生化实验报告
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
生化基础实验报告
一、实验目的1. 了解生化实验的基本原理和操作方法。
2. 掌握常见生化试剂的制备和性质。
3. 学习并运用生化实验技术，进行物质的定性、定量分析。
二、实验原理生化实验是研究生物体内化学反应、生物分子结构与功能及其相互关系的实验方法。
本实验主要涉及以下内容：1. 蛋白质性质及鉴定：通过观察蛋白质在不同条件下的性质变化，如盐析、变性等，以及鉴定蛋白质的方法，如双缩脲试剂、酚试剂等。
2. 酶的性质及活性测定：通过观察酶催化反应的特点，如专一性、高效性等，以及酶活性测定方法，如比色法、电化学法等。
3. 糖类及脂肪的鉴定与测定：通过观察糖类、脂肪在特定条件下的性质变化，如糖的还原性、脂肪的皂化反应等，以及鉴定、测定方法，如费林试剂、苏丹Ⅲ染液等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、淀粉、葡萄糖、果糖、蔗糖、脂肪、盐酸、氢氧化钠、硫酸铜、硫酸锌、氯化钠、碘液、苏丹Ⅲ染液等。
2. 仪器：试管、烧杯、量筒、滴定管、pH计、电炉、恒温水浴锅、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 蛋白质性质及鉴定实验（1）观察蛋白质盐析现象：取鸡蛋清溶液，逐滴加入饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质沉淀现象。
（2）观察蛋白质变性现象：取鸡蛋清溶液，加入少量氢氧化钠溶液，观察蛋白质变性现象。
（3）鉴定蛋白质：取鸡蛋清溶液，加入双缩脲试剂，观察颜色变化。
2. 酶的性质及活性测定实验（1）观察酶的专一性：取淀粉溶液，分别加入淀粉酶、蛋白酶，观察酶催化反应现象。
（2）测定酶活性：取淀粉溶液，加入淀粉酶，用碘液检测淀粉分解情况，计算酶活性。
3. 糖类及脂肪的鉴定与测定实验（1）观察糖的还原性：取葡萄糖、果糖溶液，加入费林试剂，观察颜色变化。
（2）观察糖的鉴定：取蔗糖溶液，加入苏丹Ⅲ染液，观察颜色变化。
（3）测定脂肪含量：取脂肪样品，加入碱液，加热皂化，测定皂化物的质量，计算脂肪含量。
五、实验结果与分析1. 蛋白质性质及鉴定实验（1）盐析现象：观察到鸡蛋清溶液中加入饱和硫酸铵溶液后，出现白色沉淀。
生化新陈代谢实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化新陈代谢的基本原理。
2. 掌握生化实验的基本操作技能。
3. 通过实验验证酶促反应的特性和效率。
二、实验原理新陈代谢是生物体内物质和能量的交换与转变过程，包括同化作用和异化作用。
同化作用是指生物体将外界环境中的营养物质转变为自身的组成物质并储存能量；异化作用是指生物体将自身的一部分组成物质分解，释放能量并排出分解产物。
酶是生物体内一类具有催化活性的蛋白质，能显著降低反应活化能，加速生化反应的进行。
三、实验设备与试剂1. 实验设备：离心机、移液器、恒温水浴锅、显微镜等。
2. 实验试剂：葡萄糖、果糖、淀粉、蛋白质、DNA、RNA、酶、指示剂等。
四、实验步骤1. 酶促反应实验（1）将酶与底物混合，观察反应速率。
（2）改变酶浓度、底物浓度、pH值、温度等条件，观察反应速率的变化。
（3）比较不同酶的催化效率。
2. 新陈代谢实验（1）将生物样本（如细胞、组织等）放入反应体系中，观察物质和能量的变化。
（2）改变反应条件，如pH值、温度等，观察反应的变化。
（3）检测代谢产物，如葡萄糖、乳酸等。
五、实验结果与分析1. 酶促反应实验（1）实验结果显示，随着酶浓度的增加，反应速率逐渐加快。
（2）改变底物浓度，反应速率也随之增加。
（3）pH值和温度对酶促反应速率有显著影响，最适pH值和温度条件下，反应速率最高。
（4）不同酶的催化效率不同，如脲酶催化尿素水解速度比一般催化剂高10~10倍。
2. 新陈代谢实验（1）实验结果显示，生物样本在反应体系中发生代谢反应，物质和能量发生转变。
（2）改变反应条件，代谢反应速率发生变化。
（3）检测到代谢产物，如葡萄糖、乳酸等。
六、讨论1. 酶促反应具有高效、特异、可调节等特点，是生物体内新陈代谢的重要催化剂。
2. 新陈代谢是生物体维持生命活动的基础，酶在代谢过程中起着至关重要的作用。
3. 实验结果表明，酶浓度、底物浓度、pH值、温度等条件对酶促反应速率有显著影响。
生化反应设计实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握生化反应的基本原理和操作方法。
2. 通过实验验证不同生化反应的特性和规律。
3. 提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理生化反应是指生物体内发生的化学反应，主要包括酶促反应、非酶促反应等。
本实验选取了以下几种生化反应进行探究：1. 酶促反应：以淀粉酶催化淀粉水解为例，研究酶促反应的特性和影响因素。
2. 非酶促反应：以蛋白质变性为例，研究非酶促反应的特性和影响因素。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 淀粉酶- 淀粉- 碘液- 氢氧化钠- 蛋白质溶液- 乙醇- 硫酸铜- 水浴锅- 试管- 移液枪- 滴管- 研钵- 研杵2. 实验仪器：- 恒温水浴锅- 酶标仪- 紫外可见分光光度计- 精密天平- 移液枪- 试管架- 移液器四、实验方法1. 酶促反应实验：（1）将淀粉酶与淀粉按一定比例混合，加入适量水，置于恒温水浴锅中，在一定温度下反应一段时间。
（2）取一定量的反应液，加入碘液，观察颜色变化。
（3）以未加淀粉酶的反应液为对照组，分析酶促反应的特性和影响因素。
2. 非酶促反应实验：（1）将蛋白质溶液与氢氧化钠按一定比例混合，观察颜色变化。
（2）将混合液加入乙醇，观察沉淀形成情况。
（3）将沉淀加入硫酸铜溶液，观察颜色变化。
（4）以未加氢氧化钠的反应液为对照组，分析非酶促反应的特性和影响因素。
五、实验结果与分析1. 酶促反应实验结果：通过实验观察，加入淀粉酶的反应液颜色逐渐变浅，说明淀粉被水解。
在对照组中，未加淀粉酶的反应液颜色未发生变化。
这说明淀粉酶具有催化淀粉水解的作用。
2. 非酶促反应实验结果：通过实验观察，加入氢氧化钠的反应液颜色逐渐变深，说明蛋白质发生变性。
在对照组中，未加氢氧化钠的反应液颜色未发生变化。
这说明氢氧化钠可以导致蛋白质变性。
六、实验结论1. 酶促反应具有高效、专一性等特点，是生物体内重要的化学反应类型。
2. 非酶促反应也具有重要的作用，如蛋白质变性等。
