动物性食品中克伦特罗_瘦肉精_残留的检测

（4）试样测定 ①肌肉、肝脏及肾脏试样 称 取 肌 肉 、 肝 脏 或 肾 脏 试 样 10g （ 精 确 到 0.01g）， 用 20mL0.1mol/L高氯酸溶液均浆， 置于膜口玻璃离心管 中；然后置于超声波清洗器中超声20min，取出置于80℃ 水浴中加热30min。 取出冷却后离心（4500r/min）15min。 倾出上清液，沉淀用5mL0.1mol/L高氯酸溶液洗涤，再离 心，将两次上清液合并。 用1mol/L氢氧化钠溶液pH值调 至9.5±0.1，若有沉淀产生，再离心10min将上清液转移至 磨 口 玻 璃 离 心 管 中 ， 加 入 8g 氯 化 钠 ， 混 匀 ， 加 入 25mL 异 丙醇+乙酸乙酯（40+60），置于振荡器上振荡提取20min。 提取完毕，放置5min（若有乳化层稍离心一下）。 用吸管 小心将上层有机相移至旋转蒸发瓶中，用20mL异丙醇+ 乙酸乙酯（40+60）再重复萃取一次，合并有机相，于60℃ 在旋转蒸发器上浓缩至近干。 用1mL0.1mol/L磷酸二氢 钠缓冲 （pH=6.0）充分溶解残 留 物 ，经 针 筒 式 微 孔 过 滤 膜 过 滤 ， 洗 涤 3 次 后 完 全 转 移 至 5mL 玻 璃 离 心 管 中 ， 并 用 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液（pH=6.0）定容至刻度。 ②尿样试样 若 尿 液 浑 浊 先 离 心 （3000r/min）10min， 将 上 清 液 适当稀释后上酶标板进行酶联免疫法筛选试验。 ③血液试样 将 血 清 或 血 浆 离 心 （3000r/min）10min， 将 上 清 液 适当稀释后上酶标板进行酶联免疫法筛选试验。 （5）检测步骤 ①将标准试样（至少按双平行实验计算）所用数 量的孔条插入微孔架，记录标准和试样的位置。 ②加 入100μL稀 释 后 的 抗 体 溶 液 到 每 个 微 孔 中, 充 分 混 合 并 在 温 室 孵 育 15min。 ③倒入孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍 打（每行拍打3次），以保证完全除去孔中的液体。 将 250μL蒸 馏 水 充 入 孔 中 ，再 次 倒 入 孔 中 液 体 ，再 重 复 操 作两遍以上。
④加入20μL的 标 准 或 处 理 好 的 试 样 到 各 自 的 微 孔中。 标准和试样至少做两个平行试验。
⑤加入100μL稀释的酶标记物，温室孵育30min。 ⑥加入50μL酶底物和50μL发色试剂到微孔中，充 分混合并在温室暗处孵育15min。 ⑦加入100μL反应停止液到微孔中, 混合好尽快 在450nm波长处测量吸光度值。 （6）结果计算 用所获得的标准溶液和试样溶液吸光度值与空 白溶液的比值计算。 相对吸光度值（％）=B/B0×100％ 式中：B— ——标准溶液的 吸 光 度 ；B0— ——空 白 （浓 度为0的标准溶液）的吸光度。 将计算的相对吸光度值 （％） 对应克伦特罗浓度 （ng/L）的自然对数作为坐标系统曲线图 ，校 正 曲 线 在 （0.004～0.054）ng （200ng/L ～2000ng/L） 范 围 内 呈 线 性 ， 对应的试样浓度可通过校正曲线算出。 X=（A×f）/（m×1000） 式 中 ：X— ——试 样 中 克 伦 特 罗 的 含 量 ，μg/kg； A— ——试样的相对吸光度值 （％） 对应的克伦特罗含 量 ，ng/L；f— — — 试 样 稀 释 倍 数 ；m— — — 试 样 的 取 样 量 ，g。 计算结果精确到小数点后两位。 二、其他方法 目前，检测瘦肉精的常用方法有高效液相色谱法 （HPLC）、气 相 色 谱-质 谱 法 （GC-MS）、毛 细 管 区 带 电 泳 法 （CE）、高 效 液 相 色 谱-质 谱 联 用 法 （HPLC-MS）、 气 相 色 谱-傅 立 叶 红 外 联 用 法 （GC-FTIR）、薄 层 色 谱 法（TLC）。 而我国结合自己的实际情况，2001年农业部 首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标准。 该 标准选择确定了两种测定方法： 高效液相色谱法 （HPLC）、气相色谱-质谱法（GC-MS）。 1.高效液相色谱法（HPLC） HPLC 法 适 合 测 定 热 不 稳 定 和 强 极 性 的 β- 激 动 剂 及其代谢产物，而且HPLC法可以与柱前提取、纯化及柱 后荧光衍生化反应和质谱（MS）等系统联用，容易实现分 析过程的自动化。 目前，我国已将HPLC法作为检测CLB 残留的半确证性方法，最低检测限范围为（1～15）ng/g，其 优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳 性率低；缺点是样品处理时间长，检测过程繁琐、难以操 作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定限制。
购买时一定要看清该猪肉是否盖有检疫印 章和检疫合格证明。
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③无 效 ：C线 条 不 显 色 ，无 论T线 条 是 否 显 色 ， 该 试 纸均判为无效。
