生物课件第九章 血清学反应课件PPT.ppt

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（三）最适比与带现象
抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现可见反应。 当抗原抗体比例适当时，两者结合后，尚有未饱和的结 合点，可以继续与游离的抗体、抗原或与抗原抗体的结 合物的未饱和点相联结，逐渐形成愈来愈大的复合物， 出现了肉眼可见反应。比例最适合，出现反应最快，反 应产物愈多。
3.酸碱度
血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使复合 物离群，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。
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二 血清学反应的类型和参与成分
(见课本表9-1)
三 血清学反应的应用方式和目的
抗原抗体反应是特异性的，在应用时必须有一个是 已知的，通过反应来鉴定另一个未知的。例如鉴定某一 病原微生物时，多用已知抗体。诊断传染病时，对慢性 病可用已知的抗原检测未知的特异性抗体；诊断急性病 则用已知的抗体检测未知的抗原（病原），如炭疽病等。
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（一）抗原与抗体的快速检测
在诊断传染病、寄生虫病、变态反应、肿瘤、 自身免疫疾病时，均已广泛应用血清学方法检查抗 体或抗原（细菌、病毒）的存在，作为诊断疾病的 手段。现已应用的间接血凝技术、对流电泳、标记 抗体技术，均能快速、简便的确诊抗原或抗体。
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（四）微生物的鉴定与分析
应用交叉凝集实验、凝集吸收实验、沉淀实验等 血清学实验，进行微生物的鉴定及区别微生物的血清 型，从而确定微生物的类型及其亲缘关系。还可应用 琼脂扩散实验、免疫电泳等技术，对微生物的抗原组 分进行分析。
（五）血型鉴定
用细胞直接凝集实验、血凝抑制实验、溶血实验、 Coomb实验等技术，可作血型鉴定、亲子关系的确定、 新生儿和出生幼畜溶血病的诊断。
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第二节 沉淀试验
可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在 下，形成肉眼可见的絮状白色沉淀，称之为沉淀试验。
可溶性抗原 + 免疫血清
出现沉淀现象
0.85%NaCl
(病毒等) （抗体）
比例适合
沉淀原
沉淀素 比例不适合 无沉淀现象
容易过多
前带现象
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（五）影响反应的因素
1.电解质 血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，
才出现可见反应。在凝集、沉淀反应操作时，一 般用生理盐水或8%—10%高渗盐水作稀释，才出现 较强反应。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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2.温度
温度升高，可增加抗原与抗体分子运动而碰撞接触， 加速反应的出现，故通常将抗原抗体混合后，放置37˚C温 箱或水浴箱中，保持一定时间，促进反应。温度高，加 速反应；温度低，反应时间延长，但反应结合充分，故 在补体结合反应、免疫吸附实验中，采用的低温中放置 过夜。
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一 液相沉淀试验 1．环状沉淀试验 原理：小试管内，下层沉
淀素与上层沉淀原 在液界面应形成白 色沉淀环。 用途：检测皮毛中的炭疽 杆菌抗原（Ascoli试验） 2．絮状沉淀试验 抗原与抗体在试管内混合，在电解质的存在下抗原 抗体复合物可形成絮状凝聚物。此法多用于毒素和抗毒 素测定。
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（二）生物活性物质的超微定量
应用酶联免疫吸附实验、放射免疫等技术，抗原抗体检 测的敏感度均大为提高，已达到能精确测出Pg的水平，其敏 感度已大大超过了常规的化学分析。此类技术已应用于测定 动物体内的激素、维生素、药物及其他病理过程中的微量产 物。
（三）抗原或抗体在细胞与亚细胞水平的定位
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二 琼脂扩散试验
琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水，冷 却后凝固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其孔径大 小与琼脂含量有关，1%琼脂凝胶孔径为85nm，能使许多 可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝胶 中的一定位置上相遇时，则两者结合形成沉淀线。沉淀 线的位置与抗原、抗体颗粒的大小、浓度，沉淀线的数 目和所含抗原组分有关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原 或抗体中一种成分扩散）和双扩散。
第九章 血清学反应
第一节 概 述
一 血清学反应的概念及一般特点
抗原及相应抗体在体内或体外均能发生特异性 结合，在体外结合能发生可见免疫反应。由于抗体 主要存在于血清中，故称为血清学反应。
血清学反应根据抗原性质、反应条件、参与反 应物质，则表现出反应有多种多样。其反应的一般 特点是：
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如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一 开始时即达到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻 抗原、抗体结合，不出现可见反应，谓之区带现象或带 现象。为了避免血清学反应的带现象，需要将抗原或抗 体作适当的稀释。
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（二）结合的可逆性
抗原抗体结合是分子表面结合，这一结 合受理化因素的影响，当温度超过60˚C或pH 降至3以下时，则抗原抗体复合物又重新离 群。离群后的抗原、抗体，其理化性质、免 疫活性保留。利用抗原抗体结合的可逆性， 可进行免疫吸附层析，纯化抗原或抗体。
比例不适合—不能完成第二步反应 —带现象
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（四）反应的阶段性
抗原与抗体进行结合，可分为两个阶段： 第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段，反 应快，几秒钟至几分钟即完成，但无可见反应； 第二阶段为抗原与抗体的反应可见阶段，表现 为凝集、沉淀、补体结合等，反应进行较慢，需几 分钟或更久。第二阶段受电解质、温度、pH值等影 响。两个阶段在反应进行中无严格界限。
用荧光抗体、酶标抗体技术，可以检测病毒或细菌在动 物各种组织细胞中的分布。应用免疫酶组化法及铁蛋白标记 技术进行免疫电镜观察，可以测定病毒在亚细胞水平的定位， 也可测定淋巴细胞表面免疫球蛋白及抗体的产生情况。据此 可分析传染病发生的机制及对免疫机理的探讨。
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（一）特异性和交叉性
血清学反应具有高度特异性。由于抗原决定 簇的组成、结构以及排列不同，所诱导产生的抗 体也不同。抗原只能与相应抗体结合，而不能与 其他抗体相结合。
生物体的组成是复杂的，包含有多种抗原成 分，在进化过程中形成不同的种类，有各不相同 的特异性抗原，在亲缘种系中往往含有部分相同 的抗原成分，能引起交叉反应。