乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定作业指导书
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定作业指导书一、目的：规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒表面抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒表面抗体。
三、临床意义乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙肝病毒携带者。
感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。
表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈的象征；全程（3针）疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs)的浓度，能够判定免疫效果。
关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值≥10mIU/ml，就有足够的保护作用；高危人群表面抗体浓度值≥100mIU/ml，具有足够的保护作用。
肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值≥100mIU/ml为宜。
四、方法原理本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。
用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。
通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。
抗凝管推荐使用肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。
5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
乙肝病毒核酸定量SOP
1、目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
2、原理本试剂盒采用乙型肝炎病毒(HBV)-核酸释放剂快速裂解、释放血清或血浆样本中的乙型肝炎病毒(HBV)DNA,利用针对乙型肝炎病毒(HBV)核酸保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针，配以PCR反应液，在荧光定量PCR仪上，应用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现乙型肝炎病毒(HBV) DNA的定量检测。
整个试验过程无须单独提取样本中的DNA，只需将血清或血浆样本直接加入PCR反应管中与乙型肝炎病毒(HBV) -核酸释放剂充分混合即可作为PCR扩增的模板，避免了常规样本核酸提取过程中的环境污染。
PCR检测体系含有UNG酶+dUTP防污染措施，将可能的产物污染充分降解，避免假阳性结果。
PCR检测体系含有阳性内对照（乙型肝炎病毒（HBV）内标），通过检测内标是否正常来监测待测样本中是否具有PCR抑制物，避免PCR假阴性。
PCR检测体系含有内参比荧光ROX，用于校正加样误差和管间差异，便于仪器自动分析报告荧光与内参比荧光ROX的比值，使定量更准确。
3、试剂保存及有效期试剂应避光密闭保存于-20±5℃。
试剂盒有效期为12个月，避免反复冻融。
采用泡沫加冰运输5天不会影响产品效期。
4、样本要求4.1. 适用样本类型:血清或血浆样本。
4.2. 样本采集:4.2.1 血清样本采集:用无菌注射器抽取受检者静脉血2ml, 注入无菌收集管，室温不超过4小时，待样本自行析出血清，或直接室温1600rpm离心5分钟分离出血清，转移到1.5ml灭菌离心管中备用；4.2.2血浆样本采集:用无菌注射器抽取受检者静脉血2ml,注入含有EDTA或枸橼酸钠抗凝剂的无菌收集管，立即轻轻颠倒混匀，室温不超过4小时，待样本自行析出血浆，或直接1600pm离心5分钟分离出血浆，转移到1.5ml灭菌离心管中备用。
乙肝dna定量检测质控行标
乙肝dna定量检测质控行标
乙肝DNA定量检测的质控行标是指用于确保检测结果准确可靠的内部参照物或校正因子。
常用的乙肝DNA定量检测质控行标有以下几种：
1. 标准曲线法：通过制备一系列已知浓度的乙肝DNA 标准品，构建标准曲线。
然后将待测样品的乙肝DNA浓度与标准曲线进行比对，从而确定其浓度。
2. 外源引物法：引入一个外源的DNA序列作为内部参照，与待测样品中的乙肝DNA一起扩增。
通过比较外源引物的扩增效率和乙肝DNA的扩增效率，计算出乙肝DNA的浓度。
3. 内部控制法：在PCR反应中加入一个内部控制（IC），它与待测样品一起扩增。
这个内部控制可以是一个稳定且数量已知的基因或DNA序列。
通过比较内部控制的扩增效果和乙肝DNA的扩增效果，计算出乙肝DNA的浓度。
以上方法都需要在实验过程中采用合适的技术和试剂来进行准确测量，并且需要严格控制实验条件和标准操作流程，以确保可靠的定量结果。
具体的质控行标选择应根据实
验室设备和试剂的可用性以及实验要求来确定。
乙型肝炎病毒(HBV)实时荧光定量PCR
乙型肝炎病毒（HBV ）实时荧光定量PCR［目的要求］掌握血清中HBV-DNA的提取方法及原理；HBV-DNA实时荧光定量PCR的测定原理;HBV-DNA实时荧光定量PCR实验操作及结果分析了解核酸测定引物设计原理；实时荧光定量PCR仪的工作原理及操作。
［教学时数］讲授2学时，实验6学时。
