病毒基因组DNA RNA快速提取试剂盒II操作方法及步骤说明书
甘棠飞华生物科技 病毒基因组 DNA 快速提取试剂 说明书
![甘棠飞华生物科技 病毒基因组 DNA 快速提取试剂 说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/1291c659842458fb770bf78a6529647d2728340d.png)
病毒基因组DNA快速提取试剂(目录号:DL100、DL101)【产品说明】z本品不含酚、氯仿,能快速裂解病毒或细胞包膜,适用于从血凊或血浆中提取病毒DNA。
z整个提取过程在室温操作,需25分钟完成。
z应用本品提取的DNA,不经任何处理可直接用于PCR实验。
【规格】DL100:50ml;DL101:100ml。
【贮存条件及有效期】15-30℃保存,有效期3年。
【需自备试剂】75%乙醇和异丙醇【操作方法】1.取血清50μl,加入本试剂100μl,异丙醇100μl立即混匀,室温放置10分钟。
2.10000rpm离心10分钟,吸去液体,在沉淀物原管内加入75%冷乙醇100μl。
3.8000rpm离心2分钟,吸去管内液体,沉淀物中即含DNA。
【操作说明及注意事项】1.本实验可使用0.5毫升超薄管提取DNA,直接进行PCR反应。
2.最后一次离心,可用真空泵吸去液体及管壁水珠,如果用加样器吸去液体,常吸不净管边水珠,可在50℃以下烘去管壁水珠,再进行PCR试验。
3.本试剂在0-4℃时,可出现结晶,室温放置或稍加温可溶解,不影响实验效果。
4.将本品加入被检血清后,应摇匀。
5.本品对皮肤及粘膜稍有损害,使用时应特别注意。
如果粘到皮肤上,可立即用异丙醇或乙醇擦拭,然后用清水冲洗。
6.如果用于PCR实验,请按PCR操作规程操作,严防污染。
北京甘棠飞华生物科技有限公司Beijing Gantangfh Biotech Co.,Ltd.地址:北京市海淀区清河安宁庄路4号11号办公楼323室邮编:100085电话:(010)62930532 Email:******************。
DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
![DNAzol基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/e7683e2eee06eff9aef807c2.png)
DNAzol 基因组DNA快速提取试剂目录号:DN26目录编号包装单位DN2601 50mlDN2602 100ml❖产品介绍:DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA提取试剂,简单高效,结果可靠,可快速提取基因组DNA,适用于多种大量或少量样品。
DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA,经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。
整个过程只需10-30 分钟,DNA 回收率可达70-100%,得到的DNA 不需再纯化,可直接用于Southern 杂交、斑点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。
❖产品储存:室温保存至少一年。
❖注意事项:DNAzol 有毒害性,应避免直接接触皮肤和眼睛。
❖操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)1.裂解,匀浆a.组织:25-50mg 组织加1ml DNAzol ,使用匀浆仪处理5-10 次。
少量(5-10mg)柔软组织,如脾或脑组织,可切成或者捣成小块使用微量取样器吹打混匀,室温放置5-10 分钟。
b.细胞:单层培养的细胞应直接裂解,倒出培养基,加入DNAzol 用取样器吹打几次混匀。
每10cm2 细胞培养板加0.75-1.0ml DNAzol。
c.细胞沉淀或悬浮液:每1-3×107细胞(体积小于0.1ml)加1ml DNAzol,反复吹打混匀。
以上均要使用大口径枪头吹打,以免过度剪切断基因组。
2.离心4 -25℃,10000g 离心10 分钟。
将得到的上清转入新管。
此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA和多糖。
如果所提样品为含较多细胞和细胞外物质的样品,如肝、肌肉和大部分植物组织等,或要提取不含RNA 的DNA 时,可加此步骤。
其他样品可省略此步。
3.沉淀每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇,颠倒离心管5-8 次,混匀样品至出现DNA 沉淀,室温放置1-3分钟。
可以看见DNA 絮状沉淀,让沉淀自然沉降到管底,尽可能吸弃上清。
病毒 DNA RNA 磁珠法提取试剂盒说明书
![病毒 DNA RNA 磁珠法提取试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/82511eca5122aaea998fcc22bcd126fff7055da6.png)
病毒DNA/RNA磁珠法提取试剂盒说明书【试剂盒组成】试剂盒组成 数量Lysis-Binding Buffer 50mL×1瓶Wash Buffer W1 40 mL×1瓶Wash Buffer W2 100 mL×1瓶磁珠(Magnetic beads) 1mL×1支使用说明书1份【规格】100 tests/盒【贮藏与有效期】所有试剂室温保存,有效期为一年。
如发现Lysis-Binding Buffer溶液中有沉淀析出,属正常现象,请在使用前将其置56℃温浴溶解。
【实验室需自备常规试剂】RNase-free H2O 建议4℃保存。
【制品说明】本试剂盒适合从血清血浆、组织提取液、拭子洗液、尿液、无细胞体液和病毒培养液等样品中快速提取其病毒的DNA/RNA,如果只想需要病毒RNA,建议用RNase-free的DNAase进行处理即可。
在提取过程中不需要用到酚氯仿抽提和耗时的醇类沉淀,所获得的核酸完整性较好、纯度高。
如果想长期保存纯化后的病毒的DNA/RNA,建议加入适当的RNA酶抑制剂并-80℃保存。
配合自动化仪器如thermofisher 96一起使用时,一次纯化96样品的总基因组DNA可在30min左右完成,无需进行离心操作。
