沉降菌检测精品课件
公共场所空气中细菌的测定(沉降法)
公共场所卫生标准
➢ 公共场所卫生标准 GB9663~9673—1996、 GB16153~1996 国家技术监督局和卫生部
➢ 公共场所卫生监测技术规范 GB/T 17220— 1998 卫生部
➢ 公共场所卫生标准检验方法 GB/T 18204.1~18204.30--2000
部分公共场所国家标准（细菌数）
❖ 图书馆阅览室：≤75个／皿 ❖ 医院候诊室：≤40个／皿 ❖ 公共交通工具： ≤40个／皿 ❖ 餐厅： ≤40个／皿
注意事项
❖ 培养皿要标记：学号或姓名（皿盖） ❖ 采样点的分布要均匀，不少于4个点，每个点
至少采集2-3样本。 ❖ 采样高度：1.2-1.5米 ❖ 采样结束是要倒置平皿 ❖ 实验结果要有图片（拍照） ❖ 实验报告要有讨论
公共场所卫生标准
➢ 旅店业卫生标准 ➢ 文化娱乐场所卫生标准 ➢ 公共浴室卫生标准 ➢ 理发店、美容店卫生标准 ➢ 游泳场所卫生标准 ➢ 体育馆卫生标准 ➢ 图书馆、博物馆、美术馆、展览馆卫生标准 ➢ 商场、书店卫生标准 ➢ 医院候诊室卫生标准 ➢ 公共交通等候室卫生标准 ➢ 公共交通工具卫生标准 ➢ 饭馆（餐厅）卫生标准
❖ 细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透 明、易挑取、质地均匀。
❖ 菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致。
实验安排
❖ 分组：按照学号平均分成8组 ❖ 采用地点：
1-2组 图书馆阅览室 3-4组 校医院大厅 5-6组 第一餐厅1楼 7-8组 公交车站501公交车 ❖ 实验记录方法：个人计数结果、小组平均结果 ❖ 实验结果：与国家相应标准比较
❖ 试剂与材料：营养琼脂培养基 ❖ 仪器与设备：恒温培养箱、培养皿等 ❖ 采样与测定方法：
沉降菌测试方法..
沉降菌测试方法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。
制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。
打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数=.........21nMnM M ++ n —培养皿总数 M 1—1号培养皿菌落数 M 2—2号培养皿菌落数 M n —n 号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
沉降菌的检测
沉降菌的检测
1 实验目的：检测洁净区沉降菌
2 实验步骤
2.1仪器
恒温培养箱（30－35℃）、生化培养箱（23－28℃）、微波炉、电磁炉、恒温水浴、电热干燥箱（250－300℃）、电冰箱、蒸汽压力灭菌器（使用时要进行生物指示剂灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。
电子天平或天平（感量0.1g），pH系列比色计。
培养皿30个、锥形瓶（1000mL、500mL）、火柴、记号笔、酒精灯、酒精棉球或碘伏棉球。
(121℃，30min灭菌备用)
2.2营养琼脂培养基的制备
成分：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂 15-17g蒸馏水 1000mL pH 7.4 注：培养基的分装量不得超过容器的 2/3，以免灭菌时溢出。
包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。
(121℃，30min灭菌备用)
3.3采样：将已制备好的培养皿按3.3.1的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
3.3.1采样点的布置：
3.3.1.1采样点的布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置，布置规则如下图：
3.3.1.2工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
3.4培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于30℃～35℃恒温培养箱中培养，时间不少于48h。
3.5菌落计数：用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。
沉降菌检测
微生物检测一、沉降菌：用标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
二、测试方法：采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿（一般多采用90mm直径硼硅酸玻璃培养皿，俗称沉降碟），经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
三、采集的沉降菌为静态检测。
四、所需物料：（1）90mm培养皿：72个；（2）棉拭子：10个；五、沉降菌检测步骤：1、检测布点：生物安全柜（6个）；水平层流台（6个）；调配间（8个）；一更（3个）；二更（3个）；清洗间（3个）；2、通常的检测应在风机开启至少30min以上，紫外线照射30min，关闭紫外灯后开始采样。
