表面微生物测试标准操作规程
版药典表面微生物检测操作规程
1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
3.责任：表面微生物检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.2表面微生物：4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。
接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
4.3.2采样点选择：洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的大小；2.设备、管路等的复杂程度；3.生产活动的重要性；4.易受污染的部位等。
微生物限度检查法标准操作规程完整
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查 供试品微生物计数中 所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性 试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备
试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法 适用性试验。
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B) 10104]
大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44102])
乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)[CMCC(B) 50094]
白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]
薄膜过滤法采用的滤膜孔径不大于。滤膜直径一般为50mm。滤器及滤膜使用 前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供 试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。为发挥滤膜的最大过滤效率，应 注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要 用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，总冲洗量不得超过1000m1；以免滤膜上的微生物受损伤。取照上述“供试液的制备”和“接种和 稀释”制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml、10cm2的供试品，若供试品 中所含菌数校对，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液总，混匀，过滤，用 适量的冲洗液冲洗滤膜。测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨 琼脂培养基平板上；测定霉菌和酵母菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖 琼脂培养基平板上，按规定条件培养、技术。每株试验菌每种培养基至少制备1张滤膜。同法测定供试品对照组和菌液对照组菌数。
微生物限度检查操作规程
更改历史微生物限度检查操作规程1.0 目的建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确2.0 范围适用于本公司采用微生物限度检查法测定的供试品。
3.0 职责质量部负责按本规程的要求执行微生物限度检查操作。
4.0 工作程序4.1 洁净区间的确认微生物计数检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全部过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品（即待检样品、产品）中微生物的检出。
4.2 培养基4.2.1 应使用按中国药典处方及规定的方法制备的培养基。
4.2.2 所用培养基可按中国药典规定的处方及制备方法自行配制，也可使用按中国药典规定的处方生产的脱水培养基进行配制；或购买商品化的预制培养基。
4.2.3 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存。
4.2.4 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
4.2.5 供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
4.2.6 供试品的微生物计数方法、控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数或控制菌检查。
4.3 菌种及菌液制备检查所用的菌种及菌液制备见附件 1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
稀释剂、冲洗液及其制备的要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查。
4.4 培养基的适用性检查供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
微生物限度检查所用的培养基每批均应进行适用性检查，检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。