【手工操作实验操作程序】1、取约250uL待提取样品于1.5mL离心管中2、加入2倍量的Lysis—Binding Buffer,旋涡振荡20 s3、加入混匀的磁珠10uL,旋涡振荡20s,室温静止3min,旋涡振荡20s,室温静止3min4、置磁架上,静止20 s,吸弃上清注意:如果管盖上有磁珠残留,建议用枪吸取并转移至离心管中5、加入400uLWash Buffer W1,旋涡振荡混匀磁珠20s6、置磁架上,静止20 s,吸弃上清7、加入500uL Wash Buffer W2,旋涡振荡混匀磁珠20s8、置磁架上,静止20 s,吸弃上清注意:如果管盖上有磁珠残留,建议用枪吸取并转移至离心管中9、重复步骤7-8一次,并尽量除去所有的液体10、开盖,室温干燥7min注意:乙醇挥发不干净,会抑制后续PCR反应11、加入30-80 uL RNase-free H2O,盖上管盖,旋涡振荡混匀磁珠30 s注意:小的洗脱体积有助于获得终浓度较高的核酸12、65℃,7min,期间旋涡振荡一次。
病毒RNA提取与纯化说明书
![病毒RNA提取与纯化说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/a576a92a3169a4517723a32e.png)
QIAamp○R UltraSens TM Virus Handbook(用于从1ml悬液样品中高效纯化可滤性病毒RNA或DNA,2003年1月)1 试剂盒(250份)纯化柱250接收管 2ml 750AC 缓冲液230 mlAR* 缓冲液90 mlAB 缓冲液(浓缩) 22 mlAW1* 缓冲液(浓缩) 95 mlAW2* 缓冲液(浓缩) 66 mlAVE 缓冲液10×2 ml蛋白酶K 6 mlCarrier RNA 5×310 μg2 保存2.1纯化柱室温保存(15—25 ℃,以下室温保存均指该温度),保质期12个月2.2干粉状Carrier RNA 可室温保存1年;而溶于AVE缓冲液时需要等分,可于-20℃保存1年2.3蛋白酶溶液可室温保存1年,但于2—8℃环境下可延长保存期3 安全3.1 衣着:合适的实验室外套、一次性医用手套、护目镜3.2 注意事项3.2.1勿将漂白剂或酸溶液直接加入样品准备废液中,当AR缓冲液和AW1缓冲液含有的胍氢可酮和漂白剂结合时会产生高敏性的有害混合物3.2.2缓冲液AC、AB、AR、AW1和蛋白酶K均具潜在危险性,操作时需认真谨慎3.2.3所有实验步骤均需在室温(15—25℃)下进行;样品液可于2—8℃下保存6小时,在-20℃或-80℃下保存更长时间;同时,样品需先用内部控制物处理,以防核酸酶降解3.2.4 纯化柱(防交叉污染)3.2.4.1加入样品液时勿弄湿柱子边缘3.2.4.2注意更换有屏障的无核酸酶枪头3.2.4.3防止用枪头触碰柱膜3.2.4.4稍离心除去盖上液滴4、设备与试剂4.1乙醇(96—100%)4.2无菌、无核酸酶、有屏蔽的枪头4.3 无核酸酶离心管(1.5ml和2ml)4.4一次性无粉手套4.5磷酸盐缓冲液(PBS,当样品样不足1ml时)g)4.6可调速微型离心机(250—1200×4.7振摇孵育器,可加热4.8试剂准备4.8.1 Carrier RNA每管加入310μl缓冲液AVE,制成1μg/μl 溶液,-20℃保存(冻融不能超过3次),每样品最优Carrier RNA量为5.6μg4.8.2 缓冲液AB加入标明的乙醇体积(96—100%),翻转10次,使得溶液均质,室温保存4.8.3 缓冲液AW1*加入瓶上标明的乙醇体积(96—100%),室温保存4.8.4 缓冲液AW2*加入瓶上标明的乙醇体积(96—100%),室温保存5、流程5.1 1ml处理液5.2细胞溶解,目标物沉淀于缓冲液AC中5.3在缓冲液AR中重新悬浮,并用蛋白酶K除去蛋白5.4加入缓冲液AB,连接,清洗2遍,洗提获得RNA或DNA6、实验操作步骤6.1 准备6.1.1使样品液温度平衡至室温(15—25℃)6.1.2校核缓冲液AB、AW1、AW2、Carrier RNA等6.1.3使AR缓冲液温度平衡至60℃(水浴锅)6.1.4所有离心操作需在室温下进行6.2吸取1ml 样液至2ml 离心管中(管盖上不能有液体粘附,防污染)若不足1ml,需用磷酸盐缓冲液补足,但样液体积应不少于200μl6.3吸取0.8ml 缓冲液AC至样液表面;吸取5.6μl Carrier RNA液体至管盖(6.1μl mix)勿将缓冲液AC和Carrier RNA事先混合,且需加入内部控制物,同时推荐与Carrier RNA混合加入(0.5μl + 5.6μl Carrier RNA),即6.1μl mix6.4盖上盖子,上下翻转3次,涡旋10秒6.5室温孵育10分钟(最多15分钟,不能更久)g),移除表面液体,收集沉淀(轻弹使沉淀松散,确保6.6离心3分钟(1200×盖上无碎物)6.7移入300μl 预热至60℃的缓冲液AR和20μl 蛋白酶K为了减少移液步骤,可将缓冲液与蛋白酶K混合,若10份,即3.3ml预热缓冲液AR和220μl蛋白酶(多10%),漩涡10秒混合后,分装320μl至每管6.8漩涡至微粒完全重新悬浮每次漩涡两管(5—10秒),后漩涡另两管,反复循环3—5次(或更多),有助于蛋白消化6.9在振摇孵育器上孵育10分钟,40℃,最高混匀速度10分钟已足够长,不允许延长时间6.10稍离心,除去盖上液滴6.11移入300μl 缓冲液AB,漩涡混匀,稍离心6.12小心移取700μl溶解物至纯化柱(装在一2ml收集管上),勿弄湿边缘,盖上盖子,离心1分钟(3000—5000×g)6.13将纯化柱装在新的2ml收集管上(试剂盒中提供),遗弃旧收集管;小心打开纯化柱盖子,移入500μl缓冲液AW1;离心1分钟(6000×g)6.14将纯化柱装在新的2ml收集管上(试剂盒中提供),遗弃旧收集管;小心打开纯化柱盖子,移入500μl缓冲液AW2;最高速离心3分钟(20,000×g)为防止离心减速震动导致的滤液黏着在纯化柱上,可额外取一新2ml收集管套上纯化柱,最高速离心1min6.15将纯化柱装在新的1.5ml收集管上(非试剂盒中提供)遗弃旧收集管;小心打开纯化柱盖子,移入30μl缓冲液AVE至纯化柱膜上(全部弄湿),离心1分钟(6000×g)6.16 重复步骤6.15,当需更多体积时,可适当增加AVE体积,而非提取后稀释6.17 RNA保存,-80℃备注:初步计算,整个实验过程共需约2—3小时。
病毒RNA提取手册
![病毒RNA提取手册](https://img.taocdn.com/s3/m/18e9ab10866fb84ae45c8da6.png)
法则:QIAamp病毒RNA试剂盒在扩增技术中提供最快捷和简便的方式来纯化病毒RNA,纯化病毒RNA可以使用非肝素抗凝的血浆,血清和其他无细胞体液。
样本可以新鲜或冻融不超过一次(多次冻融可导致病毒载量下降并应该避免该种情况)。
样本反复冻融会有冷沉淀物的聚集,当使用真空管时会导致QIAamp滤膜的堵塞。
QIAamp病毒RNA试剂盒一般可用于从许多病毒中分离出单个病毒RNA,但不能保证每种病毒均适用。
程序:QIAamp病毒RNA试剂将硅胶膜的选择结合特性和微旋转或真空技术的速度连接起来,理想地适用于多样本的同时处理。
样本首先溶解于高浓度变性液,来确保RNA 酶失活并且完整的病毒RNA分离。
