁珠技术）
采用与细微铁颗粒结合的抗体(铁液)。铁液特异性结合循肿瘤 细胞，其强大的磁场把循环肿瘤细胞“牵引”出血样，再用染
色鉴定。
CellSearch 检测CTCs 流程图
CTC研究现状
1、不同肿瘤表面抗体的表达量存在差异 2、肿瘤发展过程中细胞的去上皮化
CTC方法学现状
➢ 纳米技术增大比表面积，分散性好，降低机械压 力，提高富集率
纳米技术
• 纳米科技是指在纳米尺度(从单个原子、分子到亚 微米尺度之间)上研究物质特性和相互作用，以及 由纳米结构集成的功能系统。以此可获得结构可 控、表面功能化的纳米材料和纳米结构；
➢ 磁珠体积很小，不损伤细胞、不影响细胞功能、 不影响细胞的特异染色(细胞膜，细胞质，细胞 核)，显微镜下可直接观察或计算机计数。
➢ 前期应用微米磁珠，比表面积小、尺寸大、稳定 性差、易聚沉，致细胞分离效率低，难洗脱并保 持细胞活性；
➢ 检测成本高、样品用量多、样品检测时间长、检 测过程封闭等诸多不足．
CTCs的临床意义
血循环转移的机制
➢ CTCs形成是血循环转移的必经步骤 ➢ 具有何种生物学特性的细胞容易转移
Chaffer CL, et al. Science. 2011. 331(6024): 1559-64 Pantel K, et al. Trends Mol Med. 2010. 16(9): 398-406
免疫磁性分离
阳性选择法
MACS、Cellsearch系统以及CTC-Chip
阴性排除法
CD45磁珠去除白细胞（IMB法）
抗原抗体吸附筛选
• 光镜下(放大倍数400倍)免疫磁珠吸附目标 细胞
CTC 检测
分子生物 学方法 (PCR)
流式细 胞技术
免疫细胞
化学方法 (ICC、 EPISPOT )
CellTracks® AutoPrep® System
CTCs的临床意义
TNM分期的重要补充
➢ 基于解剖学特点的TNM分期存在许多不足 ➢ CTCs可以做为TNM分期的重要补充 ➢ 2007年CTCs被ASCO推荐做为肿瘤标志物
Pantel K, et al. Nat Rev Cancer. 2008. 8(5): 329-40 Harris L, et al. J Clin Oncol. 2007. 25(33): 5287-312
外周血循环肿瘤细胞检测技术
主要内容
➢ 循环肿瘤细胞检测的意义 ➢ 循环肿瘤细胞检测的基本原理 ➢ 纳米材料技术在循环肿瘤细胞检测中的应用 ➢ 微流控技术在循环肿瘤细胞检测中的应用
精品资料
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