3、将培养皿按采样点布置逐个放置，从内向外放置，摆放距离地面不低于60cm，培养皿暴露时间不得少于30min，不得大于4h。
操作台调配间一更/二更/清洗4、全部采样结束后，将二批杨敏倒置放置，随后送至检验科进行培养（2小时内送检）；每批均应有培养基对照实验，检验培养基本身是否污染，可每批做对照实验，与采样皿同法操作但不需暴露采样。
5、注意事项：（1）布置采样点时，至少应尽量避免尘粒较集中的回风口，采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量减少走动；（2）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除；（3）采样时摆放顺序为从里向外，净化台-调配间-二更-清洗间-一更。
回收培养皿时顺序相反。
（4）从检验科取来的培养皿不用时应在冷藏柜（2-8℃）保存。
（5）净化台沉降菌检测可轮流做，不必每个净化台都做检测；（6）二更和调配间均为万级，可轮流做检测；一更和清洗间为十万级，也可轮流做检测。
6、结果测定：（1）每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准的界限；（2）在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次结果均为合格才能判为符合；（3）洁净室沉降技术要求：洁净室沉降菌技术要求六、物体表面检测项目：1、物体表面检测：对静配中心洁净区内的各物体表面（操作台面、门把手、传递窗、大小推车、洁净服等）存在的病原微生物进行监控，达到规定标准，以保证所调配的输液质量。
车间洁净区沉降菌测试办法
4.1检验依据：GB/T16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范4.2方法概述：采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境中的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
4.3仪器和设备：高压蒸汽灭菌锅恒温培养箱培养皿，¢90mm×15mm硅硼酸玻璃培养皿培养基，大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）4.4准备操作：将¢90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。
按比例配置营养琼脂培养基，将其装入三角烧瓶，置于121℃湿热灭菌30min。
将加热溶化并冷却至45℃，在无菌操作要求下将培养基倒入培养皿，一般15ml/皿。
4.5采样方法：将已制好的培养皿按相关要求放置，打开培养皿盖（口向下），使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
4.6培养：全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
大豆酪蛋白琼脂培养基，培养温度34℃，培养时间：2d；沙氏培养基，培养温度：24℃，培养时间：5d。
每批培养基选定3只培养皿做对照培养。
4.6菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
计数时一般透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落。
4.7结果评定：用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
4.8注意事项：4.8.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
4.8.2对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.8.3采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现破损或污染的应剔除。
5.0测试规则：5.1测试状态：5.1.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在技术指标规定值内。
沉降菌检测
沉降菌检测
培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基
培养皿：Φ90培养皿
检测准备：环境消毒后，开空调净化30min后，在采样过程中要开着空调净化系统。
检测：
1、采样点设置：根据环境洁净级别和房间面积设置采样点。
2、每个采样点放置一个装量约20ml的胰酪大豆胨琼脂培养基培养皿4个小时（动态）。
3、培养把培养皿放置30~35℃下培养不少于2天观察。
4、计数：每个房间或每个工作台内采用点数的菌数求平均。
5、限度标准（CFU/皿）.4小时 A级区<1个，B级区≤5个,C级区≤50个,D级区≤100个
注意事项：用记号笔把房间编号，采样点编号记在培养皿有培养基的那边底部，以免混淆。
沉降菌测试方法..
