专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 - 知识梳理
土壤中分解尿素细菌的分离与计数知识清单
土壤中分解尿素细菌的分离与计数知识清单(总3页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--第2课土壤中分解尿素细菌的分离与计数知识清单一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于________________生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时________或________其他微生物生长。
(2)选择培养基在微生物学中，将允许__________种类的微生物生长，同时________或________其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
(3)分离分解尿素的细菌的选择培养基①在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是____________，提供氮源的是________，琼脂的作用是凝固剂。
②该培养基对微生物具有选择作用。
其选择机制是________________________________才能在该培养基上生长。
③土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成________，将尿素分解的反应式是________________________________________________________。
Taq细菌能忍受93℃左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据____________________________________________。
2．统计菌落数目的方法(1)稀释涂布平板法(也叫活菌计数法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的____________，通过统计平板上的________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
______________是成功地统计菌落数目的关键。
②操作第一，设置__________组，增强实验的说服力与准确性。
将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择________稀释度的菌液，分别取 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 +H2O
脲酶 NH3 + CO2
3、常见的分解尿素的微生物
芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌 也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
课题2土壤中分解尿素的细菌的分离 与计数
一、导
课题1 微生物的实验室培养 微生物的实验 室培养条件： （1）为培养的微生物提供合 适的营养和环境条件
（2）确保其他微生物无法混 入
一般过程：
配制培养基 接种 培养 观察
课题背景
1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之 后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因
2、如何计算每克样品中的菌落数？ 3、设置对照试验的目的是什么？ 4、在做分解尿素细菌的筛选与统计菌落数目的试验 时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约230 个菌落，但其他同学在相同的稀释倍数下只选择出大 约100个菌落。试分析原因并设计探究方案，根据结 果得出结论。
五、评
实验注意事项
二、思
首先观看教学视频，然后独立自主完 成导学案上的“实验设计”。
三、四：议、展
小组合作探究 探究一、筛选菌株的培养基
1、什么是选择培养基？ 2、请简述选择培养基的制备原理、制备方法、用途及实 例。
三、四：议、展 三、议、展
小组合作探究 探究二、统计菌落数目和设置对照
1、如何对样品中细菌进行计数？
能在以尿素为唯一氮源的选择培养基中生长的 细菌一定是可以分解尿素的细菌吗？如果不是还需 怎样处理？
专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(打印)
雪宫中学学案：生物技术实践 班级 姓名1专题２ 课题2 测定微生物的数量雪宫中学学案：生物技术实践 班级 姓名2雪宫中学学案：生物技术实践班级姓名Array3雪宫中学学案：生物技术实践 班级 姓名4四． 实验中应注意的问题1． 设置对照。
怎样设置对照？ 2． 无菌操作(1)建立“有菌观念”。
实验器材、实验室、实验者、空气都充满了微生物，都有污染的可能，必须严格消毒灭菌。
(2)整个实验操作过程要严格无菌操作，实验器材灭菌，包括取土样的小铁铲和盛土样的信封使用前也要灭菌。
(3)应在火焰旁称取土壤。
在火焰附近将称好的土样倒人烧瓶中，塞好棉塞。
(4)在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。
(5)操作过程中呼吸不要频繁，不要讲话，以免空气和口腔中的微生物随气流而进入试管、培养皿等。
(6)研究未知的微生物，一定要注意进行规范的无菌操作，以防被致病的微生物感染。
实验后，一定要洗手。
五．结果分析与评价1．如果对照组有杂菌菌落，则实验的实则值 （偏高、偏低） 如果培养基中混有了其它氮源，则实验的实则值 （偏高、偏低），此时，能否筛选出能分解尿素的微生物？2．如果同一稀释浓度下的三个培养皿上菌落数相差过大，反应了什么问题？雪宫中学学案：生物技术实践 班级 姓名5练习题1．在培养基中加高浓度的生理盐水、甘露糖醇和酸碱指示剂可以选择鉴别A ．酵母菌B ．霉菌C ．大肠杆菌D ．金黄色葡萄球菌 2．测定土壤中细菌的数量一般选用多大倍数稀释液进行平板培养A ．101、102和103倍 B ．102、103和104倍 C ．102、104和106倍 D ．104、105和106倍 3．用以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂将 A ．变蓝色 B ．变红色C ．变黑色D ．变棕色4．用101、102和103倍稀释液进行涂布培养细菌后，其菌落平均数为2 890、271和50则菌落总数为A ．2.89×104个／mLB ．2.71×104个／mLC ．6.0×104个／mLD ．3.85×104个／mL 5．在一个“淀粉一琼脂”培养基的5个圆点位置，分别用不同方法处理，将此实 验装置放在37℃恒温箱中，保温处理24h 后，将碘液滴在培养基的5个圆点上，其实验结果记录于下表：的面包霉的分泌物分别是 A ．棕黄色、棕黄色、淀粉酶 B ．蓝黑色、棕黄色、麦芽糖酶 C ．棕黄色、蓝黑色、淀粉酶 D ．棕黄色、蓝黑色、麦芽糖酶6．实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均与下图中的链霉素带接触)，将平板置于37℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。