生化实验报告
生化实验报告引言：生化实验是现代生物科学研究中不可或缺的一部分。
通过生化实验，可以深入了解生物体的分子组成和功能，揭示生物体的生理过程和相关疾病的发生机制。
本报告将就我们进行的一系列生化实验结果进行总结和分析。
实验一：蛋白质浓度测定实验蛋白质是生物体的重要组成部分，也是许多生理过程的关键调节因子。
通过本实验，我们采用比色法测定了不同样本中的蛋白质含量，并得出以下结论：1. 样本A的蛋白质浓度明显高于样本B，表明样本A可能含有更多的蛋白质。
2. 样本C的蛋白质浓度最低，可能是由于样本C中存在其他干扰物质，影响了测定结果。
实验二：酶活性测定实验酶是生物体内参与代谢反应的重要分子，其活性的变化可以反映生物体的生理状态。
本实验中，我们通过测定不同条件下酶的活性，得出以下结论：1. 酶活性随着温度的升高呈先增加后下降的趋势，说明酶在适宜温度下具有最高的活性。
2. pH值的变化对酶活性也有一定影响，酶活性在酸性和碱性条件下均降低，表明酶对于特定pH值有一定的适应性。
3. 离子浓度的改变可以显著影响酶的活性，高浓度的阳离子对酶活性的抑制效果较大。
实验三：DNA提取实验DNA是生物体内存储遗传信息的重要分子，在基因研究和生物技术中应用广泛。
本实验中，我们采用了几种常见的DNA提取方法，得出以下结论：1. 不同提取方法对于不同样本的DNA提取效果有所差异，需要根据实际情况选择合适的方法。
2. 样本中其他杂质的存在会干扰DNA的提取，需要进行适当的纯化步骤以提高提取纯度。
3. 所得到的DNA质量可以通过比色法或荧光法进行检测，得出相对准确的结果。
实验四：酸碱滴定实验酸碱滴定是一种常用的分析方法，在酸碱度测定和沉淀反应等方面有广泛应用。
本实验中，我们进行了一系列的酸碱滴定实验，得出以下结论：1. 强酸和强碱的滴定过程呈现出明显的酸碱中和点，通过计算可以得到溶液中目标物质的浓度。
2. 在滴定过程中，我们需要通过指示剂的颜色变化来判断滴定终点，需注意颜色的变化程度和持续时间。
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
细菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。
2. 掌握常见细菌生理生化反应的检测方法，如糖发酵、吲哚产生、甲基红反应等。
3. 学会通过生理生化反应对细菌进行初步鉴定。
二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长繁殖过程中，利用酶催化底物发生的一系列化学反应。
通过检测细菌对特定底物的利用能力、酶的产生以及代谢产物的生成，可以判断细菌的种类和特性。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂等。
3. 仪器：酒精灯、接种环、培养皿、试管、试管架、滴管等。
四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
观察菌落周围是否出现透明圈，判断细菌是否能发酵该糖。
2. 吲哚产生实验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
取培养液滴加吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀，判断细菌是否能产生吲哚。
3. 甲基红反应实验：将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
取培养液滴加甲基红试剂，观察颜色变化，判断细菌是否能产生有机酸。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验结果：- 大肠杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 金黄色葡萄球菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 枯草芽孢杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。
- 变形杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阳性。
2. 吲哚产生实验结果：- 大肠杆菌：吲哚产生阴性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚产生阳性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚产生阴性。
- 变形杆菌：吲哚产生阳性。
3. 甲基红反应实验结果：- 大肠杆菌：甲基红反应阴性。
- 金黄色葡萄球菌：甲基红反应阴性。
- 枯草芽孢杆菌：甲基红反应阳性。
- 变形杆菌：甲基红反应阳性。
根据实验结果，我们可以初步判断：- 大肠杆菌为革兰氏阴性菌，发酵葡萄糖，不产生吲哚和有机酸。
生化实验实验报告模板
实验名称：____________________实验日期：____________________实验地点：____________________实验者：____________________一、实验目的1. 了解实验原理和方法。
2. 掌握实验操作技能。
3. 分析实验结果，得出结论。
二、实验原理（一）实验背景（二）实验原理（三）实验方法三、实验材料与仪器（一）实验材料1. 试剂：____________________2. 仪器：____________________（二）实验仪器1. 实验室仪器：____________________2. 专用仪器：____________________四、实验步骤（一）准备工作1. 实验前检查仪器、试剂是否齐全。
2. 熟悉实验操作步骤。
3. 按照实验要求准备实验器材。
（二）实验操作1. 实验步骤一：____________________2. 实验步骤二：____________________3. 实验步骤三：____________________……n. 实验步骤n：____________________五、实验结果与分析（一）实验结果1. 观察到的现象：____________________2. 数据记录：____________________（二）结果分析1. 分析实验现象：____________________2. 计算与分析：____________________3. 与预期结果比较：____________________六、实验结论根据实验结果，得出以下结论：1. 实验原理正确，实验方法可行。
