结核分枝杆菌的试验室诊断

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本法弊端
操作繁琐 需时久，4周 结果准确性差

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五、液体培养＋ 显微镜观察药敏试验

是2000年建立的一种痰标本液体培养结合显微镜观察技 术。其原理是MTB含有索状因子，因此其在液体培养基 中生长时分泌索状因子，形成索状特征性结构，利用倒 置显微镜观察索状结构可用于MTB的快速诊断。由于液 体培养基营养丰富，因此MTB生长迅速，使MTB的培 养时间显著缩短，培养阳性率显著增加。该法还能在培 养的同时直接进行临床标本的直接药敏试验，因此能显 著缩短从临床标本到耐药性测定的所需时间，这是其它 传统方法所不具有的，也是MODS的最大优点。
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检测方法
1．菌悬液的制备 2.接种及培养 3.结果判定与报告 敏感（一）： 含药培养基上无菌落生长。 报告菌落数：当含药培养基上菌落数在20个以下时， 报告菌落个数。 耐药（1+）： 含药培养基上菌落数约占斜面面积1/4； 耐药（2+）： 含药培养基上菌落数约占斜面面积1/2； 耐药（3+）： 含药培养基上菌落数约占斜面面积3/4； 耐药 (4+)： 含药培养基上菌落呈菌苔样生长。
结核分枝杆菌的试验室诊断
医院检验科
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结核疫情及诊断进展
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黛玉脸色苍白， 瘦骨嶙峋，经不断 咳嗽及吐血后，香消玉殒，结束了一场 哀怨凄绝的爱情故事。
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我国结核病疫情
全球结核病第二高负担国家，结核病疫情表现有“六
多” 。
一、感染人数多——5.5亿人感染过结核菌，约占全国人口
的45％，高于全球平均水平。 二、患病人数多——活动性肺结核、传染性肺结核患病率 分别为367/10万和122/10万， 三、新发患者多——全国每年新发活动性肺结核患者145 万， 其中传染性 肺结核患者65万。 四、死亡人数多——全国每年约有13万人死于结核病。 五、农村患者多——全国约有80％的结核病人集中在农村， 主要在经济不发达的中西部地 区。 六、耐药患者多——全国结核病耐药率高达28％。 4
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涂片优点：简便、快速、价廉
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涂片的缺点
敏感性低：5000～10000条菌／ml 特异性差：所有分枝杆菌均可着色 无法区别死菌与活菌：结果均为阳性

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痰菌假阴性原因
病变是封闭或开放； 病变性质和其中能够排出的菌量和排出 时间间歇； 结核分枝杆菌形态多样性；

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二、液基夹层杯结核杆菌检验工作原理

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实验室诊断方法
病原学诊断 辅助诊断
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病原学诊断
一、涂片抗酸染色镜检法， 二、液基夹层杯结核杆菌检验 三、荧光染色法 四、培养法 五、液体培养＋显微镜观察药敏试验 六、快速培养检测法， 七、色谱法 八、分子生物学法 九、噬菌体生物扩增法
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一、涂片抗酸染色镜检法：

国内大多采用厚涂片，比薄涂片法可提高 阳性率；涂片萎尼抗酸染色法能保存较久， 可备复查； 因费时、繁琐，综合医疗单位常因重视不 够，致涂阳检出率低于5%，专业机构涂阳 率可达到30%。 国外痰涂片阳性率可达30%～40%，反复 多次查，可增加到65%～75%；
结核病实验室 诊断方法介绍
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概 述
结核病人的细菌学检查不仅是发现传染源 的主要途径和手段，也是结核病确诊和制 订抗痨方案，考核疗效、评价治疗效果的 可靠标准。 由于结核菌的遗传特性决定其生长周期长， 致使常规细菌学检查方法存在着灵敏度低、 操作复杂，需时间较长和影响因素较多， 不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发展缓 慢，无法充分满足临床诊断的需要。
将经过消化灭活处理液处理的痰液、或其他体液标本混 悬液置于具有符合光学要求基片的夹层杯中，经过专业离心 机离心将混悬液中细菌或细胞牢固附着基片上，并在夹层杯 中直接染色后取出基片在载波片上封片，置显微镜下观察。
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优点：
1、操作方便，易于掌握。 2、片中结核菌分布均匀，染色效果清晰 3、液基结核菌制片技术较离心浓缩集菌法有显著提 高： 该方法将所有消化后标本的抗酸杆菌均完整 地保留于液基薄片中，从而显著提高了检出率。 4、安全性有所提高： 消化，制片，烤片，染色均在 彭氏杯中完成，操作人员不直接接触标本。 采用 结核专用消化液，可有效杀灭结核分支杆菌，更好 的提高了操作的安全性。
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三、荧光染色法：

是涂片法中阳性率较高，较快速的方法， 集菌与荧光染色相结合，则荧光显微镜下的抗 酸杆菌阳性率可达50%， 荧光法的缺点： 假阳性率较高， 保存时间短，不到4个月
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四、培养法
一般都用改良罗氏固体培养基 接种后第3第7天观察，以后每周观察一 次菌落生长情况，第8周若仍无生长，报 告为阴性。 优点：准确，灵敏度略高于涂片法；可 以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种 鉴定和药敏试验. 缺点：诊断周期长，最快也需要6周。 有一定的污染率

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培养假阴性的原因
个别细菌营养要求的特异性； 细菌和细菌营养代谢异质性； 细菌培养前处理对细菌活性影响；

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分枝杆菌药物敏感性试验


绝对浓度法检测分枝杆菌药敏实验是采用含药罗氏培养基进行的。常用药物终浓度（μg/ml） ____表 1 绝对浓度法含药培养基中的药物终浓度_____ 药 物 浓 度（μg/ml） 低浓度 高浓度 异烟肼 1μg/ml 10μg/ml 利福平 1μg/ml 10μg/ml 链霉素 10μg/ml 100μg/ml 乙胺丁醇 5μg/ml 50μg/ml 对氨基水杨酸 1μg/ml 10μg/ml 氨硫脲 10μg/ml 100μg/ml 乙硫异烟胺 25μg/ml 100μg/ml 卡那霉素 10μg/ml 100μg/ml 卷曲霉素 10μg/ml 100μg/ml 紫霉素 10μg/ml 100μg/ml 氧氟沙星 5μg/ml 50μg/ml 左氧氟沙星 5μg/ml 50μg/ml 环丙沙星 5μg/ml 50μg/ml 司帕沙星 5μg/ml 50μg/ml 力克肺疾 1μg/ml 10μg/ml 丁胺卡那 10μg/ml 100μg/ml