［讲授内容］血清中病毒DNA的提取方法和原理；实时荧光定量PCR的测定原理；核酸测定引物设计原理；HBV-DNA测定引物设计思路；HBV-DNA荧光定量PCR试剂组成、相应作用及反应混合液配制；实时荧光定量PCR仪的工作原理及操作［实验内容］分组提取血清中HBV-DNA ；配制反应液并上机操作，实时观察，结果分析；实验结果讨论;实验总结［自学内容］“感染性疾病的分子诊断”实验指导（自编）实验乙型肝炎病毒（HBV）实时荧光定量PCR【原理】Real time PCR是普通PCR的一项改进，使用了针对扩增DNA的荧光物质，使得DNA的数量与检测到的荧光强度成线性关系，大致得到DNA的扩增曲线，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
即对DNA靶分子的起始拷贝数进行定量的核酸检测。
该方法精确、灵敏、特异性强、污染途径小、自动化程度高、操作简单。
是国际公认的核酸分子定量的标准方法。
它已逐渐代替了Northern blotting 以及semi RT-PCR 技术。
本实验从HBV携带者或者乙型肝炎患者血清中抽提HBV基因组DNA，采用核酸扩增结合TaqMan 荧光探针技术，利用一对乙肝病毒特异性引物和一特异性结合于扩增区另一位点的TaqMan 探针，实现对乙肝病毒模板的扩增和检测。
使用商品化试剂盒：HBV实时荧光定量试剂盒, 深圳匹基公司（PG, Biotech.）。
针对表面抗原S基因，设计一对引物和一个探针。
TaqMan 荧光探针技术中，两个荧光染料标记在探针上，一个叫报告基团（R） , 一个叫淬灭基团（Q）。
当两个荧光基团都连在探针上时，报告基团的荧光被淬灭基团抑制。
乙肝病毒核酸检测(金豪)作业指导书
HBV-DNA检测（PCR）作业指导书1. 目的：规范本中心对乙型肝炎病毒DNA定量检测的方法细则。
2. 范围：乙型肝炎病毒DNA定量检测。
3. 职责：3.1 检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测。
3.2 复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核。
3.3 科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。
4. 方法：实时荧光PCR法5. 仪器：博日FQD-48(M4)荧光定量PCR仪6. 试剂与材料6.1 试剂来源：北京华大吉比爱生物技术有限公司，试剂有效期为12个月。
6.2 材料：PCR所使用的吸管、试管、加样枪头以及微量离心管都应一次性使用。
特别是微量离心管和试管都应为无菌。
6.3 可调移液器（0.5～10ul、10～200ul、100~1000ul）应该用重量法效正后再使用。
7．操作步骤7.1 样本要求：7.1.1、血清：1600rpm20分钟分离全血取血清；7.1.2、血浆：EDTA抗凝剂，1600rpm20分钟，分离血浆。
7.2样本处理7.2.1、待测血清/血浆及对照个100ul，分别加至1.5ml离心管中；7.2.2、再加100ul浓缩液，振荡混匀，13000rmp10分钟，弃上清液；7.2.3、然后加入10ul内参对照品，50ul核酸提取液；7.2.4、100℃干浴或沸水浴10分钟，13000rmp离心10分钟，吸取上清液备用。
7.3扩增试剂准备7.3.1、核酸反应液振荡混匀，2000rpm10秒；7.3.2每管加入反应液25ul；(样本数+1管阴性对照+1管强阳性对照+1管弱阳性对照+4管工作标准品)7.3.3加样：加入处理过的样品个5ul，盖紧管盖，2000rpm10秒。
7.4 PCR 扩增反应程序如下：仪器检测通道选择：HBV发光荧光基团为FAM,淬灭荧光基团为TAMAR荧光素,参考荧光基团为Rox荧光基团。
8. 结果判断：分析软件自动结合,4个定量校准品制定标准曲线，并计算各样品的结果。
达安HBV-DNA定量试剂说明书
1 目的规范LightCycler荧光PCR检测仪检测乙型肝炎病毒（HBV-DNA）的检验工作，指导检验人员正确进行乙肝病毒核酸定量的检测，保证检验结果的质量。
2 范围本规程适用于LightCycler荧光PCR检测仪检测乙型肝炎病毒（HBV-DNA）3 试剂中山大学达安基因公司乙肝病毒(HBV)核酸扩增荧光检测试剂盒4 仪器Roche LightCycler荧光PCR检测仪高速台式冷冻离心机微量加样器（覆盖1-1000μl）5 样品处理样品处理按《PCR实验室标本处理规程》进行收集和处理，具体操作见本规程附录1和附录2。
6 测定6.1 PCR扩增6.1.1 打开稳压器电源，再打开计算机电源。
6.1.2 打开扩增仪电源，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。
6.1.3 将循环条件设定为：6.1.4 检查反应管是否盖紧，以免荧光物质泄漏污染仪器。
6.1.5 将待反应的PCR反应管放入扩增仪中，并根据实际情况和仪器操作规程在程序中定好反应孔位置。
6.1.6 关闭扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。
6.1.7 扩增结束后关闭扩增仪电源，取出PCR反应管，密封放入垃圾桶。
6.2 产物分析6.2.1 条件设置：反应结束后自动保存检测数据文件，调整荧光数值为F1/F2。
点击Quantification读取结果。
6.2.2 基线的确定：取3～8个循环的荧光信号。
6.2.3 噪声容限（阈值）：调节在阴性质控品以上，要求在Step3：Analysis下相关性r值＜-0.97，接近-1.0。
6.2.4 对照标准：保证阴性质控品的Ct值不出现任何数值（默认为40）。
6.2.5 最后记录仪器自动分析计算出的未知标本数值（M），关闭计算机。
7 结果判断7.1 如果Ct值＝40，则实验样品的UU DNA含量（基因拷贝数/ml）＜1×103。
7.2 如果Ct值＜40，则实验样品的UU DNA含量（基因拷贝数/ml）＝ M7.3 检测样本中核酸阳性时，按实际结果报告；对可疑结果应复查，需要时与临床联系。
血清乙型肝炎病毒e抗原检测ELISA-检验科免疫室作业指导书
