胰蛋白酶(Trypsin)试剂盒说明书

胰酶得配制

查看文章细胞消化胰酶的配制2008-12-10 12:46适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。

低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。

急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。

2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。

EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。

EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。

如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。

如果对贴壁没影响，那么可不离心。

3、EDTA的浓度也是质量体积比。

和胰酶一起溶于PBS。

4、注意，血清可终止胰酶的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。

5、胰酶和EDTA在pH 为8左右的时候最易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，胰酶可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。

注意，不可加过量NaOH，否则过碱，细胞会受不了。

201404210936_美国药典34版胰蛋白酶质量标准Trypsin-USP34

Crystallized Trypsin» Crystallized Trypsin is a proteolytic enzyme crystallized from an extract of the pancreas of healthy bovine or porcine animals, or both. When assayed as directed herein, it contains not less than 2500 USP Trypsin Units in each mg, calculated on the dried basis, and not less than 90.0 percent and not more than 110.0 percent of the labeled potency.[NOTE—Determine the suitability of the substrates and check the adjustment of the spectrophotometer by performing the Assay using USP Crystallized Trypsin Reference Standard. ]Packaging and storage— Preserve in tight containers, and avoid exposure to excessive heat.USP R EFERENCE STANDARDS11—USP Trypsin Crystallized RSSolubility test— An amount, equivalent to 500,000 USP Trypsin Units, is soluble in 10 mL of water and in 10 mL of saline TS.M ICROBIAL ENUMERATION TESTS61 and T ESTS FOR SPECIFIED MICROORGANISMS62— It meets the requirements of the tests for absence of Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, and Salmonella species.L OSS ON DRYING731— Dry it in vacuum at 60 for 4 hours: it loses not more than5.0% of its weight.R ESIDUE ON IGNITION281: not more than 2.5%.Limit of chymotrypsin—0.067 M Phosphate buffer , pH 7.0—Dissolve 4.54 g of monobasic potassium phosphate in water to make 500 mL of solution. Dissolve 4.73 g of anhydrous dibasic sodium phosphate in water to make 500 mL of solution. Mix 38.9 mL of the monobasic potassium phosphate solution with 61.1 mL of dibasic sodium phosphate solution. Adjust dropwise, if necessary, with dibasic sodium phosphate solution to a pH of 7.0.Substrate solution— Dissolve 23.7 mg of N-acetyl-L-tyrosine ethyl ester, suitable for use in determining chymotrypsin, in about 50 mL of 0.067 M Phosphate buffer, pH 7.0 with warming. When cool, dilute with additional pH 7.0 buffer to 100 mL. (Substrate solution may be stored in the frozen state and used after thawing; it is important, however, to freeze immediately after preparation.)Crystallized Trypsin solution— Dissolve a sufficient quantity of Crystallized Trypsin, accurately weighed, in 0.0010 N hydrochloric acid to obtain a solution containing 650 USPTrypsin Units per mL.Procedure— Conduct the test in a suitable spectrophotometer equipped to maintain atemperature of 25 ± 0.1 in the cell compartment. Determine the temperature in the reaction cell before and after the measurement of absorbance to ensure that the temperature does not change by more than 0.5. Pipet 200 µL of 0.0010 N hydrochloric acid and 3.0 mL of the Substrate solution into a 1-cm cell. Place this cell in the spectrophotometer, and adjust the instrument so that the absorbance reads 0.200 at 237 nm. Pipet 200 µL of Crystallized Trypsin solution into another 1-cm cell, add 3.0 mL of the Substrate solution, and place the cell in the spectrophotometer. [NOTE—This order of addition is to be followed. ] At the time the Substrate solution is added, start a stopwatch, and read the absorbance at 30-second intervals for not less than 5 minutes. Repeat the procedure on the same dilution at least once. Absolute absorbance values are of less importance than the constancy of the rate of change of absorbance. If the rate of change does not remain constant for at least 3 minutes, repeat the run, and if necessary, use a lower concentration. The duplicate run at the same dilution should match the first run in rate of absorbance change. Determine the average absorbance change per minute, using only the values within the 3-minute portion of the curve where the rate of absorbance is constant. Plot a curve of absorbance against time. One USP Chymotrypsin Unit is the activity causing a change in absorbance of 0.0075 per minute under the conditions specified in this test. Calculate the number of USP Chymotrypsin Units per mg of Crystallized Trypsin taken by the formula:(A2A1) / (0.0075TW)in which A2 is the absorbance straight-line initial reading, A1is the absorbance straight-line final reading, T is the elapsed time, in minutes, between the initial and final readings, and W is the weight, in mg, of Crystallized Trypsin in the volume of solution used in determining the absorbance. Not more than 50 USP Chymotrypsin Units per 2500 USP Trypsin Units is found, indicating the presence of not more than approximately 5% of chymotrypsin.Assay—0.067 M Phosphate buffer , pH 7.6—Dissolve 4.54 g of monobasic potassium phosphate in water to make 500 mL of solution. Dissolve 4.73 g of anhydrous dibasic sodium phosphate in water to make 500 mL of solution. Mix 13 mL of the monobasic potassium phosphate solution with 87 mL of the anhydrous dibasic sodium phosphate solution.Substrate solution— Dissolve 85.7 mg of N-benzoyl-L-arginine ethyl ester hydrochloride, suitable for use in assaying Crystallized Trypsin (see N OTE), in water to make 100 mL. Dilute 10 mL of this solution with 0.067 M Phosphate buffer, pH 7.6 to 100 mL. Determine the absorbance of this solution, in a 1-cm cell, at 253 nm, in a suitable spectrophotometerequipped with thermospacers to maintain a temperature of 25 ± 0.1, using water as the blank. By the addition of 0.067 M Phosphate buffer , pH 7.6, or of the Substrate solution before dilution, adjust the absorbance so that it measures not less than 0.575 and not more than 0.585. Use this Substrate solution within 2 hours.Crystallized Trypsin solution — Dissolve a sufficient quantity of Crystallized Trypsin,accurately weighed, in 0.0010 N hydrochloric acid to obtain a solution containing about 50 to 60 USP Trypsin Units per mL.Procedure — Pipet 200 µL of 0.0010 N hydrochloric acid and 3.0 mL of the Substratesolution into a 1-cm cell. Place this cell in a spectrophotometer, and adjust the instrument so that the absorbance reads 0.050 at 253 nm. Pipet 200 µL of Crystallized Trypsin solution , containing 10 to 12 USP Trypsin Units, into another 1-cm cell, add 3.0 mL of Substrate solution , and place the cell in the spectrophotometer. At the time the Substrate solution is added, start a stopwatch, and read the absorbance at 30-second intervals for 5 minutes. Repeat the procedure on the same dilution at least once. Plot a curve ofabsorbance against time, and use only those values that form a straight line to determine the activity of the Crystallized Trypsin. If the rate of change does not remain constant for at least 3 minutes, repeat the run, and if necessary, use a lower concentration. One USP Trypsin Unit is the activity causing a change in absorbance of 0.003 per minute under the conditions specified in this Assay. Calculate the number of USP Trypsin Units per mg taken by the formula:(A 1 A 2) / (0.003TW )in which A 1 is the absorbance straight-line final reading, A 2 is the absorbance straight-line initial reading, T is the elapsed time, in minutes, between the initial and final readings, and W is the weight, in mg, of Crystallized Trypsin in the volume of solution used indetermining the absorbances.Auxiliary Information — Please check for your question in the FAQs before contactingUSP. Topic/Question Contact Expert Committee Monograph Fouad Atouf, Ph.D.Senior Scientific Liaison1-301-816-8365(BIO12010) Monographs - Biologics and Biotechnology 1Reference Standards RS Technical Services1-301-816-8129rstech@61Radhakrishna STirumalai, Ph.D.Principal Scientific Liaison1-301-816-8339(GCM2010) General Chapters - Microbiology 62Radhakrishna STirumalai, Ph.D. (GCM2010) General Chapters -MicrobiologyPrincipal Scientific Liaison1-301-816-8339USP34–NF29 Page 4535Pharmacopeial Forum: Volume No. 32(3) Page 779。