沉降菌测试方法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。
制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。
打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3平均菌落数=.........21nMn M M ++ n —培养皿总数M 1—1号培养皿菌落数M 2—2号培养皿菌落数M n —n 号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试是对洁净室环境中空气中悬浮微粒的数量和种类进行评估的方法之一。
沉降菌测试是通过将培养基暴露在空气中，使空气中的微生物落到培养基上生长，然后计数和鉴定这些微生物来评估洁净室的微生物污染。
以下是一般的洁净室沉降菌测试方法：
1. 准备培养基：选择适用于微生物生长的培养基，如营养琼脂培养基。
按照培养基说明制备培养基。
2. 制备沉降皿：将培养基倒入锅中，加热至液态，然后倒入含有适量培养基的沉降皿中。
3. 安置沉降皿：在洁净室中的代表性位置放置沉降皿，如工作台面、天花板等。
4. 收集样品：根据需要和测试目的，选择适当时间段收集样品。
可以采用定期采样或连续采样的方式。
5. 培养：将采集的样品放置在培养箱中，以合适的温度和湿度条件孵育。
通常情况下，温度为30-37摄氏度，孵育时间为24-48小时。
6. 计数和鉴定：在孵育结束后，观察培养皿中的菌落形成情况，并进行计数。
可以根据菌落的形态和特征，使用显微镜和生化试剂等进行鉴定。
7. 报告结果：根据实验结果，记录沉降菌的数量和种类，并参考相关标准，如ISO 14698等，评估洁净室的微生物污染级别。
需要注意的是，洁净室沉降菌测试方法可能因测试目的、要求和标准的不同而有所差异。
在进行实际测试之前，最好参考相关的测试标准和指南，并根据具体情况进行适当的调整和验证。
沉降菌测定
GB/T 16294--1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法前言本标准依照国内外药品生产管理规范(GMP)的要求,非等效采用美国国家航空及宇宙航行局NASA标准NHB5340--2关于洁净室和洁净工作台微生物的控制标准&;,并参考JGJ--90洁净室施工验收规范制定。
悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室和洁净区空气洁净度的主要指标.本标准用沉降菌评价洁净室和洁净区空气中的微生物。
医药工业洁净室（区）沉降菌的测试应采用本标准的规定。
本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。
本标准的附录D是提示的附录。
本标准由国家医药管理局提出并归口。
本标准起草单位：上海市医药管理局药品测试所。
本标准主要起草人：钱周、步伯荪、沈建华、顾锋、唐小珍。
1、范围本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。
2、引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
YY/T0188.6---1995药品检验操作规程第6部分：药品生物测定法3、定义本标准采用下列定义。
3.1 洁净室(区) clean roon(area)对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
3.2 洁净工作台cleaning work station一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
3.3 洁净度 cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
3.4 菌落colony forming units细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
沉降菌测试方法..
沉降菌测试⽅法..沉降菌测试⽅法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养⽫包在报纸⾥，放⼊恒温烤箱中加热⾄180℃后，⼲烤2⼩时。
2、取X克培养基放⼊X克蒸馏⽔，放⼊⾼压消毒锅中加热溶化，冷⾄45℃时，在⽆菌操作要求下将培养基注⼊培养⽫，每⽫约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平⽫倒置于33℃恒温培养箱中培养48⼩时，若培养基平⽫上确⽆菌落⽣长，即可采样⽤。
制备好培养⽫宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，⼀般在100级层流罩中放置3个培养⽫，在100000级，10000级按⾯积⼤⼩⼀般放2个培养⽫。
打开培养⽫盖，使培养基表⾯暴露0.5⼩时，再将培养⽫盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不⼩于48⼩时，采样点位置离地0.8m—1.5m 左右。
5、将培养⽫举起⽤⾁眼直接计数，⽤记号笔点记然后⽤5—10倍放⼤镜检查是否遗漏，若培养⽫上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养⽫边缘⽣长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换⽓次数、空⽓流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合⽣产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试⼈员必须穿戴符合环境洁净度级别⼯作服，静态测试时，室内测试⼈员不得多于2⼈。
测试时间对单向流100级净化房间及层流⼯作台，测试应在净化空调系统正常运⾏不少于10min后开始，对⾮单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运⾏不少于30min 后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数=.........21nMnM M ++ n —培养⽫总数 M 1—1号培养⽫菌落数 M 2—2号培养⽫菌落数 M n —n 号培养⽫菌落数⽤平均菌落数判断洁净空⽓中微⽣物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
