PCR技术
PCR技术
PCR技术PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种用于扩增DNA片段的重要分子生物学技术。
通过PCR技术，可以在体外迅速扩增出特定的DNA序列，使得该技术在基因分型、基因克隆、基因重组、遗传病检测等领域得到广泛应用。
PCR技术主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
首先，通过高温（通常为94-98°C）将DNA双链变性为两个单链。
然后，通过降低温度（通常为50-65°C）使引物与目标序列互补结合。
最后，通过DNA聚合酶的活性，在适当的温度条件下（通常为72°C），引物通过DNA聚合酶的催化作用将目标序列进行扩增。
PCR技术中，引物的设计起着至关重要的作用。
引物是指在DNA序列两侧能够与目标序列互补结合的寡核苷酸序列。
在PCR扩增的第一步中，引物通过与目标序列的互补性结合来引导DNA的扩增。
因此，引物的设计需要考虑以下几个因素。
首先，引物的长度应该在18-30个碱基对之间，通常为20-25个碱基对。
引物过短可能无法确保特异性扩增，引物过长可能导致目标序列的特异性降低。
其次，引物的Tm（熔解温度）应该在55-65°C之间。
熔解温度是引物与目标序列结合的温度，过低的熔解温度可能导致非特异性产物的扩增，过高的熔解温度可能导致引物无法结合目标序列。
此外，引物的GC含量也是设计引物时需要考虑的因素之一、GC含量的适宜范围通常为40-60%，过高或过低的GC含量可能导致引物的特异性降低。
最后，引物之间不能有自身互补性或引物之间的互补性。
自身互补性可能导致引物形成二聚体，而引物之间的互补性可能导致不特异性产物的扩增。
在引物设计方面，可以借助于计算机软件进行引物的全面评估。
目前常用的引物设计软件有Primer3、OligoAnalyzer等。
通过在这些软件中输入目标序列，可以获得一系列满足上述设计准则的引物。
综上所述，PCR技术是一种重要的分子生物学技术，而引物的设计是PCR技术中至关重要的一环。
pcr技术的名词解释
pcr技术的名词解释PCR技术，全称聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种在生物科学领域广泛应用的核酸扩增技术。
PCR技术可以在体外复制、扩增极微量的DNA或RNA片段，从而使其在实验室中进行更详细和准确的研究。
PCR技术是由美国科学家凯瑟琳·穆利斯（Kary Mullis）于1983年发明的，她因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。
PCR技术的发明被视为生命科学领域的一项突破性发现，它极大地改变了基因分析和诊断的方式。
PCR技术的核心原理是通过一系列温度变化，使DNA模板序列在DNA聚合酶的作用下反复复制。
PCR技术通常需要以下几个步骤。
首先，从待扩增的DNA样本中提取出目标DNA序列。
提取DNA的方式可以根据实验目的不同而有所差异，常见的方法包括酚氯仿法、磁珠法等。
然后，将DNA样本置于PCR反应管中，并添加聚合酶、DNA引物（primer）以及四种碱基（A、T、C和G），混合均匀。
引物是一对短链的DNA片段，它能够特异性地与待扩增的DNA片段的两端结合。
接下来，将PCR反应管置于热循环仪中，进行一系列温度变化的循环。
通过加热至高温（通常为94-98摄氏度），使DNA双链解离成两条单链。
然后，降温到合适的温度（通常为50-65摄氏度），引物与目标DNA序列的两端结合，作为DNA复制的起始点。
最后，加热至适宜的温度（通常为72摄氏度），聚合酶将新的DNA链片段与引物结合，并复制出新的双链DNA。
上述温度循环通常需要重复20-40次，每一轮都会产生比前一轮更多的目标DNA序列。
因此，PCR技术具有极好的扩增效率。
PCR技术在生物科学中有广泛的应用。
它可以用于基因测序、基因突变检测、基因表达分析、DNA指纹鉴定等多个领域。
此外，PCR技术的快速和高效使其成为了病原体检测、法医学和生物工程等领域的重要工具。
总结来说，PCR技术是一种重要的核酸扩增技术，通过循环反应和温度变化的方式可以在实验室中迅速、准确地复制和扩增DNA或RNA序列。
pcr技术有几种
PCR技术有几种PCR（聚合酶链式反应）是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，其原理和过程都非常重要。
PCR技术可以迅速复制DNA片段，并在实验室中进行分析和研究。
PCR技术有几种不同的变体，每一种都有其特定的应用领域和优势。
1. 标准PCR标准PCR，也被称为常规PCR或传统PCR，是PCR技术最常用的形式。
在标准PCR中，需要使用DNA模板、一对引物、四种核苷酸和DNA聚合酶。
PCR反应从一段DNA的两端引导酶链的扩张，通过多次循环反复进行，最终产生大量的DNA复制产物。
标准PCR可用于多种应用，如基因克隆、基因表达定量分析、基因突变检测等。
它是分子生物学研究中最重要且最常用的工具之一。
2. 实时定量PCR实时定量PCR（qPCR）是PCR技术的一种改进形式，可以在PCR反应过程中实时监测扩增产物的积累量。
该技术利用荧光染料或探针标记扩增产物，通过测量荧光信号的强度来确定反应体系中的DNA量。
实时定量PCR广泛应用于基因表达分析、病原体检测、药物研发等领域。
由于其高灵敏度、准确性和快速性，成为许多实验室和医学机构的首选技术。
3. 逆转录PCR逆转录PCR（RT-PCR）是用于将RNA转录为相应的DNA的技术。
逆转录PCR结合了逆转录酶的作用和标准PCR的扩增机制，可以从RNA中合成DNA，进而进行进一步的分析。
逆转录PCR在研究基因表达和分析RNA病毒等方面发挥着重要作用。
它可用于确定基因是否转录为RNA，并量化RNA的表达水平。
4. 梯度PCR梯度PCR是一种对PCR反应条件进行逐步优化的技术。
通过在反应管中创建不同温度的梯度，可以在一个PCR实验中测试多个不同条件下的扩增效果。
这有助于确定最佳的PCR条件，以提高扩增效率和特异性。
梯度PCR在优化引物和降低非特异引物扩增的干扰方面非常有用。
对于特定的PCR 反应，梯度PCR可以提供更准确和高效的结果。
综上所述，PCR技术有多种不同的变体，每一种都有其特殊的应用领域。
pcr技术
pcr技术PCR技术简述PCR（聚合酶链式反应）是一种在分子生物学领域中广泛应用的技术，它通过扩增DNA序列，使得微量的DNA可被放大到足够进行分析和检测。
