盐酸克伦特罗酶联检测试剂盒使用说明书
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本酶联免疫检测试剂盒可以经济、快速地检测鸡肉、鱼、虾等中恩诺沙星的含量。
2. 测定原理
本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在微孔条上预包被恩诺沙星卵清蛋白的偶联物。检测时，加入恩诺沙星标准 品或待测样品溶液及特异性的抗恩诺沙星抗体，包被在微孔板上的恩诺沙星蛋白偶联物和标准品或样品中的恩诺沙星 竞争性地与抗体结合。再加入酶标二抗, 形成抗原抗体复合物；洗涤后加入显色剂，结合的酶将无色的显色剂转化为蓝 色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在 450nm 波长进行检测，样品中的恩诺沙星浓度与吸收光强度 成反比，与标准曲线比较即可得出相应残留物恩诺沙星的含量。
11. 灵敏度
恩诺沙星检测试剂盒的检测限： 鸡肉、鱼、虾：0.6ng/g
3
深圳市易瑞生物技术有限公司 Tel：0755-29744527
Fax：0755-27948417
%Maximum Absorbance
100
80
60
40
20
0
0
0.5 1.5 4.5 13.5 40.5
ENR(ng/ml)
Calibration Curve of ENR ELISA Kit
4. 需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
（1）设备 …均质器 …天平，精度 1mg …15ml、50ml 塑料离心管 …5、10ml 刻度移液管 …振荡器 …恒温水浴锅 …离心机 …氮吹仪或旋转蒸发仪 …恒温箱
1
深圳市易瑞生物技术有限公司 Tel：0755-29744527
Fax：0755-27948417
8. 免疫分析时试剂的准备
注意事项
a) 使用之前将所需试剂在室温放置至少半小时, 让温度回升至室温，特别是测试板孔、稀释抗体的洗涤液、
稀释浓缩酶结合物的洗涤液、标准品溶液、样品液等。
b) 使用之后立即将所有试剂放回 2-8பைடு நூலகம்。
2
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Fax：0755-27948417
12. 特异性
与类似物的交叉反应率：
恩诺沙星:
100%
环丙沙星:
107.89%
诺氟沙星:
67.61%
培氟沙星:
43.25%
氧氟沙星:
23.27%
洛美沙星:
6.01%
沙拉沙星:
<0.5%
甲磺酸达氟:
<0.5%
13. 回收率
鱼、虾、鸡肉等: 80±15%
4
深圳市易瑞生物技术有限公司 Tel：0755-29744527
恩诺沙星酶联免疫检测试剂盒使用说明书
1. 用途
恩诺沙星，是喹诺酮类抗菌药，因其能抑制细菌DNA螺旋酶，抗菌谱广、高效、低毒、组织穿透力强，已成为兽 医临诊和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，被大量用于治疗、预防和促进生长。但由于其耐药性和潜在的致癌性， 欧盟、日本及我国均制定了在组织中的最高残留限量为100ppb。目前对恩诺沙星的检测方法主要有荧光分光光度法、 酶联法（ELISA）和液相色谱法等。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、不需要贵重仪器和样本前处理相对简单等优 点，适于现场监控和大量样本筛查。
3. 试剂盒组成
（1） 酶标板(已包被恩诺沙星卵清蛋白偶联物的微量反应板):1 块（8 孔 X 12 条）。 （2） 恩诺沙星标准液:6 瓶（1ml/瓶），浓度分别为 0、0.5ng/ml、1.5ng/ml、4.5ng/ml、13.5ng/ml、40.5ng/ml （3） 浓缩酶结合物( 羊抗鼠 IgG-辣根过氧化物酶结合物溶液): 1 瓶（10 倍, 1.6ml） （4） 浓缩抗体：1 瓶（10 倍, 0.8 ml） （5） 显色剂 A：1 瓶（8ml） （6） 显色剂 B：1 瓶（8ml） （7） 终止液：1 瓶（8ml） （8） 浓缩洗涤液：1 瓶（10 倍, 50ml/瓶）,用于浓缩酶结合物和浓缩抗体的稀释以及微孔板的洗涤 （9） 使用说明书：1 份。
c) 在使用中不要让微孔干燥。 d) 在 EIA 分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是 EIA 测定程