（3）检测对象 猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品。 （4）适用单位 生殖养殖场、屠宰场，农业、贸易等主管部门。 2.酶联免疫（ELISA）法 （1）检测原理 测定的基础是抗原抗体反应。 微孔板包被有针对 克伦特罗IgG的包被抗体。 克伦特罗抗体被加入，经过 孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标记物、标准或试 样溶液。 克伦特罗与竞争性酶标记物竞争克伦特罗抗 体，没有与抗体连接的克伦特罗酶标记物在洗涤步骤 中除去。 将底物（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯 胺）加入孔中孵育，结合的标记酶将无色的发色剂转 化为蓝色产物。 加入反应停止液后使颜色由蓝色转变 为黄色。 在450nm处测量吸光度值，吸光度壁纸与克伦 特罗浓度的自然对数成反比。 （2）试剂 磷 酸 二 氢 钠 、 高 氯 酸 、 异 丙 醇 、 乙 酸 乙 酯 、0.1mol/L 高 氯 酸 溶 液 、1mol/L 氢 氧 化 钠 溶 液 、pH=6 的 0.1mol/L 磷 酸 二 氢 钠 缓 冲 溶 液 、异 丙 醇+乙 酸 乙 酯 （40+60）、针 孔 式 微 孔 过 滤 膜 （0.45μm，水 相 ）、克 伦 特 罗 酶 联 免 疫 试 剂 盒 、96孔 板 （12调×8孔 ）包 被 有 针 对 克 伦 特 罗IgG的 包被抗体、克伦特罗系列标准液（最少5倍比稀释浓度 水 平 ， 外 加1 个 空 白 、 过 氧 化 物 酶 标 记 物 （ 浓 缩 液 ）、 克 伦 特 罗 抗 体 （ 浓 缩 液 ）、 酶 底 物 （ 过 氧 化 尿 素 ）、 发 色 剂 （四 甲 基 联 苯 胺 ）、反 应 停 止 液 （1mol/L 硫 酸 ）、 缓 冲 液
三、展望 根 据 目 前 国 内 外 检 测 CLB 各 种 办 法 的 进 展 情 况 以 及CLB滥用及残留的严峻性，建立多种克服上述各种检 测方法缺点的简便、快速、精确、可实现在线检测的CLB 技术势在必行。 滴金免疫技术（DIGFA）和生物传感技术 （biosensor，BS）是两种快速、高效的残留物分析技术。 其 中，DIGFA技术已成功运用于早孕诊断、弓形虫病诊断、 血吸虫病诊断等，灵敏度及准确度均很理想。 对于生物传感器技术，其原理为当分子识别部分 与被识别物质相接触时，可发生化学变化、热变化、光 变化以及直接诱导电信号，而后利用电学测量方法进 行检测、控制和显示输出。 国外已有用生物传感器技 术 检 测CLB残 留 的 资 料 报 道 ， 其 优 点 是 假 阳 性 率 低 、 高 效、方便。 总之，开发研制出高效、方便、迅速的DIGFA 试 纸 条 和 生 物 传 感 器 是 检 测 CLB 残 留 较 为 理 想 的 方 法 和途径，也是今后的发展趋势。 作者单位【山东省招远市质量技术监督局】 计
技术 TECHNOLOGY 化学计量与分析技术
动物性食品中 克伦特罗（瘦肉精）残留的检测
□赵枫霞 赵金忠
一、样品快速检测方法 1.胶体金检测卡法 （1）特点 ① 操 作 简 单 、 检 测 速 度 快 ， 尿 样 检 测 时 间 约 5min， 组织约10min。 ②无需其他仪器设备。 ③样品量需求少。 ④适用于大量样本的快速步筛。 ⑤结果判断简单明了。 （2）判断结果 ① 阴 性 ：C线 条 显 色 ，T线 条 肉 眼 可 见 ， 无 论 颜 色 深 浅均判为阴性。 ②阳性：C线条显色，T线条不显色，判为阳性。
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化仪的计量要求。 因此，作为B级生化仪使用时，其计 量性能指标有可能优于A级。 这不仅给检定员正确判 断仪器级别带来了困难，也容易让仪器使用者感到迷 惑。 因此，JJG464-1996应着重从计量性能而不是仪器 原理上规定被检仪器的计量性能指标。
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猪肉是否含瘦肉精的快速判断方法
看 该 猪 肉 的 脂 肪 （ 猪 油 ）， 如 该 猪 肉 在 皮 下 就是瘦肉或仅有少量脂肪， 则该猪肉就可能含 有 “瘦 肉 精 （CLB）”。
含有“瘦肉精”的瘦肉外观特别鲜红，纤维 比较疏松，切成二三指宽的猪肉比较软，不能立 于案，瘦肉与脂肪间有黄色液体流出，脂肪特别 薄。 而一般健康的瘦猪肉是淡红色， 肉质弹性 好，瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。
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技术 TECHNOLOGY 化学计量与分析技术
2.气相色谱-质谱法（GC-MS） GC-MS法 的 优 点 是 把 色 谱 高 效 快 速 的 分 离 效 果 和质谱高灵敏度的定性分析有机结合起来，能在多种 残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行 定性、定量分析，而且具有更高的检测极限。 另外，GCMS法与HPLC法相比， 检测灵敏度更高， 假阳性率更 低 。 因 此 ，我 国 将GC-MS法 定 为 检 测CLB的 确 证 性 方 法 （NY/T468-2001）。 3.液相色谱-质谱/质谱法（HPLC-MS/MS） 参 见 SN/T1924-2007 进 出 口 动 物 源 食 品 中 克 伦 特 罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方 法。 本标准适用于动物源性食品肌肉和内脏中克伦特 罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测。 试 样 中 的 药 物 残 留 采 用 pH 值 为 5.2 的 乙 酸 铵 缓 冲 液 提 取， 同时加入β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶进行 酶 解 后 ，提 取 液 经C18 和 SCX 双 SPE 柱 净 化 ， 液 相 色 谱 质谱进行测定，内标法定量。