胰蛋白酶

基本信息
物化性质
胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取，纯化获得的结晶，再制成的冻干制剂。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有机溶剂。在pH1.8时，短时间煮沸几乎不失活；在碱溶液中加热则变性沉淀，Ca2+有保护和激活作用，胰蛋白酶的等电点为pH10.1。
牛胰蛋白酶原有229个氨基酸组成，含6对二硫键，其氨基酸排列顺序和晶体结构已被阐明。在肠激酶活自身催化下，酶原的N末端赖氨酸与异亮氨酸残基之间的肽键被水解，释放出来缬-天-天-天-天-赖6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量23800 ，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨
胰蛋白酶能使痰、血凝块溶化变稀，易于引流排痰，加速创面愈合净化，促进肉芽组织增生，而不损伤正常组织，临床上有消炎消肿功能。
其他
细胞培养
胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在 pH为 8.0、温度为 37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因 Ca2+、 Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含 Ca2+、 Mg2+的 BSS，如： D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
1.用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、娄管等所产生的局部水肿、血肿、脓肿。 2.用于呼吸道疾患溶解黏痰和脓性痰。 3.用于治疗毒蛇咬伤，曾试用于竹叶青、银环蛇、眼镜蛇、蝮蛇等毒蛇咬伤的各型病人800余例，均获治愈。
1.肝肾出血、出血倾向及结核性脓肿患者禁用。 2.不可用于急性炎症及出血空腔中。

胰蛋白酶-EDTA溶液

胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)产品简介：胰蛋白酶（Trypsin）是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。

胰蛋白酶的特点还在于已经活化的胰蛋白酶，能够继续活化更多胰蛋白酶原，这种过程即自动催化。

胰蛋白酶在小肠工作，它会将蛋白质水解为肽，进而分解为氨基酸，其最适温度约为37℃。

Leagene的 Trypsin-EDTA solution，含0.25%胰酶、0.02%EDTA。

该溶液经过过滤除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。

该产品通常室温消化1min 左右就可以消化下大多数贴壁细胞。

主要成分：主要由0.25%胰酶、0.02%EDTA等组成，不含酚红，过滤除菌。

自备材料：1、微量移液器2、PBS、Hanks液或无血清培养液3、显微镜4、离心机操作步骤(仅供参考)：1、贴壁细胞的消化①吸除培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置0.5～2min，不同的细胞消化时间有所不同。

③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。

此时吸除胰酶细胞消化液。

加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。

④如果发现消化不足，则加入Trypsin-EDTA solution重新消化。

⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。

1000～2000g离心1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

注意事项：1、尽量减少反复冻融的次数，以免失效。

胰蛋白酶 Trypsin

胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种，EC3.4.21.4。

在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。

在胰脏是作为酶的前体胰蛋白酶原而被合成的。

作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。

它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。

是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。

牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量为23300，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。