然后调整缓冲液来提供RNA与膜结合的最适条件,如此样本装载到旋转柱中。
RNA结合在膜上,污染物通过使用两种不同的清洗液,两步实现特异性洗脱。
高质量RNA通过特异性无RNA酶的缓冲液洗脱下来,可直接使用或安全储存起来。
洗涤过的RNA不含蛋白,核酸酶和其他污染物或抑制剂。
特异性的QIAamp膜能确保在20分钟内高度回收纯净而完整的RNA,不需要使用苯酚或氯仿萃取,也不需要酒精沉淀。
所有的缓冲液或试剂都不含RNA酶。
重点:第一次准备RNA请参考附录该试剂盒所有步骤均应在室温下快速完成。
收集并离心样本后,血浆或血清可存放于2-8℃中6小时,长期储存应在-20至-80℃。
冻融别超过一次。
反复冻融可导致蛋白的失活和凝集,使病毒滴度降低并随后导致病毒RNA产量的降低。
另外,冻融形成的冷凝集可堵塞滤膜,如果冷凝集可见,可简单通过6800g离心3分钟来浓缩分离,离心后在不搅动片状沉淀物同时移走上清液。
避免细胞中DNA的干扰:1.推荐使用无细胞体液2.对含有细胞的样本(包括脑脊液、骨髓、尿液和试子),首先应过滤或者是1500g离心十分钟,留取上清液3.若RNA和DNA已经并联分离,洗出液可通过不含RNA酶的DNA酶来消化处理,随后高温处理(70℃15分钟)来使DNA酶失活该试剂盒能分离超过200个碱基的RNA分子,小的RNA分子在该条件下无法定量。
BIOG病毒RNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
![BIOG病毒RNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/5c927f04a8114431b90dd8b8.png)
BIOG 病毒RNA 提取试剂盒操作方法及步骤说明书运输条件:常温运输货 号:51027:50次反应 51027-MG:50次反应51028:100次反应 储存条件:室温(15-25℃),消化液、RNA Carrier 请于-20℃存放产品特点 试剂盒组成 组分 50次 50次 定制 100次 吸附柱和收集管各50个 各50个 各100个 裂解液 18mL 2*45mL 36mL 洗涤液A 21mL 3*35mL 42mL 洗涤液B 9mL 3*15mL 18mL 洗脱液 3mL 15mL 6mL 消化液 1.2mL 5*1.2mL 2.4mL RNA Carrier 0.24mL 1.2mL 0.48mL 说明书1份1份1份产品介绍BIOG cfRNA Easy Kit 是常州百代生物科技股份有限公司研制的专门用于血清、血浆等游离样本中RNA 的提取的试剂盒。
BIOG cfRNA Easy Kit 采用了最新的优质进口离子膜,裂解液和洗脱液经过多次优化,能高效地分离RNA 。
提取得到的RNA 较其它品牌的同类试剂盒产量更大,纯度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR 、Real Time RT-PCR 、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。
操作步骤1. 请自行准备:无水乙醇、无RNA 酶1.5mL 离心管。
2. 取出洗涤液,按以下操作:a) 洗涤液A :21mL 加入9mL 无水乙醇;35mL 加入15mL 无水乙醇;42mL 加入18mL 无水乙醇。
b) 洗涤液B:9mL 加入21mL 无水乙醇;15mL 加入35mL 无水乙醇;18mL 加入42mL 无水乙醇。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
3. 取无RNA 酶的1.5mL 离心管,加入200μL 样本,4μL RNA Carrier 混合均匀,再加入300μL 裂解液及20μL 消化液,漩涡震荡10秒,充分混匀,56℃水浴10 分钟至完全裂解。
病毒基因组RNA提取试剂盒使用说明书
![病毒基因组RNA提取试剂盒使用说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/7e2e2be00975f46527d3e1cd.png)
病毒RNA 提取试剂盒Virus RNA Kit(目录号:HS0408)产品包装自备试剂无水乙醇储存条件蛋白酶K 于-20℃,其他组分室温(15 ~ 25℃)产品简介本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒RNA 。
无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提,独特的缓冲液/蛋白酶K 体系能迅速裂解病毒,使病毒蛋白与RNA 分离,在蛋白酶K 的作用下降解病毒蛋白,在高盐状态下将病毒RNA 选择性吸附于硅基质膜上,再通过快速的漂洗、离心步骤,去除蛋白等杂质,最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的病毒RNA 从吸附柱膜上洗脱下来。
本试剂盒操作简单、快速,所得病毒RNA 不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可直接用于RT-PCR 、Real-Time PCR 、印迹等分子生物学实验。
产品特点1.简便快速,1小时内可获得高纯度的病毒RNA 。
2.无需有机溶剂抽提,使用安全。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.3.重复性好,产量高。
4.所得病毒RNA纯度高,无污染物和抑制剂,方便下游应用。
注意事项1.血清或血浆避免反复冻融,否则会使蛋白变性或产生沉淀,导致提取的RNA片段小,提取量下降。
2.如缓冲液Buffer GB、Buffer RD结晶或产生沉淀,可在56℃水浴溶解。
3.所有离心步骤均为室温下操作。
4.本试剂盒也可提取高质量的病毒DNA,操作步骤相同。
操作步骤1. 取1.5 ml离心管(自备),加入20 ul的Proteinase K溶液。
2. 向离心管中加入200 ul血清或血浆,然后再加入200 ul Buffer GB,涡旋震荡15 sec。
(注意:1、样本体积不足200 ul可以加入0.9% NaCl(自备)补足。
2、为确保样本有效裂解,加入Buffer GB后,需将样本与Buffer GB充分混匀。
)3.56℃孵育15 min,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
病毒基因组DNA提取试剂盒使用说明书
![病毒基因组DNA提取试剂盒使用说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/d9b7fa16a8114431b90dd8cd.png)