具体要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
4.5 方法适用性试验供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。
微生物检验实验室G试验标准操作规程
微生物检验实验室G试验标准操作规程1．目的规范G试验标准操作规程。
1.操作授权人经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。
2.用途：4．原理真菌（1，3）-β-D葡聚糖能特异性激活反应主剂中的G因子、凝固酶原等，发生凝固蛋白原转变的级联反应从而引起吸光度的变化，根据检测气吸光度的变化从而对真菌（1，3）-β-D葡聚糖浓度进行定量，试剂中添加的两性电解质甘氨酸、氨基糖苷类抗生素机表面活性剂可抑制脂多糖对B、C因子的激活，对革兰阴性脂多糖有特异性屏蔽作用。
5．样本要求5.1血清的制备：用一次性无热源真空采血管采静脉血4ml，进行3000rpm/min离心10-15min分得血清2小时内检测。
5.2血清保存：标本需冷藏于2-8℃下不超过24小时避免反复冻融。
产品如果需要运输，则应该冷藏运输。
5.3标本前处理：取上述血清0.1ml，加入0.9ml样品处理液中，混匀后70℃孵育10min，取出后立刻放入冷却槽中冷去5min，即为待测血清样品。
6．操作步骤：取待测血清0.2ml直接加入酶反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至9*65mm标准无热源平底试管中，然后再加入0.1ml反应主剂溶液，混匀后，插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行反应，反应结束后检测系统自动计算出待测血清中真菌（1，3）-β-D葡聚糖含量。
注：每批试剂盒由厂家提供参考标准曲线。
定标使用真菌（1，3）-β-D 葡聚糖纯品，纯度>98%。
7.结果判断结果解释：参考值：正常血清真菌（1，3）-β-D葡聚糖值<60pg/ml。
60pg/ml以下，无深部真菌感染（隐球菌、接合菌除外）：60-100pg/ml之间，为观察期，应连续检测。
100pg/ml以上，怀疑为深部真菌将感染，建议临床结症状治疗。
8.注意事项8.1、只能检测（1，3）-β-D葡聚糖含量，不能区分真菌种属，不能检测接合菌和隐球菌。
8.2、实验操作应在无菌无热源的环境下，避免微生物细菌污染8.3、无菌无热源的采血管（建议采用BD血清管），保证试验数据的准确。
表面微生物测定操作规程
文件制修订记录一、目的：建立表面微生物测定操作规程，使操作标准化，规范化。
二、范围：各生产车间、化验室。
三、责任人：质控部检验员。
四、管理内容：1 洁净区微生物监测的动态标准如下：2 检测方法2.1 培养皿接触法培养皿接触法(Rodac Plate法)最为简单，但仅适用于平的表面。
在层流下开启表面接触碟，碟内无菌琼脂培养基 (通常直径为50mm)直接与设备表面接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖；用蘸有75%酒精的棉球擦拭被取样表面，除去残留琼脂。
将取样后的接触碟置于预定时间内和规定温度下(例如30～35℃或20～25℃)进行培养，用肉眼对微生物计数并识别，有疑似控制菌应鉴别菌种。
此方法要求将培养基倒人培养皿中并使之隆起，应防止培养基溢出。
2.2 棉球擦抹法对洁净区消毒结束后，可对洁净室内的机械表面＼内部及缝隙间、墙壁、窗台、试验台等量取25cm2的面积，用事先经过灭菌的生理盐水、精制水或缓冲液(例如磷酸缓冲生理盐水)润湿的适当大小的灭菌纱布或灭菌脱脂棉充分擦拭，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内振摇(或作超声波洗涤)，再对浸出液进行增菌培养。
棉签取样能用于 Rodac 盘无法进行取样的场合，例如角落、缝隙等处。
棉签可以由棉花和涤纶制成。
如果棉签是由海藻酸钙做成的那就最好不过，因为这种材料可溶于稀释液，这样便于将微生物释放在溶液中。
擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。
对每个擦拭点应详细记录所在房间的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间。
2.3 浸渍法棉签先用灭菌稀释液(如注射用水)湿润，然后擦拭取样区域，最后放入一个装有灭菌稀释液的试管中。
样品应在2小时内进行测试，以免在稀释液中增加微生物数量。
试管经搅动从棉签上释放出微生物，稀释液则注入培养基盘内，经培养，然后计数并鉴别。
根据USP中表面微生物的检测，面积为25～30平方厘米，一个点使用一根棉签，擦拭完毕后将棉签剪断到5ml生理盐水中，分注到5个平皿中。
药典表面微生物检测操作规程
题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
3.责任：表面微生物检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。
接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
表面微生物检测标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。
表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。
如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。
不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。