除存在于脊椎动物外，还存在于蚕、海盘车、蝲姑、放线菌等范围广泛的生物体中。

另外与高等动物的血液凝固和炎症等有关的凝血酶、纤溶酶、舒血管素等蛋白酶在化学结构和特异性等方面与胰蛋白酶具有密切的关系，可以认为这些酶是从共同的祖先酶在进化过程中分化而来的。

胰糜蛋白酶与弹性蛋白酶在结构和催化机制方面也具有密切关系，但其特异性则完全不同。

胰蛋白酶系自牛、羊或猪胰中提取的一种蛋白水解酶。

中国药品标准规定按干燥品计算，每1mg 的效价不得少于2500单位。

由牛、羊、猪胰脏提取而得的一种肽链内切酶，只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽键。

白色或米黄色结晶性粉末。

溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。

分子量24 000，pI 10.5，最适pH值7. 8～8.5左右。

pH值2～3是稳定的。

pH值5以上易自溶失活。

pH>9.0不可逆失活。

Ca2+对酶活性有稳定作用；重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制剂对其活性有强烈抑制。

临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。

作用与用途本品为蛋白质水解酶，能选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，能消化溶解变性蛋质，对未变性的蛋白质无作用，因此，能使脓、痰液、血凝块等分解、变稀，易于引流排除，加速创面净化，促进肉芽组织新生，此外还有抗炎症作用。

胰蛋白酶比活力测定的实验操作

胰蛋白酶比活力测定的实验操作胰蛋白酶（trypsin）是一种重要的消化酶，用于蛋白质的降解。

测定胰蛋白酶的比活力可以评估其酶活性及纯度。

下面是测定胰蛋白酶比活力的实验操作步骤。

实验所需材料：1.胰酶溶液2. Brain Heart Infusion (BHI)培养基3. 丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-色氨酸对(L-Tyr-L-Phe)4.0.1M氢氧化钠（NaOH）溶液5.0.1M硫酸（H2SO4）溶液实验步骤：1.准备酶样品：取适量的胰酶溶液，可以是商业制备的纯胰蛋白酶或者胰腺提取物。

2. 酶样品稀释：将胰酶溶液与BHI培养基按照一定比例混合，使得最终浓度在0.5-1.2mg/mL之间。

3.加入底物：向每个试管中加入20μL的丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-色氨酸对底物。

4.孵育反应：将试管置于37℃恒温培养箱中，在设定的时间内进行酶催化反应。

5.终止反应：用加入2NNaOH溶液终止酶反应，使底物水解停止。

6.酶解产物的提取：将反应液离心，取上清液转移到新的离心管中。

实验测量方法：1. 分光光度计法：利用胰酶催化底物水解产生的对分光光度计可见吸收的产物进行测定。

用1cm光程的比色皿，将底物水解产物的吸光度读数记录下来。

2. pH差比色法：用pH差比色法测量胰酶反应液中产生的酪氨酸分解产物。

黄色小麦胚芽酪氨酸（Tyr）的醛缩反应，其产物具有红色或紫色，在526nm处吸收峰。

通过比较不同样品的吸收度可以得出胰酶比活力。

数据处理：1.分光光度计法：根据底物水解产物的吸光度，绘制标准吸光度-底物浓度曲线，利用该曲线确定底物浓度，进一步计算胰酶的比活力。

2.pH差比色法：计算样品吸收值，将其与标准吸光度曲线相对应的底物浓度进行比较，计算胰酶的比活力。

注意事项：1.操作要严格遵守无菌技术，以避免细菌或其他污染物对实验结果的干扰。

2.实验过程中可以选择不同的底物和测量方法，以适应实验目的和条件。

3.实验操作需谨慎，避免接触眼睛和口腔，注意个人安全。

无酶细胞消化液(含酚红)

无酶细胞消化液(含酚红)简介：胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。

胰蛋白酶经常用于动物组织的培养细胞消化或者一些组织的消化，但对细胞有的潜在损害，尤其是在37℃环境下危害较大。

Leagene 无酶细胞消化液(含酚红)(Non-enzy Cell Detach Solution)其特点是：1、作用温和；2、对细胞的损伤和破坏极小，不影响细胞生物学特性，是肿瘤细胞的极好细胞脱壁方法；3、可以在血清存在的情况下进行消化，该消化液适用于消化肿瘤、脑、肝、肾、肺组织等，尤其适用于上皮组织。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、贴壁细胞的消化①吸除培养液，用无菌PBS、培养液洗涤细胞1次。

②加入少量Non-enzy Cell Detach Solution(含酚红)，略盖过细胞即可(一般按细胞的有效体积的10倍添加)。

③室温放置，如置于37℃脱壁反应会加速，直到细胞完全脱壁，不同的细胞消化时间有所不同。

④加入细胞培养液或5倍体积PBS 缓冲液终止反应。

如果发现消化不足，则加入Non-enzy Cell Detach Solution(含酚红)重新消化。

⑤离心，沉淀细胞，弃上清，尽量去除Non-enzy Cell Detach Solution(含酚红)，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2、组织的消化①PBS、培养液清洗组织1次，用无菌的刮勺或茶匙将剪碎的组织碎片转移至合适容器。