病毒基因组DNA 提取试剂盒Virus Genomic DNA Kit(目录号:HS0307)产品包装自备试剂无水乙醇储存条件蛋白酶K 于-20℃,其他组分室温(15 ~ 25℃)产品简介本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒DNA 。
无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提,独特的缓冲液/蛋白酶K 体系能迅速裂解病毒,使病毒蛋白与DNA 分离,在蛋白酶K 的作用下降解病毒蛋白,在高盐状态下将病毒DNA 选择性吸附于硅基质膜上,再通过快速的漂洗、离心步骤,去除蛋白等杂质,最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的病毒DNA 从吸附柱膜上洗脱下来。
本试剂盒操作简单、快速,所得病毒DNA 不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可直接用于PCR 、RT-PCR 、Real-Time PCR 、印迹等分子生物学实验。
产品特点1.简便快速,1小时内可获得高纯度的病毒基因组DNA 。
2.无需有机溶剂抽提,使用安全。
3.重复性好,产量高。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.4.所得病毒DNA纯度高,无污染物和抑制剂,方便下游应用。
注意事项1.血清或血浆避免反复冻融,否则会使蛋白变性或产生沉淀,导致提取的DNA片段小,提取量下降。
2.如缓冲液Buffer GB、Buffer GD结晶或产生沉淀,可在56℃水浴溶解。
3.所有离心步骤均为室温下操作。
操作步骤1. 取1.5 ml离心管(自备),加入20 ul的Proteinase K溶液。
2. 向离心管中加入200 ul血清或血浆,然后再加入200 ul Buffer GB,涡旋震荡15 sec。
(注意:1、样本体积不足200 ul可以加入0.9% NaCl(自备)补足。
2、为确保样本有效裂解,加入Buffer GB后,需将样本与Buffer GB充分混匀。
)3.56℃孵育15 min,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底。
碧云天rna提取试剂盒说明书
![碧云天rna提取试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/e16268322bf90242a8956bec0975f46527d3a7dd.png)
碧云天rna提取试剂盒说明书
本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组dna。
首先红细胞裂解液裂解去除不含dna的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组dna,
然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组dna通过异丙醇沉淀并重溶解于dna溶解液。
产品特点:
从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。
不需要使用有毒的苯酚等试剂。
快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。
结果稳定,产量高(典型的产量300µl全血可提取出4-15µg),od260/od280典型的比值达1.7~1.9,长度可达50kb-150kb,可直接用于构建文库、pcr、southern-blot和各种酶切反应。
RNA提取trizol试剂盒说明书
![RNA提取trizol试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/c5a5a443e518964bcf847c53.png)
注:各种样品的最大使用量(1ml Trizol)操作步骤:1. 在液氮中将组织(单头飞虱)研磨成粉末,趁液氮尚未挥发光时,将粉末转移到1.5ml离心管中。
细胞经计数后直接加入离心管,然后5000rpm室温离心去上清。
每100mg组织或5×106个细胞加1ml的Trizol。
注意:如果组织量(1-10mg)或细胞数很少(1×102-1×104),在样品中加入800μl的Trizol,用枪头反复抽吸混匀,再加入糖原(终浓度为250μg/ml),剧烈振荡或用匀浆器匀浆。
2. 用1ml针筒,26-G号(6#)针头抽吸匀浆液两次以剪切基因组DNA,然后直接从针筒中将样品转移到无菌1.5-ml离心管中。
3. 加入200μl氯仿/异戊醇(24:1)或氯仿,剧烈振荡混匀30秒。
4. 台式离心机上,12000rpm,室温离心5分钟。
5. 将上清液小心转移到RNase-free 1.5ml 离心管中,加入等体积的异丙醇,室温下放置5分钟。
(注意:不要吸取任何中间层物质,否则会出现染色体DNA污染)6. 台式离心机上,12000rpm,室温离心5分钟。
7.小心移去上清液,防止RNA沉淀丢失。
8. 用70%酒精洗涤两次,每次700μl,12000rpm,室温离心2分钟。
9. 尽可能彻底地吸走上清,防止RNA沉淀丢失。
10. 真空离心干燥3-5分钟,或放在室温下使酒精完全挥发。
11. 沉淀用30-50μl DEPC-H2O溶解。
如发现沉淀难溶,68℃处理10分钟。
对于胰腺,肾等组织中RNase含量很高,沉淀用100%去离子甲酰胺溶解。
12.DNA的分析和定量:(1)测定样品在260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量。
按1 OD=40μg RNA计算RNAD的产率:OD260/280在1.8-2.0视为抽提的RNA纯度很高。
若需精确量化,只有浓度在4μg/ml以上的样品适于用光度计测定。
RNA病毒基因组提取试剂盒使用说明
![RNA病毒基因组提取试剂盒使用说明](https://img.taocdn.com/s3/m/642f241ee87101f69e319581.png)
RNA病毒基因组提取试剂盒使用说明货号:R2000规格:50T/100T保存:室温(15℃-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2℃-8℃。
产品内容:试剂盒组成R2000-50R2000-100蛋白酶K1ml2ml洗柱液50ml2ml结合液25ml50ml×2漂洗液15ml50mlRNase free ddH2O15ml15ml×2RNase free吸附柱50个100个RNase free收集管(2ml)50个100个产品介绍:RNA病毒基因组提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组,不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组的提取。