2. 实验结果与预期相符。
3. 实验过程中存在的问题及改进措施：____________________七、实验讨论1. 实验过程中遇到的问题及解决方法：____________________2. 实验结果的误差分析：____________________3. 对实验原理和方法的理解与认识：____________________八、参考文献[1] ______________________[2] ______________________[3] ______________________九、附录1. 实验数据表：____________________2. 实验照片：____________________3. 实验过程记录：____________________实验报告撰写注意事项：1. 实验报告应简洁明了，条理清晰。
生化实验的设计实验报告
一、实验目的1. 掌握从生物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 学习使用酚-氯仿法进行DNA的粗提取和纯化。
3. 熟悉DNA的鉴定方法。
二、实验原理DNA是生物体内的重要遗传物质，具有独特的碱基序列。
在提取过程中，利用DNA与蛋白质、RNA等物质的溶解性差异，通过适当的化学试剂和操作步骤，将DNA从细胞中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 材料：鸡血、无菌生理盐水、无水乙醇、氯化钠、酚-氯仿、NaCl溶液、DNA标准样品等。
2. 仪器：离心机、玻璃棒、量筒、烧杯、滴管、吸管、移液器、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 鸡血采集：取鸡血2ml，加入10ml无菌生理盐水，充分混匀。
2. 细胞裂解：取2ml鸡血混合液，加入等体积的酚-氯仿，充分混匀后静置5分钟。
3. DNA沉淀：取上述混合液，加入2.5倍体积的无水乙醇，充分混匀后静置10分钟。
4. DNA纯化：将上述混合液转移到离心管中，离心5分钟（8000r/min），弃去上清液。
5. DNA溶解：将沉淀用50μl NaCl溶液溶解，混匀。
6. DNA鉴定：取少量溶解后的DNA溶液，加入2μl DNA标准样品，观察颜色变化。
五、实验结果1. 在实验过程中，观察到鸡血混合液与酚-氯仿混合后分层，上层为红色，下层为无色。
2. 在DNA沉淀过程中，观察到白色沉淀形成。
3. 在DNA溶解过程中，观察到溶液颜色由白色变为无色。
4. 在DNA鉴定过程中，观察到溶液颜色与DNA标准样品颜色相似。
六、实验结论1. 成功从鸡血中提取了DNA。
2. 酚-氯仿法是提取DNA的有效方法。
3. DNA在生物组织中的提取具有实际应用价值。
七、实验讨论1. 实验过程中，酚-氯仿的加入有助于细胞裂解和DNA的提取。
2. 无水乙醇的加入有助于DNA的沉淀。
3. NaCl溶液的加入有助于DNA的溶解。
4. 实验过程中，注意操作规范，避免污染。
5. DNA提取过程中，温度、pH值等条件对实验结果有影响。
生化薄层层析实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解薄层层析（TLC）的基本原理及其在生物化学研究中的应用。
2. 掌握薄层层析实验的操作步骤，包括样品制备、点样、层析、显色等。
3. 学会使用比移值（Rf值）进行样品的定性和定量分析。
二、实验原理薄层层析是一种利用固体吸附剂（如硅胶、氧化铝等）对混合物中各组分进行分离的技术。
在TLC实验中，样品被点在薄层板上，然后置于展开剂中。
由于样品中各组分的极性不同，它们在展开剂中的迁移速度也不同，从而实现分离。
三、实验仪器与药品1. 仪器：薄层板、点样器、层析缸、显色剂、烘箱、显微镜等。
2. 药品：硅胶、氧化铝、展开剂、显色剂、待分离的混合物等。
四、实验步骤1. 样品制备：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，制成适当浓度的溶液。
2. 点样：用点样器将样品溶液点在薄层板的一端，点样点应尽量小而圆。
3. 层析：将点有样品的薄层板置于层析缸中，加入适量展开剂，使展开剂液面略高于点样线。
待展开剂到达薄层板另一端时，取出薄层板，晾干。
4. 显色：根据样品的性质选择合适的显色剂，将显色剂喷洒在薄层板上，或将薄层板置于加热的显色剂中。
5. 观察与分析：观察薄层板上出现的色斑，测量色斑与点样线的距离，计算比移值（Rf值）。
五、实验结果与分析1. 样品分离：根据薄层板上出现的色斑数量和位置，可以初步判断样品中各组分的种类。
2. 比移值（Rf值）：比移值是样品中某一组分在展开剂中的迁移距离与展开剂前沿距离的比值。
通过比较不同组分的Rf值，可以进一步判断它们的相对极性。
3. 定量分析：通过测量样品中某一组分的峰面积或颜色深度，可以对其进行定量分析。
六、实验讨论1. 展开剂的选择对样品的分离效果有很大影响。
应根据样品的性质选择合适的展开剂。
2. 点样点的形状和大小对分离效果也有一定影响。
点样点应尽量小而圆。
3. 显色剂的选择对样品的鉴定和定量分析也很重要。
七、实验结论通过本次实验，我们掌握了薄层层析的基本原理和操作步骤，学会了使用比移值进行样品的定性和定量分析。
生化细菌培养实验报告
一、实验目的1. 理解细菌生理生化反应的基本原理。
2. 掌握细菌生理生化实验的基本操作方法。
3. 通过实验，学习如何利用生理生化反应对细菌进行鉴定。
4. 培养严谨的科学态度和实验操作技能。
二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长代谢过程中，通过各种酶的催化作用，将简单的有机物质转化为复杂的有机物质，同时释放出能量和代谢产物的过程。
这些反应包括糖类发酵、蛋白质分解、脂质分解等。
通过观察细菌对这些底物的利用情况以及产生的代谢产物，可以鉴定细菌的种类。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌等。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管等。
四、实验步骤1. 接种：将菌种接种于相应的培养基中，置于恒温培养箱中培养24-48小时。
2. 观察：观察菌落形态、颜色等特征。
3. 生理生化实验：- 糖发酵实验：将培养好的菌液接种于糖发酵培养基中，观察细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖等的发酵情况。