②按组织有效体积的5～10倍，加入Non-enzy Cell Detach Solution(含酚红)。

③置于37℃作用，无需振荡，不同的细胞消化时间有所不同。

对于较难分解的肿瘤细胞，可作用5天或更长时间，但应重新用消化液悬浮。

④吹打组织碎片数次，释放松散的细胞，轻轻晃动培养瓶或皿。

⑤离心，沉淀细胞，弃上清，尽量去除Non-enzy Cell Detach Solution(含酚红)，加入含编号名称CC0123StorageNon-enzy Cell Detach Solution(含酚红)100ml -20℃使用说明书1份血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

roche cooktail蛋白酶成分

roche cooktail蛋白酶成分罗氏鸡尾酒（Roche鸡尾酒）是一种用于生物科学研究的常用试剂盒，其中包含多种蛋白酶。

蛋白酶是一类能够加速蛋白质降解的酶类分子，它们具有多种不同的功能和特性。

以下将介绍Roche鸡尾酒中常见的蛋白酶成分。

1.胰蛋白酶（Trypsin）：胰蛋白酶是一种消化酶，由胰腺分泌，用于在消化过程中分解蛋白质。

在Roche鸡尾酒中，胰蛋白酶被用于体外细胞培养中，用于细胞的离析和传代。

它能够通过剪切蛋白质的肽键来降解蛋白质分子。

2.胰蛋白酶抑制剂（Trypsin Inhibitor）：胰蛋白酶抑制剂是一种能够抑制胰蛋白酶活性的分子。

在Roche鸡尾酒中，胰蛋白酶抑制剂被用于停止胰蛋白酶的活性，从而控制蛋白质降解的过程。

3.蛋白激酶抑制剂（Protein Kinase Inhibitors）：蛋白激酶抑制剂是一类能够抑制蛋白激酶活性的分子。

在Roche鸡尾酒中，蛋白激酶抑制剂被用于研究细胞信号传导的过程。

它们能够干扰蛋白激酶的活性，从而影响细胞内信号传递通路。

4.磷酸酶抑制剂（Phosphatase Inhibitors）：磷酸酶是一类能够去磷酸化蛋白质的酶。

在Roche鸡尾酒中，磷酸酶抑制剂用于抑制磷酸酶活性，从而保持蛋白质磷酸化状态。

5.蛋白酶抑制剂混合物（Protease Inhibitor Cocktail）：这是Roche鸡尾酒中的一个重要成分，它由多种蛋白酶抑制剂组成，能够抑制多种蛋白酶的活性。

蛋白酶抑制剂混合物能够保护蛋白质免受蛋白酶降解的影响，从而保持蛋白质的稳定性。

Roche鸡尾酒中的这些蛋白酶成分在生物科学研究中发挥着重要作用。

它们能够帮助研究人员保护蛋白质的完整性，提高实验的可靠性和准确性。

另外，这些蛋白酶成分还能够用于调节细胞内的信号传导过程，从而揭示细胞生物学的各个方面。

需要注意的是，Roche鸡尾酒中的蛋白酶成分不能用于食品加工或药品制造。

它们仅限于科学研究中的使用，需要严格遵守实验室安全操作规程。

胰蛋白酶的提取

胰蛋白酶的提取原理和方法步骤2010-03-29 14:21:31 来源：易生物实验浏览次数：404 网友评论0 条在动物胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋白酶性质相似的蛋白水解酶：胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。

在胰蛋白酶提取过程中，三者彼此很难分开。

需采用合适的方法进一步分离纯化。

关键词：胰蛋白酶trypsin［原理］在动物胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋白酶性质相似的蛋白水解酶：胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。

在胰蛋白酶提取过程中，三者彼此很难分开。

需采用合适的方法进一步分离纯化。

从动物胰脏中提取胰蛋白酶，一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋白酶原提取出来，然后根据等电点沉淀的原理将提取液的pH值调至酸性（pH3.0左右），使大量的酸性蛋白沉淀出来。

经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀。

沉淀物经水溶解并调至pH8.0，用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活，同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原也被激活，三种酶原相互作用过程如下：也可采用从胰脏中提取出胰蛋白酶原，利用合适的提取溶液的pH值促使胰蛋白酶原部分自溶，并通过溶液中Ca2+的环境，使胰蛋白酶原被开始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活，转变为具有活性的胰蛋白酶（胰凝乳蛋白酶原及弹性蛋白酶原亦同时被胰蛋白酶激活成有活性的酶）。

激活后的酶溶液再进一步分离纯化。

［试剂和器材］1、试剂（1）pH2.5～3.0乙酸化的水溶液（2）10%（体积分数）乙酸（3）2mol/L硫酸（4）固体硫酸铵（5）无水CaCl2（6）结晶胰蛋白酶（7）25%乙醇溶液(含0.015mol/ＬHCl 、0.05mol/ＬCaCl2)（8）95%（体积分数）乙醇（9）5mol/ＬNaOH（10）丙酮2、器材（1）胰脏（2）组织捣碎机（3）离心机（4）磁力搅拌器（5）透析袋、20目筛网、纱布、水浴锅（6）烧杯、量筒、刻度吸管、试管、玻璃漏斗（7）布氏漏斗、抽滤瓶、温度计、滴管、玻璃搅棒、纱布、pH试纸等［方法和步骤］方法一1、胰蛋白酶原的提取取新鲜胰脏约150g，剥去结缔组织和脂肪，取净重100g，切成碎块，在组织捣碎机中捣碎，并加入2倍体积预冷的pH2.5～3.0 乙酸化水溶液，制成匀浆。

胰蛋白酶的提取

胰蛋白酶的提取原理和方法步骤2010-03-29 14:21:31 来源：易生物实验浏览次数：404 网友评论0 条在动物胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋白酶性质相似的蛋白水解酶：胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。

在胰蛋白酶提取过程中，三者彼此很难分开。

需采用合适的方法进一步分离纯化。

关键词：胰蛋白酶trypsin［原理］在动物胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋白酶性质相似的蛋白水解酶：胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。