4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。
5、测试状态及时间：动态测试。
6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。
将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。
翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。
但与前次擦拭移动方向垂直。
擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。
7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
车间微生物检验作业指导书
车间微生物检验作业指导书引言概述：车间微生物检验是指对车间环境、设备和产品进行微生物污染检测的一项重要工作。
它能够匡助企业及时发现和控制微生物污染问题，保障产品质量和员工健康。
本文将详细介绍车间微生物检验的操作流程和注意事项。
一、检验前准备1.1 清洁车间环境车间环境的清洁程度对微生物检验结果有重要影响。
在进行检验前，需要确保车间环境的卫生状况良好，尽量减少空气中的微生物数量。
定期清洁车间地面、墙壁和设备表面，使用合适的清洁剂进行消毒。
1.2 准备检验设备和试剂进行微生物检验需要使用一系列的设备和试剂，包括培养基、培养皿、移液器、显微镜等。
在检验前，需要检查这些设备和试剂的完好性和有效期，确保其能够正常使用。
同时，要做好试剂的储存和保管工作，避免受潮或者受污染。
1.3 培养基的制备培养基是进行微生物检验的基础，其制备需要严格按照像关标准和规定进行。
在制备培养基时，要注意消毒操作，避免细菌污染。
同时，要根据检验需要，选择适合的培养基类型和配方，确保能够有效检测出目标微生物。
二、样品采集与处理2.1 样品采集方法选择根据不同的检验目的和要求，选择合适的样品采集方法。
常见的样品采集方法包括空气采样、表面刷拭法、冲洗法等。
要注意采样器具的消毒和无菌操作，避免样品污染。
2.2 样品处理与制备采集到的样品需要进行适当的处理和制备，以便于后续的微生物检验。
对于液体样品，可以通过过滤、离心等方法获得微生物。
对于固体样品，可以使用稀释液进行稀释，然后进行培养。
同时，要注意样品的保存和标识，避免交叉污染和混淆。
2.3 样品保存和运输采集到的样品需要及时保存和运输，以保持微生物的活性和可检测性。
对于不同类型的样品，可以选择适当的保存方法，如低温保存、添加保护剂等。
在运输过程中，要避免温度过高或者过低，以及震动和挤压等对样品的不利影响。
三、微生物检验方法3.1 培养方法培养方法是微生物检验中常用的一种方法，通过将样品接种到培养基上，利用培养基的营养成份和条件，使细菌能够生长和繁殖。
物体表面微生物污染检测标准操作规程
物体表面微生物污染检测标准操作规程一、采样方法
二、检测方法
充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0 ml接种平皿，将冷却至40~45 ℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20 ml，36±1 ℃恒温箱培养48小时，计数菌落数。
三、结果计算
物体表面菌落总数计算方法：
1、规则物体表面：
细菌菌落总数（CFU/ cm²）：平均每皿菌落数×稀释倍数/
采样面积（cm²）；
2、不规则物体表面的结果计算，用CFU/件表示。
四、判定标准
1、Ⅰ、Ⅱ类环境：洁净手术部、其他洁净场所、非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器
官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等，物体表
面细菌菌落总数≤5 CFU/cm²。
2、Ⅲ、Ⅳ类环境：儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人工流产室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心检
查包装灭菌区和无菌物品存放区、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室等，物体表面细菌菌落总数≤10 CFU/cm²。
五、采样中的注意事项
1、采样时机：日常常规检测时可在消毒后采样，怀疑医院感
染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被污染时，应随机采样。
2、常规对环境物体表面消毒效果检测时可不进行致病性微生物检测，疑似医院感染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被微生物污染时，应进行目标微生物的检测。
3、采样、接种中严格遵守无菌技术操作规程。
微生物限度检查法标准操作规程
微生物限度检查法标准操作规程一、目的：建立一个微生物限度检查标准操作规程，规范质检员的操作，保证实验的安全性、准确性。
二、范围：适用于微生物限度检查的产品。
三、责任：QC部质检员对本规程实施负责。
四、内容1.检验依据：《中国药典》2010年版二部。
2. 简述2.1.微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌数检查。
2.2.微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
2.3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