血清乙型肝炎病毒e抗原检测ELISA1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗原（HBeAg）。
2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBeAg微孔板，HBeAg酶标记抗原，HBeAg阳性对照血清，HBeAg 阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：Rayto7.3仪器型号：RT-2100C8.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl 于相应孔中。
8.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50μl，轻拍混匀。
8.6温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：每孔加入底物A、B各50μl，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
乙型肝炎病毒核酸定量检测操作程序
乙型肝炎病毒核酸定量检测操作程序
标本编号：操作时间：操作者：
1、将浓缩液及样品从-20℃取出，平衡至室温（ - ）。
2、用移液器加（）ul血清到（）ul浓缩液，振荡混匀。
3、将混匀好的标本放入高速冷冻离心机（）转离心（）分钟。
4、弃上清，沉淀中加入（）ul DNA提取液混匀。
5、（）℃恒温（）分钟（10±1分钟）。
6、（）转离心（）分钟，备用。
7、吸取（）ul上清到反应管，瞬时离心（）秒。
8、将反应管通过传递窗到产物扩增区准备扩增。
9、用ABI 7500扩增仪进行扩增.
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精品文档交流。
《乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒(1 2型)核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)操作规程》.
乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1+2型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）操作规程1.目的规范核酸检测试验操作，确保检测结果的准确性。
2.原理2.1 汇集：吸取8份（或以下）样品到指定的汇集管。
2.2提取：病毒核酸提取的方法为磁珠法。
试剂盒提供之内对照(IC)为不具感染性的假病毒，在进行样品核酸提取前加入样品中，监控提取、扩增和分析的全过程。
标本经裂解液处理后会将病毒外鞘膜破坏，蛋白质变形，使病毒裂解释放出病毒基因组核酸。
加入表面包被有二氧化硅的磁珠颗粒，在高盐环境下带负电荷的核酸吸附到带正电荷的的磁珠颗粒表面。
洗液可以洗去未结合的物质，如变性的蛋白、细胞碎片、PCR抑制物等并降低盐浓度。
纯化的病毒在特定的环境下从磁珠颗粒表面洗脱下来成为扩增的模板。
2.3扩增：采用PCR扩增TaqMan荧光探针标定技术同时对HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV（RNA）进行检测。
在反转录酶的作用下HCVRNA、HIVRNA反转录成cDNA，再与HBVDNA一同通过TaqDNA聚合酶的作用扩增病毒核酸的保守区域，TaqDNA聚合酶5`—3`外切酶活性切割反应系统中带荧光标记的TaqMan探针，随着PCR的进行，荧光信号不断积累。
通过PCR仪的检测血液标本达到和超过荧光阈值的信号给出样品的阴阳性结果。
选择性PCR扩增：采用UNG-dUTP抗污染系统。
在PCR扩增系统中采用UTP代替TTP，产生大量U-DNA片段。
UNG酶特异识别U-DNA片段中含UTP的位点并进行切割，U-DNA被降解后不能作为再次扩增的模板，系统选择性的扩增天然的核酸分子，从而防止了PCR扩增产物的污染。
2.4 质量控制原理为监控实验进行，保证实验结果的准确，在每次检测过程依靠阳性、阴性质控品以及内标进行监测。
2.4.1阴性质控品监控系统性假阳性，如果阴性质控品检测结果为阳性，说明实验存在假阳性的风险，因此实验中的阳性结果需复查。
HBeAb半定量测定-检验科免疫室作业指导书
HBeAb半定量测定1.原理抗原或抗体包被的微粒子，是由多孔高分子粒子制成，具有很好的亲水性，悬浮性极佳，微粒子可与玻璃纤维不可逆结合，从而提高了反应的特异性。
标本与微粒子以一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，以反应终了后，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其它的不要成份，加入基质液，基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。
当该物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的分化率，从而决定被测物质的浓度。
2.标本采集：2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2标本种类：血清或血浆。
2.3标本要求：采集血清样本，取被检者静脉血，用无菌取血针抽取病人静脉血3ml，收集干燥试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用.采集血浆样本，用无菌取血针取被检者静脉血3ml，收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。
3.标本储存：待测样本室温不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
6.试剂：6.1试剂名称：HBeAb诊断试剂盒。