PCR技术的发明者是美国生物化学家凯瑟琳·穆利斯和基瑞克·穆利斯，他们在1983年首次描述了PCR技术的原理和应用。
PCR技术的原理基于DNA的双链结构以及DNA聚合酶的酶活性。
首先，需要将DNA样本经过解链处理，使得DNA的两条链分离。
然后，通过引物（primers）的引导，DNA聚合酶在适当的温度下，将碱基按序合成新的DNA链。
在这个过程中，由于DNA聚合酶的高保真性，其错误复制的错误率非常低。
PCR技术的应用非常广泛。
一方面，PCR技术可以用于DNA的克隆，即通过扩增特定目标序列，大量复制所需的DNA片段。
这项技术在基因工程、遗传学、疾病诊断以及法医学中有着重要的应用。
另一方面，PCR技术还可用于DNA的测序，即通过大量扩增DNA片段的方法，快速获取准确的DNA序列信息。
这项技术在基因组学、进化生物学等领域具有重要意义。
PCR技术具有许多优点。
首先，PCR技术具有高效快速的特点。
在PCR反应中，只需几个小时就能从微量的DNA样本扩增出大量的DNA。
其次，PCR技术的扩增过程是在体外进行的，不依赖于生物体，也不受DNA序列的限制。
第三，PCR技术对DNA样本的要求较低，只需微量的DNA就可以进行扩增。
最后，PCR技术的扩增结果可以被检测和分析，从而实现对特定DNA序列的定量和定性研究。
然而，PCR技术也存在一些限制。
首先，由于PCR技术的扩增过程是指数型增长，因此存在扩增产物的竞争问题，这可能导致非特异性扩增。
其次，PCR技术对引物的设计和选择要求较高，如果引物选择不当，可能会导致扩增失败或非特异性扩增。
此外，PCR技术还存在杂交、污染和抑制等问题，这可能对结果的准确性产生影响。
为了解决PCR技术的一些限制，研究人员对PCR技术进行了改进和创新。
pcr知识点总结归纳
pcr知识点总结归纳PCR（Polymerase Chain Reaction），即聚合酶链反应，是一种用于抑制、合成、扩增DNA的技术。
PCR技术广泛应用于科学研究、临床诊断、法医鉴定和生物工程等领域。
PCR技术的出现不仅提高了DNA的扩增速度，而且在很大程度上解决了DNA分析的难题和可行性问题。
PCR技术的关键在于DNA的扩增，通过特定的引物（primer）和热稳定的DNA聚合酶在不同温度下进行多次循环反应，使目标DNA片段扩增成百上千倍。
PCR技术的应用可以在较短时间内获得充足的DNA，为后续的实验提供了可行性基础。
PCR技术是分子生物学研究的重要工具，掌握PCR技术的原理和操作方法对于分子生物学研究者来说至关重要。
下面将对PCR技术的知识点进行总结和归纳，包括PCR的基本原理、PCR反应体系、PCR引物设计、PCR技术的优缺点以及PCR技术在生物学研究中的应用等方面。
一、PCR的基本原理PCR技术是通过DNA的酶解、DNA的引物延伸、DNA的片段合成来实现DNA扩增。
PCR主要由以下三个步骤组成：变性、退火和延伸。
1. 变性步骤：将DNA的双链解链成两条单链，即使DNA解链。
2. 退火步骤：将引物与DNA模板结合成双链，即使DNA复性。
3. 延伸步骤：在退火变性条件下将引物作为起始核酸，然后DNA聚合酶将其扩增成DNA。
通过以上三个步骤的循环反应即可实现DNA的多次扩增。
二、PCR反应体系PCR反应体系主要包括DNA模板、引物、DNA聚合酶、四种dNTPs、缓冲液和辅助剂等。
1. DNA模板：PCR反应的起始材料，可以是基因组DNA、cDNA或其他DNA模板。
2. 引物：在退火步骤中将与DNA模板特异性结合，为DNA的扩增提供起始核酸。
3. DNA聚合酶：用于合成DNA，PCR反应中通常采用热稳定的DNA聚合酶如Taq DNA聚合酶。
4. dNTPs：即脱氧核苷酸三磷酸盐，即dATP、dCTP、dGTP和dTTP，是DNA聚合的四种脱氧核苷酸单体。
pcr的原理和应用领域
PCR的原理和应用领域1. PCR的原理PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）是一种在体外扩增DNA片段的技术。
它是由美国生物学家凯瑟琳·梅利斯（Kary B. Mullis）在1983年发明的，因其在分子生物学领域的重要应用而获得了1993年的诺贝尔化学奖。
PCR的原理主要包括三个步骤：变性、退火和延伸。
1.1 变性（Denaturation）将待扩增的DNA样品加热至94-98℃，使双链DNA解开成两条单链DNA。
这一步是为了使DNA分子的双链结构完全解链，以便后续的退火步骤。
1.2 退火（Annealing）将待扩增的DNA样品降温至50-65℃，加入引物（寻找特定靶序列的DNA寡核苷酸链），使引物与单链DNA序列互补配对结合。
这一步是为了使引物与待扩增的DNA序列特异性地结合，以启动PCR反应。
1.3 延伸（Extension）将待扩增的DNA样品在72℃下加入DNA聚合酶（如Taq聚合酶），使DNA引物双链结构被DNA聚合酶复制成两条新的DNA双链。
这一步是为了合成新的DNA链，使扩增物数量呈指数倍增。
经过多个循环的变性、退火和延伸步骤，可以在短时间内扩增出大量特定目标序列的DNA片段。
2. PCR的应用领域PCR技术具有高效、灵敏、特异性强等优点，因此在许多领域得到了广泛应用。
2.1 分子生物学研究PCR技术在分子生物学研究中扮演着重要角色，广泛应用于：•基因克隆和表达研究：PCR可以扩增特定基因片段，用于克隆和构建重组DNA。
可以通过PCR检测基因在不同组织和细胞类型中的表达水平，研究基因的功能和调控机制。
•突变检测和基因诊断：PCR可以检测基因突变，用于遗传病的诊断和预测。
例如，PCR可以用于检测致病基因的特定突变，如BRCA1和BRCA2基因突变与乳腺癌的关联。
•DNA指纹和个体识别：PCR可以扩增DNA中的特定序列，用于DNA指纹分析和个体识别。
pcr的名词解释
pcr的名词解释PCR，全称为聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种能够在体外迅速并大量复制DNA序列的技术方法，由美国生物化学家凯瑟琳·穆利斯与基里·穆利斯于1983年发明。
PCR在遗传学、生物医学研究、临床诊断等领域广泛应用，被誉为分子生物学中最重要的发现之一。
PCR的工作原理基于DNA的复制，它通过复制反应周期使得原始DNA序列在短时间内指数级增加。
PCR反应的基本步骤包括：变性、退火和延伸。