- 甲基红实验：将培养好的菌液接种于蛋白胨水培养基中，加入甲基红试剂，观察菌液的颜色变化。
- 吲哚实验：将培养好的菌液接种于蛋白胨水培养基中，加入吲哚试剂，观察菌液的颜色变化。
- V-P实验：将培养好的菌液接种于V-P试剂中，观察菌液的颜色变化。
4. 结果记录与分析：将实验结果记录于实验报告中，并对实验结果进行分析。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：- 大肠杆菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖均能发酵，产生气泡。
- 金黄色葡萄球菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖均不能发酵。
- 枯草芽孢杆菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖均能发酵，产生气泡。
- 普通变形杆菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖均能发酵，产生气泡。
2. 甲基红实验：- 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的菌液呈现红色，为甲基红反应阳性。
生化试剂配制实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握常用生化试剂的配制方法。
2. 熟悉实验操作规范，提高实验技能。
3. 了解不同生化试剂的用途和注意事项。
二、实验原理生化试剂在生物化学实验中起着至关重要的作用，它们可以用于检测、分析、分离和鉴定生物分子。
本实验旨在通过配制不同类型的生化试剂，加深对实验原理和操作步骤的理解。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：分析天平、移液器、容量瓶、烧杯、玻璃棒、滴定管、滴定台、试管等。
2. 试剂：氯化钠、氢氧化钠、硫酸铜、硼酸、葡萄糖、丙酮、苯酚等。
四、实验步骤1. 氯化钠溶液的配制a. 称取5.85g氯化钠，置于烧杯中。
b. 加入少量蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其溶解。
c. 将溶液转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
d. 摇匀溶液，备用。
2. 氢氧化钠溶液的配制a. 称取4.0g氢氧化钠，置于烧杯中。
b. 加入少量蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其溶解。
c. 将溶液转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
d. 摇匀溶液，备用。
3. 硫酸铜溶液的配制a. 称取0.5g硫酸铜，置于烧杯中。
b. 加入少量蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其溶解。
c. 将溶液转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
d. 摇匀溶液，备用。
4. 硼酸溶液的配制a. 称取5.2g硼酸，置于烧杯中。
b. 加入少量蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其溶解。
c. 将溶液转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
d. 摇匀溶液，备用。
5. 葡萄糖溶液的配制a. 称取5.0g葡萄糖，置于烧杯中。
b. 加入少量蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其溶解。
c. 将溶液转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
d. 摇匀溶液，备用。
6. 丙酮溶液的配制a. 称取5.0g丙酮，置于烧杯中。
b. 加入少量蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其溶解。
c. 将溶液转移至100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线。
d. 摇匀溶液，备用。
7. 苯酚溶液的配制a. 称取5.0g苯酚，置于烧杯中。
生化医学实验报告
实验名称：蛋白质等电点测定、血糖浓度测定、酶的作用及竞争性抑制、谷丙转氨酶的测定实验日期：2023年10月25日实验地点：生物化学实验室一、实验目的1. 学习蛋白质等电点的测定方法，了解蛋白质在不同pH值下的溶解度变化。
2. 掌握血糖浓度测定的原理和方法，分析血糖水平对生物体的影响。
3. 研究酶的作用及其竞争性抑制现象，加深对酶活性调控机制的理解。
4. 测定谷丙转氨酶（ALT）活性，探讨ALT在肝脏疾病诊断中的应用。
二、实验原理1. 蛋白质等电点测定：蛋白质在特定pH值下带有正电荷或负电荷，此时称为等电点。
通过测定蛋白质在等电点时的溶解度，可以确定其等电点位置。
2. 血糖浓度测定：血糖浓度是反映机体能量代谢状况的重要指标。
常用的血糖测定方法包括葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法等。
本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。
3. 酶的作用及竞争性抑制：酶是生物体内重要的催化剂，能够加速化学反应。
竞争性抑制是指抑制剂的化学结构与底物结构相似，与酶结合形成复合物，从而降低酶的活性。
4. 谷丙转氨酶（ALT）测定：ALT主要存在于肝脏细胞内，其活性在肝脏疾病时升高。
本实验采用比色法测定ALT活性。
三、实验材料1. 蛋白质等电点测定：牛血清蛋白、不同pH值的缓冲液、电导率仪、pH计。
2. 血糖浓度测定：葡萄糖标准品、葡萄糖氧化酶试剂盒、蒸馏水、微量滴定板。
3. 酶的作用及竞争性抑制：过氧化氢酶、竞争性抑制剂、底物溶液。
4. 谷丙转氨酶（ALT）测定：ALT标准品、ALT试剂盒、蒸馏水、微量滴定板。
四、实验步骤1. 蛋白质等电点测定：- 配制不同pH值的缓冲液。
- 将牛血清蛋白溶液分别加入不同pH值的缓冲液中，测定其溶解度。
- 记录不同pH值下牛血清蛋白的溶解度。
- 分析数据，确定牛血清蛋白的等电点。
2. 血糖浓度测定：- 按照试剂盒说明书配制工作液。
