PH0536-Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒使用手册
Annexin V-FITC PI细胞凋亡检测试剂盒
Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit一、试剂盒说明在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS ）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS ）由脂膜内侧翻向外侧。
Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V 进行荧光素FITC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI ）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。
因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
二、试剂盒组份 组份(20 assays) (50 assays) (100 assays) 储存条件 AnnexinV-FITC100 μL 250μL 500 μL Propidium Iodide100 μL 250μL 500 μL Binding Buffer 10.0 mL 25 mL 50 mL 注：1、Annexin V-FITC 组份建议按需分装小份冻存于-20℃，避免反复冻融； 2、Propidium Iodide 和Binding Buffer 组份不用时可放置于4℃保存，Propidium Iodide 需要避光。
3、Store at -20℃ for 12 months三、试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5m L Microtube 、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS 、不含EDTA 的胰酶消化液四、使用注意事项1.微量试剂取用前请离心集液。
AnnexinV-FITC细胞凋亡检测说明书
凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒一、原理在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V进行荧光素（FITC、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
与FITC 的绿色荧光信号相比，FITC的绿色荧光信号具有信号强，不易淬灭，稳定性高等优点，故本试剂盒采用FITC作为荧光标记探针。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。
因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
二、试剂盒组份三、操作步骤1．用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组，并收集细胞；2．用PBS洗涤细胞二次（离心2000rpm，5min）收集1~5×105细胞；3．吸取250μL的2×Binding Buffer和250μL灭菌去离子水（用户自备），混匀；4．用上述500μL的1×Binding Buffer悬浮细胞；5．加入1μL Annexin V-FITC混匀后加入5 μL Propidium Iodide，然后混匀；6．避光室温反应5min；根据不同的分析方法选择步骤A或B。
A．荧光显微镜观察1．滴一滴经过步骤1~6处理过的细胞悬浮液于载玻片，并用盖玻片盖上细胞；2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；（2）用PBS洗涤细胞两次；（3）吸取250μL 的2×Binding Buffer和250μL灭菌去离子水（用户自备），混匀；（4）加入1μL Annexin V-FITC混匀后加入5 μL Propidium Iodide，然后混匀；（5）将（4）步骤的溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；（6）避光室温反应5 min。
Annexin V-FITC细胞凋亡检测详细步骤及说明
Annexin V-FITC细胞凋亡检测详细步骤及说明1. 对于悬浮细胞：a. 在进行完细胞凋亡刺激后，1000g离心5分钟，弃上清，收集细胞，用PBS 轻轻重悬细胞并计数。
注意：PBS重悬不能省略，PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用，可以保证后续Annexin V-FITC的结合。
b. 取5-10万重悬的细胞，1000g离心5分钟，弃上清，加入195µl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。
c. 加入5µl Annexin V-FITC，轻轻混匀。
d. 加入10µl碘化丙啶染色液，轻轻混匀。
e. 室温(20-25ºC)避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中。
可以使用铝箔进行避光。
孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善染色效果。
f. 如果用于流式细胞仪检测，可立即上机检测，Annexin V-FITC为绿色荧光，碘化丙啶(PI)为红色荧光，流式检测细胞凋亡的效果及其验证请参考图1和图2。
初次进行流式细胞仪检测时，建议选择一组适当的细胞参考图2设置未染色、PI单染和Annexin V-FITC单染这3个对照。
如果用于荧光显微镜检测，1000g 离心5分钟，收集细胞，用50-100µl Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞，涂片后，荧光显微镜下观察。