在胰蛋白酶提取过程中，三者彼此很难分开。

需采用合适的方法进一步分离纯化。

从动物胰脏中提取胰蛋白酶，一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋白酶原提取出来，然后根据等电点沉淀的原理将提取液的pH值调至酸性（pH3.0左右），使大量的酸性蛋白沉淀出来。

经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀。

沉淀物经水溶解并调至pH8.0，用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活，同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原也被激活，三种酶原相互作用过程如下：也可采用从胰脏中提取出胰蛋白酶原，利用合适的提取溶液的pH值促使胰蛋白酶原部分自溶，并通过溶液中Ca2+的环境，使胰蛋白酶原被开始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活，转变为具有活性的胰蛋白酶（胰凝乳蛋白酶原及弹性蛋白酶原亦同时被胰蛋白酶激活成有活性的酶）。

激活后的酶溶液再进一步分离纯化。

［试剂和器材］1、试剂（1）pH2.5～3.0乙酸化的水溶液（2）10%（体积分数）乙酸（3）2mol/L硫酸（4）固体硫酸铵（5）无水CaCl2（6）结晶胰蛋白酶（7）25%乙醇溶液(含0.015mol/ＬHCl 、0.05mol/ＬCaCl2)（8）95%（体积分数）乙醇（9）5mol/ＬNaOH（10）丙酮2、器材（1）胰脏（2）组织捣碎机（3）离心机（4）磁力搅拌器（5）透析袋、20目筛网、纱布、水浴锅（6）烧杯、量筒、刻度吸管、试管、玻璃漏斗（7）布氏漏斗、抽滤瓶、温度计、滴管、玻璃搅棒、纱布、pH试纸等［方法和步骤］方法一1、胰蛋白酶原的提取取新鲜胰脏约150g，剥去结缔组织和脂肪，取净重100g，切成碎块，在组织捣碎机中捣碎，并加入2倍体积预冷的pH2.5～3.0 乙酸化水溶液，制成匀浆。

消化胰酶配制方法

适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。

低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2+，增加消化效力好帖，顶一个！！！不过我们用hanks配制胰酶好呀，对我帮组好大呵呵,亲人呀呵呵,亲人呀Thank you!谢谢分享！谢谢。

呵呵应该是Ｄ-Ｈａｎｋｓ吧．excellent好是好，不过你的分子式写错了，PO4HNa2应为Na2HPO4，PO4H2K应为KH2PO4。

这种错误好像不该出吧。

我用的是EBss配的.呵呵，经典提醒。

我的一位大学老师，有机化学，我称之为董，呵呵。

前几天，和前辈聊，他说：你学了那么多学科，还接触过很多实验，应该在科研上很有前途。

我说：等我自己积累到一定程度，就能把昨天的东西也发挥上。

董，你的提醒，促使我加强这个意识！！！好！提醒一点，一定要分装成小瓶！2~3次即用完！不然胰酶失活，你会很麻烦！胰酶是不能用hanks的,应用D-hanks,不能有钙镁离子我们都用PBS配置，然后加EDTA。