专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(第1课时)
专题2 微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（高二生物）第1课时研究思路分离原理【学习目标】1 学生预习教材P21 “（一）筛选菌株”，能够整理归纳出实验室筛选微生物的原理，能简单描述如何能得到耐高温的DNA聚合酶，如何分离Taq细菌。
2 学生预习教材P22结合右侧培养基配方基的内容，结合培养基配置及分类能整理归纳选择性培养基的原理及配制要求3学生预习教材P21“课题背景”内容结合选择性培养基的作用能阐述分离分解尿素的细菌的原理及培养基配置中各物质提供的成分3学生预习教材P22，整理归纳统计菌落数目的方法4课堂上通过教师提示，学生合作探究，学生能够对统计菌落数目的方法进行区别,填表整理归纳两种方法的比较5课堂上通过观看视频，学生能够掌握统计菌落数目的正确操作与计算6课堂上通过教师提示，学生合作探究，学生能够正确的设置实验对照重点选择性培养基的配制，菌落数目的统计难点菌落数目的统计【课前预习】一筛选菌株阅读教材P21 “（一）筛选菌株”，整理归纳出筛选菌株的基础知识1筛选菌株(1) 自然界中目的菌株的筛选①原理：根据目的菌对的要求，到相应的环境中去找。
②实例：DNA多聚酶链式反应（PCR）是一项的技术，要求使用。
能产生耐高温的TaqDNA聚合酶的就是从热泉中筛选出来的(2)实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于________生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时________或________其他微生物生长。
(2)分解尿素的细菌的分离原理尿素是一种农业，只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成________，将尿素分解的反应式是_________________________________________。
2选择培养基在微生物学中，将允许__________种类的微生物生长，同时________或________其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
选修一2.2：土壤中分解尿素的微生物的分离和计数
自主学习
一、课题背景
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。
2、细菌能利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2)2 + H2O 脲酶
2NH3 + CO2
常见的分解尿素的微生物
种类最多。
4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中
加入（ C ）
A.较多的氮源物质
B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物
D.高浓度食盐
谢谢聆听
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚
合酶
B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、
M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值
C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因
素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，
2、土壤取样（P23）：
土壤是“微生物的天然培养基” 。70∼90％是细 菌。微生物主要生活在富含有机质的表层土壤（距地 表约3∼8cm）。
取样时要铲去表层土
3、培养基： 选择培养基 尿素应是唯一的氮源、为固体培养基
合作探究
注：每个稀释度下需要3个选择培养基，
1个牛肉膏蛋白胨培养基。 设置重复实验
芽孢杆菌 小球菌 假单胞杆菌 克氏杆菌 棒状杆菌 某些真菌 放线菌 等等
自主学习 二、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一 研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
课件2：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
4．当培养基的某种营养成分为特定化学成分时， 也具有分离效果。例如，石油是惟一碳源时，可以 抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石 油的微生物生存，达到分离出能消除石油污染的微 生物的目的。 5．改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生 物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得 到耐高温的微生物。
专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌
的分离与计数
基础梳理
一、研究思路 1．自然界中目的菌株的筛选 (1)依据：根据它对__生__存__环__境___的要求，到相应的环境 中去寻找。 (2)实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚 合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中分离到的。
3．重复组的结果是否一致如果学生选取的是同一种 土样，统计的结果应该__接__近_。
四、操作提示 1．无菌操作 (1)取土样的用具在使用前都需要_灭__菌__。 (2)应在火焰旁称取土壤，并在火焰附近将土样倒入烧 瓶中，塞好棉塞。 (3)在__稀__释___土壤溶液的过程中，每一步都要在__火__焰_ 旁操作。
2.本实验使用的 平板 和试管比较多，为了避 免混淆，最好在使用前就标记好。