注意：细胞在染色后须尽快完成检测，通常宜在1小时之内完成检测。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测。
2. 对于贴壁细胞的消化后检测：a. 把细胞培养液吸出至一合适离心管内，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量胰酶细胞消化液(可含有EDTA)消化细胞。
室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液。
需避免胰酶的过度消化。
中文操作手册 细胞凋亡
凋亡检测操作流程一、Annexin V检测凋亡细胞膜的改变试剂及溶液：A．对于单独购买的试剂：a)10X Binding Buffer （货号：556454）：0.1 M HEPES，pH 7.4；1.4 M NaCl；25 mM CaCl 2。
使用前稀释至1X。
b)Propidium Iodide（PI，货号：556463）：建议与以下试剂同时使用 Annexin V-FITC（货号： 556420,556419）或 Annexin V-Biotin （货号： 556418，556417）c)Via-Probe™ （货号：555816 ）：核酸染料7-AAD。
建议与以下试剂同时使用Annexin V-PE（货号：556422，556421）或Annexin V-Biotin（货号：556418，556417）。
d)1X PBS Buffer （货号： 554781）：8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na2HPO 4• 7H20, 0.24 g KH2PO4 , 加水至1L。
调整pH值至 7.2。
高压灭菌室温保存。
B．对于凋亡检测试剂盒（货号：556547）a)FITC Annexin V （组分编号： 51-65874X）：每个样本5 μl用量。
b)Propidium Iodide （PI，组分编号： 51-66211E)）：现成的核酸染料。
每个样本5 μl用量。
c)10X Annexin V Binding Buffer（组分编号： 51-66121E）： 0.1 M Hepes/NaOH (pH 7.4), 1.4 M NaCl,25 mM CaCl2.使用时用双蒸水配制成1X。
操作步骤：1．取Falcon试管，按标本顺序编好阴性对照管和标本管号。
2．使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次，再用1⨯ Binding Buffer缓冲液制成1⨯106细胞/ml的悬液。
3．Falcon试管中加入100 µl细胞悬液。
AnnexinV凋亡试剂盒操作步骤
请在使用前仔细阅读说明书Annexin V,FITC 凋亡检测试剂盒(100次)产品名称货号规格储存条件运输条件Annexin V,FITC结合物AD01-10 100次×1 0-5℃，避光(切勿冻存) 室温PI Solution AD02-05 50次×2 0-5℃，避光(切勿冻存) 室温10×Annexin V Binding Buffer AD03-05 50次×2 0-5℃，避光(切勿冻存) 室温*注：规格中的每“次”是以细胞浓度1×106 cells/ml计算产品描述细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。
正常情况下任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。
例如体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。
然而在抑癌基因p53出现问题时，凋亡就不会诱导发生，从而导致癌细胞的不断增长。
细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。
目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。
Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。
在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。
Annexin V 是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜特异性结合，因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
用绿色荧光FITC标记的Annexin V 通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料，PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜，因此Annexin V和PI结合使用，可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。
所需的设备和材料-合适量程的移液枪-样品和诱导剂-细胞培养用6，12，24，96孔板-PBS、去离子水-流式细胞仪或荧光显微镜。
细胞凋亡实验详细步骤及说明
细胞凋亡实验详细步骤及说明实验概述本实验旨在研究细胞凋亡的过程和机制。
细胞凋亡是一种正常的细胞死亡方式，对于维持组织的稳态具有重要作用。
通过本实验，我们可以了解细胞凋亡的特征和调控通路，以及一些常用的检测方法。
实验材料- 培养皿- 细胞培养基- 不同处理条件下的细胞（例如药物处理、基因敲除等）- Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒- 显微镜实验步骤1. 培养细胞：将细胞按照常规方法培养至适当的细胞数目。
2. 细胞处理：根据实验设计，在细胞培养基中添加不同处理条件下所需的药物。
3. 收集细胞：根据实验设计决定收集细胞的时间点，使用适当的方法将细胞收集到离心管中。
4. 染色试剂处理：根据实验需求，使用 Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒中的染色试剂进行细胞染色，按照试剂盒说明书的操作步骤进行。