首先，PCR反应系统中加入待复制的DNA样品，然后样品经过变性，即使DNA双链分离为两条单链，这可以通过高温或碱性条件触发。
接下来，低温使引物（primers）与目标DNA序列的互补序列结合，这一步骤被称为退火（annealing）。
在DNA引物的作用下，通过DNA聚合酶酶作用，沿着模板DNA链合成新的DNA链（延伸）。
延伸步骤的最终结果是生成两条完整的DNA分子，它们与初始目标DNA序列相同。
这个过程重复多次，通过指数增加的PCR循环数目，可以在短时间内快速扩增目标DNA。
PCR具有许多优点，因此被广泛应用于科研和诊断场景中。
首先，PCR具有高度特异性，只扩增目标DNA序列，能够从复杂的混合物中选择性地放大具体的DNA片段。
其次，PCR速度快，反应时间仅需数小时，能高效进行批量的DNA复制。
此外，PCR具有高灵敏度，能够检测到非常微量的DNA，极大地提高了DNA分析的灵敏性和准确性。
此外，PCR还可以应用在限制性酶切分析、序列测定、基因突变检测和基因表达分析等方面。
PCR技术的一些衍生应用也被广泛使用。
实时定量PCR（real-time PCR）是一种结合PCR和荧光探针技术的方法，它可以实时测量PCR过程中的产物量，并在PCR反应的不同阶段对扩增产物进行定量分析。
反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）是PCR的一个变种，它在反应前将RNA转录成DNA，使得可以将RNA作为模板进行扩增，而不仅仅局限于DNA。
pcr的技术原理及应用
PCR的技术原理及应用1. PCR的技术原理PCR（Polymerase Chain Reaction），即聚合酶链反应，是一种重要的分子生物学技术，广泛应用于基因工程、疾病诊断及法医学等领域。
PCR能够在体外复制一小段DNA序列，从而产生大量数量的目标DNA片段。
PCR技术主要包括三个步骤：变性、退火和扩增。
1.变性（Denaturation）：在高温（通常为94-96摄氏度）下，DNA双链被破坏，使DNA单链暴露出来。
2.退火（Annealing）：在较低温度（通常为50-65摄氏度），引物（primers）与DNA单链特异性结合，形成DNA-RNA杂交体。
引物是一段DNA片段，用于定义PCR扩增的起始和终止位置。
3.扩增（Extension）：在中高温度（通常为72摄氏度），热稳定的DNA聚合酶（如Taq聚合酶）在引物的指导下，以DNA单链为模板合成新的DNA链。
经过多个PCR循环，可以扩增出相当数量的目标DNA片段。
2. PCR的应用PCR技术被广泛应用于许多领域，以下是PCR的几个主要应用：2.1 DNA测序PCR技术可以用于DNA测序，即通过扩增DNA的目标片段，使其数量足够进行测序。
这种方法被广泛应用于基因组学、遗传学以及疾病研究领域。
PCR扩增出的大量DNA可以通过测序方法，如Sanger测序或高通量测序，对DNA序列进行分析和解读。
2.2 基因工程PCR技术在基因工程中起着至关重要的作用。
它可以在合成基因和重组蛋白的过程中，通过扩增目标DNA片段，使得基因工程变得简单、快速和可行。
PCR技术被广泛应用于构建基因表达载体、制备基因突变体和表达蛋白等方面。
2.3 疾病诊断PCR技术在疾病诊断中有着重要的应用。
例如，在传染病的诊断中，通过检测致病微生物的DNA或RNA，可以迅速、灵敏地确定感染病原体。
此外，PCR技术还可以用于基因突变的检测，早期癌症的筛查，以及非侵入性产前基因检测等方面。
pcr技术的知识点
pcr技术的知识点PCR，全称为聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种在体外扩增DNA分子的技术。
自从其产生以来，PCR技术在生物学、医学等领域都扮演着重要角色。
本文将介绍PCR技术的基本原理、主要步骤及其应用。
一、PCR技术的基本原理PCR技术是利用DNA聚合酶能够在适宜条件下从单链DNA模板向其补体的方向合成新的互补双链DNA的特性，通过体外操作使目标DNA区段被扩增的一种技术。
PCR技术相当于“放大器”，它把少量的DNA分子扩增成数百万分子，这种扩增是平凡的、快速的和特异的。
PCR从样本中扩增一段特定目的序列的DNA，应该是由以下三个部分所组成：一段待扩增的DNA序列，一对荧光探针（引物）和一种特殊的聚合酶。
PCR反应主要可分为以下三个阶段：1. 解旋（Denaturation）：将待扩增的DNA序列在高温条件下变性，形成两条单链DNA模板。
2. 引物与合成（Annealing and Extension）：在低温条件下，引物与模板DNA的互补匹配，并由聚合酶在其5'-3'方向上合成新的DNA链。
3. 延伸（Extension）：利用DNA聚合酶在适宜温度下合成新的互补双链DNA，形成两个完全相同的分子。
通过不断的循环这三个阶段，从而使得PCR反应体系中的待扩增物质呈指数级别的增长。
二、PCR技术的主要步骤PCR主要分为以下几个步骤：1. 样品获取PCR技术对样品数量和质量要求较高。
通常采用的是细胞、肝脏、皮肤、血液等组织或器官中提取DNA分子作为扩增目标。
同时，需要注意样品的保存和处理以避免DNA降解。
2. DNA提取DNA提取技术是PCR技术的基础。
不同的样品需要采用不同的DNA提取方法，常见的DNA提取方法有基于酸性、碱性或复合的物理或化学方法等。
3. 引物设计PCR扩增需要引物特异性和长度适宜，且引物与待扩增的DNA序列互补匹配度高，通常由专业的引物设计软件完成。
pcr技术的原理及应用
PCR技术的原理及应用1. PCR技术概述PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种基因工程技术，用于在体外扩增DNA片段。
它是由美国生物化学家Kary B. Mullis于1983年发明的，已经成为现代分子生物学和生物医学研究中最基础和最重要的技术之一。
PCR技术的原理是通过逐渐增加DNA双链的方法，在体外扩增某一特定DNA片段，使之达到可以测定和分析的水平。
PCR技术的基本原理包括DNA的变性、引物的结合和DNA合成。
2. PCR技术的步骤PCR技术通常包括以下三个主要步骤：2.1 变性（Denaturation）PCR反应开始时，DNA样本被加热至高温（通常是94-98℃），使DNA双链变性，即将两个DNA链分离成两条单链。
2.2 引物结合（Annealing）PCR反应温度下降时，引物与目标DNA片段中的互补序列结合。