2.4.除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃2.5.检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
3.设备、仪器3.1.设备：3.1.1.洁净实验室：微生物限度检查应有单独的洁净实验室，每个洁净实验室应有独立的净化空气系统。
结构和要求：洁净室应采光良好，避免潮湿、远离厕所及污染区。
操作间与缓冲间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。
洁净实验室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处无缝隙，不留死角。
操作间不应安装下水道。
洁净实验室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300LX。
●温度、湿度：洁净实验室内温度应控制在18～26℃，相对湿度最好在40％～60％。
●操作间：操作间应安装空气除菌过滤层流装置。
洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
洁净室(区)表面微生物检测操作规程
标准操作规程（STANDARD OPERATING PROCEDURE ）题目洁净室（区）表面微生物检测规程编码SOP-QC-011-00 文件属性■新订；□确认；□修订，第次，替代起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门品质管理部颁发日期2018.07.23 生效日期2018.08.01 分发部门品质管理部1份，检验检测部2份，行政人事部1份，共印4份1. 目的：规范洁净室（区）表面微生物检测程序，以确切反映生产活动对环境的影响程度。
2. 适用范围：适用于洁净室（区）内包括设施、墙面、地面、设备表面和洁净服、操作手套等表面的微生物监测。
3. 责任人：QC：负责培养基的准备及取样后培养观察记录结果。
负责培养皿（液）的中间转运、记录填写及报告发放。
各车间工序指定人员：负责正常生产时对无菌注射剂车间动态洁净区的表面微生物检测。
4. 正文：4.1 测试条件：4.1.1 被测洁净室（区）温、湿度、静压差、换气次数和空气的流速必须控制在规定范围内；4.1.2 测试前，被测试洁净室（区）已经消毒；4.1.3 被测净化空调系统正常运行不少于30min后开始测定。
4.2 测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服；4.3 测试前准备：4.3.1 定量法培养皿的准备：为购买的预灌装表面接触碟平皿，成分为大豆酪蛋白琼脂营养基（TSA），具有三层包装且经钴60辐照的预灌装表面接触碟平皿，可供采样用。
4.3.2 定性法培养基的准备：4.3.2.1 取250ml锥形瓶加入200ml营养肉汤培养基后，置121℃湿热灭菌20min后备用；4.3.2.2 取500ml锥形瓶加入400ml营养肉汤培养基后，置121℃湿热灭菌20min后备用；4.3.2.3 取20ml试管注入10ml营养肉汤培养基后加塞，置121℃湿热灭菌20min后备用。
4.3.3 擦拭工具准备：4.3.3.1 擦拭用洁净棉签放在烧杯里包裹后，经过121℃湿热灭菌20min后备用。
表面微生物检测标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基2.1培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿2.2培养基：营养琼脂培养基2.3生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
2.4自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、采样位置和采样点数3.1根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。
3.2表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。
如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。
3.3不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。
4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。
5、测试状态及时间：动态测试。
6、测试6.1依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
6.2将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。
6.3将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。
6.4翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。
但与前次擦拭移动方向垂直。
6.5擦拭方法如图：6.6擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。
表面微生物测试标准操作规程
1．目的建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2．依据《药品生产质量管理规范》（2010年修订本）3．范围本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。