5. 检测细胞凋亡：将染色后的细胞标本放置在显微镜下观察，并使用适当的过滤器和荧光镜头进行观察。
6. 数据分析：根据观察结果，统计和分析不同处理条件下细胞凋亡的数量和特征。
实验注意事项- 操作过程中应严格遵守实验室安全规范，确保个人和实验室安全。
- 细胞培养过程中，注意细胞接种密度和培养基条件的控制，以维持细胞的正常生长状态。
- 在染色试剂处理过程中，按照试剂盒说明书的要求进行操作，避免试剂污染和误操作。
- 在显微镜观察过程中，注意调整适当的放大倍数和聚焦，以获得清晰的细胞图像。
实验结果与讨论根据实验结果可以获得不同处理条件下细胞凋亡数量和特征的数据。
结合相关文献和已有知识，可以对细胞凋亡的机制和调控通路进行深入的讨论。
实验结果可以为进一步研究细胞凋亡的相关领域提供有价值的数据基础。
以上是细胞凋亡实验的详细步骤及说明。
希望对你的研究有所帮助！。
ANNEXIN V-FITC PI 凋亡检测试剂盒说明书
第1页，共3页ANNEXIN V-FITC/PI 凋亡检测试剂盒说明书注意：本产品试剂浓度发生变化，使用前请仔细阅读说明书。
货号：CA1020规格：20T/50T /100T保存：2-8°C ，避光保存，有效期1年。
产品说明：细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS 暴露在细胞膜外表面。
PS 是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。
Annexin V 具有易于结合到磷脂类如PS 的特性，对PS 有高度的亲和性。
因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS 。
PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。
两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。
因此，可以采用Annexin V 与PI 双染的方法，通过流式检测细胞早期凋亡。
操作步骤:1.细胞样品的准备：a)对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。
用不含EDTA 的胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。
再次收集到离心管内。
1000rpm 左右离心5min ，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50µl 左右的培养液，以避免吸走细胞。
加入约1ml 4℃预冷的PBS ，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。
b)对于悬浮细胞：1000rpm 左右离心5min ，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50µl 左右的培养液，以避免吸走细胞。
PH0536 Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒操作手册
PH0536|Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-PE apoptosis detection kit）货号：PH0536规格：PH0536-20|20T存储：4℃保存，半年有效。
AnnexinV-PE需避光保存。
◆产品组分试剂组成规格保存Annexin V-PE100uL4℃Annexin V-PE结合液12mL4℃，避光说明书1份/◆产品简介Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit)是用PE(Phycoerythrin)标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。
可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
本试剂盒检测的是红色荧光，因此在待检测的细胞已经表达GFP等绿色荧光蛋白的情况下，特别适合使用本试剂盒检测细胞凋亡。
PE可以被495nm、545或564nm的激发光所激发，发出峰值为575nm的荧光。
(参考图1)Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。
但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。
Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。
磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。
在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。
磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。
而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。
用带有红色荧光的荧光探针PE标记的Annexin V，即Annexin V-PE，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
正常细胞不会被Annexin V-PE所染色，凋亡细胞和坏死细胞都会被Annexin V-PE所染色。
kga101 n凯基annexin vegfp细胞凋亡检测试剂盒说明书
凯基Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit）Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at4℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
与FITC的绿色荧光信号相比，EGFP的绿色荧光信号具有信号强，不易淬灭，稳定性高等优点，故本试剂盒采用EGFP作为荧光标记探针。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。
