分子生物学检验完整版

1病原生物基因组在医学上有何应用？详见书P3
a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查
2什么是原癌基因，原癌基因有什么特性，原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的
激活机制有哪些？
原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新
生物特征的基因总称。

特性：进化上高度保守，负责调控正常细胞生命活动，可以转化为癌基因。

功能分类：生长因子，生长因子受体，信号转导蛋白，核调节蛋白，细胞周期调节蛋白，抑制凋亡蛋白
激活机制：插入激活，基因重排，基因点突变，基因扩增，基因转录改变
3试述Down综合征（21三体综合征）的主要临床特征及核型。

临床特征：生长发育障碍，智力低。

呆滞面容，又称伸舌样痴呆。

40%患者有先天性心脏畸形。

肌张力低，50%患者有贯通手，男患者无生育能力，女患者少数有生育能力，遗传风险高。

核型：92.5%患者游离型：核型为47，XX(XY),+21
2.5%患者为嵌合型：46，XX(XY)/47，XX(XY),+21
5%患者为易位型：46，XX(XY),-14，+t(14q21q)
4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点，对比分析分子生物学方法的优
势
1直接涂片染镜检：敏感度和特异性差，不能用于确诊。

2分离培养法：诊断NG感染的金标准，但是其对标本和培养及营养要求高，培养周期长，出报告慢，
难以满足临床要求。

3免疫学法：分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制，推广受限。

分子生物学的优点：敏感，特异，可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌，适应于快速检测
5、在单基因遗传病的分子生物学检验中，点突变检测常用方法有哪些？
1异源双链分析法（HA）2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术
6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法
白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸（DNA RNA）的检测、基因分型和耐药基因分析等。

1PCR技术：选择高度特异性的天冬氨酸蛋白酶基因设计引物
PCR—斑点杂交技术：正向杂交和反向杂交，后者可一次检测多种真菌
DNA指纹技术：RFLPRAPD电泳核型分析
AP—PCR技术：定义方法简便，快速，特别适合临床应用
DNA序列分析：可测定rDNA序列也适用于基因突变引起的耐药
基因芯片技术：适用于病原体的耐药研究
7、 F VIII基因倒位导致血友病A，DMD基因外显子缺失导致与杜氏肌营养不良，珠蛋白
基因突变导致与珠蛋白合成障碍性贫血。

（第11章，P197，P203，P207。

窝觉得大家把题目读三遍就可以了）
答：F VIII基因倒位是导致的血友病A的主要原因（占50%）其它基因突变，如点突变，缺失，插入也
会导致血友病A。

同理DMD基因外显子缺失是迪谢内肌营养不良（杜氏肌营养不良）发生的主要原因（60%-70%）。

珠蛋白合成障碍性贫血有六种，主要的两种是α珠蛋白生成障碍性贫血和β珠蛋白生成障碍性贫血，基因
突变是主要发病原因。

8、基因多态性有哪些的临床应用？（P4）
答：1、基因定位和遗传病相关性分析；2、疾病诊断和遗传咨询；
3、多基因病的研究；
4、器官移植配型和个体识别
9.第一代测序技术特点。

（p83）
答：优点：高读长，准确率一次性达标率高，能很好处理重复序列和多聚序列，易小型化。

缺点：通量低，单个样本制备成本相对较高，难以做大量的平行测序,小规模进行。

10. 慢粒融合基因。

急性早幼粒融合基因。

答案：（一）慢粒融合基因（p229）
BCR-ABL融合基因：BCR-ABL为t（9；22）(q34;q11)染色体易位所产生的融合基因，可见于25%-40%的成人ALL和4%-6%的儿童ALL，更是CML的重要分子基础（95%），Ph1染色体异常即为t(9；22（q34;q11）易位。

(二)急性早幼粒融合基因（p230）（10-529）
PML-RARa融合基因：多数急性早幼粒细胞白血病（APL）有染色体t(15;17)(q22；q21)的易位，位于15q22的早幼力粒细胞白血病(PML)基因的17q21的维A酸受体a(RARa)基因融合成PML/RARa。

98%的AML-M3亚型发生该融合基因。

11华法林用药监测常用何种基因多态性，它有何特点。

P264 监测CYP2C9基因多态性，其特点为：CYP2C9约占CYP450总量的20%，参与约12%临床药物的代谢，尤其与磺酰脲类降糖药甲糖宁的代谢特异性有关。