4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行5．内容5.1洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：5.1.1空调系统验证的结果5.1.2房间的大小和布局5.1.3房间的用途5.1.4与产品的距离5.1.5人流物流方向对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
5.2洁净区微生物测试频率和限度5.2.1日常监控一月一次5.2.2接触碟（ 55mm）50cfu/25cm2，警戒40cfu/25cm2，纠偏45cfu/25cm2。
5.3洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）5.3.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。
5.3.2仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac（Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。
5.3.3取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。
取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与去仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。
5.3.4取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。
5.3.5培养：收好的营养琼脂接触碟在30～35℃培养3天，玫瑰红钠琼脂培养基在23～28℃培养5天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。
5.4偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.4.1检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.4.2回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.4.3回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4.4检查人员的更衣程序是否正确；5.4.5检查清洁设备和消毒剂的质量；5.4.5查看操作员工的培训记录。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程1. 目的建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。
2. 范围适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。
3. 职责3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程；3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。
4. 操作规程4.1 微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤4.1.1 一般的玻璃器皿（例如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充分冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达到标准。
4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗干净，备用。
4.1.3 新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。
4.2 器皿的包扎4.2.1 试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。
做发酵试验时，将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。
4.2.2 三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。
4.2.3 吸管：将耐高温的移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。
4.2.4 平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。
4.3消毒和灭菌：4.3.1 化学灭菌：此法适用于微生物操作过程中不能加热、紫外线的地方。
如人手等。
（1）用75%的乙醇溶液或0.1%新洁尔灭擦拭或浸泡。
（2）一般用1～2%的甲醛液浸泡软管和用具。
（3）一般成品漂白粉的有效成分是25～32% 。
使用时配成有效成份的2%溶液洒在地面或容器内，（对金属有腐蚀作用）放置10～15min后冲洗即可。
（4）氯灭菌剂的能力以有效氯表示，将氯水配制成50～100PPm 的有效氯溶液，可用于浸泡，冲洗和表面杀菌。
但氯对金属有腐蚀作用。
4.3.2 物理灭菌：4.3.2.1 干热灭菌：适用于干燥的玻璃器皿（吸管、平皿等）、金属器具（镊子等）、固体试液、液状石蜡等。
灭菌条件一般选用在160℃干热空气灭菌2h。
洁净室(区)表面微生物的检验操作规程
洁净室(区)表面微生物的检验操作规程.doc洁净室（区）表面微生物检验操作规程1. 目的确保洁净室（区）表面微生物的检验操作标准化，以评估和控制洁净环境的微生物污染。
2. 适用范围适用于所有需要进行微生物污染控制的洁净室（区）。