沉降菌检测
洁净区微生物检测操作规程名称：洁净区微生物检测操作规程关键词：洁净区、微生物检测目的：规范洁净区微生物检测背景知识：略原理：略适用范围：100级、1万、10万、30万级洁净区环境。
1.沉降菌检测1)在万级洁净区内的关键操作点和洁净室内每周检测一次沉降菌和浮游菌；在10万级洁净区内其检测频次为每月检测一次。
30万级每季度检测一次沉降菌。
2)由微生物检测员按《养基的配制操作规程的要求配制肉汤琼脂培养基，培养皿使用Φ90mm×15mm，于121℃湿热灭菌20分钟，取出备用。
3)做好洁净区消毒工作，开启洁净区净化空调系统，正常运行不少于30分钟；对单向流如100级的净化工作台和层流罩要在净化系统运行10min后开始。
4)静态测试在除测试人员外，室内无生产人员的情况下进行，动态测试在已处于正常生产状态下进行。
5)采样点布置选用对角线法，要求布置地面四个方向，工作线上左右，关键设备顶上放置一个。
6)万级、10万级、30万级的最少采样点数可按下表确定。
在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表7)百级区只有净化工作台下的局部范围，其面积小于10m2，因此百级区取样点至少为3个。
8)测试人员按洁净室级别规定的程序更换洁净服进入洁净区；静态测试时，室内人员不得多于2人。
9)将制备好的肉汤琼脂培养基按采样点布点位置离地0.8～1.5m处放置，打开培养皿盖，暴露30分钟，检测人员及时填写记录，记录房间温湿度，压差及测试状态。
10)盖好皿盖，将培养皿倒置于恒温培养箱内，在30～35℃中培养48小时，并用3只培养皿作对照。
11)用透射光于培养皿背面或正面仔细观察平皿上所有菌落数，要注意菌落与培养基沉淀物的区别，然后用5～10倍放大镜检查有否遗漏。
12)计算平均菌落数=（M1＋M2……＋Mn）／n，式中M1：1号培养皿菌落数，M2：2号培养皿菌落数，n：培养皿数。
13)用平均菌落数判断洁净室空气中的微生物，洁净区的平均菌落数（静态测试）：100级≤1个/皿，万级≤3个／皿，10万级≤10个／皿，30万级≤15个／皿。
沉降菌检测方法
沉降菌检测方法：
沉降菌检测包括动态检测和静态检测，动态即有人操作及走动，静态即无人操作走动。
做沉降菌检测时，洁净室风机打开，超净台风机打开状态。
大超净台间隔放14个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
小超净台间隔放8个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
洁净室、培养箱室高效过滤进风口下方各放一个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
培养箱最上层、最下层各放一个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
血常规室手术台对角各放一个，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
走廊高效过滤风口下各放一个，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
风淋室对角各放一个，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
二更台子上、衣柜前、门口各放一个，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；一更柜子上放三个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
留两个平皿做阳性（手指摁）对照，两个阴性平皿（不做处理）；
沉降30min后收平皿，标记不同位置的所有平皿后，37℃培养，3天后观察。
沉降菌一个月检测两次，实验室打扫完卫生后1-2天进行检测，每次用琼脂平皿约50-60个。
超净台检测无菌落生长为合格；培养箱检测菌落1个为合格；洁净室菌落小于等于1个为合格；风淋室小于三个菌落合格；二更小于三个合格；一更小于5个合格；阴性0个为合格。
沉降菌检测精品课件
2021/4/26
8
测试方法
3、采样点数目及其布置: 在满足最少测点数的同时,不宜满足最少培养皿数,见表2
2021/4/26
9
测试方法
3、采样点数目及其布置:
（2）采样点的布置:
除受洁净区的设备限制外,取样点应在洁净区均匀布置。
在日常监控时,那些与产品相邻近的区域,以及可能与产 品直接接触的空气及设备附近应考虑增加取样点和取
11、人总是珍惜为得到。21.5.1820:32:4220:32 May-21 18-May -21
12、人乱于心，不宽余请。20:32:4220:32:422 0:32Tu esday, May 18, 2021
13、生气是拿别人做错的事来惩罚自 己。21.5 .1821.5. 1820:3 2:4220: 32:42May 18, 2021
2021/4/26
13
测试方法
4、测试步骤: （2）培养: 全部采样结束,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
32℃培养,时间为72小时。 每批培养基应有对照试验,检查培养基本身是否污染,可
每批选定三个培养皿做对照培养。
2021/4/26
14
测试方法
4、测试步骤: （3）菌落计数: 用肉眼直接计数,然后用5-10倍放大镜检查,是否有遗漏。
样次数(与产品非接触区相比,这些区域应视为关键区):
人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区,需
加强监控。 2021/4/26
10
9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定 。21.5.1821.5.18Tuesda y, May 18, 2021
10、低头要有勇气，抬头要有低气。2 0:32:42 20:32:4220:32 5/18/2021 8:32:42 PM
沉降菌测试方法..