（不肯定，参照P262）
12在细胞增殖周期中，染色体的形态最典型和清晰的阶段。

P243 （填空题）有丝分裂中期
13单基因遗传病间接诊断是在家系中进行？
P192 （填空题）连锁分析和关联分析
14染色体异常？原癌基因、核酸分子标志物、病毒感染的完整性检出策略、线粒体基因突
变性糖尿病、PCR-RFLP、AP-PCR技术、抑癌基因、准病毒株、核型分析、连锁染色体异常：在受到环境，物理，化学，生物，自身遗传和母亲年龄等因素影响，导致人体染色体数
目和结构的异常改变。

原癌基因：是指人类或其他动物细胞固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的
基因总称。

核酸分子标志物：是分子生物学检验的主要内容，包括基因突变，DNA多态性，基因组DNA片段，RNA和循环核酸等多种形式。

病毒感染的完整性检出策略：通过分子生物学检验技术对病毒的存在与否作出明确的判断，同时能够
诊断出带菌者和潜在性感染者，并能对病毒进行拷贝数测定，基因分型检测及亚型和耐药性鉴定。

线粒体基因突变性糖尿病：（p240）tRNAleu(UUR)A3243G是国际上唯一公认的线粒体糖尿病致病突变，
是国内外报道的最多，发病率较高的单基因糖尿病突变位点。

（课本上找不到）
PCR--PFLP:：是对PCR产物作限制性片段的长度多态性分析，是根据PCR产物突变序列是否位于限
制性内切酶的酶切位点内设计的。

AP-PCR技术：AP-PCR技术是在对所扩增的基因序列一无所知的情况下随意设计或选择一个非特异性
引物，在PCR反应体系中，首先使引物与模板DNA中许多序列通过错配而复性。

抑癌基因：又称肿瘤抑制基因，为一类可编码对肿瘤形成起阻抑作用蛋白质的基因，正常情况下负责
控制细胞的生长和增殖。

准病毒株：即准种，是指HCV感染后，在感染者体内形成以一个优势株为主的相关突变株病毒群。

核型分析：人类的染色体数目和形态的相对恒定，将细胞的染色体按相应的生物固有的染色体形态特
征和规定，进行配对，编码和分组的分析过程。

连锁：在疾病家系中，同一染色体上相邻的两个位点因其位置十分靠近，在遗传时两者分离的概率很
低。

15HBV感染的病原学诊断目前主要依靠？
答：免疫学方法检测HBV的血清学标志物和分子生物学检测HBV核酸。

P141
16甲型分亚型的标准？
P148 (书上未找到甲型)丙型肝炎5’UTR区的序列最为保守，种系变化程度及进化率都很低，可用于区分主要基因型。

NS5b区变异交大，易于区分不同病毒株，常被选作亚型区分依据。

17淋病奈瑟菌的分子生物学检验最常用的检测目标是？
P172 核酸的检测： 1.PCR，2实时荧光定量PCR，3.连接酶链反应（LCR），4.链替代扩增技术(SDA)；
耐药性检测： 1.DNA测序，2.PCR-SSCP，3.PCR-RFLP，4.基因芯片技术
18最常用的检测大肠杆菌O157：H7致病基因的方法是？主要检测的靶基因包括？
P174 PCR是最常用的检测方法；
主要检测的靶基因包括：stx1、stx2、eae 、ehxA 、saa
19胎植入前诊断分子生物学技术主要包括？p269
1 单细胞PCR技术（步骤包括模板制备、单细胞基因扩增及产物分析）
2荧光原位杂交技术（FISH）
20.真菌分子生物学检验常用？p179
1.PCR技术
2.PCR斑点杂交技术
3.DNA指纹技术
4.AP-PCR技术
5.DNA序列分析
6.基因芯片技术
21 衣原体的特点。