因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
二、 试剂盒组份组份Cat: KGA10110 assays Cat: KGA10220 assaysCat: KGA10350 assaysCat: KGA104100 assays储存条件AnnexinV-EGFP 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Propidium Iodide 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃三、 试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液四、 使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
AnnexinV-FITCPI双染法细胞凋亡检测试剂盒操作说明
AnnexinV-FITCPI双染法细胞凋亡检测试剂盒操作说明细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。
在细胞凋亡过程中,细胞内膜的磷酯酰丝氨酸外翻到细胞外膜,而Annexin V(膜联蛋白V)对其有天然的高亲和能力,故可以用FITC标记(绿色荧光)的Annexin V来检测细胞凋亡,但本方法的缺点是不能区分早期和晚期的凋亡细胞。
早期和晚期的凋亡细胞的一个重要区别在于细胞膜的完整性(凋亡早期细胞没有丧失膜的完整性),故可以用碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)来染色加以区分。
图源：网络Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒特点：1. 即开即用,不需要专门花时间准备各种成分。
2. 整合了Annexin V-FITC和PI检测法的优点,提高了凋亡细胞检测的灵敏度和特异性,本方法是目前极为灵敏的细胞凋亡检测方法。
3. 跟流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测兼容。
Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒操作步骤：(一)获得目的基因1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
(二)构建重组表达载体1、Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
(三) 获得含重组表达质粒的表达菌种1、将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp 或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。
PH0539-Annexin V-FITCPI 凋亡检测试剂盒使用手册
PH0539|Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒（Annexin V-FITC/PI Apoptosis Assay Kit）货号：PH0539规格：PH0539-50|50T存储：Store at4℃，一年有效。
◆产品组分>>Annexin V-FITC--------------------250ul>>10×Binding Buffer-----------------2*13ml>>Propidium Iodide(PI)--------------500ul◆产品简介细胞凋亡（Apoptosis）是一种由基因控制的细胞自主死亡方式。
它与组织器官的发育，机体正常生理功能的维持，某些疾病的发生发展以及细胞癌变过程均有着密切的关系。
细胞凋亡已成为生命学科极为活跃的研究领域之一。
此外，介绍几种常用的细胞凋亡检测方式。
在细胞凋亡的早期，细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）将会从细胞膜内侧转移到细胞膜外侧，使PS充分暴露在细胞膜外表面。
Annexin V是一种磷脂结合蛋白，对PS有高度的亲和力。
因此，Annexin V作为一个敏感的探针可以有效地检测暴露在细胞膜表面的PS。
目前普遍使用的检测方法是将荧光标记后的Annexin V-FITC作为探针，利用流式细胞仪来检测细胞凋亡。
值得注意的是，在细胞坏死的过程中也会发生PS的暴露。
但两者的差别在于细胞凋亡的初始阶段细胞膜结构是完好的，只有PS转移，而细胞坏死则在早期阶段细胞膜的完整性就破坏了，从而暴漏出PS。
因此，检测细胞凋亡时，通常会使用颜料碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）以确立细胞膜的完整性。
PI是一种核酸染料，它可以染色死细胞，但不能进入完整的活细胞，从而将凋亡性细胞和坏死性细胞区分开来。
◆使用说明1、细胞收集与Annexin V-FITC结合（1）在完成细胞凋亡诱导处理后，1500rpm，5分钟离心后弃上清，收集细胞。
Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit 膜联蛋白V细胞凋亡检测试剂盒中文说明书
膜联蛋白V的结合细胞凋亡检测试剂盒绿色荧光优化流式细胞仪Cat.No ：BS7127包装：1套一、描述膜联蛋白是一类钙依赖性磷脂结合蛋白。
它们大量存在于真核生物中，是参与信号转导的广泛的细胞质蛋白家族。
膜联蛋白V的优先结合伴侣是磷脂酰丝氨酸（PS），它通常保持在细胞膜的内表面（胞质一侧）。
在细胞凋亡时，PS转移到质膜的外表面。
细胞表面上的磷脂酰丝氨酸是细胞凋亡起始/中间阶段的一个通用指标，可以在观察形态变化之前被检测出。
我们的细胞仪表™检测试剂盒是通过检测磷脂酰丝氨酸（PS）的易位来监测细胞凋亡的。
该试剂盒采用我们专有的绿色荧光膜联蛋白V- iFluor 488 PS传感器，它能够特异性结合PS 。
染色具有光谱特性，几乎与更高光稳定性的FITC相同，从而使其方便用于配备光源和滤波器的共同荧光仪器。