3. 责任质量管理部门：负责制定和更新检验操作规程。
检验人员：负责执行检验操作，并记录检验结果。
4. 术语和定义洁净室（区）：指按照特定要求控制空气、表面等微生物污染的封闭空间。
表面微生物检验：指对洁净室（区）内表面进行取样和分析，以评估微生物污染程度的过程。
5. 检验准备5.1 检验人员：检验人员应经过专业培训，熟悉检验操作规程。
5.2 检验工具和材料：准备必要的检验工具和材料，如无菌棉签、无菌生理盐水、培养基、手套、口罩、工作服等。
5.3 检验环境：确保检验环境符合洁净室（区）的要求，如温度、湿度、空气洁净度等。
6. 检验操作步骤6.1 表面取样6.1.1 取样点选择：根据洁净室（区）的布局和使用情况，合理选择取样点。
6.1.2 表面消毒：对取样点进行消毒，以减少非目标微生物的干扰。
6.1.3 取样：使用无菌棉签蘸取无菌生理盐水，轻轻擦拭取样点表面，收集样本。
6.2 样本接种6.2.1 培养基准备：根据需要选择合适的培养基，如琼脂平板。
6.2.2 接种：将取样棉签在培养基上轻轻涂抹，确保样本均匀分布。
6.3 培养6.3.1 培养条件：将接种后的培养基放入恒温培养箱中，设定适宜的温度和时间进行培养。
6.3.2 观察记录：定期观察培养基上微生物的生长情况，并记录数据。
6.4 结果分析6.4.1 计数：根据培养基上的菌落数，计算每平方厘米的微生物数量。
6.4.2 鉴定：对菌落进行形态学观察和必要的生化试验，以鉴定微生物种类。
6.4.3 数据分析：分析检验结果，评估洁净室（区）的微生物污染状况。
7. 检验结果的评估7.1 标准对比：将检验结果与洁净室（区）的微生物污染标准进行对比。
细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程
细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：细菌、霉菌、酵母菌检查是食品安全和环境卫生领域中非常重要的一项工作。
为了确保检查结果的准确性和可靠性，需要遵守一系列标准操作规程。
下面将介绍一份关于细菌、霉菌、酵母菌检查的标准操作规程，以供参考。
一、检测方法选择在进行细菌、霉菌、酵母菌检查之前，首先需要确定检测的目的和样品种类。
根据具体情况选择适合的检测方法，一般可以选择培养基法、PCR法、免疫学法等方法进行检测。
不同方法的灵敏度和准确度有所差异，需要根据具体要求选择合适的检测方法。
二、样品采集在进行细菌、霉菌、酵母菌检查之前，需要首先采集样品。
样品的采集应该遵循以下原则：1. 样品应该代表性，能够反映整个检测对象的真实情况；2. 样品的采集方法应该符合标准操作规程，避免污染；3. 采样器具和容器应该经过消毒处理，避免样品受到外界干扰。
三、样品处理在采集到样品后，需要进行样品处理以提取目标微生物。
样品处理的方法应该符合标准操作规程，避免样品受到外界污染。
常用的样品处理方法包括过滤法、萃取法、富集法等。
四、培养条件设置对于细菌、霉菌、酵母菌的检测，需要设置合适的培养条件以促进目标微生物的生长。
培养条件的设置应该考虑到目标微生物的生长特性和适宜条件，并严格控制培养环境的温度、湿度和氧气等因素。
五、培养基选择在进行微生物检测时，需要选择适合的培养基以促进目标微生物的生长。
不同微生物对培养基有不同的选择性，需要选择适合的培养基进行培养。
常用的培养基包括普通培养基、选择性培养基、差异培养基等。
六、检测结果解读在检测完成后，需要进行检测结果的解读。
根据实验结果判断目标微生物的存在与否，对结果进行合理解读和分析。
检测结果应该符合标准操作规程的要求，确保检测结果的准确性和可信度。
七、结果报告在完成检测后，需要对检测结果进行报告。
检测报告应该包括检测方法、样品信息、检测结果、结论和建议等内容。
洁净区表面微生物检测方法标准操作规程
目的：建立检测洁净区的表面微生物污染的检测方法，保证洁净区达到要求。
应用范围：适用于洁净室的质量控制责任人：化验室微生物检验员。
内容：1 仪器与材料灭菌的培养皿及营养琼脂培养基，每个培养皿中倒入20ml培养基、121℃灭菌30分钟，然后30～35℃培养24小时，如无菌生长，则可用于试验。
2 取样检测方法包括：接触平皿法、棉签擦拭法及表面冲洗法。
取样人员于取样前检查琼脂平皿。
不得使用被污染、水汽过多、过于干燥或分装不均的平皿。
同一物体应在其不同的地方采2个样。
2.1 接触平皿法2.1.1 适用于对平整的有规则性表面进行取样。
碟子为直径50～55mm，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面积一般约为25cm2。
2.1.2 取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，再盖上碟盖。
2.2.3 取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。
2.2 棉签擦拭法2.2.1 适用于平皿接解法不适用的设备和不规则表面取样。
2.2.2 棉签的种类可选棉质、涤纶等。
将100个棉签用无菌生理盐水或0.1%的蛋白胨溶液约50ml浸湿，包上铝箔放入不锈钢饭盒中，121℃灭菌30分钟。
2.2.3 取样时，握住棉签柄，以30角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积24～30 cm2，然后将取样头折断放入浸湿溶液中，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。
2.3 表面冲洗法2.3.1需要确定设备内表面的生物载荷或面积较大时采用此法。
2.3.2用经121℃灭菌30分钟无菌水冲洗内表面，刻度吸管吸取淋洗液1ml，膜过滤后，检测。
3 培养 30～35℃培养48小时。