序中的要点。 e) 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用膜盖住微孔板。 （1）配制洗涤液:浓缩洗涤液为浓缩 10 倍的溶液，使用前应根据所需量进行 10 倍稀释，即按 1ml 浓缩洗涤液加 入 9ml 蒸馏水的比例进行稀释。 （2）配制恩诺沙星抗体应用液：提供的恩诺沙星抗体为浓缩液。按照 1：10 稀释（1μl 浓缩抗体加 9μl 洗涤液）。 在吸取浓缩液之前，要仔细地摇动，剩余的放置于 2-8℃保存。每次抗体应用液应现配现用。 （4）配制酶结合物应用液：提供的酶结合物为浓缩液。按照 1：10 稀释（1μl 浓缩酶结合物加 9μl 洗涤液）。在 吸取浓缩液之前，要仔细地摇动，剩余的放置于 2-8℃保存。每次酶结合物应用液应现配现用。
9. 测定程序
（1） （2）
（3） （4） （5）
（6）
（7） （8）
将标准液、样品所需微量反应板（均需 2 个平行试验）放在反应架上。 加 50μl 的标准液或处理好的样品液到相应的微孔中，然后加 50μl 稀释好的抗体应用液，用膜盖好，37℃ 下反应 30 分钟。 弃去孔中液体，并将微孔板剩余残液在吸水纸上拍干。每孔注满稀释好的洗涤液， 轻轻振荡，放置 2 分钟，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复洗涤 4 次，或洗板机洗五次。 加 100μl 酶结合物应用液（已稀释 10 倍的羊抗鼠 IgG-辣根过氧化物酶结合物溶液）到微孔板中，用膜盖 好，37℃下反应 30 分钟。 弃去孔中的液体，并将微孔板剩余残液在吸水纸上拍干，每孔注满稀释好的洗涤液，轻轻振荡，放置 2 分钟，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复洗涤 4 次，或洗板机洗五次。 显色剂 A 和 B 以 1：1 充分混合后，加 100μl 到微孔中，并在 37℃暗处孵育 15 分钟。 加 50μl 终止液到微孔板中，在 450nm 处测量吸光度值。
（1） 2-8℃保存，切勿冷冻。 （2） 将不用的酶标板放进原袋中重新密封。 （3） 酶结合物和显色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7. 样品处理
样品处理： 鱼、虾和鸡肉： (1) 鱼虾、鸡肉等去皮、脂肪，用均质器均质样本，称取 2±0.05g 均质物，加入 15ml 离心管; (2) 加入 5ml 乙腈，1ml 0.1M NaOH，充分混合 10min，3000 转/分以上，离心 10min; (3) 取出 4ml 上清液，加入 PB 缓冲液 2ml，混合均匀； (4) 加入二氯甲烷 5ml，充分混匀 10min，3000 转/分以上，离心 10min。去上层，取下层有机相 4ml 到 15ml 离心 管中（清亮无杂质）； (5) 50℃用氮气吹干； (6) 0.5ml PB 缓冲液溶解干燥的残留物，加入正己烷 1ml 混合 2min，3000 转/分以上，离心 5min。 (7) 取下层 50ul 溶液。 样本稀释倍数 1 倍。
10. 结果
计算百分吸光度值： 标准品（或样品）的吸光度平均值 -----------------------------------×100 = %吸光度值 0 标准品的吸光度平均值 以标准品浓度的 10 为底的对数为 X 轴， 百分吸光度值为 Y 轴，绘制标准曲线。将测得的样本的百分吸光度值代 入标准曲线，从标准曲线上读出样本所对应的值，作为 10 的幂，乘以稀释倍数，即为样品中所含恩诺沙星的量。
Fax：0755-27948417
…微孔板酶标仪(450nm) …20μl, 200μl, 1000μl，八道 100 或 200μl 移液枪 （2）试剂 …二氯甲烷 …双蒸水 …正己烷 …乙腈 …0.1M NaOH 溶液：0.4gNaOH 溶于 100ml 双蒸水 …PB缓冲液：0.52gNa2HPO4 , 0.088gNaH2PO4 溶于 100ml 双蒸水
5. 注意事项
（1）终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。 （2）不要使用过了有效日期的恩诺沙星检测试剂盒，不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降 低灵敏度。 （3）0 标准液的A450nm<0.6 时，表示试剂可能变质，请勿使用。 （4）显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。