使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验。
操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇,加入到离瓶口约0.5-1cm距离,盖好摇匀。
所有离心步骤均在2-8℃条件下进行。
1、取病毒上清液0.5ml,12000rpm离心5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀(如无沉淀可省去此步)。
2、向病毒上清中加入20ul10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,65℃消化10min,期间可颠倒离心管混匀数次。
3、吸附柱前处理:从包装中取出吸附柱,放入收集管中,加入700ul洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中待用。
4、向病毒上清中加入500ul结合液,充分混匀。
再向管中加入400ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响RNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。
(吸附柱的最大容积为750ul,可分两次加入。
一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。
)5、12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
试剂盒DNA提取详细操作步骤
![试剂盒DNA提取详细操作步骤](https://img.taocdn.com/s3/m/2f8cf0d7900ef12d2af90242a8956bec0975a569.png)
试剂盒DNA提取详细操作步骤一、试剂盒打开后需要准备的工作1、Proteinase K(蛋白酶K)的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管,每管100u l~200ul③将分装好的Proteinase K放入-20℃冰箱中保存,使用期限为12个月2、组织抑制剂(Inhibitor Removal buffer)的调配加入20ml无水乙醇(absolute ethanol)颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液(wash buffer)的调配加入80ml无水乙醇(absolute ethanol)颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取(试剂盒)1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎(≤0.1cm)洗净保存液。
②加入组织破解液Tissue-lysis 200ul 蛋白酶K 40ul然后放入55℃水浴锅内3个小时使其充分消化。
2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液binding buffer 200ul 然后放入70°水浴锅中10分钟。
②再加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中,然后离心8000g一分钟。
③倒掉底液,加500ul组织抑制剂Inhibitor Removal 然后离心倒掉底液④加洗液washing buffer500ul离心(洗液加两次)⑤在70℃预热Elution Buffer,然后将洗好的柱体下部分丢掉,换新的离心管加入Elution Buffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20℃保存。
三、细胞DNA的提取(试剂盒)1、组织样品处理与消化①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心,倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③加200ul Binding Buffer,40ul蛋白酶K 混合均匀放入70℃水浴锅内消化10分钟。
2、DNA提取①加异丙醇100ul 混合均匀吸取上清液放入柱体中,然后离心8000g一分钟。
康为RNA提取试剂盒使用说明书
![康为RNA提取试剂盒使用说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/554628c8b14e852458fb57b5.png)
RNA试剂盒所含药品:Component CW0559S 50 preps DNase I(DNA酶Ⅰ)1000 U 10×Reaction Buffer(10×缓冲液)1000 μlBuffer RL 35 mlBuffer RLC 35 mlBuffer RW1 40 mlBuffer RW2(concentrate)11 ml RNase-Free Water(无RNA酶的水)10 ml50Spin Columns FL with Collection Tubes(含收集管的吸附柱FL)50Spin Columns RM with Collection Tubes(含收集管的吸附柱RM)50RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5 ml)(无RNA酶的离心管)自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。
实验前准备及重要注意事项:1.预防RNase污染,应注意以下几方面:1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2.预防RNase污染,应注意以下几方面:1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
3.提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取的量和质量。
4.Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇,1 ml Buffer RL加10 μl β-巯基乙醇。
加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
Buffer RLC使用时不需加β-巯基乙醇。
5.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
