DEHP及其代谢产物MEHP对MLTC-1细胞凋亡和类固醇激素合成基因表达的影响
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作 者 简介 ：叶 婷 ，讲 师 ，主 要 从 事 环境 污 染 物 的 毒 理 研 究 作 者 单 位 ：１贵 阳学 院 生 物 与 环 境 工程 学 院 贵 州 省 山 地珍 稀 动 物 与 经 济 昆 虫 重 点 实验 室 ；２ 中 国科 学 院 城 市环 境研 究所 中 国
《环 境 卫 生 学 杂 志 ）２０１８年 ８月 第 ８卷 第 ４期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｈｙｇｉｅｎｅ Ａｕｇ．２０１８，Ｖｏ１．８ Ｎｏ．４
【调 查 研 究 】
ＤＥＨＰ及 其 代 谢 Biblioteka Baidu 物 ＭＥＨＰ对 ＭＬＴＣ一１细 胞 凋 亡和 类 固 醇 激 素合 成 基 因表 达 的 影 响
基 金 项 目 ：贵 州省 大 鲵 可 持 续 利 用 协 同 ２０１１创 新 中 心 （黔 教 合 协 同 创 新 字 ［２０１５］０６）、国 家 自然 科 学 基 金 （２１５０７０９９， ３１６００４４２）、山 东省 自然科 学基 金 （ＺＲ２０１５ＰＢ０１１）、贵 州省 联 合 基 金 项 目（黔 科 合 ＬＨ 字 （２０１４）７ｌ８２）、贵 州 省 高 层 次 创 新 人 才 “百 ”层 次人 才 （黔 科 合 人 才 （２０１６）４０２０号 ）、贵 阳 学 院 引进 人 才启 动 资金 科 研 项 目（２０１６０３７５１１２）
叶婷 董 四君 王佳 杨 丹 杨 大 星 李灿
摘要 ：目的 实验 测评 ＤＥＨＰ及 其 主要代 谢 产物 ＭＥＨＰ暴 露 对 ＭＬＴＣ－１细胞 类 固醇激 素 合 成 关键 基 因 表 达的影 响 。方 法 将 ＭＬＴＣ－１分 别暴 露 于 ＤＥＨＰ（０，１，１０，１００，１ ０００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ）和 ＭＥＨＰ（０，１，１０，１００，１ ０００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ）２４ ｈ，采 用 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ双染 法测 定 细胞 凋 亡 ，并 应 用 荧光 定 量 ＰＣＲ 法分 析 细胞 类 固醇 激 素合 成 过程 中涉及 关键 酶的 基 因表 达 水平 。 结果 凋 亡 实验 结 果 显 示 ＤＥＨＰ（１００和 １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ）和 ＭＥＨＰ（１０ 和 １ ０００￣ｍｏｌ／Ｌ）显著诱 导 ＭＬＴＣ．１细胞 晚期 凋亡 的发 生 ，１ ０００ ｌｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ显 著 降低 了 ＭＬＴＣ．１ 活 力 。所 以本研 究采 用 了较低 的 染毒 浓度 （１，１０和 １００￣ｍｏｌ／Ｌ）对 ＭＬＴＣ一１染毒 ２４ ｈ来评 估 ＤＥＨＰ和 ＭＥ． ＨＰ对 ＭＬＴＣ一１类 固醇合成 通路 的影响 。荧光 定 量结 果显 示 １ ｔｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著增 加 ＭＬＴＣ－１ ＣＹＰ１７Ａ１基 因表 达 水平 ，而 １００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著抑 制 ＭＬＴＣ一１ ＣＹＰ１７Ａ１、ＣＹＰ１１Ａ１和 ＳＦ－１基 因表 达 水平 。１０ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著增 加 ＭＬＴＣ．１外 ＣＹＰ１Ａ１基 因表 达 水 平 。１００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著 抑 制 ＭＬＴＣ－１黄 体 激 素 受 体 ＬＨＲ基 因表 达水 平 。１ Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＭＥＨＰ显 著增加 ＭＬＴＣ一１ ３Ｂ—ＨＳＤ基 因表 达 水平 。然 而 ＭＥＨＰ对 类 固醇激 素 合 成过 程 中一 些 酶如 ＳＴＡＲ、ＣＹＰ１７Ａ１、ＣＹＰ１１Ａ１、重要 调 节 因子胰 岛素样 激 素 ３ ＩＮＳＬ．３、ＳＦ一１、关键 受体 ＡＲ 和 ＬＨＲ基 因表 达水 平均 无显 著影 响 。结 论 ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ诱 导 ＭＬＴＣ．１凋 亡 ，ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ都 可影 响 ＭＬＴＣ．１细胞 类 固醇激 素合 成过 程 中关键 基 因的表 达 ，从 而引起 内分 泌干扰 。
ｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ， ａｎｄ ｒｅａｌ ｔｉｍ ｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｍ ｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍ ＲＮＡ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｋｅｙ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｔｅｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ １００ ａｎｄ １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨ Ｐ ａｎｄ Ｍ ＥＨＰ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｌａｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ＭＬＴＣ－１，１ ０００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨ Ｐ
关键 词 ：邻 苯二 甲酸二 （２一 乙基 己）酯 ；邻 苯二 甲酸单 乙基 己基 酯 ；类 固醇激 素合 成 中 图 分 类 号 ：Ｘ１７１．５ ＤｏＩ：１０．１３４２１／ｊ．ｃｎｋｉ．ｈｊｗｓｘｚｚ．２０１８．０４．Ｏ０１
Ｅｆｌ ｆｅｃｔｓ Ｏｆ Ｄ ＥＨ Ｐ ａｎｄ ｉｔｓ Ｍ ｅｔａｂｏｌｉｔｅ Ｍ ＥＨ Ｐ ｏｎ Ｃｅｌｌ Ａ ｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｉｃ Ｇ ｅｎｅｓ ｉｎ Ｍ ＬＴＣ ．１ Ｃｅｌｌｓ
ＹＥ Ｔｉｎｇ ，ＤＯＮＧ Ｓｉｊｕｎ ，Ｗ ＡＮＧ Ｊｉａ。，ＹＡＮＧ Ｄａｎ ，ＹＡＮＧ Ｄａｘｉｎｇ ，ＬＩ Ｃａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅｓ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＤＥＨＰ ａｎｄ ｉｔｓ ｍａｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｍｏｎｏ（２－ｅｔｈｙｌｈｅｘｙ１）ｐｈｔｈａｌａｔｅ （ＭＥＨＰ）ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｏｎ ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ＭＬＴＣ－１．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ ＭＬＴＣ一１ ｗｅｒｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ＤＥＨＰ （０，１，１０，１００， １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ）ａｎｄ ＭＥＨＰ（０，１，１０，１００，１ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ）ｆｏｒ ２４ ｈ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ａｎ－
《环 境 卫 生 学 杂 志 ）２０１８年 ８月 第 ８卷 第 ４期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｈｙｇｉｅｎｅ Ａｕｇ．２０１８，Ｖｏ１．８ Ｎｏ．４
【调 查 研 究 】
ＤＥＨＰ及 其 代 谢 Biblioteka Baidu 物 ＭＥＨＰ对 ＭＬＴＣ一１细 胞 凋 亡和 类 固 醇 激 素合 成 基 因表 达 的 影 响
基 金 项 目 ：贵 州省 大 鲵 可 持 续 利 用 协 同 ２０１１创 新 中 心 （黔 教 合 协 同 创 新 字 ［２０１５］０６）、国 家 自然 科 学 基 金 （２１５０７０９９， ３１６００４４２）、山 东省 自然科 学基 金 （ＺＲ２０１５ＰＢ０１１）、贵 州省 联 合 基 金 项 目（黔 科 合 ＬＨ 字 （２０１４）７ｌ８２）、贵 州 省 高 层 次 创 新 人 才 “百 ”层 次人 才 （黔 科 合 人 才 （２０１６）４０２０号 ）、贵 阳 学 院 引进 人 才启 动 资金 科 研 项 目（２０１６０３７５１１２）
叶婷 董 四君 王佳 杨 丹 杨 大 星 李灿
摘要 ：目的 实验 测评 ＤＥＨＰ及 其 主要代 谢 产物 ＭＥＨＰ暴 露 对 ＭＬＴＣ－１细胞 类 固醇激 素 合 成 关键 基 因 表 达的影 响 。方 法 将 ＭＬＴＣ－１分 别暴 露 于 ＤＥＨＰ（０，１，１０，１００，１ ０００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ）和 ＭＥＨＰ（０，１，１０，１００，１ ０００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ）２４ ｈ，采 用 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ双染 法测 定 细胞 凋 亡 ，并 应 用 荧光 定 量 ＰＣＲ 法分 析 细胞 类 固醇 激 素合 成 过程 中涉及 关键 酶的 基 因表 达 水平 。 结果 凋 亡 实验 结 果 显 示 ＤＥＨＰ（１００和 １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ）和 ＭＥＨＰ（１０ 和 １ ０００￣ｍｏｌ／Ｌ）显著诱 导 ＭＬＴＣ．１细胞 晚期 凋亡 的发 生 ，１ ０００ ｌｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ显 著 降低 了 ＭＬＴＣ．