方法如下：PBS100ml+250mg胰酶+0.02EDTA消化作用很快，加EDTA对细胞毒性较小。

GIBCO胰蛋白酶替代物说明书

TrypLE™DescriptionTrypLE™ is an animal origin-free recombinant enzyme alternative to porcine or bovine trypsin for the dissociation of attachment-dependent cell lines from plasticware. TrypLE™ cleaves peptide bonds on the C-terminal side of lysine and arginine but with greater specificity than native trypsin preparations due to the superior purity of TrypLE™. TrypLE™ has demonstrated the ability to dissociate cells cultured both in serum-free and serum supplemented systems. TrypLE™ products are formulated in DPBS/1 mM EDTA, are room-temperature stable, and are convenient to use.Product Catalog no. Amount Storage Shelf life*TrypLE™ Express (1X), no phenol red 12604-01312604-02112604-03912604-054100 mL500 mL20 × 100 mL5 L15°C to 30°C; Protect from light 24 monthsTrypLE™ Express (1X), phenol red 12605-01012605-02812605-03612605-093100 mL500 mL20 × 100 mL5 L15°C to 30°C; Protect from light 24 monthsTrypLE™ Select (1X), no phenol red 12563-01112563-029 100 mL500 mL15°C to 30°C; Protect from light 24 monthsTrypLE™ Select (10X), no phenol red A12177-01A12177-02A12177-03100 mL500 mL20 × 100 mL15°C to 30°C; Protect from light 24 months*Shelf life duration is determined from Date of Manufacture.Product useTrypLE™ Express:For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures. TrypLE™ Select:Caution: For manufacturing, processing, or repacking. Important information•TrypLE™ Select is formulated on dedicated animal origin-free equipment at our cGMP compliant facility.•No inactivation required; dilution alone inactivates TrypLE™avoiding the need for trypsin inhibitors.•TrypLE™ is also stable when stored in PET bottles at 2°C to 8°C and –20°C to –5°C protected from light up to 24 months. •TrypLE™ packaged in the 5 L universal bag is also stable when stored at 2°C to 8°C protected from light up to 24 months. Safety informationRead the Safety Data Sheets (SDSs) and follow the handling instructions. Wear appropriate protective eyewear, clothing, and gloves.UseTrypLE™ is designed as a direct substitute for trypsin in existing protocols.1.Pre-warm TrypLE™ and complete growth medium to 37°Cbefore use. Minimize dwell time.Note: TrypLE™ may be used at ambient room temperaturefor many types of cells.2.Aspirate spent medium and discard.3.Wash cell monolayer with 5 mL of Dulbecco’s PhosphateBuffered Saline (DPBS) without calcium and magnesium.Aspirate and discard. 4.Add an appropriate volume (e.g., 5 mL in a 75 cm2 flask) ofTrypLE™ to flask. Ensure complete coverage of cellmonolayer with TrypLE™.5.Incubate at 37°C until cells have detached. Observe cellmonolayer using an inverted microscope to ensure complete cell detachment from the surface of the flask. Gently tapflask to dislodge cells if necessary.6.Add 5–10 mL of pre-warmed complete medium to flask. Tiltflask in all directions to thoroughly rinse flask. Transfer cell suspension to a 15-mL conical tube.7.Centrifuge at 100 × g for 5–10 minutes.8.Discard supernatant and resuspend cell pellet with 2–5 mLof pre-warmed complete medium.9.Determine viable cell density and percent viability using aCountess® Automated Cell Counter (similar automated ormanual methods may be used).10.Seed, incubate and subculture according to normal protocolsdepending on your cell type.Note: Use of soybean trypsin inhibitor is not recommended. TrypLE™ Select 10X dilutionTrypLE™ 10X stock solution is designed for the dissociation of attachment-dependent cell lines with strong adhesive properties. TrypLE™ 10X can be used at the 10X concentration or diluted as desired for the dissociation of general cell lines from plasticware. Dilute TrypLE™ 10X as follows:1.Prepare a 100 mM EDTA pH 8.0 (100X) solution. Filter(0.2-μm pore size) to sterilize.2.Prepare DPBS/1 mM EDTA buffer by adding 1 mL of 100XEDTA Solution (from Step 1) to 99 mL of DPBS withoutcalcium and magnesium.3.Dilute TrypLE™ Select 10X to desired concentration inDPBS/1 mM EDTA buffer.Publication Number MAN0007321 Rev. 1.00Related productsProduct Catalog no. Dulbecco's Phosphate Buffered Saline, withoutcalcium and magnesium14190 Distilled Water 15230 Trypsin-EDTA, 1X 25300 UltraPure™ 0.5 M EDTA, pH8.0 15575 TrypLE™ Select CTS™A12859 Explanation of symbols and warningsThe symbols present on the product label are explained below:Use By: ManufacturerBatch code Keep away from lightTemperature LimitationCatalognumberConsult instructionsfor useCaution, consultaccompanying documentsSterilized using asepticprocessing techniquesLimited product warrantyLife Technologies Corporation and/or its affiliate(s) warranttheir products as set forth in the Life Technologies’ GeneralTerms and Conditions of Sale found on Life Technologies’website at /termsandconditions. Ifyou have any questions, please contact Life Technologies at/support.Important licensing informationThese products may be covered by one or more Limited UseLabel Licenses. By use of these products, you accept the termsand conditions of all applicable Limited Use Label Licenses.For additional technical information such as Safety Data Sheets (SDS), Certificates of Analysis, visit /support For further assistance, email techsupport@©2014 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified.DISCLAIMER - LIFE TECHNOLOGIES CORPORATION AND/OR ITS AFFILIATE(S) DISCLAIM ALL WARRANTIES WITH RESPECT TO THIS DOCUMENT, EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDINGBUT NOT LIMITED TO THOSE OF MERCHANTABILITY, FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, OR NON-INFRINGEMENT. TO THE EXTENT ALLOWED BY LAW, IN NO EVENT SHALLLIFE TECHNOLOGIES AND/OR ITS AFFILIATE(S) BE LIABLE, WHETHER IN CONTRACT, TORT, WARRANTY, OR UNDER ANY STATUTE OR ON ANY OTHER BASIS FOR SPECIAL, INCIDENTAL,INDIRECT, PUNITIVE, MULTIPLE OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THE USE THEREOF.。

牛胰蛋白酶( Trypsin Bovine)

牛胰蛋白酶（Trypsin Bovine）-Qwbio
产品名称：Trypsin Bovine（启维益成有售）
货号：PRO-313
规格：1 mg，10 mg，100 mg
物理形态：灭菌过滤的冻干粉末
纯度：经RP-HPLC和SDS-PAGE测定，其纯度高于90%。

来源：玉米
组分：无任何添加剂，冷冻干燥得到
溶解性：推荐牛胰蛋白酶溶于18 MΩ-cm的灭菌水中，浓度不低于100 μg/ml，使用之前稀释成对应的工作浓度。

稳定性：牛胰蛋白酶在室温下可以稳定存放1周，长期保存请置于-20°C，同时推荐添加载体蛋白（0.1% HSA或BSA），避免反复冻融。

生物活性：3650 Units/mg
产品介绍
胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，其作用是水解蛋白质，在大量脊椎动物的消化系统中都有发现。

在胰脏内，胰蛋白酶前体胰蛋白酶原被合成，由胰腺分泌，而后在小肠内分解成活化胰蛋白酶。

胰蛋白酶能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断，但是当这两种氨基酸与脯氨酸相邻时则不能被切断。