- 将待测样品加入工作液中，加入葡萄糖氧化酶试剂。
- 在微量滴定板上加入显色剂，测定吸光度。
生化提取实验报告
一、实验名称：植物基因组DNA提取二、实验日期：2023年X月X日三、实验地点：生物实验室四、实验人员：XXX，XXX，XXX五、实验目的：1. 掌握植物基因组DNA的提取原理和方法；2. 了解琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作；3. 学习对电泳检测基因组DNA结果的初步分析；4. 学习紫外吸收法测定核酸基本原理和方法；5. 掌握紫外吸收法测定基因组DNA纯度与含量的方法。
六、实验原理：植物基因组DNA的提取主要基于以下原理：- 利用十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）和十二烷基硫酸钠（SDS）等离子型表面活性剂溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来；- 加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，核酸（DNA、RNA）水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；- 上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得纯化的DNA。
七、实验材料与试剂：- 植物样本（如菠菜叶片）- CTAB试剂- NaCl溶液- Tris-HCl缓冲液- EDTA溶液- 氯仿/异戊醇混合液- 95%乙醇- 无水乙醇- 琼脂糖凝胶- DNA分子量标准- 紫外分光光度计- 电泳仪- 离心机- 移液器- 试管、离心管、玻璃棒等实验器材八、实验器材与仪器：- 离心机- 电泳仪- 紫外分光光度计- 移液器- 玻璃棒- 试管、离心管- 琼脂糖凝胶电泳槽九、实验步骤：1. 植物样本的制备：取适量植物样本，用液氮研磨成粉末；2. DNA提取：将研磨好的样本加入CTAB试剂和NaCl溶液，混匀后加入氯仿/异戊醇混合液，充分振荡，离心取上清液；3. DNA纯化：在上清液中加入95%乙醇，混匀后静置，离心取沉淀；4. DNA溶解：将沉淀溶于TE溶液中；5. DNA浓度测定：用紫外分光光度计测定DNA溶液的吸光度，计算DNA浓度；6. 琼脂糖凝胶电泳：将DNA分子量标准与提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA条带；7. 结果分析：根据电泳结果和DNA浓度，分析提取的DNA纯度和含量。
生化分离实验报告
一、实验目的1. 理解生化分离的基本原理和方法。
2. 掌握离心、沉淀、透析等生化分离技术的操作步骤。
3. 通过实验，提高对生化分离技术的实际操作能力。
二、实验原理生化分离是利用生物大分子在物理、化学性质上的差异，将其从混合物中分离出来的过程。
常用的生化分离方法有离心、沉淀、透析、电泳、层析等。
本实验主要采用离心和沉淀法对混合蛋白质进行分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：兔肝匀浆液、标准蛋白质溶液、丙酮、硫酸铵、生理盐水等。
2. 仪器：离心机、试管、移液器、恒温水浴锅、烧杯等。
四、实验步骤1. 准备标准蛋白质溶液：称取标准蛋白质，用生理盐水溶解并定容至一定体积。
2. 离心分离：取一定量的兔肝匀浆液，加入适量的硫酸铵，充分混匀后静置一段时间，待蛋白质沉淀形成。
将沉淀与上清液分离，取上清液进行离心，转速为4000 r/min，时间为10分钟。
3. 沉淀分离：取离心后的上清液，加入适量的丙酮，充分混匀后静置一段时间，待蛋白质再次沉淀形成。
将沉淀与上清液分离，取沉淀进行离心，转速为4000r/min，时间为10分钟。
4. 透析分离：将离心后的沉淀溶于适量的生理盐水中，加入透析袋，放入含有适量生理盐水的烧杯中，恒温水浴加热，使蛋白质逐渐溶解。
待蛋白质溶解后，取出透析袋，将蛋白质溶液进行透析，去除小分子杂质。
5. 蛋白质鉴定：取一定量的标准蛋白质溶液和透析后的蛋白质溶液，进行比色法鉴定。
五、实验结果与分析1. 离心分离：通过离心，可以将兔肝匀浆液中的蛋白质沉淀分离出来。
2. 沉淀分离：通过沉淀，可以将离心后的蛋白质进一步纯化。
3. 透析分离：通过透析，可以去除蛋白质溶液中的小分子杂质。
4. 蛋白质鉴定：通过比色法，可以鉴定透析后的蛋白质是否为兔肝匀浆液中的蛋白质。
六、实验总结本实验通过离心、沉淀、透析等生化分离技术，成功地将兔肝匀浆液中的蛋白质分离出来，并对其进行鉴定。
实验过程中，需要注意以下几点：1. 操作要规范，避免污染。
生化物质代谢实验报告
一、实验目的1. 了解生化物质代谢的基本原理和实验方法。
2. 掌握糖类、脂类、蛋白质等物质的代谢途径和过程。
3. 学习利用生化实验技术检测和分析代谢产物的变化。
二、实验原理生物体内的代谢活动是通过一系列的生化反应来完成的，这些反应涉及到多种生化物质，如糖类、脂类、蛋白质等。
本实验通过检测和分析这些物质在代谢过程中的变化，来研究生物体内的代谢途径和过程。
三、实验材料1. 实验试剂：葡萄糖、脂肪酸、氨基酸、酶、缓冲液等。
2. 实验仪器：分光光度计、离心机、冰箱、水浴锅等。
3. 实验样品：细胞提取物、组织匀浆等。
四、实验方法1. 糖类代谢实验- 取一定量的细胞提取物或组织匀浆，加入适量的葡萄糖底物，在适宜的条件下进行反应。
- 利用分光光度计检测反应体系中葡萄糖的消耗量，以反映糖类的代谢速率。
2. 脂类代谢实验- 取一定量的细胞提取物或组织匀浆，加入适量的脂肪酸底物，在适宜的条件下进行反应。
- 利用分光光度计检测反应体系中脂肪酸的消耗量，以反映脂类的代谢速率。
3. 蛋白质代谢实验- 取一定量的细胞提取物或组织匀浆，加入适量的氨基酸底物，在适宜的条件下进行反应。
- 利用分光光度计检测反应体系中氨基酸的消耗量，以反映蛋白质的代谢速率。
五、实验结果与分析1. 糖类代谢实验结果- 实验结果显示，在适宜的条件下，葡萄糖的代谢速率较快，说明糖类是生物体内主要的能量来源。
2. 脂类代谢实验结果- 实验结果显示，在适宜的条件下，脂肪酸的代谢速率较慢，说明脂类在生物体内的能量代谢中起到辅助作用。
3. 蛋白质代谢实验结果- 实验结果显示，在适宜的条件下，氨基酸的代谢速率较快，说明蛋白质在生物体内的代谢过程中具有重要作用。
六、实验结论1. 本实验通过检测和分析糖类、脂类、蛋白质等物质的代谢速率，揭示了生物体内代谢途径和过程的基本规律。
2. 实验结果表明，糖类是生物体内主要的能量来源，脂类在能量代谢中起到辅助作用，蛋白质在生物体内的代谢过程中具有重要作用。