6.2试剂生产厂家：美国雅培制药有限公司6.3包装规格：100Test/kit6.4试剂盒组成：HBeAb诊断试剂。
6.5试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8℃条件，有效期12个月。
7.仪器设备：7.1仪器名称：AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家：美国雅培公司7.3仪器型号：AXSYMTm型7.4仪器校准：本仪器校准由厂家工程师负责校准。
8.操作步骤：8.1样本处理：取待测样本血清或血浆置于样本杯中(不能有纤维蛋白，不能有气泡)。
8.2仪器准备：检查纤维杯，反应杯数量满足实验需要，废物桶和废液桶是否连接好，仪器的光路是否正常，环境温度是否符合要求，打印机的连接。
HBV-DNA检测标准操作程序
2.3 吸取已编号的待测血清或血浆样本、试剂盒中的阴性对照、强阳性对照、临界阳性对照及定量标准品（1→）各200μl,分别加入到1.5ml离心管中，在离心管上编好号，振荡混匀。
2.4 56℃温浴15-2Omin,期间颠倒混匀数次。
2.5 加入200Ul无水乙醇，充分混匀，将全部液体转入装有2ml收集管的硅胶柱中，IoOoorPm离心Imin,倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
2.6 在硅胶柱中加入500Ul溶液Wl（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），1000OrPm离心Imin,倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
2.7 在硅胶柱中加入500Ul溶液W2（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇），1000OrPm离心Imin,倒掉收集管中的废液，将硅胶柱重新放入收集管中。
2.8 在硅胶柱中加入500Ul溶液W2（使用前先检查是否加入相应体积的无水乙醇）,IoOOOrPm离心Imin,倒掉收集管中的废液。
2.9 将硅胶柱放入收集管中，1200OrPm空管离心3min,丢弃收集管。
2.10 将硅胶柱放入新的1.5ml离心管中，开盖静置L2min,往硅胶柱中心加入80Ul 的TE洗脱液，静置2-5min,1200OrPm离心2min,丢弃硅胶柱，盖好离心管盖，做好相对应的编号。
（注意：TE洗脱液的体积应不少于50ul,体积过小影响回收率。
为增加基因组DNA的回收率，可将TE洗脱液稍微加热。
获得的DNA应保存在-20°C,以防DNA降解。
）3 .加样（在样本处理区进行）3.1 向设定的n个PCR反应管中分别加入步骤1处理好的样品DNA、强阳性对照、临界阳性对照、阴性对照以及定量标准品（4个）各20μ∣,盖紧管盖，稍做离心。
3.2 将PCR反应管转移到检测区，放入相应的荧光PCR检测仪内，记录样品摆放顺序。
4 .PCR扩增（检测区）4.1 循环条件设置使用ABI7500和Line-Gene9660荧光PCR检测仪时循环程序设置如下：1150℃2min无2195℃9min无34595℃15sec无58℃50sec单次采集荧光4138℃10sec无■阴性对照无定量值出现，且内标Ct值W40；■强阳性对照检测值范围(3.16X105-3.16X106),临界阳性对照检测值范围(3.16×101-3.16×102),且内标Ct值W40。
乙型肝炎病毒表面抗原测定(绝对定量)标准操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原测定(绝对定量)标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：乙型肝炎病毒表面抗原测定(HBsAg II quant)；组合项目申请：乙肝病毒项目组合。
临床医生根据乙肝患者抗病毒疗效监测需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，置含分离胶的真空采血管（黄盖管）。
2.1.2采用电子检验申请单，血标本试管粘贴附患者信息的条形码。
2.1.3标本采集后，通过LIS及标本条形码管理系统记录标本采集时间。
2.1.4标本采集后及时运送至实验诊断中心。
由标本处理中心负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.3其他如标识涂改、标本试管破裂等。
注：严重溶血或脂浊的标本,应在检验报告中标注标本状况，并建议复查；并在工作日志中记录。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（20℃～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2℃～8℃）7天，-20℃3个月。
样本可以冻存5次。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2℃～8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理用免疫学方法定性测定人血清或血浆中的针对乙肝病毒表面抗原。
采用双抗体夹心法原理，①第一次孵育：将含有样本，两种生物素化的anti-HBsAg单克隆抗体与钌复合体标记的一种anti-HBsAg单克隆抗体和anti-HBsAg多克隆抗体形成一种夹心复合体；②第二次孵育：加入链霉亲合素包被的微粒后抗原，该复合体通过生物素与链霉亲合素的相互作用与结合；③将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面，未与磁珠结合的物质通过Procell被去除。
乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测标准操作规程
乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的: 规范乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围: HBV DNA 荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司乙型肝炎病毒（HBV）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。
5. 内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法。
5.2 实验原理：用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测乙型肝炎病毒DNA。
5.3 性能参数：5.3.1 精密度：检测下限为5.0x102IU/ml。
5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108IU/ml。
5.4 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集5.4.1 标本类型：血清。
5.4.2 标本采集：用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2毫升，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.4.3 标本保存：标本可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月，应避免反复冻融。
5.4.4 运送条件：标本运送采用0℃冰壶。
5.4.5 标本拒收标准：污染、严重溶血、脂血类或肝素抗凝剂标本。
5.5 设备和试剂：5.5.1 设备： DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱/干式恒温器、冰箱（4℃、-20℃）、移动/固定紫外灯、冷冻离心机。
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)操作说明
1 弱阳性血清对照 100μl/管 0 1 定量校准品 1 号 15μl/管 7 1 （7.5×10 IU/ml） 1 定量校准品 2 号 15μl/管 6 2 （7.5×10 IU/ml） 1 定量校准品 3 号 15μl/管 5 3 （7.5×10 IU/ml） 1 定量校准品 4 号 15μl/管 4 4 （7.5×10 IU/ml） 1 定量校准品 5 号 15μl/管 3 5 （7.5×10 IU/ml） 注：不同批号试剂盒中各组份不能互换。 自备实验耗材：适用规格的离心管、微量移液器等。
乙型肝通用名称：乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 英文名称：Diagnostic Kit for Quantification of Hepatitis B Virus DNA (PCR-Fluorescence Probing) 【包装规格】 32 人份/盒 【预期用途】 乙型肝炎病毒是乙型病毒性肝炎的病原体，具有较强传染性，传播途径复杂，流行面广，发病率高等特点，可导 致急慢性乙型肝炎，淤胆型肝炎，严重的可导致急性肝衰竭，临床上主要表现为肝功能损害，部分患者可有黄疸。隐形感 染较为常见。 目前临床上常用的 HBV 检测方法主要有酶免疫法、化学发光法检测 HBV 标志物和核酸检测 HBV DNA 方法。本试剂 盒定量检测人血清和血浆样本中的乙型肝炎病毒 DNA，主要是通过对乙肝患者血中 HBV DNA 基线水平和变化情况的监测， 用于评估抗病毒治疗的应答和治疗效果监测。检测结果仅供临床参考，不能作为患者病情单独的评价指标，必须结合临床 表现和其他实验室检测指标对患者病情进行评价，亦不能作为血液筛查 HBV 病毒的筛查试剂使用。 【检验原理】 本品基于 TaqMan 探针实时荧光 PCR 技术。在 PCR 反应过程中，同时利用 Taq 酶的 5’→3’聚合酶活性和核酸外 切酶活性， 使得 TaqMan 探针降解， 荧光报告基团和淬灭基团分离使得荧光信号发射， FAM 荧光检测乙型肝炎病毒， JOE/RED 610 nm 波长通道检测内参。 本品使用外源性内参，可以监控和避免由于样本中的 PCR 抑制物或操作不当引起的“假阴性”结果。 【主要组成成份】 每个反应 组份名称 装量 主要成份 中的用量 1 2 3 4 5 6 7 8 9 核酸提取液 A 核酸提取液 B 内参 MgCl2 PCR缓冲液A Taq酶 HBV引物探针 阴性对照 阳性血清对照 3×1.1ml/管 2×1ml/管 160μl/管 450μl/管 480μl/管 160μl/管 320μl/管 100μl/管 100μl/管 100μl 50μl 3μl 13μl 15μl 5μl 10μl － － － 7 μl 7 μl 7 μl 7 μl 7 μl 聚 乙 二 醇 、 NaCl NaOH、SDS、Tween-20、 Chelex-100 合成病毒 MgCl2 Buffer、dNTPs Taq酶、UNG酶 HBV 引物和探针，内参 引物和探针 HBV 阴性血清 HBV 阳性血清 HBV 阳性血清 寡核苷酸片段 寡核苷酸片段 寡核苷酸片段 寡核苷酸片段 寡核苷酸片段 【储存条件及有效期】-20℃保存12个月。探针若单独储存，应注意避光。 【适用仪器】 本品适用于 AB 7300/7500/Mx3000P/LightCycler 480/SLAN 实时荧光定量 PCR 仪。 【样本要求】 用一次性的针筒抽取病人静脉血 1ml，置于灭菌的一次性试管中室温自然凝固或 800～1600g 离心 20 分钟，取分离出的 血清 0.2ml 左右送检。血清标本 2～8℃可放置 72 小时，-70℃可长期保存，标本不宜反复冻融。 【检验方法】 1. 试剂配制 按样本数（样本数＝待检血清样本数＋血清对照品 3 个＋定量校准品 5 个）n 配制反应液： 取 PCR 缓冲液 A n×15μl、HBV 引物探针 n×10μl、Taq 酶 n×5μl、MgCl2 n×13μl 至于一离心管中混匀；低速离