胰蛋白酶被分泌到十二指肠中，将多肽水解成氨基酸，此过程对于食品中蛋白质的吸收非常必要，因为即使多肽相对蛋白质已经很小了，但是回肠粘膜要将其吸收，其尺寸仍然过大。

胰蛋白酶最佳工作pH为8，温度为37 °C。

在囊胞性纤维症中，运输胰蛋白酶和其他源于胰腺的消化酶的系统缺乏。

胰蛋白酶在胰腺中的含量高，易纯化，其在多个生物技术领域得到了广泛应用。

描述
重组牛胰蛋白酶既非来源于动物，也不是来源于人。

抑制剂对重组牛胰蛋白酶和天然牛胰蛋白酶的抑制作用相同（启维益成有售）。

trypsin 酶切原理

trypsin 酶切原理简介Trypsin（胰蛋白酶）是一种常用的酶切试剂，广泛应用于生物学研究中。

它能够特异性地识别并切割蛋白质分子中的肽键，从而最终得到多个片段。

本文将探讨trypsin酶切原理及其应用。

1. Trypsin酶的特性Trypsin酶是属于胃蛋白酶家族的一员，由胰腺分泌并在小肠中发挥作用。

它具有如下特性： - 酶切特异性：trypsin酶主要识别并切割肽键的C端，特别是在精氨酸（Arg）和赖氨酸（Lys）的 C 端。

- 促进肽链切割：trypsin酶的作用是将蛋白质分子切割成较小的多肽片段或氨基酸。

2. trypsin酶切机制trypsin酶切分为两个主要步骤：识别位点和切割。

2.1 识别位点trypsin识别位点主要是肽链中特定的氨基酸序列，即精氨酸和赖氨酸的C端。

它能够辨别这些氨基酸的侧链并与之相互作用，从而发挥酶切功能。

2.2 切割在trypsin酶与特定位点发生相互作用后，酶则通过水解反应将目标位点C端的酰基酶切下来。

这一过程被称为酰化，并形成一个较小的肽段。

trypsin酶的酰化作用也会导致该酶的构象发生改变。

3. trypsin酶切的应用Trypsin酶切在生物学研究中具有广泛的应用。

3.1 蛋白质鉴定与定量通过trypsin酶切，可以将复杂的蛋白质混合物切割成多个片段，从而减少蛋白质的复杂性。

这些片段可以被质谱仪器较为精确地测定和鉴定，进一步用于蛋白质组学研究，如蛋白质鉴定和定量。

3.2 蛋白质结构和功能研究在蛋白质的结构和功能研究中，trypsin酶切被广泛应用。

通过对目标蛋白质的特定位点进行酶切，可以获得不同长度的肽段。

这些肽段可以用于研究蛋白质的结构域、序列、功能以及相互作用等方面。

3.3 蛋白质修饰研究蛋白质修饰研究是生物学研究中的一个重要方向，而trypsin酶切在这方面也发挥着重要作用。

蛋白质修饰可能会导致肽链上的特定氨基酸发生变化，通过使用不同的消化酶如trypsin，可以把具有修饰的肽段与未修饰的肽段区分开来，从而进一步分析和研究蛋白质修饰。

常用的质谱蛋白组学试剂盒

常用的质谱蛋白组学试剂盒
质谱蛋白组学试剂盒是用于质谱技术下的蛋白质研究和分析的实验试剂盒。

下面是一些常用的质谱蛋白组学试剂盒：
1. 蛋白质消化试剂盒：用于蛋白质消化为肽段，常见的有胰蛋白酶（Trypsin）和谷氨肽酶（Glu-C）等消化酶。

2. 蛋白质标记和定量试剂盒：用于对蛋白质进行标记和定量，例如利用同位素标记（如TMT或iTRAQ）对不同样品进行比较分析。

3. 蛋白质富集试剂盒：用于富集特定类型的蛋白质或特定修饰的蛋白质，例如磷酸化蛋白质富集试剂盒、甲基化蛋白质富集试剂盒等。

4. 肽段分馏试剂盒：用于分离和富集不同长度的肽段，常见的有强阳离子交换（SCX）柱和反相（C18）柱等。

5. 蛋白质定性和定量分析试剂盒：用于蛋白质的定性鉴定和定量分析，例如蛋白质组学数据库搜索软件、差异表达蛋白鉴定和定量分析工具等。

这些试剂盒可以在质谱蛋白组学的研究中起到辅助分析和提高效率的作用。

具体选择使用哪种试剂盒，应根据研究需求和实验设计的要求来进行评估和选择。

胰蛋白酶溶液(0.25%)

胰蛋白酶溶液(0.25%)简介：胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。

Leagene Trypsin solution(0.25%)主要由0.25%胰酶组成，不含EDTA ，经过滤除菌。

本试剂可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化，通常室温下1min 左右就可以消化下大多数贴壁细胞。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、贴壁细胞的消化①吸除培养液，以去除残余的血清。

②加入少量Leagene Trypsin solution ，室温放置0.5～2min 。

③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。

④如果发现消化不足，则加入Trypsin solution 重新消化。

⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。

量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

注意事项：1、尽量减少反复冻融的次数，以免失效。

2、在Trypsin solution 过程中，要特别注意避免消化液被细菌污染。

3、 Trypsin solution 消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12个月有效。

编号名称 CC0133 Storage Trypsin solution(0.25%) 100ml -20℃ 使用说明书 1份相关：编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CA0075 青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗)DC0032 Masson三色染色液DH0006 苏木素伊红(HE)染色液NH0043 SSC缓冲液(20×,pH7.0)TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

胰蛋白酶（Trypsin）试剂盒说明书（分光光度法）

胰蛋⽩酶（Trypsin）试剂盒说明书（分光光度法）正式测定前务必取2-3个预期差异较⼤的样本做预测定测定意义：胰蛋⽩酶选择性⽔解变性蛋⽩质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是⼀种重要的消化酶。

此外，胰蛋⽩酶还⼴泛应⽤于脓胸、⾎胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产⽣的局部⽔肿、⾎肿及脓肿等的辅助治疗。

