(公开课)分解尿素的细菌、分解纤维素的微生物的分离说课讲解

（四）.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养 时间不足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的培养与观察
说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定
要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力 与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复 组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要 重新实验。
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有 说服力，对照的设置是必不可少的。
[一]土壤取样
“微生物的天然培养基”
数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌
从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去 表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌。
缺点：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数；
2.间接计数法（活菌计数法）
⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固 体培养基上所形成的一个菌落是由一个单 细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的 一个单细胞。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
一.研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
㈠.筛选菌株 1、实例： PCR技术 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大 量复制(PCR)的技术，此项技术要求使用耐高温 （930C）的DNA聚合酶。
原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。
三、
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥 形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、稀释度等。 [三]规划时间
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与
计数
一、课题背景 1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之 后才能被植物利用。 2、细菌能利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
CO(NH2)2+ H2O 脲酶 2NH3 + CO2
3、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH等)，同时抑制其他微生物生长。
要分离一种微生物，必须根据该微生物的特 点，包括营养、生理、生长条件等； 方法：
⑴抑制大多数微生物的生长 ⑵促进目的菌株的生长 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过 平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。
（三）设置对照
主要目的是排除实验组中非测试因素对实验 结果的影响，提高实验结果的可信度。 判断培养基的制备是否合格（有无被杂菌污染） ： 将未接种的培养基同时进行培养。
判断选择培养基是否具有筛选作用： 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养 观察菌落数目。
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基 中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。
（二） 样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板
（三）.取样涂布
还少了什么吗？
未接种的选择培养基 接种的完全培养基
◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养 基类型、培养时间、稀释度。
对照组 蛋白胨 培养基
是
判断该 培养基 有无选
生长多种 微生物
择性
找规律：
1：判断某个培养基是否具有选择作用时， 应设立__基___础____培养基进行对照。
2：判断所使用的培养基是否被杂菌污染 时，应设立_不__接__该__菌_种__的__培养基进行空 白对照？
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下 计算一定容积里样品中微生物的数量。
原因： ⑴土样不同 ⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含 氮物质)
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱA同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？
固体培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖 氮源：尿素
5、培养基选择分解尿素的微生物的原理
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液
的体积为0.1ml） A. 2.34×108 B. 2.34×109
B( )
C. 234
D. 23.4
培养基的氮源为尿素， 只有能合成脲酶的微生 物才能分解尿素，以尿 素作为氮源。
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基
6、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
是否 接种
目的
结果
以尿素为 实验组 唯一氮源 是
的培养基
分离 尿素 细菌
只生长尿 素细菌
牛肉膏