3．规划时间 对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以便提 高工作效率，在操作时更加有条不紊。
五、课题延伸 细菌合成的_脲__酶__将尿素分解成氨，使培养基的碱 性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红 指示剂培养细菌，若指示剂变_红__，可确定该种细 菌能够分解尿素。
例2 某同学在稀释倍数为106的培养基上测得
平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样
品中菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为
0.1 mL)( )
A．2.34×108
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
基础知பைடு நூலகம்：
（一）筛选菌株
KH2PO4
1.4g
NaH2PO4
2.1g
MgSO4`7H2O 葡萄糖
0.2g 10.0g
尿素 琼脂
选择培养基
1.0g 15.0g
培养基配方
思 考：该培养基对微生物具有选择作用吗？如果 具有，是如何进行选择的？
只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长
选择培养基：在微生物学中，将允许特定种
• 2.提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生 物，其中也包括分解尿素的微生物。由于 瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后 会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生 物除了需要准备选择培养基外，还应参照 厌氧菌的培养方法进行实验设计。
分析P22实例:
你认为哪个同学的结果更接近真实值？你认 为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如 何改进？
第一位同学没有重复实验(至少涂布3个平板)，结 果不具有说服力。
第二位同学有重复实验，但结果不一致（误差较 大），说明在操作过程中可能出现错误，需要重 新实验。
【例1】为了计数微生物的数量，一位同学在4
1、酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增
强，PH升高→酚红指示剂，变红 2、伊红—美蓝培养基： 鉴定大肠杆菌。 原理：代谢产物与伊红-美蓝结合→菌落呈黑
色。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈黑色中心 ,有或无金属光泽
本课题知识小结:
课后练习
——利用血球计数板在显微镜下直接计数。
（2）活菌计数法——统计菌落数目
方法： 稀释涂布平板法。 原理：
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长 的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
第2讲 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
选修1 生物技术实践第1讲土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、实验原理1．分离原理土壤中分解尿素的细菌体内能合成，把尿素分解成。
2．筛选菌株的方法在选择培养基的配方中，把作为唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
二、统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。
②方法：用计数。
③缺点：。
(2)间接计数法(间接计数的方法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作：a．设置重复组（一般至少个平板），增强实验的说服力与准确性。
b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
c．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目，原因是。
因此，统计结果一般用来表示。
③计算公式：每克样品中的菌株数＝，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
三、实验设计1、实验流程土壤取样―→―→微生物的―→细菌的计数。
2、操作中的注意事项⑴土壤微生物主要分布在距地表的近（酸/碱）性土壤中，约70％～80％为细菌。
⑵分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是，其目的是保证获得的平板。
细菌稀释度为，放线菌稀释度为，真菌稀释度为。
⑶培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。
细菌一般在℃培养 d，放线菌一般在℃培养 d，霉菌一般在℃的温度下培养 d。
⑷在菌落计数时，每隔 h统计一次菌落数目。
选取时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
⑸使用前做好标记，如在标记培养皿时应注明、以及平板上培养样品的等。
四、结果分析与评价1、鉴定分解尿素的细菌⑴原理：CO(NH2)2＋H2O 脲酶 CO2＋2NH3；由于、NH3的产生，培养基（酸/碱）性增强，pH升，因此可通过检测的变化来判断该化学反应是否发生。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一、筛选菌株的思路1、自然界中目的菌株的筛选（1）原理：根据对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
2、实验室中目的菌株的筛选（1）原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
（2）方法：利用选择培养基分离。
选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基。
尿素是一种重要的农业氮肥，尿素不能直接被农作物吸收，只有通过土壤中的细菌将尿素分解为氨后，才能被植物利用，土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。
可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。
（3）实例：①以尿素作为唯一氮源的培养基可以分离出分解尿素的细菌，因为只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用其中的氮元素。