沉降菌测试方法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。
制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。
打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min 后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数=.........21nMnM M ++ n —培养皿总数 M 1—1号培养皿菌落数 M 2—2号培养皿菌落数 M n —n 号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
测试方法
1、使用的仪器设备和培养基: （1）高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。 （2）恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。 （3）培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养
10、低头要有勇气，抬头要有低气。1 2:24:52 12:24:5 212:242 /17/202 1 12:24:52 PM
11、人总是珍惜为得到。21.2.1712:24:5 212:24Feb-211 7-Feb-2 1
12、人乱于心，不宽余请。12:24:5212: 24:5212 :24We dnesda y, February 17, 2021
7、标准:
测试方法
结果评定
用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。 洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。 若某洁净区的菌落数超过评定标准,则必须对此区域先
行消毒,然后重新测试两次,测试结果必须合格。
采样点布置图
9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定 。21.2.17 21.2.17 Wedne sday, February 17, 2021
13、生气是拿别人做错的事来惩罚自 己。21.2 .1721.2. 1712:24:5212:2 4:52Fe bruary 17, 2021
14、抱最大的希望，作最大的努力。2 021年2 月17日 星期三 下午12 时24分5 2秒12: 24:5221. 2.17
15、一个人炫耀什么，说明他内心缺 少什么 。。202 1年2月 下午12 时24分 21.2.171 2:24February 17, 2021
• 基本概念 • 测试原理 • 测试方法 • 结果评定
基本概念
菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一 细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。 沉降菌:用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的 活性微生物粒子,通过专门的培养基在适宜的生长条件 下繁殖到可见的菌落数。
测试原理
每批选定三个培养皿做对照培养。
测试方法
4、测试步骤: （3）菌落计数: 用肉眼直接计数,然后用5-10倍放大镜检查,是否有遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠,可分辨时仍以2 个或2个以上计数。
测试方法
5、注意事项: 测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。 采取一切措施防止人为对样本的污染。 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培
养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的 菌落,必要时用显微镜鉴别。
测试方法
5、注意事项: 采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破
损或污染的应剔除。测试状态: 沉降菌测试前,被测试洁净区的温湿度须达到规定的要
求,静压差必须控制在规定值内。 沉降菌测试前,被测试洁净区己经过消毒。
平皿)带至待测区,将培养皿取出,放置在预先确定取样 点,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5小时,再将培养 皿盖上,盖后倒置。检测时记下培养皿打开的起始时间 和结束时间。
测试方法
4、测试步骤: （2）培养: 全部采样结束,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
32℃培养,时间为72小时。 每批培养基应有对照试验,检查培养基本身是否污染,可
皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
测试方法
1、使用的仪器设备和培养基: （4）培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化,冷却至约45℃在无菌操作条件下将培
养基注入培养皿,每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后,将 培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养 基平皿上确无菌落生长即可供采样用,制备好的培养基 平皿应在2-8℃的坏境中存放。
测试方法
3、采样点数目及其布置: （2）采样点的布置: 取样点一般在离地面0.8-1.0m之间或操作平台的高度。 取样设备会对气流产生干扰,取样时应避免可能对气流
组织的干扰。 尽量避免在回风口附近取样(距离lm以上),且测试人员
应在取样口的下风侧,并尽量少走动。
测试方法
4、测试步骤: （1）采样方法: 用无菌容器(如不锈钢储槽)将预先培养的培养皿(无菌
测试方法
5、注意事项: 测试状态有静态和动态两种,在空调系统验流时、长期
停产恢复生产前、设施设备大修复产前进行静态测试, 在日常监测时进行动态监测。 测试人员:测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。 静态测试时,室内测试人员不得多于2个人。
测试方法
6、结果计算: 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。 平均菌落数的汁算见下式:
测试方法
2、测试时间 对单向流,如A级净化房间内及层流工作台,测试应在净
化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 对非单向流,如B级、C级、D级以上的净化房间,测试应
在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
测试方法
3、采样点数目及其布置: （1）最少采样点数目:沉降菌的最少采样点可按表1确定。
16、业余生活要有意义，不要越轨。2 021年2 月17日 星期三1 2时24分52秒1 2:24:52 17 February 2021
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要 自强不 息。下 午12时2 4分52 秒下午1 2时24分12:24:5 221.2.1 7
谢谢大家
测试方法
3、采样点数目及其布置: 在满足最少测点数的同时,不宜满足最少培养皿数,见表2
测试方法
3、采样点数目及其布置: （2）采样点的布置: 除受洁净区的设备限制外,取样点应在洁净区均匀布置。 在日常监控时,那些与产品相邻近的区域,以及可能与产
品直接接触的空气及设备附近应考虑增加取样点和取 样次数(与产品非接触区相比,这些区域应视为关键区): 人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区,需 加强监控。