乙型肝炎核心抗体定量检测
乙型肝炎核心抗体定量检测（Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen，anti-HBc/CORE）1、检验目的检测HBcAb主要是用于乙型肝炎的的诊断、了解乙肝病毒感染者的感染状况，另外还用于乙型肝炎的流行病学调查。
2、方法原理采用了美国雅培公司的专利技术—微粒子酶免疫分析（MEIA），即以HBcAg包被微粒子（M-Ag）与标本中的HBcAb形成M-Ag-Ab 复合物，当复合物被转移到纤维杯上时，微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上，并与加入的碱性磷酸酶标记HBcAb 结合，洗去未结合的游离物质，加入底物—四甲基伞形酮磷酸盐，碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光，通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。
3、性能指标MEIA定量检测HBcAb不精密度CVs为5.8-10.4%，检出限<1.0 PEI unit/ml），灵敏度1.0 PEI unit/ml，特异性对99.9%。
4、标本收集4．1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4．2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4．3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放臵于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
4．4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4．5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
HBV、HCV检测规程
乙型肝炎病毒核酸定量检测1原理本试剂盒用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（TAQ酶）、核苷酸单体（DNTPS）等成分，用PCR体外扩增法定量检测乙型肝炎病毒DNA。
2 标本种类及收集要求2.1 标本采集2.1.1标本种类：血清或血浆。
2.1.2标本要求：血清——用一次性无菌采血针抽取受检者静脉血2ml，注入无菌的干燥生化管，使用水平离心机，3000rpm离心10min;吸取上层血清，转移至1.5ML进口灭菌管。
血浆——用一次性无菌采血针抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA（乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5~10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，3000rpm离心10min;吸取上层血浆，转移至1.5ML 进口灭菌管2.2 标本储存：标本可立即用于测试，也可以保存与—20℃待测，保存期为6个月。
2.3标本运输：密封，室温运输。
2.4标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
3试剂3.1 试剂名称：乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）3.2 试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司。
3.3 包装规格：20人份/盒3.4 试剂盒组成DNA浓缩液，DNA提取液，PCR反应管，HBV临界阳性质控品，HBV强阳性质控品，阴性质控品，HBV阳性定量参考品（1.0×104IU/ml、1.0×105 IU/ml、3.5试剂储存条件及有效期：-20℃避光保存，有效期6个月。
4 仪器设备4.1 仪器名称：生物安全柜(Ⅱ级)、高速冷冻离心机、荧光定量PCR仪、恒温金属浴。
4.2 仪器厂家：上海培清、美国NUAIR公司、美国eppendorf、美国ABI生物技术公司、广州达安基因有限公司。
4.3 仪器型号：ABI7300、DA7600。
5 操作步骤5.1 DNA提取：5.1.1 标本处理（血清和血浆标本处理相同）-取100ul血清加入等量DNA浓缩液，振荡器振荡混匀5sec；12，000rpm离心10min；去上清，沉淀中加入30ul DNA 提取液，振荡器剧烈振荡混匀5-10sec，瞬时离心数秒，100℃恒温处理10±1min；12，000rpm离心5min，备用。
(2024版)乙肝SOP
可编辑修改精选全文完整版【标本的采取和保存】采静脉血2ml,分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐【检验原理】乙肝五项检测卡（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗HBsAg单抗（AU-SAbI）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG。
检测阳性样本时，样本中HBsAg与胶体全标记抗体结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成"Au-sAbl-HBsAg-sAb2"夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠I g G结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBsAb金标试条利用双抗原夹心法原理，在玻璃纤维纸上预包被金标表面抗原（重组抗原）（Au-SAg）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被（重组抗原）HBsAg和羊抗HBsAg。