该试剂盒提供了所有与流式细胞仪的应用优化的协议的必需成分。
二、试剂盒成分A组分：膜联蛋白V- iFluor 488 （100X原液）1瓶（200微升/瓶）B组份：缓冲液50毫升C 组分：100X碘化丙啶1瓶（100微升）三、保存4℃，避光四、步骤注意：对贴壁细胞的膜联蛋白V流式细胞术分析不是常规检测，因为在细胞脱落或收获时，可能会出现特定的膜损伤。
但是，此前已报道Casiola -罗森等人对贴壁细胞类型利用Annexin V的流式细胞仪的方法。
1、用试验化合物处理细胞（喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时）来诱导细胞凋亡。
2、离心细胞，得到1-5 × 105个细胞/管。
3、将细胞悬浮于200μL的缓冲液（B组分）中。
4、添加2μL膜联蛋白V- iFluor™ 488（A组分）到细胞中。
可选：加入2 μL 100X碘化丙啶（C组分）到坏死细胞中。
5、在室温下孵育30 〜60分钟，避光。
6、可选：加200-300μL缓冲液（B组分），以增加体积在细胞仪分析细胞（见步骤7）。
之前。
7、使用FL1通道显示膜联蛋白V- iFluor ™ 488的荧光强度（EX / EM =490/525nm），并使用FL2通道和碘化丙啶检测细胞活力。
Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒操作方法及步骤说明书
Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒说明：细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。
Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。
以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。
将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。
产品组成（50／25次反应）：· Annexin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml）· Binding Buffer 40ml／20 ml· Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml）保存条件: 2-8℃储存，有效期一年。
注意事项：1.为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项；2.试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落；3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用；4.此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断；5.本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。
操作注意要点：1.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作；2.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变；3.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在操作时请注意避光；4.成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的；5.在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果；6.PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，上机前5分钟再加入PI染色。
Annexin V 检测试剂
联科生物技术有限公司
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1) 即用型试剂盒(Kit 或 Apoptosis Kit)
Annexin V* Kit Annexin V* Apoptosis Kit
其中含各种标记的 Annexin V(如 FITC, PE-Cy5, Cy3, Cy5, EGFP, Biotin 等)、PI(碘化丙啶)和结合 缓冲液(Binding Buffer)，直接使用，可区分出凋亡细胞、活细胞和坏死细胞。
Annexin V-PE-Cy5 Apoptosis Detection Kit K129-100
Annexin V-PE-Cy5 Apoptosis Detection Kit K129-400
Annexin V-PE-Cy5 Reagent
1015-1000
应用 FC,FM FC,FM FC,FM FC,FM
规格 25T 100T 400T 1000T
价格(元) 生产商 1,875 Biovision 3,825 Biovision 8,925 Biovision 11,175 Biovision
EGFP 标记
产品名
Annexin V-EGFP Apoptosis Kit
Annexin V-EGFP Reagent
产品编号 K104-25 K104-100 K104-400 1004-1000
应用 FC,FM FC,FM FC,FM FC,FM
规格 25T 100T 400T 1000T
价格(元) 生产商 1,575 Biovision 3,825 Biovision 8,925 Biovision
13,425 Biovision
invitrogen_AnnexinV_PI双染试剂盒说明书中文版
流式细胞仪1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗3，准备1X的annexin结合液，例如，对于10个实验来说，加1ml 5X annexin 结合液（组分C）到4ml 去离子水中4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。