生化实验报告血乳酸(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过生化方法测定血乳酸浓度，了解机体代谢状态，为临床诊断提供参考。
二、实验原理乳酸脱氢酶（LDH）是一种糖酵解酶，广泛存在于机体所有组织细胞的胞质内。
在缺氧或无氧条件下，乳酸脱氢酶催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，生成乳酸和NADH。
通过测定血中乳酸的浓度，可以反映机体代谢状况和缺氧程度。
三、实验材料1. 标本：静脉血5ml2. 试剂：乳酸测定试剂盒（包括乳酸脱氢酶、NADH、NAD+、缓冲液等）3. 仪器：全自动生化分析仪、恒温水浴箱、移液器、试管等四、实验方法1. 取静脉血5ml，加入含有抗凝剂的试管中，混匀。
2. 按照试剂盒说明书进行操作，将血样加入反应管中，加入乳酸测定试剂盒中的其他试剂，充分混匀。
3. 将反应管放入恒温水浴箱中，在37℃下孵育一定时间。
4. 取出反应管，用全自动生化分析仪测定血乳酸浓度。
五、实验结果本次实验测定血乳酸浓度为2.5mmol/L。
六、结果分析1. 正常人血乳酸浓度为1.0-2.5mmol/L，本次实验结果在正常范围内。
2. 血乳酸浓度升高可能见于以下情况：- 缺氧：如慢性阻塞性肺疾病、心力衰竭等；- 营养不良：如糖尿病、蛋白质营养不良等；- 药物作用：如某些抗生素、抗癫痫药物等；- 先天性代谢缺陷：如乳酸酸中毒等。
七、讨论1. 本实验通过测定血乳酸浓度，可以初步了解机体代谢状态和缺氧程度。
但在实际临床应用中，需要结合患者的病史、症状、体征和其他检查结果进行综合判断。
2. 影响血乳酸浓度的因素较多，如药物、饮食、运动等，因此在实验过程中应严格控制实验条件，确保实验结果的准确性。
3. 血乳酸检测作为一种无创、简便、快速的方法，在临床诊断中具有广泛的应用前景。
八、结论本次实验成功测定了血乳酸浓度，为临床诊断提供了参考。
在今后的工作中，我们将进一步研究血乳酸检测在临床诊断中的应用价值。
九、注意事项1. 实验操作过程中，应严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性。
创新生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着生物技术的快速发展，人们对生物化学领域的探究越来越深入。
为了进一步提高学生的实践能力和创新能力，我们小组开展了一项创新生化实验——蛋白质等电点测定。
本实验旨在了解蛋白质等电点的概念、测定方法以及影响蛋白质等电点的因素。
二、实验目的1. 理解蛋白质等电点的概念及意义；2. 掌握蛋白质等电点的测定方法；3. 分析影响蛋白质等电点的因素；4. 提高学生的实验操作技能和创新能力。
三、实验原理蛋白质在溶液中的带电性质与其氨基酸组成、溶液pH值等因素有关。
当溶液pH值等于蛋白质的等电点时，蛋白质所带正负电荷数量相等，净电荷为零，此时蛋白质的溶解度最小，容易析出。
蛋白质等电点的测定方法主要有电泳法、滴定法等。
四、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、氯化钠、硫酸铵、氢氧化钠、盐酸、酚酞指示剂等；2. 实验仪器：分析天平、移液管、滴定管、电热恒温水浴锅、电泳仪、凝胶成像系统等。
五、实验步骤1. 准备蛋白质溶液：取一定量的鸡蛋清，用氯化钠溶液进行稀释，得到蛋白质溶液；2. 测定蛋白质溶液的初始pH值；3. 逐滴加入氢氧化钠溶液，直至溶液pH值达到蛋白质等电点；4. 逐滴加入盐酸溶液，直至溶液pH值达到蛋白质等电点；5. 分别测定蛋白质在等电点时的溶解度；6. 记录实验数据，分析影响蛋白质等电点的因素。
六、实验结果与分析1. 蛋白质溶液的初始pH值约为7.4；2. 在加入氢氧化钠溶液的过程中，蛋白质溶液的pH值逐渐升高，当pH值达到7.0时，蛋白质开始析出；3. 在加入盐酸溶液的过程中，蛋白质溶液的pH值逐渐降低，当pH值达到4.0时，蛋白质开始析出；4. 通过实验数据，发现蛋白质在等电点时的溶解度最小，且受pH值、离子强度等因素的影响。
七、结论1. 蛋白质等电点是蛋白质在溶液中带电性质发生变化的临界pH值；2. 通过电泳法可以测定蛋白质的等电点；3. 蛋白质的等电点受pH值、离子强度等因素的影响。
医学检验生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验名称血清酶活性检测二、实验目的1. 掌握血清酶活性检测的基本原理和方法。
2. 学会使用生化分析仪进行血清酶活性检测。
3. 了解血清酶活性检测在临床诊断中的应用。
三、实验原理血清酶活性检测是通过测定血清中某种酶的活性来反映该酶在体内的代谢状况。
酶活性测定通常采用比色法、电化学法等方法，其中比色法是最常用的方法。
本实验采用比色法检测血清中丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）的活性。
四、实验材料1. 试剂：丙氨酸转氨酶（ALT）试剂盒、天冬氨酸转氨酶（AST）试剂盒、缓冲液、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、硫酸钠、氢氧化钠、盐酸、三氯乙酸等。
2. 仪器：生化分析仪、离心机、移液器、比色皿等。
3. 样品：血清样本。
五、实验步骤1. 样本处理：取血清样本，按照实验要求进行离心处理，分离出血清。
2. 丙氨酸转氨酶（ALT）活性检测：（1）按照试剂盒说明书配置反应体系，加入血清样本。
（2）将反应体系放入生化分析仪中，按照仪器操作步骤进行测定。
3. 天冬氨酸转氨酶（AST）活性检测：（1）按照试剂盒说明书配置反应体系，加入血清样本。
（2）将反应体系放入生化分析仪中，按照仪器操作步骤进行测定。
4. 结果记录与分析：记录实验数据，与正常值范围进行比较，分析实验结果。
六、实验结果1. 丙氨酸转氨酶（ALT）活性检测结果：实验测得的ALT活性为30 U/L，正常值范围为10-40 U/L。
2. 天冬氨酸转氨酶（AST）活性检测结果：实验测得的AST活性为25 U/L，正常值范围为15-35 U/L。
七、讨论与分析1. 丙氨酸转氨酶（ALT）活性检测：ALT主要存在于肝脏细胞中，其活性升高可反映肝脏损伤。
本实验中ALT活性检测结果在正常范围内，说明受试者肝脏功能正常。
2. 天冬氨酸转氨酶（AST）活性检测：AST广泛存在于人体各组织中，但以肝脏细胞中的含量最高。
AST活性升高可反映心肌损伤、肝脏损伤等。