检测阳性样本时，样本中HBsAb 与胶体全标记表面抗原结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包破的表面抗原结合形成"Au-sAg-HBsAb-sAg"夹心物而凝聚显色，游离金标抗原则在对照线处与羊抗HBsAg结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBeAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤雄素膜上预包被金标鼠抗HBeAg单抗(Au-eAbl),在硝酸纤维素膜上的检测线和对照线处分别包被鼠抗e单抗(eAb2)和羊抗鼠IgG。
检测时，样本中的eAg可与胶体金标记抗体结合形成免疫复合物，在层析作用下复台物沿膜带移动，经过检测线时与预包被的抗体形成&Ab2-eAg-eAbl-Au”夹心物而凝聚显色;阴性样本仅在对照线处显色。
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乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。
3. 职责3.1 操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。
3.2 专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
3.3 实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4. 原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值(CT)实现对未知样品的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5. 样品要求5.1 适用样品类型：血清或血浆。
5.2 样品采集：5.2.1 血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA（乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml灭菌离心管。
5.3 样品保存和运送使用专用样品0℃冰壶送检，温度约维持在4℃左右。
分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
5.4 拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。
6. 仪器和试剂6.1 仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
6.2 试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司产品标准批号：YZB/国7265-2013线性范围：100 IU/ml-5×108 IU/ml最低检出限及定量限：最低检出限浓度为30 IU/ml，最低定量浓度为100 IU/ml。
试剂各组分见表1：表1 试剂盒组分表7. 操作步骤7.1 试剂准备（试剂储存和准备区）7.1.1 进入试剂准备区，打开通风设备，按照消毒清洁程序擦拭实验台面。
7.1.2 取出N个（N=待测样品数+8 =待测样品数+ 4个HCV阳性定量标准品+HCV强阳性质控品+HCV临界阳性质控品+阴性质控品+空白孔）PCR反应管，HBV单人份扩增体系配制如下表2：表2 反应液配制表将各组分充分混匀，混合好后进行瞬时离心将管壁上的液体全部离心至管底，之后将30 ul扩增体系分装到PCR反应管，反应液分装时尽量避免产生气泡，盖紧管盖，经传递窗传递到标本制备区。
7.2 DNA提取（标本制备区）7.2.1 进入标本制备区，从传递窗中取出PCR反应管，将其放入标本制备区冰箱冷藏。
7.2.2 从冰箱取出待测样品、阴性质控品、强阳性质控品、临界阳性质控品、DNA提取液Ⅰ和内标液，放入生物安全柜内室温溶解，备用。
7.2.3 打开金属浴，调节温度为100℃，使仪器自动升温。
7.2.4 用镊子夹取按需要量准备的1.5 ml灭菌离心管放于安全柜内离心管架上，所需离心管数为样品数+8。
7.2.5向离心管中各加入450 ul DNA 提取液Ⅰ和4 ul内标溶液，再按编号加入200 ul样品，离心管与样品对应编号，每个离心管的编号方向都要朝向管口开启的方向。
用振荡器剧烈震荡混匀15s，瞬时离心数秒。
7.2.6将离心管放入金属浴，100℃恒温处理10±1 min。
（摆放离心管时，离心管开口要背向人放置。
）7.2.7 温育10min后，用镊子从金属浴中取出所有离心管，室温静置冷却。
12000g，离心5min，备用。
（摆放离心管时要将离心管开口朝向内侧。
）7.2.8 从标本制备区冰箱冷藏室取出分装好的HBV DNA PCR反应管，向对应编号的PCR管中加入处理好的的样品（包括样品、阴性质控品、阳性质控品、临界阳性质控品）上清液各20 ul，空白对照不加模板，盖紧反应管。
8000rpm离心数秒，经传递窗移至扩增检测区。
（用移液枪小心吸取上清液，尽量不要碰到底层沉淀。
）7.3 PCR扩增（扩增区）7.3.1 从传递窗中取出PCR反应管，放入仪器样品槽内。
7.3.2 按对应顺序设置空白管、阴性质控品、阳性室内质控品、临界阳性质控品、阳性定量参考品及待测样品，并在“sample name”一栏中设置样品名称，探针检测模式设置：Reporter Dye1：FAM，Quencher Dye1：none；Reporter Dye2：VIC，Quencher Dye2：none；Passive Reference：Rox。