细菌基因组 DNA 快速提取试剂盒 说明书
![细菌基因组 DNA 快速提取试剂盒 说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/99bbcd0da9114431b90d6c85ec3a87c240288a9e.png)
细菌基因组DNA快速提取试剂盒(溶液型)GK1061 50 次GK1062 100次一、试剂盒组成Components GK1061 GK1062Digestion Solution(a)Proteinase K(b)NaCl Solution CTAB/NaCl Solution(c) Boiled RNase A (10mg/ml)TE (pH8.0)Lysozyme(d)SP Buffer 18ml3mg6ml6ml240µl18ml30mg0.5ml36ml6mg12ml12ml480µl36ml60mg1.0ml二、实验前的准备(a) Digestion Solution低温时可能出现沉淀,请于55℃适当加温溶解后使用,不会影响实验结果。
首次使用时,将Boiled RNase A全部加入到Digestion Solution中,充分混匀备用,加完Boiled RNase A的Digestion Solution,请于4℃保存。
(b) Proteinase K使用前加入300µl (GK1061) 、600µl (GK1062)灭菌双蒸水,分装-20℃冻存。
不得将ProteinaseK直接加入到Digestion Solution中,以免酶失活。
(c) CTAB/NaCl Solution使用前需要65℃预热,便于溶解和取液。
(d) Lysozyme使用前加入500µl (GK1061) 或1ml (GK1062) SP Buffer,使Lysozyme全部溶解。
分装后-20℃冻存。
三、试剂盒说明本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。
细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后),首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA,接着加入RNase A去除RNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重新溶解于DNA溶解液中。
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南
![RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南](https://img.taocdn.com/s3/m/9295da1bb307e87100f69616.png)
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南准备试剂:氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)。
操作步骤:1. 匀浆处理a. 植物组织:以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.,大约100mg 叶片使用1 ml Trizol.b. 动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.c. 单层培养细胞.直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次.注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染.d.细胞悬液:离心取细胞,每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。
加Trizol 前不要洗涤细胞,以免降解mRNA。
一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。
e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10min,10 000rpm 离心1min。
弃上清,收集白细胞沉淀。
每1ml血液收集的白细胞沉淀中加入1ml Trizol。
2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim,使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤:4 ℃10 000rpm离心10min,取上清。
如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等,可离心去除。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA,上清中含有RNA。
处理脂肪组织样品时,上层是大量油脂,应除去。
取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
4. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈震荡15s,室温放置3min。
磁珠法病毒DNARNA提取试剂盒使用说明书原理及用途
![磁珠法病毒DNARNA提取试剂盒使用说明书原理及用途](https://img.taocdn.com/s3/m/ba0837eb710abb68a98271fe910ef12d2af9a973.png)
磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒使用说明书原理及用途本试剂盒利用磁珠的特殊分离作用,采用独特的缓冲液系统,从组织研磨液、血清、血浆、淋巴液、无细胞体液、细胞培养上清液、尿液或各种病毒保存液中分离纯化高质量病毒DNA或RNA。
特殊包埋的磁珠,在一定条件下对核酸具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。
提取的病毒DNA/RNA得率高、纯度高、质量稳定可靠。
使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作,包括反转录、PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、荧光定量RT-PCR等各种下游实验。
试剂盒组成储存条件1. 所有缓冲液在室在温条件下(15–25℃)保存。
2. 在原始状态下,Carrier RNA冻干粉可在室温条件下储存至有效期;已配好的工作液时必须按照“Carrier RNA工作液的配制”要求进行配制、储存、使用。