没有使用的这部分工作液用于以后的实验。
5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。
调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备100ul 足够的体积。
6，加5ul Alexa Fluor 488 annexin V(组分A)和1ul 100ug/ml PI工作液（4步骤中准备的）到每100ul的细胞悬液中。
7，室温孵育细胞15min.显微镜观察1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗3，准备1X的annexin结合液，例如，配置1ml，加200ul 5X annexin 结合液（组分C）到800ul去离子水中4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。
没有使用的这部分工作液用于以后的实验。
5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。
调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备足够的体积。
6，加5-25ul的annexin V缀合物（组分A）和1-2ul(100ug/ml)PI工作液到100ul 的细胞悬液中。
高浓度的annexinV缀合物会产生较好的结果；最佳染色浓度需要凭借经验7，室温孵育细胞15min8，1X annexin 结合液清洗细胞9，用一个合适方法使细胞固定在载玻片上，用一个适当的滤镜观察荧光效果。
Annexin V-FITC PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒说明书
Annexin V-FITC / PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒货号: P-CA-201规格: 20Assays / 50Assays / 100Assays / 200Assays产品编号产品名称20Assays 50Assays 100Assays 200Assays Storage P-CA-101 Annexin V-FITC 染色液100 μL250 μL500 μL 1 mL 2~8℃. 避光P-CA-151 Annexin V Binding Buffer(10×) 1.4 mL×2 5.5 mL 11 mL 11 mL×2 2~8°C 碘化丙啶(PI)染色液P-CA-161 100 μL250 μL500 μL 1 mL 2~8℃, 避光说明书一份保存条件2~8℃可保存1年。
Annexin V-FITC禁止冷冻保存。
实验原理Annexin V-FITC/PI 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒，可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸(PS) 有高度亲和力。
当细胞发生凋亡时，膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS) 外翻到膜表面，而被荧光染料FITC标记的Annexin V结合，可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。
由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可与双链DNA特异性结合并产生强烈的荧光，与Annexin V搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂盒检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示：Jurkat细胞用 5 μM喜树碱（Camptothecin）(左) 或未加药(右) 处理4 h，本试剂盒染色后流式检测。
Annexin V-FITC单阳细胞为早期凋亡细胞，AnnexinV-FITC和PI双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞，PI单阳细胞为裸核细胞。
细胞凋亡试剂盒使用说明书 - 专业提供基因,重组蛋白,抗体
细胞凋亡试剂盒使用说明书目录号：CSB-AP11921h本试剂盒仅供研究使用概述细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。
在正常细胞中磷脂酰丝氨酸（PS）分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
此磷脂酰丝氨酸可与Annexin V, 一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白以高度亲和力相结合。
凋亡后期死亡的细胞与其它因素死亡的细胞，虽都可与A nnexin V结合，但死亡的细胞其细胞膜通透，也可被碘化丙啶（Propidium Iodide, PI），一种核酸染料染成红色。
如将Annexin V标以荧光素（RPE、FITC等)作为荧光探针，结合PI, 利用荧光显微镜或流式细胞仪检测，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
试剂盒组成及试剂配制1.Annexin V-FITC：保存在Tris-HCl (20mM), NaCl(50mM) 缓冲液中，含1mg/ml BSA和0.09% NaN3。
2.Binding Buffer：Hepes(10 mM) /NaOH (pH 7.4), NaCl (140 mM),CaCl2(2.5 mM). 经0.2μm孔径过滤器除菌。
2–8℃保存。
3.Propidium Iodida(PI)：50 ug/ml 溶于PBS (pH7.4)中。
操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