6. 储存条件
2. 测定原理
本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在微孔条上预包被恩诺沙星卵清蛋白的偶联物。检测时，加入恩诺沙星标准 品或待测样品溶液及特异性的抗恩诺沙星抗体，包被在微孔板上的恩诺沙星蛋白偶联物和标准品或样品中的恩诺沙星 竞争性地与抗体结合。再加入酶标二抗, 形成抗原抗体复合物；洗涤后加入显色剂，结合的酶将无色的显色剂转化为蓝 色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在 450nm 波长进行检测，样品中的恩诺沙星浓度与吸收光强度 成反比，与标准曲线比较即可得出相应残留物恩诺沙星的含量。
11. 灵敏度
恩诺沙星检测试剂盒的检测限： 鸡肉、鱼、虾：0.6ng/g
3
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Fax：0755-27948417
%Maximum Absorbance
100
80
60
40
20
0
0
0.5 1.5 4.5 13.5 40.5
ENR(ng/ml)
Calibration Curve of ENR ELISA Kit
4. 需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
（1）设备 …均质器 …天平，精度 1mg …15ml、50ml 塑料离心管 …5、10ml 刻度移液管 …振荡器 …恒温水浴锅 …离心机 …氮吹仪或旋转蒸发仪 …恒温箱
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深圳市易瑞生物技术有限公司 Tel：0755-29744527
Fax：0755-27948417
8. 免疫分析时试剂的准备
注意事项
a) 使用之前将所需试剂在室温放置至少半小时, 让温度回升至室温，特别是测试板孔、稀释抗体的洗涤液、
稀释浓缩酶结合物的洗涤液、标准品溶液、样品液等。
b) 使用之后立即将所有试剂放回 2-8பைடு நூலகம்。
2
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Fax：0755-27948417
12. 特异性
与类似物的交叉反应率：
恩诺沙星:
100%
环丙沙星:
107.89%
诺氟沙星:
67.61%
培氟沙星:
43.25%
氧氟沙星:
23.27%
洛美沙星:
6.01%
沙拉沙星:
<0.5%
甲磺酸达氟:
<0.5%
13. 回收率
鱼、虾、鸡肉等: 80±15%
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恩诺沙星酶联免疫检测试剂盒使用说明书
1. 用途
恩诺沙星，是喹诺酮类抗菌药，因其能抑制细菌DNA螺旋酶，抗菌谱广、高效、低毒、组织穿透力强，已成为兽 医临诊和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，被大量用于治疗、预防和促进生长。但由于其耐药性和潜在的致癌性， 欧盟、日本及我国均制定了在组织中的最高残留限量为100ppb。目前对恩诺沙星的检测方法主要有荧光分光光度法、 酶联法（ELISA）和液相色谱法等。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、不需要贵重仪器和样本前处理相对简单等优 点，适于现场监控和大量样本筛查。
3. 试剂盒组成
（1） 酶标板(已包被恩诺沙星卵清蛋白偶联物的微量反应板):1 块（8 孔 X 12 条）。 （2） 恩诺沙星标准液:6 瓶（1ml/瓶），浓度分别为 0、0.5ng/ml、1.5ng/ml、4.5ng/ml、13.5ng/ml、40.5ng/ml （3） 浓缩酶结合物( 羊抗鼠 IgG-辣根过氧化物酶结合物溶液): 1 瓶（10 倍, 1.6ml） （4） 浓缩抗体：1 瓶（10 倍, 0.8 ml） （5） 显色剂 A：1 瓶（8ml） （6） 显色剂 B：1 瓶（8ml） （7） 终止液：1 瓶（8ml） （8） 浓缩洗涤液：1 瓶（10 倍, 50ml/瓶）,用于浓缩酶结合物和浓缩抗体的稀释以及微孔板的洗涤 （9） 使用说明书：1 份。
c) 在使用中不要让微孔干燥。 d) 在 EIA 分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是 EIA 测定程