引物是短的DNA片段，以逆向互补的方式与目标DNA序列的两端配对。
引物的选择是PCR反应成功的关键，需要根据目标序列的特性进行设计。
2.3 DNA合成（Extension）在PCR反应过程中，酶（通常是热稳定的DNA聚合酶）通过引物作为起始点，沿着DNA模板合成新的DNA链。
该过程通常在高温下进行，使酶能够稳定在DNA链上进行复制。
每个PCR循环会产生两条新的DNA链，其中一条是目标序列的补充链。
3. PCR技术的应用PCR技术广泛应用于各个领域，包括基因检测、遗传学研究、医学诊断和法医学等。
3.1 基因检测PCR技术可以用于检测和鉴定各种基因突变、插入、缺失等基因变异。
通过PCR技术可以扩增出需要检测的基因片段，并可以通过其他技术（如DNA测序）对扩增产物进行分析和验证。
3.2 遗传学研究PCR技术在遗传学研究中起着重要的作用，可以用于DNA指纹鉴定、基因组重组、基因表达调控研究、基因治疗等方面。
例如，PCR技术被广泛应用于DNA 指纹鉴定，通过对DNA样本进行PCR扩增和电泳分析，可以确定个体之间的遗传关系。
简述PCR技术
简述PCR技术引言聚合酶链式反应（PCR）是一种被广泛应用于生物医学研究领域的重要技术。
它是一种能够在体外迅速扩增DNA序列的方法，使得从少量样本中获得足够多的目标DNA。
PCR技术的发展在分子生物学、基因工程和医学诊断等领域有着重要的应用。
本文将简要介绍PCR技术的原理、步骤和应用。
原理PCR技术主要基于DNA的复制原理，即DNA的两条链可以通过加入适当的引物和DNA聚合酶酶，通过一系列的反应步骤模拟DNA复制的过程。
PCR反应分为三个核心步骤：变性、退火和延伸。
1.变性：将待扩增DNA样本暴露在高温条件下，使得双链DNA变为单链DNA。
这个步骤通常在95°C的高温下进行，以使DNA的双链解开。
2.退火：在较低温度下，引物与单链DNA特异性结合。
引物是由PCR反应策略所决定的短寡核苷酸序列，它们与待扩增序列的两端互补。
引物与单链DNA的结合是PCR扩增的关键步骤。
3.延伸：在适当的温度下，DNA聚合酶酶借助引物作模板合成新的DNA链。
这个步骤会在每个引物的3’端延伸到5’端方向进行。
通过不断重复变性、退火和延伸的循环过程，PCR能够迅速扩增目标DNA序列。
步骤PCR反应通常包括以下步骤：1.样本准备：从样本中提取待扩增的DNA。
2.引物设计：根据待扩增的DNA序列设计引物。
引物的设计对PCR反应的特异性和效率有重要影响。
3.PCR反应体系的配制：将待扩增的DNA样本与引物、DNA聚合酶酶以及反应缓冲液等混合在一起。
4.PCR反应条件设定：确定PCR反应的变性、退火和延伸温度和时间。
5.PCR反应：设置PCR反应的循环次数，按照设定的温度和时间进行PCR扩增。
6.扩增产物检测：利用凝胶电泳或其他检测方法检测PCR反应产生的扩增产物。
应用PCR技术在许多领域有着广泛的应用，包括：1.分子生物学研究：PCR技术被广泛用于DNA序列的分析、基因克隆和定量检测等领域。
它可以对微量DNA样本进行扩增，从而得到足够的DNA用于后续实验。
PCR技术
PCR技术PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，用于复制和扩增DNA片段。
PCR技术已广泛应用于基因分型、疾病诊断、基因工程等领域。
其中，引物设计是PCR技术的关键一步，决定了PCR扩增的特异性和效率。
引物是PCR反应中的两段短DNA序列，它们与待扩增的DNA片段的两端相互互补。
PCR反应中的引物设计需要考虑以下几个因素：1.引物长度：引物一般为15-30个碱基对长，过短会导致非特异性扩增，过长则会影响反应的效率。
2.引物的GC含量：引物的GC含量应该在40%-60%之间，过高或过低的GC含量会影响PCR反应的特异性和效率。
3. 引物的熔解温度（Tm）：引物的Tm是指引物与待扩增DNA片段结合时的温度，通常设计时要求引物的Tm相近，一般在55-65摄氏度之间。
引物的熔解温度可以通过计算公式进行估算，如Wallace等提出的公式：Tm = 4(G+C) + 2(A+T)。
4.引物序列的特异性：引物的序列应该特异性地与待扩增的DNA片段相互配对，避免与其他非目标DNA片段发生非特异性扩增。
在引物设计中，可以使用生物信息学工具进行引物的特异性分析，如比对引物序列与基因组数据库，检查是否存在交叉重复序列。
5.引物之间的相互作用：在PCR反应中，引物之间的相互作用可能导致非特异性扩增或二聚体的形成。
因此，在引物设计中，要避免引物之间的互补或相似性，尤其是在引物的3'末端。
在实际引物设计中，可以使用计算机辅助设计工具来进行引物序列的设计和分析，如Primer3、OligoAnalyzer等。
这些工具根据上述引物设计的原则，通过计算引物的物理化学性质和与待扩增DNA片段的匹配情况，辅助用户选择合适的引物序列。
需要注意的是，引物设计是PCR技术成功的前提，但并不是唯一影响PCR扩增效果的因素。
在实验中，还需进行反应条件的优化，如PCR反应体系的设计、反应温度和时间的调节等，以确保PCR反应能够高效、特异地扩增目标DNA片段。
pcr技术的原理与应用
PCR技术的原理与应用1. PCR技术概述聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）是一种基因工程和分子生物学领域常用的技术。
它通过复制和扩增DNA片段，使之在数量上显著增加，从而更方便地进行进一步的实验操作和分析。
PCR技术具有高灵敏度、高选择性、高重复性和高效率等特点，广泛应用于基因组学、生物医学研究、临床诊断等领域。
2. PCR技术原理PCR技术基于酶的反应，利用DNA聚合酶酶的酶活性，在适宜的温度下，通过反复循环的核酸扩增步骤，可制备大量具有特定序列的DNA分子。
PCR技术的核心步骤包括：2.1 反应物准备•DNA模板：待扩增的DNA样本，可以是基因组DNA、cDNA或其他DNA片段。
•引物（Primers）：引物是一段具有互补序列的DNA片段，用于界定扩增的DNA区域。
•核苷酸三磷酸酶（dNTPs）：供聚合酶合成新DNA链所需的四种核苷酸单元。
•聚合酶（DNA polymerase）：常用的PCR聚合酶有Taq聚合酶、Pfu聚合酶等。
2.2 反应步骤a.热变性（Denaturation）：加热使DNA双链解开，产生两条单链DNA。
b.引物结合（Annealing）：降温，使引物与目标序列的互补部分结合。