具体设置方法参考《AB 7500核酸扩增仪标准作业指导书》。
7.3.3 打开Run窗口设置循环条件：93℃ 2 min；93℃ 45 s → 55℃ 60 s，10个循环；93℃ 30 s → 55℃ 45 s，30 个循环。
7.3.4 保存文件，运行仪器。
8. 结果分析8.1 反应结束后，操作人员可根据实际情况自行调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值。
Start值可以在3-15，End值可设在5-20。
在Log图谱窗口设置的Threshold的Value值，使基线位于扩增曲线指数期，调整阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线，点击Analysis自动获得分析结果在Report界面查看结果，记录样品数值（C）。
8.2 如果在FAM检测通道扩增曲线无明显对数增长期或CT值等于30，在VIC检测通道扩增曲线有对数增长期，则判定样品的HBV DNA浓度小于检测灵敏度。
8.3 如果在FAM检测通道扩增曲线有对数增长期且CT值小于30，则按以下方法判断：（1）若样品的C﹤100，则样品的HBV DNA浓度﹤100IU/ml；（2）若样品的100﹤C﹤5.0E+008，则样品的HBV DNA浓度＝C IU/ml；（3）若样品的＞5.0E+008，则样品的HBV DNA浓度＞5×108 IU/ml；如需要精确定量结果，可将样品用阴性质控品稀释到线性范围后在检测。
则该样品的HBV DNA浓度＝（C×稀释倍数）IU/ml。
9. 质量控制每次实验均需检测阴性质控品、HBV 强阳性质控品、HBV临界阳性质控品。
质控品结果满足质量控制要求时方可进行检测结果的判断。
9.1 试剂盒自带质控（1）阴性质控品：FAM检测通道扩增曲线无明显对数增长期或CT值＝30，VIC检测通道扩增曲线为明显对数增长期；（2）HBV 阳性质控品：FAM检测通道扩增曲线有明显对数增长期且CT值＜30，强阳性质控品定值范围在 2.0×105IU/ml~8.0×106 IU/ml，临界阳性质控品定量定值范围在 3.0××102 IU/ml~1.0×104IU/ml；（3）HBV 阳性定量参考品：FAM检测通道扩增曲线有明显对数增长期，呈典型S型曲线，CT 值＜29，且R2≥0.98。
9.2 室内质控每次实验应选择适当的HBV DNA质控品作室内质控，将阳性质控品的数据填入质控图。
9.3以上要求（9.1和9.2）需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需从新进行。
10. 干扰因素10.1 临床标本中内源性抑制物：血红蛋白、免疫球蛋白、白细胞内乳铁蛋白、脂类等都可抑制PCR 反应，标本应避免溶血、脂血、黄疸等。
10.2 外源性抑制物：肝素抗凝剂、纤维素和硝酸纤维素、手套上的滑石粉、标本容器上的抑制物等，标本应按采集要求采集，操作中应小心谨慎，标本容器及实验用具应合格。
10. 3标本的交叉污染：操作过程中应仔细认真，防止交叉污染，尽量使用带鉴定合格的滤芯吸头，阴性对照品应与标本一起提取，以及时发现交叉污染。
11. 生物参考区间：1×102 IU/ml~5.0×108 IU/ml12. 警示/危急值：HBV DNA检测无警示/危急值。
13. 异常结果处理如遇HBV DAN检测结果与临床诊断或资料，或与近期历史检测结果不相符合，应及时与临床医生联系、沟通，查找原因并采取措施，于《疑问报告发放处理记录表》中记录处理过程。
如需复查，需及时保存标本。
14. 临床意义14.1 HBV DNA是乙型肝炎病毒感染的最直接的证据，较其他血清学标志物（如HBsAg、HBeAg）更有价值。
14.2 HBV DNA测定有助于阻断母婴传播的判断和检测，HBV DNA阳性的产妇，其婴儿随访中60%为HBV感染，而HBV DNA阴性的产妇，其婴儿随访无一例阳性。
14.3 HBV DNA测定有助于HBsAg阴性的慢性肝炎的诊断和鉴别诊断，在血清学试验HBsAg阴性的人群中，至少有3-4%的HBV携带者，由于HBV的S基因突变，属于HBsAg表达缺陷或低水平表达而无法常规检出，利用HBV DNA方法的敏感性，可以对HBsAg阴性的慢性肝炎进行检测，还可以区分慢性乙型肝炎和非甲非乙型肝炎。
14.4 HBV DNA测定可作为抗病毒治疗疗效的判断指标。
15. 变异的潜在来源标本保存不当或反复冻融，都会影响检测结果的准确。
16. 注意事项16.1 实验过程中必须穿专用工作服、戴手套、口罩、帽子、必要时戴防护眼罩，接触标本后必须及时更换手套。
16.2 阳性质控品和检测样品均应视为具有传染性物质，应避免接触到皮肤和粘膜。
16.3 实验过程必须严格分区操作，各区物品均为专用，不得交叉使用。
16.4 样品的处理操作应在生物安全柜内进行。
16.5所用检测试剂使用前应完全解冻，瞬时离心后使用，应避免反复冻融。
16.6 样品核酸提取后，建议马上进行下一步实验，否则请保存于-20℃待用（24 h）。
16.7操作过程中应防止交叉污染，尽量使用鉴定合格的滤芯吸头，阴性对照品应与标本一起提取。
16.8 加样时应使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，尽快盖紧管盖。
上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。
16.9 标本制备区所用到的试管、吸头等需打入盛有消毒剂的容器，并与废物一起灭菌后方可丢弃。
16.10 扩增完毕立即取出反应管，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。
16.11 实验中用过的吸头请直接打入盛有10%巴氏消毒液的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。
16.12 实验完毕用10%巴氏消毒液或75%酒精处理工作台和移液枪，然后用紫外线灯照射30 min。