3. 有效期:1年样品处理1.组织样品处理:每份组织分别从三个不同的位置称取样品约1g,用手术剪剪碎混匀后取0.05 g于研磨器中研磨,加入1.5 mL生理盐水继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液用于检测。
2.排泄物样品处理:取约0.05g排泄物于1.5 mL灭菌离心管中,加入1mL生理盐水涡旋振荡,8000 rpm离心2 min,取上清液用于检测。
3.其它液体样品:直接取上清液用于检测注意事项(请务必在使用本试剂盒之前仔细阅读)1.样品应避免反复冻融,否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。
2.若缓冲液RLCK中有沉淀,可于37℃水浴重新溶解,摇匀后使用。
3.需要用户自行准备的试剂:生理盐水、异丙醇、无水乙醇。
4.实验前应仔细阅读说明书,在提取核酸时提前配制缓冲液RLCK、Carrier RNA工作液、漂洗液PWI和漂洗液PWII工作液。
缓冲液的配制1.缓冲液RLCK使用前应加入5 mL异丙醇,并在瓶签上勾选已配制标识,以方便操作时确认。
MagMAX预分装病毒RNA DNA提取试剂盒说明书
![MagMAX预分装病毒RNA DNA提取试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/cce764b0f71fb7360b4c2e3f5727a5e9856a2734.png)
MagMAX 预分装病毒 RNA/DNA 提取试剂盒说明书储存条件及有效期试剂于15°C - 30°C 储存。
生产日期及使用期限见试剂盒外包装。
适用仪器适用于生命科技公司(Life Technologies)生产的KingFisher™ Flex 全自动核酸提取仪(货号:A5400630、C5400630)。
样本要求适用样本类型:全血、血清、血浆、口腔液、组织/器官、环境拭子等样本。
样本采集:按照各样本类型常规采集方法进行采集。
样本保存和运输:采集后的样本可立即用于核酸提取,或2°C- 8°C 保存(不超过24小时),长期保存应置于-20°C 以下,避免反复冻融。
样本运送可采用加冰密封进行运输。
检验方法1. 需自备的仪器、试剂、耗材产品名称MagMAX™预分装病毒RNA/DNA 提取试剂盒包装规格包装规格:预分装2×96次反应/盒货号:A52990预期用途用于核酸提取和纯化步骤。
本试剂盒仅供科研使用(包括动物和环境用途)。
提取产物类型病毒核酸(RNA 和DNA)检验原理采用磁珠法核酸分离技术,携带正电荷的磁珠易于吸附负电荷的核酸,主要用于从样本中提取DNA 和RNA 。
将液体样本与结合缓冲液、蛋白酶K 和磁珠混合。
核酸与磁珠结合后,经过数次洗涤与磁场捕获,洗脱下来的核酸即可通过PCR 或其它特定方法来检测特定的RNA 或DNA 。
磁分离法是广泛应用于动物健康等行业且能实现高通量、自动化的核酸提取方法。
主要组成成分2.3.3 在程序运行完之后(约25分钟),立刻取出洗脱液板,提取完成。
注意:为了防止蒸发,尽快将洗脱液板里的上清液转移到无核酸酶的板或者管中,立刻用于下一步实验。
或者用一张新封膜封好洗脱液板,放入-80°C冰箱保存。
所有使用完毕的深孔板用封膜封好丢弃。
5. 制作样本板5.1 撕去预分装结合缓冲液深孔板的封膜,向其每个孔中加入蛋白酶K/IPC 混合物(在步骤4制备)。
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
![新型植物基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/a38c4637453610661ed9f4cd.png)
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号:DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次适用范围:适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次100次200次RNase A(10mg/ml) -20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管(2ml)室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
RM401病毒DNA RNA提取试剂盒2.0 (预包装)说明书
![RM401病毒DNA RNA提取试剂盒2.0 (预包装)说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/6ea9c957a31614791711cc7931b765ce05087a8d.png)
本试剂盒可从血液、血清、血浆、拭子洗液等多种液体样本中快速提取高纯度的病毒核酸(DNA/RNA),实现平行样本的高通量处理。
试剂盒采用独特包埋的超顺磁性硅基磁珠,在独特的缓冲液系统中,通过氢键和静电吸附核酸,而不吸附蛋白和其他杂质,吸附了核酸的磁珠经洗涤去除剩余的蛋白和盐离子,当使用低盐缓冲液时,磁珠释放核酸,从而达到快速分离纯化核酸的目的。
整个操作过程简单、快速且安全高效,获得的核酸可直接用于逆转录、PCR、荧光定量PCR、RT-PCR、RT-qPCR、二代测序、生物芯片分析等下游相关实验。
15 ~ 25℃保存,室温运输。
产品概述▲ 使用本试剂盒时,请穿戴实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩,使用Nuclease-free耗材等,最大程度避免DNase、RNase污染。
Virus DNA/RNA Reagents 2.0(Prepackaged For RM401)组 分8 × 1 T/条RM401-012 × 8 T/板RM401-022 × 16 T/板RM401-036 × 16 T/板RM401-04产品组分保存条件诺唯赞生物网址/ 咨询热线/400-600-9335 销售技术支持适用于全自动核酸提取仪(Vazyme#VNP-32P/VNP-32,奥盛 #Auto-Pure32A)及同类型仪器(加热槽位为1、6、7、12)。
适用仪器1. 适用样本类型:血液、血清、血浆、拭子洗液、组织匀浆等。
2. 样本投入体积:100 - 400 μl。
3. 样本保存:可立即进行提取,也可4℃保存待测,保存期不超过24 h,长期保存需置于-20℃。
样本要求注意事项Version 21.11. 本试剂盒提取产物为DNA/RNA,操作过程要特别注意防止RNase对RNA的降解,所使用的器皿、加样器等均为专用,所使用的离心管、枪头等一次性耗材应高压灭菌,且不含DNase和RNase。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