c.DNA合成（Extension）：提高温度，使聚合酶沿模板DNA链合成新的DNA链。
2.3 循环扩增上述三个步骤根据需要反复循环，通常为20-40个循环，每一循环使扩增的DNA量翻倍。
在较短的时间内，PCR技术能够合成大量特定DNA片段。
3. PCR技术的应用PCR技术已经在很多研究和应用领域得到了广泛的应用。
以下是PCR技术常见的应用示例：3.1 基因克隆PCR技术可用于在分子克隆中扩增需要的DNA片段。
通过引物的选择，可以在PCR反应中制备合成的DNA片段，用于进一步的分析和鉴定。
3.2 基因表达和蛋白质研究PCR技术可用于检测和定量特定基因的表达水平。
三种PCR类型及应用
三种PCR类型及应用多种PCR技术类型：1. 实时定量PCR（qPCR）实时定量PCR是一种检测PCR反应过程中的特定DNA序列的技术。
它可以实时监测PCR反应过程中的产物累积情况，通过检测DNA结合荧光染料的信号强度来定量分析起始模板的含量。
由于其高灵敏度和快速结果，实时定量PCR 被广泛应用于基因表达分析、微生物检测、病毒定量测定等领域。
2. 数字PCR数字PCR是一种基于微小级别的PCR技术，通过将PCR分成数百万份独立的反应来进行定量分析，从而实现对起始模板数的精确计数。
与传统PCR技术相比，数字PCR具有更高的灵敏度和准确性，尤其适用于低拷贝基因的检测和分析。
数字PCR广泛应用于检测稀有突变、检测微生物DNA和病毒DNA等领域。
3. 表面增强拉曼散射PCR表面增强拉曼散射PCR结合了PCR技术和拉曼光谱学，通过在PCR过程中引入金纳米颗粒来增强PCR产物的拉曼信号，从而实现对PCR产物的多重检测和分析。
表面增强拉曼散射PCR技术具有高速、高灵敏度和高特异性的特点，适用于分子生物学、生物医学和环境监测等领域。
不同类型PCR的应用：1. 实时定量PCR在基因表达分析中的应用实时定量PCR可以准确、快速地测定特定基因的表达水平，广泛应用于基因调控研究、药物筛选、疾病诊断等领域。
通过实时定量PCR技术，研究人员可以量化分析基因在细胞、组织或生物样品中的表达情况，从而深入了解基因的功能和调控机制。
2. 数字PCR在稀有基因检测中的应用数字PCR技术可以对样本中稀有基因的存在进行准确计数，适用于肿瘤标志物检测、胎儿DNA检测等需要高灵敏度和准确性的应用。
通过数字PCR技术，研究人员可以对样本中的特定基因进行精确检测，为疾病诊断和生物医学研究提供有力的支持。
3. 表面增强拉曼散射PCR在环境监测中的应用表面增强拉曼散射PCR技术可以实现对微生物DNA的可视化检测，广泛应用于环境监测和水质检测等领域。
pcr技术的知识点
pcr技术的知识点PCR 技术的知识点PCR 技术，全称聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种在分子生物学领域中极为重要的技术手段。
它就像是一把神奇的钥匙，能够让我们在微观世界里打开探索生命奥秘的大门。
PCR 技术的基本原理其实并不复杂。
想象一下，我们要复制一份非常珍贵的文件，但这份文件只有一个小小的片段。
首先，我们需要知道这个片段的开头和结尾在哪里，这就相当于 PCR 中的引物。
引物是一小段与我们想要复制的 DNA 片段两端互补的核苷酸序列。
然后，我们有一个特殊的“复印机”，那就是 DNA 聚合酶。
它能够根据已有的模板，一个碱基一个碱基地合成新的 DNA 链。
在 PCR 反应的过程中，一般会经历三个主要的步骤：变性、退火和延伸。
变性阶段，就像是把一本整齐的书撕得粉碎。
高温使得 DNA 双螺旋结构的两条链解开，变成两条单独的链。
这就为后续的复制做好了准备。
退火阶段，就像给这些零散的纸片找到了它们的伙伴。
降低温度，让引物能够与解开的 DNA 单链结合，准确地找到我们想要复制的那一段的起始和结束位置。
延伸阶段，就是真正的复制过程啦。
DNA 聚合酶沿着引物开始工作，从引物的 3'端开始，一个一个地添加碱基，合成新的 DNA 链。
经过一轮这样的过程，我们想要复制的 DNA 片段数量就翻倍了。
然后不断重复这个过程，经过多次循环，就能够在短时间内得到大量的特定 DNA 片段。
PCR 技术的优点那可是相当多。
首先，它的灵敏度极高。
哪怕初始样本中只有极少量的目标 DNA，也能够被检测和扩增出来。
这对于检测病原体、基因突变等微量存在的物质非常有用。
其次，特异性强。
只要引物设计得准确，就能够精确地扩增我们想要的那段 DNA，而不会扩增其他无关的区域。
再者，它操作相对简单，在实验室里容易实现。
PCR 技术在很多领域都发挥着巨大的作用。
在医学领域，它可以用于疾病的诊断。
比如，检测病毒感染，像新冠病毒，通过 PCR 技术能够快速准确地确定是否感染。
分子生物技术—PCR技术
PCR的反 应体系
脱氧核苷三磷酸 C
D
（dNTP）
即dNTP为dATP、dCTP、 dGTP和dTTP四种脱氧 核苷三磷酸的混合物
E
镁离子浓度
可稳定核苷酸和提高
Taq DNA聚合酶的活性,
MgCl2浓度一般为 1.5mmol/L为宜
Taq DNA聚合酶
催化DNA合成，即在模 板指导下，以dNTP为
二、PCR技术基本原理
PCR是在试管中进行的DNA复制 反应，基本原理与细胞内DNA的 复制基本相似。每一次循环复制包 括3个步骤：
• 变性 • 退火 • 延伸
二、PCR技术基本原理
变性（denature） • 通过加热至95℃左右，使DNA
双螺旋的氢键断裂，形成DNA 单链模板而游离于反应体系中， 此过程称为变性
二、PCR技术基本原理
退火（annealing） • 即在较低的温度(40～70℃)下使
加入的引物与待扩增的DNA区域 特异性结合，以提供DNA复制起 始的3’-OH端
二、PCR技术基本原理
延伸（extension）
• 即在适当的温度下（70℃～75℃ ），DNA聚合酶特异性结合到 DNA模板上的引物的3’-OH端 ，以dNTP为反应原料，以靶序列 为模板，根据碱基互补配对原则 ，进行DNA链的延伸，即合成 DNA新链
原料，使DNA链沿 5′→3′方向延伸
三、PCR反应技术在临床的应用
• 人类遗传疾病的诊断与研究，如地中海 贫血、血友病、苯丙酮尿症等致病基因 的检测
• 病原体的检测，包括细菌、病毒、支原 体、衣原体以及原虫等的检测，用于传 染病的诊断、变异株分析、流行病学研 究
• 肿瘤检测，如检测白血病、淋巴瘤、消 化道肿瘤等细胞基因的改变
pcr的原理和步骤