１ 活 力 。所 以本研 究采 用 了较低 的 染毒 浓度 （１，１０和 １００￣ｍｏｌ／Ｌ）对 ＭＬＴＣ一１染毒 ２４ ｈ来评 估 ＤＥＨＰ和 ＭＥ． ＨＰ对 ＭＬＴＣ一１类 固醇合成 通路 的影响 。荧光 定 量结 果显 示 １ ｔｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著增 加 ＭＬＴＣ－１ ＣＹＰ１７Ａ１基 因表 达 水平 ，而 １００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著抑 制 ＭＬＴＣ一１ ＣＹＰ１７Ａ１、ＣＹＰ１１Ａ１和 ＳＦ－１基 因表 达 水平 。１０ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著增 加 ＭＬＴＣ．１外 ＣＹＰ１Ａ１基 因表 达 水 平 。１００ ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨＰ显 著 抑 制 ＭＬＴＣ－１黄 体 激 素 受 体 ＬＨＲ基 因表 达水 平 。１ Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ ＭＥＨＰ显 著增加 ＭＬＴＣ一１ ３Ｂ—ＨＳＤ基 因表 达 水平 。然 而 ＭＥＨＰ对 类 固醇激 素 合 成过 程 中一 些 酶如 ＳＴＡＲ、ＣＹＰ１７Ａ１、ＣＹＰ１１Ａ１、重要 调 节 因子胰 岛素样 激 素 ３ ＩＮＳＬ．３、ＳＦ一１、关键 受体 ＡＲ 和 ＬＨＲ基 因表 达水 平均 无显 著影 响 。结 论 ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ诱 导 ＭＬＴＣ．１凋 亡 ，ＤＥＨＰ和 ＭＥＨＰ都 可影 响 ＭＬＴＣ．１细胞 类 固醇激 素合 成过 程 中关键 基 因的表 达 ，从 而引起 内分 泌干扰 。
ｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ， ａｎｄ ｒｅａｌ ｔｉｍ ｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｍ ｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｍ ＲＮＡ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｋｅｙ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｔｅｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ １００ ａｎｄ １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨ Ｐ ａｎｄ Ｍ ＥＨＰ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｌａｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ＭＬＴＣ－１，１ ０００ ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ ＤＥＨ Ｐ
关键 词 ：邻 苯二 甲酸二 （２一 乙基 己）酯 ；邻 苯二 甲酸单 乙基 己基 酯 ；类 固醇激 素合 成 中 图 分 类 号 ：Ｘ１７１．５ ＤｏＩ：１０．１３４２１／ｊ．ｃｎｋｉ．ｈｊｗｓｘｚｚ．２０１８．０４．Ｏ０１
Ｅｆｌ ｆｅｃｔｓ Ｏｆ Ｄ ＥＨ Ｐ ａｎｄ ｉｔｓ Ｍ ｅｔａｂｏｌｉｔｅ Ｍ ＥＨ Ｐ ｏｎ Ｃｅｌｌ Ａ ｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｉｃ Ｇ ｅｎｅｓ ｉｎ Ｍ ＬＴＣ ．１ Ｃｅｌｌｓ
ＹＥ Ｔｉｎｇ ，ＤＯＮＧ Ｓｉｊｕｎ ，Ｗ ＡＮＧ Ｊｉａ。，ＹＡＮＧ Ｄａｎ ，ＹＡＮＧ Ｄａｘｉｎｇ ，ＬＩ Ｃａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅｓ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＤＥＨＰ ａｎｄ ｉｔｓ ｍａｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｍｏｎｏ（２－ｅｔｈｙｌｈｅｘｙ１）ｐｈｔｈａｌａｔｅ （ＭＥＨＰ）ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｏｎ ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ＭＬＴＣ－１．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ ＭＬＴＣ一１ ｗｅｒｅ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ＤＥＨＰ （０，１，１０，１００， １ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ）ａｎｄ ＭＥＨＰ（０，１，１０，１００，１ ０００ ｉｘｍｏｌ／Ｌ）ｆｏｒ ２４ ｈ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ａｎ－