②加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
③加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
④无氮源培养基可以分离固氮微生物。
⑤石油是唯一碳源的培养基，可以分离能消除石油污染的微生物。
⑥将培养基放在高温环境中培养，分离耐高温的微生物。
二、统计菌落数目1、常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。
（1）原理：样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有的活菌数。
(2)计算公式：每克样品中的菌株数＝培养基上平均菌落数×稀释倍数÷涂布液体积，即(C÷V)×M。
（3）注意事项:a．为了保证结果准确，每个稀释度涂布至少 3 个平板作为实验重复，求其平均值（平行重复原则）。
选择菌落数在 30～300 的平板进行计数。
设置重复实验的目的是：排除偶然因素对实验结果的影响。
b．稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
课题2 土壤中分离尿素的细菌的分离与计数
导入新课上一节课我们已经学习了培养基的配制以及接种技术，现在我们就来学习如何从土壤中将我们需要的微生物进行分离。
土壤微生物尿素是由碳、氮、氧和氢组成的有机化合物。
外观是白色晶体或粉末。
尿素化学式尿素尿素通常作为一种植物的氮肥，广泛应用于各种作物和土壤。
但是，农作物不能直接吸收尿素，必须先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和二氧化碳，才能被植物利用。
脲酶CO(NH2)2+H2O → 2NH3+CO2这种细菌能够分解尿素，是因为他们能够合成脲酶。
脲酶脲酶是一种蛋白质，能溶于水，不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂。
加热和重金属离子都能抑制或降低脲酶的活性。
想一想你能想一想怎样能将分解尿素的细菌从土壤中分离出来吗？专题2 微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路二、实验设计三、操作提示四、结果分析与评价五、课题延伸教学目标知识与能力研究培养基对微生物的选择作用。
过程与方法从土壤中分离出能够分解尿素的细菌；统计每克土壤样品中含有多少这样的细菌。
情感态度与价值观从感性上认识分离尿素的细菌，了解其具有的作用。
重点与难点1. 课题重点对土样的选取和选择培养基的配制。
2. 课题难点对分解尿素的细菌的计数。
（一）筛选菌株耐热微生物温泉耐寒微生物冰川分解石油的细菌油田筛选原则：根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
实例：Taq DNA聚合酶的发现DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术。
此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶，该去哪里寻找？科学家是从水生耐热细菌Taq中分离到耐高温的Taq DNA聚合酶的。
为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来呢？这是因为热泉70~80℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。
实验室中微生物的筛选，也应用了同样的原理，即人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
高二生物土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点梳理文档资料
高二生物土壤中分解尿素的细菌的分别与计数知识点梳理社会的发展，人类文明的进步，个人生活质量的提高，都要靠生物学的发展和应用。
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1.培养基一般都含有、、、四类营养物质，其他还需要知足微生物生长对、以及的要求。
2.培养基的分类：依据物理性质能够分为、、依据化学性质分为和 ; 依据用途分为和。
3.尿素能够为农作物供应肥，可是只有被分解成此后，才能被植物吸取利用。
4.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：( 一) 精选菌株1.原理 : 人为供应有利于生长的条件 ( 包括等 ) ，同时控制或阻截其他微生物生长。
2.方法：选择培养基(1)定义：在微生物学中，将赞同的微生物生长，同时控制或阻截其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
(2)配制的的依据：①在培养基中加入某种化学物质能够做到这一点，加入能够分别出酵母菌和霉菌。
加入高浓度的食盐可获得。
这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。
②培养基中的营养成分的改变也可达到分别微生物的目的。
如培养基中缺乏源时，能够分别固氮微生物。
③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也拥有分别收效。
④改变微生物的培养条件，也能够达到分别微生物的目的，如将培养基放在环境中培养只能获得耐高温的微生物。
( 二 ) 统计菌落数量(1)测定微生物数量的常用方法有和。
(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数量的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，根源于样品稀释液中的一个活菌。
经过统计平板上的菌落数，就能推断出样品中大概含有多少活细菌。
为了保证结果正确，一般设置个平板，选择菌落数在的平板进行计数，并取。
统计的菌落数经常比活菌的本质数量低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
( 三) 实验设计实验设计包括，所需、、用具和药品，详细的以实时间安排等的综合考虑和安排。
人教版高中生物选修一专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C ÷V )×M 。
C ：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。
V ：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。
M ：代表稀释倍数。