pcr的原理和步骤PCR的全称是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种重要的分子生物学技术，它可以在体外迅速、特异地扩增DNA片段。
PCR技术的发明为分子生物学研究和临床诊断提供了重要工具，被广泛应用于基因克隆、基因突变分析、DNA指纹鉴定、病原体检测等领域。
本文将详细介绍PCR的原理和步骤。
一、PCR的原理。
PCR技术的原理主要包括DNA的变性、引物的结合、DNA的合成三个步骤。
首先是DNA的变性。
PCR反应液中的DNA双链在高温下（一般为94-98℃）会解旋成两条单链，使得引物能够结合到目标序列上。
其次是引物的结合。
在PCR反应中，需要加入两种引物，它们分别结合到目标序列的两端，并指导DNA聚合酶进行DNA合成。
最后是DNA的合成。
在引物的引导下，DNA聚合酶开始合成新的DNA链，生成两条新的双链DNA。
二、PCR的步骤。
PCR反应一般包括变性、引物结合和DNA合成三个步骤，具体步骤如下：1. 变性，将PCR反应管放入热循环仪中，进行变性步骤。
一般的变性温度为94-98℃，时间为1-3分钟。
2. 引物结合，降温至引物的结合温度，一般为50-65℃，使引物与目标序列结合。
这一步是为了让引物与目标序列进行特异性结合，避免非特异性扩增。
3. DNA合成，将温度升至DNA聚合酶的最适工作温度，一般为72℃，进行DNA合成。
DNA聚合酶会在引物的引导下合成新的DNA 链。
以上就是PCR的基本步骤，通过不断重复这三个步骤，可以在短时间内扩增出大量的目标DNA片段。
三、总结。
PCR技术的原理和步骤相对简单，但是需要严格控制反应条件和引物设计，以确保扩增的特异性和准确性。
在实际操作中，还需要注意反应管的材料选择、反应体系的配制、反应条件的优化等方面的问题。
希望本文对PCR技术的原理和步骤有所帮助，能够更好地理解和应用PCR技术。
pcr的基本原理和应用
PCR的基本原理和应用1. PCR是什么？PCR（Polymerase Chain Reaction），即聚合酶链反应，是一种在体外通过模拟自然界DNA复制过程而快速制备特定DNA片段的方法。
它是分子生物学领域中最重要的技术之一，也是遗传学、医学诊断和生物技术研究中必不可少的工具。
2. PCR的基本原理PCR的基本原理是通过DNA聚合酶（DNA polymerase）在适当的反应条件下，在一种模板DNA、一种重复性DNA序列的引物（primer）和四种脱氧核苷酸（dNTPs）的存在下，将DNA序列进行多次模板复制，从而产生大量目标DNA片段。
PCR反应主要包括三个步骤：变性（denaturation）、引物结合（annealing）和延伸（extension）。
具体步骤如下：2.1 变性首先，将PCR反应体系中的DNA模板加热至高温（通常为94-98°C），使其双链结构解开，并分离为两条单链。
2.2 引物结合然后，将体系降温至适当的温度（通常为50-65°C），使引物与模板DNA中的相应序列碱基互补配对，形成引物-模板复合物。
2.3 延伸最后，将体系温度升高至适当的温度（通常为70-72°C），由热稳定的DNA聚合酶引导，通过逐个加入dNTPs，延伸引物上定向配对的碱基，合成新的DNA链。
经过多次循环上述三个步骤，每一轮循环，产生的DNA数量会呈指数级增加，从而快速扩增目标DNA片段。
3. PCR的应用PCR技术已广泛应用于许多领域，下面列举了几个常见的应用：3.1 基因测序和基因克隆PCR技术可以用于扩增目标基因片段，从而方便后续的基因测序和基因克隆工作。
通过PCR扩增目标基因片段后，可以进行测序分析，了解DNA序列的组成和功能。
此外，PCR还可以产生足够数量的目标DNA片段，以供进一步的基因克隆和表达研究。
3.2 疾病诊断PCR技术在疾病诊断领域中起到了重要作用。
pcr技术的原理与应用领域
PCR技术的原理与应用领域1. PCR技术的基本原理PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种能够在体外迅速复制DNA片段的技术。
它利用DNA聚合酶酶和一系列特定的引物，通过分别加热、降温和延伸的循环反应，使得目标DNA片段在短时间内被放大。
PCR技术的基本步骤包括：•反应混合物的制备：将待扩增的DNA模板、引物、DNA聚合酶和缓冲液等混合。
•Denaturation（变性）：将反应体系加热至高温，使得DNA双链解开，产生两个单链DNA。
•Annealing（退火）：降温使引物与单链DNA结合。
•Extension（延伸）：通过增加适量的DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸，将引物延伸，合成新的DNA链。
通过不断循环以上步骤，每个循环后，目标DNA序列会以指数级别增加，最终使得目标DNA经过大量循环反应后被扩增到足够多数量的DNA产品。
2. PCR技术的应用领域PCR技术具有广泛的应用领域，以下列举了其中几个重要的应用：2.1 分子生物学研究PCR技术在分子生物学研究中具有重要的地位。
它可以用于：•基因克隆：通过PCR技术扩增目标基因片段，使其达到克隆所需的数量。
同时，PCR也可以用于检测克隆的准确性。
•DNA测序：PCR技术可以扩增目标片段，然后通过测序技术对其进行分析，以获取DNA序列信息。
•基因突变：通过特定的引物设计，可以在PCR扩增过程中引入目标基因的突变，用于研究基因功能。
2.2 疾病诊断PCR技术在疾病诊断领域有着重要的应用。
例如：•检测遗传病：PCR技术可以用于检测遗传病的基因突变，帮助进行早期诊断和遗传咨询。
•检测感染病原体：PCR技术可以用于检测感染病原体的核酸，快速确定感染病原体的存在和类型。
•癌症诊断：PCR技术可以用于检测癌症相关基因的突变，帮助早期癌症的诊断和预后评估。
2.3 法医学应用PCR技术在法医学应用中也具有重要作用。
例如：•DNA鉴定：PCR技术可以对犯罪现场的DNA进行扩增，与嫌疑人的DNA进行比对，用于身份鉴定。
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PCR技术1．PCR原理（1）细胞内DNA复制条件（2）细胞内DNA复制过程①DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端。
DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3’端延伸DNA链，因此，DNA 复制需要引物。
DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸。
②在DNA的复制过程中，复制的前提是双链解开。
在体外可通过控制温度来实现。
在80~ 100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。
PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。
由于PCR过程的温度高，导致DNA聚合酶失活，后来耐高温的DNA聚合酶的发现和应用，大大增加了PCR的效率。
③PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行，需提供：DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
2．PCR的反应过程PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。
从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DN A序列，使这段固定长度的序列成指数扩增。
1．PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，下列有关PCR过程的叙述，不正确的是A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高【参考答案】C2．利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。
图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
下列叙述错误的是A．用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列B．设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连C．退火温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物D．第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例为15/16【答案】D1．有关PCR技术的说法，不正确的是A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术B．PCR技术的原理是DNA双链转录C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列D．PCR扩增中不需要解旋酶解开双链DNA2．下列有关PCR技术的说法，不正确的是A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术B．PCR技术的原理是DNA双链复制C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列D．PCR扩增中需要解旋酶解开双链DNA3．标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是A．94 ℃、55 ℃、72 ℃B．72 ℃、50 ℃、92 ℃C．50 ℃、92 ℃、72 ℃D．80 ℃、50 ℃、72 ℃4．用PCR技术将DNA分子中的A1片段进行扩增，设计了引物Ⅰ、Ⅱ，其连接部位如图所示，x为某限制酶识别序列。
扩增后得到的绝大部分DNA片段是图中的A．B．C．D．5．下列有关PCR技术中引物的叙述，正确的是A．引物是一小段DNA分子或双链RNA分子B．扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目C．两种引物之间能够发生碱基互补配对D．DNA聚合酶只能从引物的5＇端连接脱氧核苷酸6．用PCR技术将DNA分子中的A1片段进行扩增，设计了引物Ⅰ、Ⅱ，其连接部位如图所示，x为某限制酶识别序列。
扩增后得到的绝大部分DNA片段是图中的A．B．C．D．7．用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱。
其中：1号为DNA标准样液（Marker），10号为蒸馏水，PCR过程中加入的模板DNA如图所示。
据此作出的分析不合理的是A．PCR产物的分子大小在250~500 bp之间B．3号样品为不含目的基因的载体DNAC．9号样品对应植株不是所需的转基因植株D．10号可确定反应体系等对结果没有干扰8．根据某基因上游和下游的碱基序列，设计合成了用于该基因PCR的两段引物（单链DNA)。
引物与该基因变性DNA(单链DNA)结合为双链DNA的过程称为复性。
下图是两引物的T m （引物熔解温度，即50%的引物与其互补序列形成双链DNA分子时的温度）测定结果，下列叙述错误的是（）A．通常引物1和引物2不能有碱基互补配对关系B．两引物分别是子链延伸的起点，并可以反复利用C．若两引物的脱氧核苷酸数相同，推测引物2的GC含量较高D．复性所需温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度等因素9．以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。
据图分析，下列说法正确的是A．④过程发生的变化是引物与单链DNA结合B．催化①过程的酶是DNA聚合酶C．催化①②⑤过程的酶都必须能耐高温D．过程③需要解旋酶10．在遗传病及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。
据图回答相关问题。
（1）在相应的横线上写出引物Ⅱ，并在复性这一步骤中将引物Ⅱ置于合适的位置。
__________________。
（2）在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。
________。
（3）若将作为原料的四种脱氧核苷酸用32P标记，请分析循环一次后生成的DNA分子的特点：________，循环n次后生成的DNA分子中不含放射性的单链占总单链的比例为________。
（4）PCR反应过程的前提条件是________，PCR技术利用了DNA的________原理解决了这个问题。