1.悬浮细胞离心（350g, 3 min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集（胰酶消化时间不易过长，以防引起假阳性）；2.用PBS洗涤细胞二次（350g, 3 min），计数细胞，每样0.1ml 含1~5×105细胞；3.用400μL Binding Buffer悬浮细胞；4.加入5μL Annexin V-FITC, 混匀，加入5 μL Propidium Iodide，混匀；5.室温避光反应10 min；6.荧光显微镜下观察或用流式细胞仪检测。
Annexin V 凋亡检测试剂盒说明书_PF032
Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit目录货号PF032包装包装：：1 试剂盒组分组分：：100次检测形式形式：：流式细胞仪或荧光显微镜检测方法检测方法：：荧光测定种属特异性种属特异性：：可适用于许多种属储存储存：：Annexin V-FITC 试剂盒组分用干冰运输，4°C 储存。
为了防止由于沾在管盖上造成的试剂损失，移除管盖前需要轻轻旋转使沾在管盖上的液体落入管内。
请参考注意事项和操作建议。
适用范围适用范围：：Calbiochem® Annexin V-FITC Apoptosis Detection 试剂盒是一种非同位素检测方法，可以检测伴随着细胞死亡发生的细胞膜的变化。
检测手段包括流式细胞仪或荧光显微镜。
背景背景：：凋亡是细胞死亡的一种基本形式，它在胚胎发育，组织分化和一些疾病发生过程中起着重要的调控作用。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS ）位于细胞膜内侧，一旦发生细胞凋亡，可以从细胞膜的内侧迅速翻转到细胞膜外侧，使得PS 暴露在细胞膜表面。
在体内，巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除，因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应，而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。
在体外可以用PS 与抗凝血剂annexin V 的相互作用检测外翻的PS 。
在Ca2+存在的情况下，annexin V 与PS 有很高的亲和力，可以与之迅速结合。
PS 外翻发生在细胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前，这使得annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。
检测原理检测原理：：在该方法中，基于流式细胞仪和荧光显微镜，FITC 标记的annexin V 可以用来检测细胞凋亡。
由于细胞坏死的过程中也会发生细胞膜通透性增强，坏死的细胞同样也会结合annexin V-FITC 。
因此，propidium iodide （PI ）被用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。
AnnexinV凋亡试剂盒一般染色检测方法1.把将被染色分析的细胞用冷PBS...
Annexin V凋亡试剂盒一般染色检测方法1.把将被染色分析的细胞用冷PBS洗涤二次并在恰当的染色缓冲液（binding buffer）中以1 x 106 细胞/mL的浓度重悬。
（染色缓冲液，binding buffer,中必须含有钙离子）2.吸取100ul的细胞(1 x 105)至试管中。
（必须在室温下进行）3.加入适量的荧光标记的annexin V试剂和PI。
（必须在室温下进行）4.混匀后避光室温下孵育15分钟。
（必须在室温下进行）5. 孵育后加入400ul染色缓冲液，立即上流式细胞仪分析。
（实验必须在一小时内完成，否则无意义！）我们推荐另外制备三个质控样本来设定流式细胞仪的荧光补偿和设置十字门的范围：a) 没有染色的细胞;b) 仅用荧光标记的annexin V染色的细胞;c) 仅用PI染色的细胞.annexin V和PI双阳性可以说明细胞群体中含有死亡细胞。
我们推荐可以使用一个细胞系来制备以上三个对照管来作为annexin V和PI阳性染色对照。
可以使用在RPMI +10% FCS + 2-4 ng/mL的TNF-a孵育2-3小时的人U-937细胞，或在培养液中孵育1-2小时鼠淋巴细胞作为对照细胞。
请依据以下建议来正确设置仪器补偿。
以下方案可以根据不同的细胞类型稍加修改。
在流式细胞仪上分析经染色的细胞:使用流式细胞仪正确分析annexin V-FITC和PI双标的细胞要求仪器的荧光补偿来去除两种染料激发光之间的叠加。
因为荧光补偿设置与PMT的电压直接相关，所以不同仪器之间的补偿不同。
我们建议在实验开始阶段分析单染的细胞来调整荧光补偿去除光谱重叠。
1. 上样未经染色的细胞，在线性FS-SS点图上显示细胞并设门圈出目标细胞群体。
注意：细胞在经培养后光散射信号会发生变化。
要注意使用侧向散射光设门来识别出这些已改变的细胞。
2.建立LogFL1-LogFL2双参数点图并分析以上光散射图中设门的细胞；保证>98%的细胞处于在X、Y轴Log 1为边界的左下象限中心区域。
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PH0536|Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒
（Annexin V-PE apoptosis detection kit）
货号：PH0536规格：PH0536-20|20T存储：4℃保存，半年有效。
AnnexinV-PE需避光保存。
◆产品组分
试剂组成规格保存
Annexin V-PE100uL4℃
Annexin V-PE结合液12mL4℃，避光
说明书1份/
◆产品简介
Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit)是用PE(Phycoerythrin)标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。