衣原体能够通过细菌滤器、无肽聚糖、对r-干扰素敏感、基因组小、发育周期独断、专性活细胞内寄生的
特殊原核细胞型微生物。

它广泛寄生于人，哺乳动物及禽类，少数致病。

它具有特征意义的特包涵体形态，
细胞内定位，染色性。

22?多发性骨髓瘤患者最常见的肿瘤标志物。

β２-微球蛋白（β２-MG）
23目前c-erb B-2/HER2用于哪种肿瘤的诊断？
答：乳腺癌
24常见原癌基因有？抑癌基因有？
答：常见原癌基因有：sis、int-2、erb、ras 等
常见抑癌基因有：APC、P53、Rb 等具体见P212
25何种常见遗传病可通过染色体检查而确诊？
答：Donwn综合征（21三体综合征）具体见P247
26根据乙肝表面抗原的抗原性差异，可以将乙肝病毒分为几个血清型？P143
答：可以分为10个血清型，其中主要血清型有adr adw ayw ayr
27 STRs作为首选的群体遗传学和法医学研究的遗传标志物，其位点分析不可以应用于哪个
方面?p285
答：1、同卵双生子的区分2、妊娠期胎儿父权的认定3、微量组织来源的鉴定
28对于基因背景未知的点突变，通常不采用何种检测方法？P191
答：不采用直接检测基因点突变的方法，如等位基因特异性寡核苷酸探针杂交、等位基因特异性PCR、PCR-限制性片段长度多态性分析、基因芯片、PCR-ELISA等技术。

29单基因遗传病主要遗传方式涉及几对等位基因，其传递呈典型的孟德尔式遗传
一对
30分子生物学检测技术中，需要结合电泳技术的有？
蛋白质组学技术（双向凝胶电泳）
31常用于结核分枝杆菌感染检测的分子生物学检测技术中，采用杂交保护试验原理的技术
是？
扩增结核分枝杆菌直接试验
32.弓形虫DNA的主要形式是？
三种形式：染色体DNA、线粒体DNA和胞质DNA
33.采用PCR扩增TP的耐药菌株23srRNA基因，经测序发现A2058位点的碱基突变，用何种分析发现有酶切图谱的变化？
PCR-RFLP（PCR--限制性酶切片段多态性分析）
34.在医院细菌感染的常用分子学技术中，被认为是菌株分子分型金标准的是？
脉冲场凝胶电泳（PFGE）
35、高危型人乳头瘤病毒约几种？
答：高危型HPV约20种，最经典的有13种（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73、82等）。

36、点突变涉及基因的？
答：单个碱基（点突变也称为碱基置换，是指单个碱基的改变。

）
37、PCR技术是新型隐球菌分子生物学检验最常用的方法，其中FQ-PCR和巢式PCR应用较多，常扩增的目的片段是？
答：rDNA的复合体
38.采用PCR、实时荧光定量PCR技术、巢式PCR和竞争性PCR检测肺炎衣原体DNA一般选择哪部分为靶序列设计引物？
答：肺炎衣原体种特异性抗原MOMP基因
39.镰状细胞贫血的分子机制。

答：镰状细胞贫血是由于β珠蛋白基因中最常见的错义突变引起的溶血性贫血，属隐性常染色体遗传病。

镰状细胞贫血患者由于β珠蛋白基因中第6位密码子存在单个碱基的突变，由原来的GAG改变成GTG，结果使β珠蛋白链的第6位氨基酸残基由原来的谷氨酸改变成缬氨酸，改变后的异常血红蛋白称为镰状血红
蛋白（HbS）。

因亲水侧链被非极性的疏水侧链所取代，在β6VaL与β1VaL之间出现了一个因疏水作用而形
成的局部结构，这一结构使脱氧的HbS进行线性缔合，导致氧结合能力过低，红细胞发生镰变（sickling），弹性几乎丧失，无法变形，不能通过直径比红细胞小的毛细血管，引起微循环阻塞，心、肺、肾脏严重损
伤。

40、病毒感染的分子生物学检验策略分为？
答：一般性检出策略和完整性检出策略。

（1）一般性检出策略只能提供是否存在某种病毒感染，即针对病毒的特异性核酸序列通过分子生物学技术检测出病毒的DNA或RNA。

临床可用作判断有无病毒感染以及被何种病毒感染，是快速诊断
机体有无病毒感染的首选方法。

（2）完整性检出策略是通过分子生物学检验技术对病毒的存在与否做出明确的判断，同时能够诊断出带菌者和潜在性感染者，并能对病毒进行拷贝数测定、基因分型检测及亚型和耐药性鉴定。