4 采样量每个采样点分别用棉签法取样或使用接触平皿法充分接触。
5 采样结果每个培养皿中的菌落数与限度比较得出最后的评判。
6 偏差纠正发现表现检测结果超标，可以采取以下行动进行调查和评估6.1 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质等。
表面微生物测试标准操作规程
表⾯微⽣物测试标准操作规程表⾯微⽣物测试标准操作规程（接触平⽫法）1．⽬的建⽴表⾯微⽣物测试标准操作规程，保证测试⼈员操作规范化、标准化。
2．依据《药品⽣产质量管理规范》（2010年修订本）3．范围本规程适⽤于本公司对洁净区的表⾯微⽣物的检测。
4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执⾏5．内容洁净区微⽣物测试点选择表⾯微⽣物监测的采样点数⽬及其布局根据以下⼏个⽅⾯设置：空调系统验证的结果房间的⼤⼩和布局房间的⽤途与产品的距离⼈流物流⽅向如何布点：对于同⼀洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地⽅采2个样。
如墙⾯2个采样点，地⾯2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。
注：表⾯微⽣物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的⼤⼩；2.设备、管路等的复杂程度；3.⽣产活动的重要性；4.易受污染的部位等。
应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把⼿、地板（⾄少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，⾄少两点）、公⽤介质的管路（不易被清洁/消毒部位）、⽣产设备的关键性部位（如灌装针、易与⼈员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。
根据洁净区内设施、设备等表⾯对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表⾯分为三类：关键表⾯（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表⾯）⼀般表⾯（如设备的外表⾯、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微⽣物限度要求。
表⾯微⽣物的每点取样⾯积宜控制在25cm2左右。
为避免⼲扰，宜在⽣产活动结束后取样。
洁净区微⽣物测试频率和限度⽇常监控⼀⽉⼀次接触碟（55mm）50cfu/25cm2 ，警戒40cfu/25cm2 ，纠偏45cfu/25cm2 。
洁净区表⾯微⽣物测试⽅法（接触平⽫法）。
洁净区表⾯微⽣物测试必须在动态下监测。
仪器与材料：如使⽤⾃制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac （Replicate Organism Detection and Counting）的培养⽫，也可在外购买。
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一、目的：建立表面微生物检验标准操作规程，确保表面微生物检验结果的准
确。
二、适用范围：适用于表面微生物检验操作。
三、责任人：QC检验人员负责本规程的实施，QA负责人、QC负责人监督检查。
四、内容：
1、测试方法
1.1 方法提要
表面微生物测试可采用棉签擦拭法取样或市售预制TSA培养皿直接接触采样法，即通过对一定面积的（约25m2）的表面进行取样后，接种至培养基后，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内表面和操作人员单位面积表面的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。
1.2 所用的仪器、设备和培养基
a）一次性采样管；
b）培养皿；
c）培养基；
d）恒温培养箱。
1.3 注意事项：
1）采样用采样棒及培养皿或培养基均应在有效期内且包装密封完好。
2）所有取样操作应在生产关键操作结束后取样。
2、测试步骤：
2.1、棉签擦拭法取样
2.1.1 选择取样点后，打开一次性采样管，提出采样棒，于管口处轻轻挤压多余的
溶液，在取样范围内，在向前移动的同时将其从一边移到另一边；翻转取样棉签，让棉签的另一面也进行擦拭，但与前次擦拭移动方向垂直，擦拭时稍用力。
取样方式：擦拭取样示意图
2.1.2 取样后立即将采样棒插入采样管中，拧紧，并用消毒剂对取样点进行表面擦拭。
2.1.3 将取样后的采样管用力振摇3分钟以上，将管内溶液照微生物限度检查法（薄膜过滤法）进行检查，置于30～35o C恒温培养箱中，培养72小时，计数。
2.2、表面接触皿取样
2.2.1 选择取样点后，打开市售预制TSA培养皿，对取样范围表面进行接触取样，接触时间不少于5秒钟，取样完成后立即加盖,并用消毒剂对取样点进行表面擦拭。
2.2.2 将取样后的培养皿用其所附包装袋包装好后，置于30～35o C恒温培养箱中，培养72小时，计数。
3、取样对象及取样点
3．1 洁净区操作间及设备表面
100级区（A级区）：每班3个样品，在关键操作点任意取样（灌装机轨道、台面，胶塞振荡斗、胶塞下料轨道、理瓶盘、触摸屏、冻干箱搁板、周转盘、人手须接触的容器具表面、不锈钢桶盖提手处）
万级无菌区：每班任意在工作面取2-3个样品（回风口上方墙面、地面、人物流门把手）
万级区、十万级区：在关键操作点设备、容器具表面或操作间表面取3-5个点。
3．2操作人员人体表面
任意取一位操作工人，双手手指及掌内侧、双手前臂、前胸或腹、眼镜、前额、口罩等处任取2-3个点
4、监测标准：。