生化实验室活体实验报告(3篇)
第1篇实验名称：细胞培养与细胞染色观察实验目的：1. 学习细胞培养的基本操作和注意事项。
2. 掌握细胞染色技术，观察细胞形态和结构。
3. 了解细胞生长周期及其在不同培养条件下的变化。
实验时间：2023年X月X日实验地点：生化实验室实验材料：1. 细胞株：人肺上皮细胞（A549）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞培养瓶：25cm²培养瓶4. CO2培养箱5. 离心机6. 显微镜7. 细胞染色剂：姬姆萨染液8. 吸管、移液器、试管等实验器材实验步骤：1. 细胞复苏：- 将冻存的细胞株取出，用DMEM培养基溶解。
- 将溶解后的细胞悬液离心，弃去上清液。
- 用DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×10⁵个细胞/mL。
2. 细胞接种：- 将25cm²培养瓶用75%乙醇消毒，晾干。
- 将细胞悬液接种于培养瓶中，每瓶接种1mL。
- 将培养瓶放入CO2培养箱中，37℃、5%CO2培养。
3. 细胞培养：- 每隔24小时更换一次培养基。
- 观察细胞生长情况，记录细胞生长周期。
4. 细胞染色：- 取对数生长期的细胞，用胰酶消化。
- 收集细胞，离心，弃去上清液。
- 用姬姆萨染液染色30分钟。
- 水洗，晾干。
5. 显微镜观察：- 将染色后的细胞涂片放在显微镜下观察。
- 观察细胞形态、核质比、细胞核染色质等。
实验结果：1. 细胞培养成功，细胞生长旺盛，呈典型的铺路石状排列。
2. 细胞染色效果好，细胞核染色质清晰，核质比适中。
3. 观察到细胞生长周期为G1期、S期、G2期和M期。
实验讨论：1. 细胞培养过程中，应注意无菌操作，避免污染。
2. 细胞染色剂的选择和浓度对染色效果有重要影响。
3. 细胞生长周期受多种因素影响，如培养基成分、温度、CO2浓度等。
实验结论：本次实验成功培养了人肺上皮细胞，并观察了细胞形态和结构。
细胞染色效果良好，成功观察到细胞生长周期。
实验结果表明，细胞培养和染色技术在生物学研究中具有重要意义。
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生化实验报告————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:ﻩ实验一过氧化物酶同工酶的分离提取一、实验目的1、初步掌握蛋白质分离纯化的一般步骤,熟悉离心的使用及蛋白质提取中的注意事项。
2、了解过氧化物酶的作用。
二、原理:过氧化物酶是植物提内普遍存在、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化，因此测定这种酶的活性,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。
本实验以苜蓿种子为材料,低速离心去除细胞碎片,上清用丙酮或硫酸铵沉淀得过氧化物酶同工酶粗品。
三、实验材料、器材及试剂：(一)材料：苜蓿种子(二）器材:研钵、超声波粉碎仪、高速冷冻离心机酸度计(三）实验试剂:１．丙酮２.提取缓冲液PBS。
四、实验步骤１．精确称取4g左右植物样品(若是苜蓿种子,提前用水溶胀好，)加1５ｍｌ提取缓冲液匀浆；［先将种子称好研碎，再逐渐加入提取缓冲液，匀浆用去10ml，最后洗涤用5ｍｌ] ２.1３0０0g离心1０mｉn；3.取清液(量体积),沉淀弃去(清液少许低温保存测定酶活和含量样1）；4.沿烧杯壁缓慢加入等体积-30℃预冷的丙酮［事先放置在冰柜中］,4℃放置30ｍｉn;5．1300０ｇ离心1０min，沉淀用3 ml ０．０5 M PBＳ回溶(记录体积,留作实验二测含量和活性样2)低温保存；6．上清液缓慢加入等体积－３0℃预冷的丙酮，4℃放置30miｎ。
１300０g离心１0m ｉn,沉淀。
沉淀用５ｍｌ0.05 M PBS回溶（记录体积后,测含量和活性样３）低温保存。
五、实验结果与分析第３步中清液的４ml，留取1ml作样品1。
第５步中回溶后体积为3mｌ,即为样品２。
第6步中回溶后体积为5ml，即为样品3。
实验二过氧化物酶同工酶含量测定一、实验目的:掌握用考马斯亮蓝Ｇ－250染色法测定酶含量的原理与方法。
二、实验原理:考马斯亮蓝G-２50（ｃｏｏmassie ｂrｉlｌｉant bluｅG-25０）测定蛋白质酶含量属于染料结合法的一种。
该染料在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区域结合后变为青色，前者最大吸收值在465nｍ,后者在595nm。
在一定蛋白质浓度范围内（1～1000μｇ),蛋白质与色素结合后在595nm吸光值的大小与蛋白质的浓度呈正比,故可用于蛋白质的定量测定。
考马斯亮蓝G-250与蛋白质的结合十分迅速,2min左右即可达到平衡,其结合物在室温下1小时内保持稳定。
此法灵敏度高，易于操作，干扰物较少,是一种比较好的定量方法。
其缺点是在蛋白质浓度太高时线形偏低，且不同来源蛋白质与色素的结合状况有一定差别。
三、实验材料、试剂和仪器设备(一）材料苜蓿种子(二）仪器设备722分光光度计烧杯量筒移液管具塞刻度试管（三)试剂１.标准牛血清白蛋白溶液（100μg/ ml）。
２．考马斯亮蓝G－25０:四、实验步骤(一)标准曲线的绘制取6支具塞刻度试管，按下表依次加入标准蛋白，向各管中加入考马斯亮蓝G-250溶液５ｍl，摇匀,放置５mｉn左右，用1cm的比色皿在595nm处测定吸光值,以蛋白的μg作纵坐标，吸光值为横坐标绘制标准曲线。
表绘制标准曲线各试剂加入量管号 1 2 3 ４ 5 6 标准蛋白质(ml）００.1 0.2 ０.3 0.４０.５蒸馏水(mｌ）1．0 0．9 0.8 ０.７0.６０.５换算出的每管的标准蛋白质（μｇ)(不用加)(二）样品的测定取7支具塞刻度试管，空白1支，其它６支分别加入实验一的3、5、6步骤中的样品（每一样品2个平行样)０.1ｍl,各加用蒸馏水0.9ｍl,向各管中加入考马斯亮蓝Ｇ－２５０溶液５ml，充分摇匀，放置2ｍｉn左右，用１cm的比色皿在５95ｎm处测定吸光值,从标准曲线上查得样品中蛋白的含量。
五、结果计算式中:C为标准曲线上查得样品中蛋白的含量，μg；V T为提取液的总体积,ｍl;W F为样品的鲜重,g;ＶS为样品测定体积，ml。
样品１样品２样品3 ＯD值0．75４０.７61 0.７17 ０.７23 0.682 0．6３2 OD值平均值0.7５75 0.720 ０.6５7蛋白含量(μg）37.698５35.８322 ３2．6969由下面标曲图可知,标准曲线的回归方程是直线方程:y=49.767x。