41、结合分子杆菌耐药性的分子生物学检验金标是？
DNA测序
42、细菌感染的分子生物学完整性检验策略？
完整性检测策略利用多种分子生物学技术对细菌感染病原体进行全面检测分析不仅提供有无结核分支
杆菌感染信息，还有耐药性方面的信息，为临床诊疗尽可能提供实验室依据
43、流感病毒结构自外而内可分为？
流感病毒结构自外而内可分为包膜、基质蛋白以及核心三部分。

病毒的核心包含了储存病毒信息的
遗传物质以及复制这些信息必须的酶。

包膜是包裹在病毒外层的磷脂双分子层膜，来源于宿主的细胞膜，
包膜中有两种非常重要的糖蛋白，血凝素和神经氨酸酶。

这两类蛋白形成突出在病毒体外，长度约为
10~40nm。

基质蛋白与包膜紧密结合，构成了病毒的外壳骨架。

44、染色体疾病包括？
常染色体疾病：Down综合征（21三体综合征）、18三体综合征、13三体综合征、5q-综合征。

性染色体疾病：klinefelter综合征、XYY综合征、Turner综合征、X三体综合征、脆性X染色体综合征。

染色体微缺失疾病：Prader-Willi综合征、Angelman综合征、Y染色体微缺失与男性不育。

45正常男性核型为;正常女性核型。

正常男性核型：46，XY；正常女性核型：46，XX
46药物代谢酶中I相酶的代表?II相酶的代表为?
药物代谢酶中Ι相酶的代表为:细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）
Π相酶的代表为:N-乙酰转移酶(N-acetyltransferase,NAT)和硫嘌呤S-甲基转移酶(thiopurine
s-methyltransferase,TPMT)。

47目前肺炎支原体的分子生物学检验主要包括？
目前肺炎支原体的分子生物学检验主要包括其特异性核酸（DNA、RNA）的检测、基因分型和耐药基因分析。

1.PCR技术 PCR检测MP（肺炎支原体）的靶序列常选在16S rRNA基因组可变区、保守区、P1蛋白基因组
区。

2.核算杂交目前应用于肺炎支原体检测的探针有特异性DNA片段探针、人工合成的寡核苷酸探针、全DNA
探针。

临床上应用较多的是斑点杂交，即将待测样本加样于硝酸纤维素薄膜上，与标记的MP DNA寡核苷酸探针进行斑点杂交，从而检测待测样本中是否存在MP DNA，可进行定性或半定量分析。

3.PCR—RFLP 采用PCR—RFLP方法可以对肺炎支原体进行分型，还可以采用PCR扩增耐药基因经产物测序
或用RFLP进行耐药分析。

48乳腺癌的发生密切相关抑癌基因。

BRAC1,BRAC2,TP53,c-erbB2,c-Myc,P53,Bcl-2,BAX,iASPP,ATM,MDM-2,PTEN,AR,HNPCC,雌二醇受体基因49目前已知感染人类最小的DNA病毒。

乙肝病毒，人乳头瘤病毒（HPV）
50真菌种类庞大而多样，现已独立成为真菌界，就医学真菌而言，包括以下哪种?
致病真菌，条件致病真菌，产毒真菌和致癌真菌
51对于基因背景未知的点突变，通常采用得检测方法?
PCR—单链构象多态性、变性梯度凝胶电泳、DNA序列分析、异源双链分析（HA）
52点突变不涉及碱基的?
（涉及替换、缺失、插入。

替换又分转换和颠换）选择题要选不涉及的
53.BRAC基因突变与下列哪种肿瘤的发生最为密切？乳腺癌
54白假丝酵母菌分子生物学检验中的常用方法？
（1）PCR技术 (2)PCR-斑点杂交技术（3）DNA指纹技术（4）AP-PCR技术（5）DNA序列分析（6）基因芯片技术
55.UU的PCR检测中常用的靶序列设计引物？
在UU的PCR检测中，常根据UU的MB基因、16S rRNA基因和脲素酶基因为靶序列设计引物，建立多种PCR 检测方法，如传统PCR、实时PCR、多重PCR等。