试剂盒组成、储存、稳定性:
试剂盒组成保存50次(RN2201) 裂解液VLB 室温20 ml
Poly Carrier -20℃200μl
去蛋白液RE 室温25 ml
漂洗液RW 室温10 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
RNase-free H2O 室温10 ml
RNase-free
吸附柱RA和收集管
室温50套
室温储存12个月不影响使用效果,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:
采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。
该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求,如病毒RNA:HCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),和HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒);病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等等。
病毒裂解后,DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸),再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。
纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR/RT-PCR分析。
产品特点:
1.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.节省时间,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成。
3.多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA/RNA 纯度高,质量稳定可靠,可适用
于各种常规操作,包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。
注意事项:
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,
如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。
3.裂解液VLB和去蛋白液RE中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染
皮肤、眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.Poly Carrier:
Poly Carrier使用方法:如果起始处理量很少,我们推荐使用Poly Carrier,如果预期有较大量核酸产量,用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。
使用时在每个样品提取所需裂解液VLB中加入4μl Poly Carrier储存溶液,将裂解液VLB与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可(裂解液VLB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。
也可根据样品数量,在总共需要的裂解液VLB中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。
混合液在室温24小时内稳定。
操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在10ml漂洗液RW中加入40ml无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1.200μl血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9% NaCl或者PBS补足)转入上
述1.5ml离心管,加入400μl 裂解液VLB,立刻涡旋振荡充分混匀。
如果处理样品量小或者病毒预期浓度较低,建议在400μl裂解液VLB中加入4μl Poly Carrier储存溶液。
2.室温(15-25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。
3.加入450μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。
如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
4.将上述混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心
30-60秒,倒掉收集管中的废液。
如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱RA中。
5.加500μl去蛋白液RE,12,000rpm离心30秒,弃废液。
6.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,
弃废液,加入500μl漂洗液RW,重复一遍。
7.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免
漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8.取出吸附柱RA,放入一个RNase free的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl
RNase free H20(事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置1分钟,12,000rpm 离心1分钟。
如果想得到较多量的DNA/RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高。
如果需要DNA/RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少DNA/RNA 产量。
9.病毒DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
病毒RNA
建议最好立刻使用,否则立刻短期放置在-70℃备用。