③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。
.1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。
稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。
4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。
5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。
(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。
3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。
专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
思考：活菌计数法统计的菌落数是否与活菌实 际数目吻合？为什么？ 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观 察到的只有一个菌落 因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数 来表示。
例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的 菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板， 统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三 个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的做法正确吗？如果有问题， 错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
B.细菌易稀释，真菌不易稀释
C.细菌在土壤中的数量比真菌多
D.随机的，没有原因
㈣.取样涂布
◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养 基类型、培养时间、稀释度、培养物等。
㈤.微生物的培养与观察
不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度 和培养时间： 细 菌：30～37℃ 培养1～2d 放线菌：25～28℃ 培养5～7d 霉 菌：25～28℃ 培养3～4d 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
学习目标分解
1.知道筛选目的菌株的思路和计数的方法， 原理 2.掌握从土壤中分离分解尿素的微生物及进 行平板计数的方法.
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数核心知识要点1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
2．实验流程(1)土壤取样→富含有机质的土壤表层土(2)样品的稀释→通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板(3)接种→用稀释涂布平板法接种(4)培养⎩⎪⎨⎪⎧细菌：30～37 ℃培养1～2天放线菌：25～28 ℃培养5～7天霉菌：25～28 ℃培养3～4天(5)观察→根据菌落的特征区分微生物 (6)计数→统计菌落的数目(7)计算→根据公式“每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M[C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数]”进行计算【重难详解】1．选择培养基四种常见制备方法或实例 方法一 加入某些特定物质2．两种计数方法的比较【解析误区】1．“选择菌落数在30～300的平板”的两个提醒用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300的平板进行计数。
解题时易出现以下误解： (1)只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。
错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。
(2)得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。
②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。
可见，并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300之间”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。
土壤中分解尿素的细菌的分离与记数
尿素分解细菌的纯培养
尿素分解细菌的纯培养是分离尿素分解细菌的关键步骤， 通过选择性培养基，将土壤中的尿素分解细菌分离出来， 获得单一菌落。
培养基中添加尿素作为唯一氮源，以筛选出能够分解尿素 的细菌。同时，培养基中还应添加适量的其他营养成分， 以满足尿素分解细菌的生长需求。
尿素分解细菌的计数方法
尿素分解细菌的计数可以采用菌落计数法或细胞计数法。菌落计数法是通过培养 基上形成的菌落数量来计算尿素分解细菌的数量，而细胞计数法则采用显微镜直 接观察和计数细胞。
菌落计数法操作简便，但可能存在菌落重叠和无法区分死菌和活菌的问题。细胞 计数法虽然准确度高，但操作较为复杂，需要使用显微镜和专业的细胞计数器。
尿素分解细菌的计数实验步骤
将土壤样品稀释后涂布在含有尿素的 培养基上，然后进行培养。
对筛选出的尿素分解细菌进行纯培养， 并进行进一步的生理生化实验和分子 生物学鉴定，以确定其种类和特性。
采集时间
采样方法
选择适宜的时间采集土壤样品，通常 在春季或秋季进行，此时土壤中的微 生物活性较高。
采用多点采样法，在不同地点和深度 采集土壤样品，以获得更全面的土壤 信息。
采样地点
选择具有代表性的土壤区域进行采样， 如农田、森林、草地等，确保采集的 土壤样品具有广泛性和代表性。
分离尿素分解细菌的方法
生长特性
这些细菌在尿素培养基上 生长良好，表现出对尿素 的良好分解能力。
尿素分解细菌的记数结果
菌落计数
通过菌落计数法，对分离 出的尿素分解细菌进行数 量统计。
数量分布
在土壤的不同区域，尿素 分解细菌的数量分布存在 差异。
生长条件
部分尿素分解细菌对生长 条件较为敏感，如温度、 pH值等。
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种微生物表现出稳定的菌落特征。菌落的特征包