（5）在对样品DNA分析过程中发现，DNA掺杂着一些组蛋白，要去除这些组蛋白可加入的物质是___________________。
11．（2019全国卷Ⅰ·38）基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。
回答下列问题。
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。
基因文库包括_ _______和________。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是________。
在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是________。
上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的________。
（3）目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是________。
12．（2018·江苏卷）为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱基对），利用基因工程大量制备琢α-淀粉酶，实验流程见下图。
请回答下列问题：（1）利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前，需先获得细菌的＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的＿＿＿＿端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（3）进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中＿＿＿＿＿＿＿的设定与引物有关，＿＿＿＿＿＿＿＿的设定与扩增片段的长度有关。
（填序号）①变性温度②退火温度③延伸温度④变性时间⑤退火时间⑥延伸时间（4）下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：图中虚线框内mRNA片段包含＿＿＿个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有＿＿种。
（5）获得工程菌表达的α-淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀根据上述实验结果，初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为＿＿＿＿＿＿。
13．(2016·天津卷)人血清白蛋白(HSA) 具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。
下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。
（1）获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_____________合成总cDNA，然后以cDNA 为模板，采用PCR技术扩增HSA基因。
下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。
（2）启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_____________（填写字母，单选）。
A．人血细胞启动子B．水稻胚乳细胞启动子C．大肠杆菌启动子D．农杆菌启动子（3）利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是______________ _______。
（4）人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确空间结构才能有活性。
与途径II相比，选择途径I获取rHSA的优势是_______________________________________。
（5）为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_________________的生物学功能一致。
1．【答案】B【解析】AB项、PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，其原理是DNA双链复制，故A项正确，B项错误；C、利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物，C项正确；D、PCR 扩增中首先要使目的基因DNA受热变性后解链为单链，不需要解旋酶解开双链DNA，故D项正确。
2．【答案】D【解析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，A正确；PCR技术以解开的双链作为模版，利用的原理是DNA双链复制，B 正确；前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，C正确；双链DNA 模板在高温作用下，氢键断裂，形成单链DNA，可见该过程不需要解旋酶解开双链DNA，D错误。
3．【答案】A【解析】标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，其中变性需要高温使DNA 解螺旋，温度为90～96℃；复性是在较低温度下，两种引物和DNA单链想结合，温度为50℃左右；延伸为在DNA聚合酶的作用下，合成新的DNA链，温度为70～75℃。
综上所述，A正确，B、C、D错误。
4．【答案】D【解析】利用PCR技术将DNA分子中的A1片段进行扩增，当引物与母链通过碱基互补配对结合后，子链延伸的方向总是从5′端到3′端，据此依题意和图示分析可知，A、B、C均错误，D正确。
5．【答案】B【解析】引物是一小段单链DNA或RNA，可与DNA母链通过碱基互补配对进行结合，A错误；扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目，B正确；引物与DNA母链通过碱基互补配对进行结合，两种引物之间不能发生碱基互补配对，C 错误；DNA聚合酶只能从引物的3＇端连接脱氧核苷酸，D错误。