序中的要点。 e) 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用膜盖住微孔板。 （1）配制洗涤液:浓缩洗涤液为浓缩 10 倍的溶液，使用前应根据所需量进行 10 倍稀释，即按 1ml 浓缩洗涤液加 入 9ml 蒸馏水的比例进行稀释。 （2）配制恩诺沙星抗体应用液：提供的恩诺沙星抗体为浓缩液。按照 1：10 稀释（1μl 浓缩抗体加 9μl 洗涤液）。 在吸取浓缩液之前，要仔细地摇动，剩余的放置于 2-8℃保存。每次抗体应用液应现配现用。 （4）配制酶结合物应用液：提供的酶结合物为浓缩液。按照 1：10 稀释（1μl 浓缩酶结合物加 9μl 洗涤液）。在 吸取浓缩液之前，要仔细地摇动，剩余的放置于 2-8℃保存。每次酶结合物应用液应现配现用。
9. 测定程序
（1） （2）
（3） （4） （5）
（6）
（7） （8）
将标准液、样品所需微量反应板（均需 2 个平行试验）放在反应架上。 加 50μl 的标准液或处理好的样品液到相应的微孔中，然后加 50μl 稀释好的抗体应用液，用膜盖好，37℃ 下反应 30 分钟。 弃去孔中液体，并将微孔板剩余残液在吸水纸上拍干。每孔注满稀释好的洗涤液， 轻轻振荡，放置 2 分钟，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复洗涤 4 次，或洗板机洗五次。 加 100μl 酶结合物应用液（已稀释 10 倍的羊抗鼠 IgG-辣根过氧化物酶结合物溶液）到微孔板中，用膜盖 好，37℃下反应 30 分钟。 弃去孔中的液体，并将微孔板剩余残液在吸水纸上拍干，每孔注满稀释好的洗涤液，轻轻振荡，放置 2 分钟，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复洗涤 4 次，或洗板机洗五次。 显色剂 A 和 B 以 1：1 充分混合后，加 100μl 到微孔中，并在 37℃暗处孵育 15 分钟。 加 50μl 终止液到微孔板中，在 450nm 处测量吸光度值。
（1） 2-8℃保存，切勿冷冻。 （2） 将不用的酶标板放进原袋中重新密封。 （3） 酶结合物和显色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7. 样品处理
样品处理： 鱼、虾和鸡肉： (1) 鱼虾、鸡肉等去皮、脂肪，用均质器均质样本，称取 2±0.05g 均质物，加入 15ml 离心管; (2) 加入 5ml 乙腈，1ml 0.1M NaOH，充分混合 10min，3000 转/分以上，离心 10min; (3) 取出 4ml 上清液，加入 PB 缓冲液 2ml，混合均匀； (4) 加入二氯甲烷 5ml，充分混匀 10min，3000 转/分以上，离心 10min。去上层，取下层有机相 4ml 到 15ml 离心 管中（清亮无杂质）； (5) 50℃用氮气吹干； (6) 0.5ml PB 缓冲液溶解干燥的残留物，加入正己烷 1ml 混合 2min，3000 转/分以上，离心 5min。 (7) 取下层 50ul 溶液。 样本稀释倍数 1 倍。
10. 结果
计算百分吸光度值： 标准品（或样品）的吸光度平均值 -----------------------------------×100 = %吸光度值 0 标准品的吸光度平均值 以标准品浓度的 10 为底的对数为 X 轴， 百分吸光度值为 Y 轴，绘制标准曲线。将测得的样本的百分吸光度值代 入标准曲线，从标准曲线上读出样本所对应的值，作为 10 的幂，乘以稀释倍数，即为样品中所含恩诺沙星的量。
Fax：0755-27948417
…微孔板酶标仪(450nm) …20μl, 200μl, 1000μl，八道 100 或 200μl 移液枪 （2）试剂 …二氯甲烷 …双蒸水 …正己烷 …乙腈 …0.1M NaOH 溶液：0.4gNaOH 溶于 100ml 双蒸水 …PB缓冲液：0.52gNa2HPO4 , 0.088gNaH2PO4 溶于 100ml 双蒸水
5. 注意事项
（1）终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。 （2）不要使用过了有效日期的恩诺沙星检测试剂盒，不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降 低灵敏度。 （3）0 标准液的A450nm<0.6 时，表示试剂可能变质，请勿使用。 （4）显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。
6. 储存条件