测定原理：胰蛋⽩酶催化⽔解TAME的酯键，释放出的游离羧基与反应体系中的氢氧化钠发⽣中和反应，导致溶液的pH值降低，以**红为指⽰剂，测定溶液在555nm处吸收值的变化，可以快速测得胰蛋⽩酶活性数据。

胰蛋⽩酶在⼀定范围内与555nm处吸收值的降低呈良好的线性关系。

组成：产品名称PI007-50T/48S Storage提取液：液体60ml4试剂⼀：液体10ml4试剂⼆：液体10ml4避光试剂三：液体4ml4说明书⼀份⾃备仪器和⽤品：紫外可见分光光度计、1ml玻璃⽐⾊⽫、台式离⼼机、⽔浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏⽔。

粗酶液提取：提取：粗酶液1、组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的⽐例（建议称取约0.1g组织，加⼊1ml提取液）冰浴匀浆，10000g，4离⼼10min，取上清，即粗酶液。

测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长⾄555nm，蒸馏⽔调零。

⼯作液的配制：临⽤前根据⽤量按照试剂⼀（V）：试剂⼆（V）：蒸馏⽔（V）：试剂三（V）=1ml：1ml：5.4ml：0.4ml的⽐例充（注意：现⽤现配，⽤多少配多少，在空瓶中配制，试剂盒中带有4个空瓶）分混合。

（注意：现⽤现配，⽤多少配多少，在空瓶中配制，试剂盒中带有3. 吸取25µl样本，加⼊975µl⼯作液，混匀后⽴即测定，记录555nm下1min时的吸光值A1和2min时的吸光值A2。

计算A=A1-A2注意：如果A⼩于0.005，可将反应时间延长到5min。

如果A⼤于0.5，体系迅速变⾊，可将样本⽤提取液稀释后测定（建议稀释10倍），计算公式中乘以相应稀释倍数。

gibco胰蛋白酶edta的解离条件

gibco胰蛋白酶edta的解离条件Gibco胰蛋白酶EDTA的解离条件胰蛋白酶（trypsin）是一种常用的消化酶，用于细胞培养中的细胞解离和传代。

Gibco胰蛋白酶EDTA是一种经典的胰蛋白酶，其解离条件对于细胞的解离和分散至关重要。

解离条件一：温度Gibco胰蛋白酶EDTA的解离条件中，温度是一个重要的因素。

一般来说，37摄氏度是常用的细胞解离温度，因为在这个温度下，细胞解离的效果最佳。

过高或过低的温度都可能影响细胞解离的效果，因此，在使用Gibco胰蛋白酶EDTA时，应注意将温度控制在37摄氏度。

解离条件二：酶浓度Gibco胰蛋白酶EDTA的解离条件中，酶浓度也是一个重要的因素。

一般来说，不同类型的细胞对酶浓度的敏感性是不同的。

对于一些较为敏感的细胞株，较低的酶浓度就可以达到良好的解离效果；而对于一些较为顽固的细胞株，可能需要较高的酶浓度才能实现解离。

因此，在使用Gibco胰蛋白酶EDTA时，需要根据不同的细胞株来确定合适的酶浓度。

解离条件三：作用时间Gibco胰蛋白酶EDTA的解离条件中，作用时间也是一个重要的因素。

一般来说，细胞解离的时间需要控制在适当的范围内，过短的时间可能导致细胞解离不完全，而过长的时间则可能导致细胞过度解离，影响细胞的活力和生长。

因此，在使用Gibco胰蛋白酶EDTA时，应根据实际情况控制解离的时间，以达到最佳的细胞解离效果。

解离条件四：缓冲液Gibco胰蛋白酶EDTA的解离条件中，缓冲液也是一个重要的因素。

一般来说，使用含有乙酸钠或磷酸盐的缓冲液可以提供适当的pH 值和离子强度，有利于细胞的解离。

此外，缓冲液还可以稳定酶的活性，防止其失活。

因此，在使用Gibco胰蛋白酶EDTA时，应选择适当的缓冲液来进行细胞解离。

Gibco胰蛋白酶EDTA的解离条件是一个综合因素的考虑。

在使用该酶进行细胞解离时，需要注意合适的温度、酶浓度、作用时间和缓冲液选择。

通过合理的调节这些解离条件，可以获得较好的细胞解离效果，为细胞的后续培养和实验提供良好的条件。

犬胰蛋白酶(trypsin)酶联免疫分析

犬胰蛋白酶(trypsin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12804c检测范围：1.56 ng/ml - 100 ng/ml最低检测限：0.39 ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的犬胰蛋白酶，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定犬血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中胰蛋白酶含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗胰蛋白酶抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗胰蛋白酶抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的胰蛋白酶呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。

3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

0.25%胰酶-EDTA的配制

0.25%胰酶-EDTA的配制细胞消化胰酶的配制对一般细胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2称胰酶0.25g3加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4调PH7.45仍在冰浴中6过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。

低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2，增加消化效力问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。

急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100mlPBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。

2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。

EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。

EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。

如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。

如果对贴壁没影响，那么可不离心。

3、EDTA的浓度也是质量体积比。

和胰酶一起溶于PBS。

4、注意，血清可终止胰酶的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。

5、胰酶和EDTA在pH为8左右的时候最易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，胰酶可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。

注意，不可加过量NaOH，否则过碱，细胞会受不了。

6、胰酶EDTA相对比较难溶，可用磁力搅拌器，或放入4度冰箱过夜，待溶解后过滤除菌。