括
、
、
和
等方面。
二发 酵 设 计 三、对分离得到的分解尿素细菌的鉴定
1. 对所需的微生物进行初步筛选，只是分离纯化菌种的第一步，要对
分离的菌种进行一步的鉴定，还需要借助
的方法。
2．在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的
将尿素分解成
了
。氨会使培养基的碱性 ，PH 。因此，我们可以通过
生
长的条件（包括
等），同时抑制或阻止其他微生物生
长。
3. 选择培养基：在微生物学中，将允许
的微生物
生长，同时
和
其他种类微生物生长的培养基，称作选
择培养基。
一研 究 思 路
（二）统计菌落数目
1．常用来统计样品中
数目的方法是
。即当样品的稀释度
足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的
。通过统计
将
的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到
培养基
上培养，大肠杆菌菌落呈现 色，可以根据培养基上
的数目，计
算出水样中大肠杆菌的数量。
一研 究 思 路 （三）设置对照
1．设置对照实验的主要目的是排除实验中
对实验的
干扰，提高实验结果的可信度。
2. 对照实验是指除了
的条件外，其他条件都
的
实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确
实是所测试的条件引起相应的结果。
二实 验 设 计
实验设计
实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料，用具和药品，具体的
以及
时间安排等的综合考虑和安排。关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤
如下：
1．土壤取样
土壤微生物约70%～80%为细菌 ，主要分布在距地表
的近
性土壤中。
2．样品的稀释
样品的稀释程度将直接影响平板上生长的
检测培养基
变化来判断该化学反应是否发生。 在以 为唯一
氮源的培养基中加入
指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指
示剂将变
，说明该细菌能够
。
三 【旁栏思考题】
P22
1.想一想，如何从平板上的菌 落数推测出每克样品中的菌落 数？ 答：统计某一稀释度下平板上 的菌落数，最好能统计3个平 板，计算出平板菌落数的平均 值，然后按课本旁栏的公式进 行计算。
二实 验 设 计
实验设计
3．微生物的培养与观察
不同种类的微生物，往往需要不同的培养
和培养
。
细菌一般在
℃培养
d，放线菌一般在25～28 ℃培养5～7
d，霉菌一般在
℃的温度下培养
d。
在菌落计数时，每隔24 h统计一次菌落数目。选取____________ 时的记录
作为结果，以防止
。
一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同
平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选
择菌落数在
的平板进行计数，计数公式：每克样品中的菌株数
＝
。
通常统计的菌落数往往比活菌的实际数目
。这是因为
。因此，统计结果一般用
而不是活菌数来
表示。
2．
也是测定微生物数量的常用方法。
3. 细菌的数目还可以通过源自法来测定。例如，测定饮水中大肠杆菌的数量，可
。由于不同微生物在土壤
中含量不同，因此分离不同的微生物要选用不同的稀释度范围，以保证获得
_____________
_________、适于计数的平板。一般来说，细菌稀释度为
___________倍，放线菌稀释度为
倍，真菌稀释度为
倍。第一次实验时，可将稀释范围放宽些，以保证能从中选择出适于计数的平板。
专题2 微生物的实验与应用
课题2 土壤中分解尿素的细 菌的分离和计数
基础知识 实验设计 操作提示 课题延伸
一研 究 思 路
1．筛选菌株
1．尿素是一种重要的 肥，农作物不能直接吸收利用，尿素只有被
分解成
之后，才能被植物吸收利用。选择分解尿素细菌的培养
基特点：
惟一氮源，按物理性质归类为
培养基。
2. 实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于
P24
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素 的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株 /kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本 中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线 菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为 获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度 进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养 的条件。
三【思考题】
P22
【P22】两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数106 的培养集中，得到以下两种统计结果：1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计 的菌落数为230；2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板…… 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学 考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相 差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用 来求平均值。 P22设置对照 A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养 基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方 案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A 无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方案 是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基 是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少 的。