标准曲线图y = 49.767x R 2 = 0.9942010203040506000.511.5系列1线性 (系列1)实验三 过氧化物酶的活性测定一、实验目的掌握愈创木酚法测定过氧化物酶活性原理与方法。
二、实验原理在过氧化物酶的催化下，H 2Ｏ２将愈创木酚氧化成茶褐色产物。
此产物在470ｎm 处有最大吸收值，故可通过测定470nm 处的吸光值的变化可以测定过氧化物酶的活性。
三、实验材料、试剂和仪器设备 (一）材料菠菜叶片(或苜蓿种子) (二)仪器设备722型分光光度计 烧杯 量筒 移液管 试管 研钵 离心机 (三)试剂1．pH5.５ 0,0５M ＰBS ；2．０．05M 愈创木酚溶液 1００ ml ； 3.2% H 2O 2;4．20%的三氯乙酸。
四、实验步骤1.样品液:以实验一的3、5、6步（稀释10倍后）中低温保存的酶样液进行测定. ２.过氧化物酶活性测定按以下表格依次加入各试剂。
表 测活体系中各试剂加入量管 号样1 样２ 样３ 对照 p Ｈ5.5 0.05M P ＢS(ｍl) ２.9 2.９ ２.９ 2.9 0.0５Ｍ愈创木酚溶液（ml)1.0 1．0 1.０ 1.0 2% Ｈ2O 2(ml ） １.０ 1.０ 1.0 1.0酶样液(m ｌ）0.10．1０.１0.１(灭活酶液）37℃保温１５mｉn，迅速冰浴20％三氯乙酸（ｍl) 2 2 2 2然后离心５000g10ｍｉn,取清液，适当稀释后，４７0ｎm处测吸光值。
五、结果计算以每分钟内A47０变化0.０１为１个过氧化物酶活性单位（ｕ)。
[U式中：ΔA４70为反应时间内吸光值的变化;Ｗ为所称样品重,g;t为反应时间,min；V T为提取酶液总体积，ml;ＶS为测定时取用酶液体积,ml。
对照组的OＤ值为0．0000。
样１样2 样3测得的OD值0.15２５0．1446 ０.1380酶活性( U/g）0.38 0.34 ０．24实验四葡聚糖凝胶过滤分离蛋白质一、实验目的：学会用凝胶过滤层析分离物质的基本操作，深刻理解其分离物质的原理。
二、实验原理:凝胶过滤层析利用有一定孔径的多孔的亲水性凝胶作为载体,当分子大小不同的混合物通过这种凝胶柱时，各物质在柱中存在两种运动,一是随洗脱液垂直向下移动,二是无定向的扩散运动。
直径大于凝胶孔径的大分子,不能进人胶粒内部,便直接沿着胶粒间隙溶剂先流出,称为全排出）;小分子物质，直径小于凝胶孔径，能自由进出能容纳下它们的孔穴,绕道而行,结果在柱中的保留时间增长而最后流出;中等大小的分子，能进人部分胶粒内部,从而在柱中的保留时间较大分子长，但较小分子短,中间流出。
于是,流过凝胶柱的混合物按其分子大小Ｗ被分离。
混合物中某一被分离成分在一定的凝胶层析柱内的洗脱行为,通常用分配系数(Kd)来表示。
其定义为,Ｋd=（Vｅ一V0）／ＶiＶe,某一被分离物成分被洗脱时所用洗脱液的体积Vo，凝胶颗粒间自由空间的总体积，Vｉ,胶颗粒内部孔穴的总容积大分子物质，其Ｋｄ=0,小分子能全部进人胶粒内的Kｄ=1，中等大小分子，Kd在O～1之间。
凝胶过滤法的分辨率(ρ）是凝胶层析中的另一个主要特征常数。
从数学角度上可以表示为，ρ=2（V2－Ｖ1)／(Ｗ1+W2）（≥１)Ｖ2、Ｖ1,是两种被分离物的洗脱体积W1、W2,是两个物质的洗脱峰的宽度。
两个相的物质要想完全分离,ρ≥,1。
三、使用试剂及器材:胰蛋白酶(分子量为2３KD)和牛血清白蛋白（分子量68KD)混合物、蛋白marker、层析柱5０cｍ×ｌ.lcｍ、核蛋检测仪、部分收集器、sｅphadex G一l５O四、实验步骤:1．凝胶的处理:取干燥的SeｐhａdexＧ一l0O浸泡在洗脱液（本实验用蒸馏水,含5%的乙醇）中，充分溶胀,注意不要过分搅拌,以防颗粒破碎。
为了缩短溶胀时间，可在沸水浴上加热至将近1OO℃30mｉｎ，还可以排除凝胶内部的汽泡（学生自己做）。
2．装柱:将柱子及其附件清洗干净先将下口接好，加上缓冲液,将出口处的汽泡排除,待柱内剩有2cｍ左右液柱时,关紧流出口,将己溶胀好的凝胶的上清液吸去,轻轻搅拌凝胶顺层析柱或玻璃棒一次性倾倒入层析柱，待底部自然沉降有一定凝胶后，打开流出口,直至凝胶沉积至所需高度。
加盖,并接上贮液瓶,开始滴注洗脱平衡液（本实验用蒸馏水，含5％的乙醇)。
至少要滴注2个柱床体积的洗液，使胶床稳定。
并检查柱子装得是否均匀、有无断层,有无汽泡(若有需重装)。
3.上样:①用蒸馏水溶解胰蛋白酶（分子量为23KD)60ｍg和牛血清白蛋白(分子量68KD）20mg混合物用１ｍl H2O溶解。
上样0.5ｍｌ．②取下洗脱液，吸去柱床上的溶液（或自留流出),直至胶面刚露出为止，夹住下出口,使洗脱液停止流动。
③将样品沿柱壁四周缓慢加入（别搅动胶面)④打开卡子，使下口流出液体，待样品进入胶床,夹住下出口，使洗脱液停止流动。
⑤再如上法,加１-２次小体积的洗脱液冲洗内壁,完成后，将洗脱剂与流入口相接，打开卡子进行洗脱。
４.洗脱：借助重力洗脱即可，洗脱时要控制流速为4m1/3Oｍｉn。
收集时用自动部分收集器收集，每管4m1,洗脱物各组分收集根据核蛋仪及层析图谱仪的数据与流速共同来决定(若无采集图谱时,还需要在分光光度计上测定OD28Onｍ来定)。
５.保存:样品洗脱完毕，根据层析图谱和自动部分收集器的数据将各组分合并,保存可以冷冻，也可浓缩，然后进行进一步鉴定。
6.凝胶的回收：取下层析柱，将上下口的盖子取下,从上口处用吸耳球一吹,胶即可从下口流出，凝胶可以灭菌保存，干燥保存（乙醇乙醚脱水干燥），和防腐剂保存。
ﻭ实验五聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一、实验目的：学会用聚丙烯酰胺凝胶分离物质的基本操作,深刻理解此法分离物质的原理。
二、实验原理:以聚丙烯酰胺作为支持介质的一种电泳技术。
凝胶是聚丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺交联而成的,催化剂为过硫酸铵，加速剂为TEMED。
本实验采用聚丙烯酰胺凝胶不连续体系与非解离体系,电泳迁移率的大小与带电粒子的大小、形状和带净电荷的数量等因素有关。
不同蛋白质,可根据其所带电荷大小、形状而得到分离。
三、试剂与器材:(一)器材垂直板电泳糟、直流稳压电源，微量注射器，电泳仪等。
(二)试剂1.分离胶缓冲液(４X）:１.５ＭTris一HＣｌｐH8.８，1ＯOml 溶液1（１．5M 是Ｔris的摩尔浓度,HCl用来调pH)2.浓缩胶缓冲液(4X）:0.5MＴris一HCｌｐH6．7，1OOmｌ溶液23．胶母液(Ｔ34%，C6%）:称取丙烯酰胺29.2g,甲又双丙烯酰胺0．8ｇ,用少量煮过1０分钟并冷却的蒸馏水溶至100mｌ，不能加热。