56氨基糖苷耳聋发病的分子基础是？
mtDNA突变是导致耳聋发生的重要原因之一。

其中，线粒体12S rRNA基因的A1555G和C1494T突变是导致氨基糖苷类抗生素耳毒性的主要分子致病基础。

57Leber遗传性视神经病单个线粒体突变中96％的患者不是由哪种错义突变引起(原发型）？
ND1 G3460A,ND4 G11778A,ND6 T14484C
58最常见的染色体畸变综合征是？
Down综合征(21三体综合征）。

主要临床症状是发育障碍，智力低下。

具有特殊的呆滞面容，有称伸舌样痴呆。

40％患者均有先天性心脏
畸形。

患者肌张力低，约百分之50患者有通贯手，男性患者无生育能;女性患者少数有生育能力，将次病
传给后代的风险高。

核型为47，XX,(XY),+21。

59核型为45，X者可诊断为？
Turner综合征。

主要临床特征：患者表型为女性，具女性外生殖器，但发育不良。

乳房不发育，身材矮小。

后发际很低，
蹼颈，面容呆板。

智力发育落后，尿中雌激素显著减少。

部分患者并发心、肾、骨骼等多种先天畸形。

60PGD称为第几代试管婴儿技术？
第三代
61以RNA为靶标的临床分子生物学检验包括？
RNA病毒基定及其拷贝数测定、基因转录产物mRNA水平的检测、疾病相关的各种微小RNA的检测分析、外周血游离循环RNA的检测等
62我国流行的主要HCV基因型别以何种型别为主。

我国流行的主要HCV基因型别及亚型有：1b 2a 3a 3b及 6a，其中以2型为主
63何谓个体化医学？试举例说明
个体化医学是现代医学的核心目标，个体化医学包含个体化诊断与个体化治疗两个部分，个体化诊断
是个体化治疗的基础，个体化治疗是个体化诊断的目的。

目前基于药物遗传学和药物基因组学的个体化分
子生物检验，如细胞色素p450酶系的基因多态性的检测，可以指导个体的用药剂量。

线粒体12SrRNA A1555G 和C1494T突变可以指导氨基糖苷类药物的使用，携带这两个突变位点的个体禁用此类药物。

HER2的检测可以指导抗肿瘤药物赫赛汀的临床应用，可以避免HER2阴性的患者使用该药带来不必要的经济负担和耽误
治疗时间。

64乙型肝炎病毒的分子生物学检验主要是针对HBV DNA的检测，常用的分子生物学技术有
哪些？
检测的常用技术有PCR技术和核酸分子杂交技术。

a普通PCR技术b荧光定量PCR技术c支链DNA技术d核酸杂交技术e杂交捕获技术f基因芯片技术
65限制性酶谱分析镰状细胞贫血的原理。

限制性酶谱分析首先设计引物进行PCR扩增，扩增片段中必须包括β珠蛋白基因的第5、6、7密码子，扩增产物经MstII限制性内切酶酶切，最后通过对酶切片段直接电泳分析或进行Southern印迹杂交分析后做出诊断.
66引起染色体异常的常见原因有哪些？
引起染色体异常的常见原因有：环境中的物理、化学、自身遗传和母亲年龄等因素。

67HLA基因配型的原理和主要方法有哪些？
原理：HLA抗原受控于主要组织相容性复合物的基因组。

不同的脊柱动物都有MHC,在人类称HLA系统。

人类HLA抗原位于人第6号染色体短臂上，由一个DRA和多个DRB基因编码组成。

HLA I类抗原的特异性取决于a重链，由HLA-A、B、C位点编码；其β轻链是β2微球蛋白，编码基因在第15号染色体。

HLA I I类抗原受控于HLA-D区，由于其中的A基因和B基因分别为a重链和β轻链编码，抗原多态性取决于β轻链。

主要方法：RFLP与PCR-RFLP分型技术、PCR-SSCP技术、测序技术、PCR-SSO技术、PCR-SSP技术、基因芯片技术、流式细胞仪技术、氨基酸残基配型标准分型技术。

68请简述扩增结核分枝杆菌直接试验（AMTDT）的检测原理。

（简答）
AMTDT以结核分枝杆菌的16SrRNA为扩增模板，采用转录介导的扩增技术对靶核酸进行扩增，采用化学发
光物吖啶酯标记的cDNA探针与扩增的靶基因进行杂交，探针与扩增产物杂交后利用杂交保护试验去除未杂
交的标记探针，最后利用化学发光仪检测化学发光信号。