实验五 培养基的配制

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. 实验五培养基的配制（基础实验，4学时）

一、实验目的和要求

学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤

二、实验原理

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素及水分等。琼脂是应用最广的凝固剂，培养基一经制成就应及时灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌器灭菌。

牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学中最常用的基础培养基，加琼脂制成的固体培养基常用于细菌的分离和培养。配方：牛肉膏0.3g, 蛋白胨1g，NaCl 0.5g，水100ml，琼脂1.5～

2.0g，pH 7.2～7.6

三、实验用具

高压灭菌器、电热板、恒温培养箱、电子天平、500ml刻度搪瓷杯、称量纸、三角瓶、量筒、试管、培养皿、玻璃棒、pH试纸、记号笔、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH 、1mol/LHCl

四、实验步骤

1、称药品按配方依次称取，放入具刻度搪瓷杯中，牛肉膏可用表面皿或小烧杯称量，热水溶解后倒入搪瓷杯中，蛋白胨极易吸潮，称量要迅速。

2、溶解在具刻度搪瓷杯中加入少于所需要的水量，加热，用玻璃棒搅拌，溶解后加入琼脂，熔化后补充水至所需量。

3、调pH 用1mol/L NaOH 和1mol/LHCl调，用pH试纸检测。

4、分装液体培养基分装高度以试管高度的1/4左右为宜，三角瓶不超过容积的一半为好，固体培养基＜试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。

5、加塞用棉花制作塞

6、包扎三角瓶用牛皮纸或双层报纸包在棉塞外，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。试管先扎成捆后，在棉塞外用纸包。标明组别、培养基名称、日期。

7、灭菌 0.103MPa，121℃，湿热灭菌20min。

8、摆斜面趁热将试管口搁在一根长木条上，使斜面长度不超过试管总长的1/2。

9、平板制作灭菌后冷至50℃～60℃，取下棉塞，通过火焰，倒在已灭菌的平皿中，平皿制好后通常倒置

10、无菌检查将灭菌的培养基放在37℃恒温箱中培养24～48h，无菌生长可使用。

六、注意事项

1、分装时可用滤斗，避免培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。

2、称药品用的牛角匙不要混用；称完药品及时盖紧瓶盖。

七、思考题

高压蒸汽灭菌器如何使用？