可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
本试剂盒检测的是红色荧光，因此在待检测的细胞已经表达GFP等绿色荧光蛋白的情况下，特别适合使用本试剂盒检测细胞凋亡。
PE可以被495nm、545或564nm的激发光所激发，发出峰值为575nm的荧光。
(参考图1)
Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合
蛋白，参与细胞内的信号转导。
但仅Annexin V被报道可以调控一些
PKC的活性。
Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。
磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。
在细
胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞
表面，即细胞膜外侧。
磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和
炎症反应。
而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可
以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。
用带有红色荧光的荧光探针PE标记的Annexin V，即Annexin V-PE，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
正常细胞不会被Annexin V-PE所染色，凋亡细胞和坏死细胞都会被Annexin V-PE所染色。
如果希望进一步区分凋亡和坏死细胞，可以使用其它细胞凋亡检测试剂盒进行检测。
一个包装的本试剂盒共可以检测20个样品。
◆注意事项
1）如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
2）染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
3）如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。
残留的胰酶会消化并降解AnnexinV-FITC，最终导致染色失败。
4）荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
5）需自备PBS。
6）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
◆使用说明
1.对于悬浮细胞：
A.在进行完细胞凋亡刺激后，1000g(约1000-2000rpm)离心5分钟，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。
注意：PBS重悬不能省略，PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用，可以保证后续Annexin V-PE的结合。
B.取5-10万重悬的细胞，1000g离心5分钟，弃上清，加入195μl Annexin V-PE结合液轻轻重悬细胞。
C.加入5μl Annexin V-PE，轻轻混匀。
D.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中。
可以使用铝箔进行避光。
孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善标记效果。
E.随即进行流式细胞仪检测，Annexin V-PE为红色荧光。
如果用于荧光显微镜下检测，1000g离心5分钟，收集细胞，用50-100μl Annexin V-PE结合液轻轻重悬细胞，涂片后，荧光显微镜下观察。
2.对于贴壁细胞：
A.把细胞培养液吸出至一合适离心管内，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量胰酶细胞消化液(可含有EDTA)消化细胞。
室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液。
需避免胰酶的过度消化。
B.加入步骤2A中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000g离心5分钟，弃上清，收集细胞，用PBS轻轻重悬细胞并计数。
注意：加入步骤2A中的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶；残留的胰酶会消化并降解后续加入的Annexin V-FITC导致染色失败。
C.取5-10万重悬的细胞，1000g离心5分钟，弃上清，加入195μl Annexin V-PE结合液轻轻重悬细胞。
D.加入5μl Annexin V-PE，轻轻混匀。
E.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟，随后置于冰浴中。
可以使用铝箔进行避光。
孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善标记效果。
G.随即进行流式细胞仪检测，Annexin V-PE为红色荧光。
如果用于荧光显微镜下检测，1000g离心5分钟，收集细胞，用50-100μl Annexin V-PE结合液轻轻重悬细胞，涂片后，荧光显微镜下观察。
3.对于贴壁细胞的原位荧光显微镜检测：
注：本方法的优点是可以原位观察细胞凋亡，缺点是部分凋亡由于不贴壁而检测不到。
A.(选做)如果条件许可，把细胞培养于24孔板、48孔板或96孔板内。
在凋亡诱导结束后，用可以对多孔板进行离心的离心机1000g 离心5分钟。
B.吸除细胞培养液，加入PBS洗涤一次。
(如果条件许可，在吸除PBS前1000g离心5分钟。
)
C.加入195μl Annexin V-PE结合液。
D.加入5μl Annexin V-PE，轻轻混匀。
E.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟。
可以使用铝箔进行避光。
F.随即在荧光显微镜下观察，Annexin V-PE为红色荧光。