第五章中药制剂的卫生学检查优秀课件

4.结果判断 同时满足以下两个条件可判定培养基的适用性检查符合规 定：
①
②菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
（二）计数方法的验证
1.菌种与菌液的制备 同培养基的适用性检查。
2. 验证方法 验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算
各试验菌每次试验的回收率； 可与供试品的细菌，霉菌及酵母菌计数同时进行。
定容至100ml 混匀
匀浆仪或其他适宜方法 1:10供试液 必要时加适量无菌聚山梨酯80，并置45℃以下水浴适当加 温，使供试品分散均匀。
3．需用特殊方法制备的供试品 非水溶性供试品 膜剂供试品 肠溶或结肠溶制剂供试品 气雾剂、喷雾剂供试品 贴膏剂供试品 其制备方法按药典规定操作。
4.具抑菌活性供试品：采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、 薄膜过滤法、中和法等消除其抑菌活性。
2.验证方法
(1)试验组：1ml最低稀释级供试液+50～100cfu试验菌 (2)菌液组：测定所加的试验菌数 (3)供试品对照组：规定量的供试液 (4)稀释剂对照组：稀释液+试验菌（加入了入乳化剂、分 散剂及中和剂等除稀释液外的试剂或需薄膜过滤处理时）
3.结果判断
在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌数回收率应 均不低于70%。
菌液保存 制备好的菌液以当天使用为宜。若在室温下放置，应在2小 时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉 孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
3.适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50～100cfu， 分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌 平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数； 取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立 即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混 匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数； 取白色念珠菌50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注酵母 浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备2个平皿，混匀，凝固， 置23～28℃培养72小时，计数。 用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
（一）计数培养基的适用性检查
大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌 黑曲霉
白色念珠菌
营养琼脂培养基
玫瑰红营养琼脂 酵母浸出粉葡萄糖琼脂
2. 菌液制备
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的新 鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，培养18～24 小时；
接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良 马丁琼脂培养基中，培养24～48小时。
注意：供试液制备若需加温时，应均匀加热，温度不超过 45℃，时间不得超过30分钟。
（四）检验条件 培养温度：细菌及控制菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母
菌培养温度为23～28℃。 阴性对照：以确定无菌技术的可靠性 阳性对照：检查供试品对控制菌生长有无干扰，培养条件是
否适宜
三、细菌、霉菌及酵母菌计数
上述培养基用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为 50～100cfu（“Colony forming units”的缩写，菌落形成单 位，代表含有的菌落数）的菌悬液。
2.菌液制备 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，
培养5～7天，加入3～5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌 氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管 中，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～ 100cfu的孢子悬液。
（一）计数培养基的适用性检查
1.菌种（5种） 传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻
干燥菌种为第0代） 大肠埃希菌（Escherchia coli） 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus） 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 白色念珠菌(Candida albicans) 黑曲霉(Aspergillus niger)
课堂互动 中国药品生产洁净级别有哪些？其标准要求是什么？
（二）供试品抽样、保存及检验量 按批号随机抽样，抽样量为检验用量的3倍。每批抽样应至 少含有2个以上最小包装单位。 检验量系指每次检验所需的供试品量(g、ml或cm2)。 固体和半固体制剂的检验量为10g；液体制剂10ml； 膜剂为100cm2 (不得少于4片)。 贵重药品、微量包装药品的检验量可酌减。要求检查沙门菌 的供试品，其检验量应增加20g或20ml
（一）计数培养基的适用性检查 （二）计数方法的验证 （三）检查方法 （四）注意事项
（一）计数培养基的适用性检查
基本知识 计数用培养基：营养琼脂、玫பைடு நூலகம்红营养琼脂和酵母浸出 粉葡萄糖琼脂 对照培养基：系指培养基处方特别制备、质量优良的培 养基，由中国药品生物制品鉴定所研制及分发。
检查方法：通过检验用培养基与对照培养基的比较，以 阳性菌的生长状态或特征来评价检验用培养基是否符合 检验要求。
（二）检查项目 1．染菌量（细菌数、霉菌数及酵母菌数） 2．控制菌检查 （包括大肠埃希菌、大肠菌群、沙门
菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌以及白色念 珠菌等）
二、微生物限度检验原则
（一）环境 1．洁净度1万级以下局部100级的单向流空气区域内进行 ； 2．检验过程严格无菌操作； 3．严防第二次污染。
第五章中药制剂的卫生学检查
《中国药典》规定：
1.各种非规定灭菌制剂应进行微生物限度检查法； 2.无菌制剂应依法进行无菌检查； 3.静脉滴注用注射剂应进行无菌、热原及细菌内毒 素检查
一、基本知识
（一）基本概念
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、 辅料受微生物污染程度的方法。
非规定灭菌制剂主要指口服制剂、一般外用制剂。
（三）供试液制备 采用规定的适宜方法制备 1．液体供试品：
供试品10ml+pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 定容至100ml
混匀
1:10供试液 油剂可加入适量无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀； 水溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
2．固体供试品： 供试品10g+pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液