白酒中氨基甲酸乙酯含量检测与分析
食品安全地方标准 酒精饮料中氨基甲酸乙酯的测定
食品安全地方标准酒精饮料中氨基甲酸乙酯的测定气相色谱-质谱法1 范围本标准规定了酒精饮料中氨基甲酸乙酯的气相色谱-质谱测定方法。
本标准适用于白酒、啤酒、黄酒、葡萄酒等酒精饮料中氨基甲酸乙酯的测定。
本标准的检出限：当试样取2.0g时，本方法氨基甲酸乙酯含量的检出限为1.0μg/kg。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义酒精饮料系指供人们饮用的且乙醇含量在0.5%(vol)以上的饮料，包括各种发酵酒、蒸馏酒及配制酒。
4 原理酒精饮料加氨基甲酸乙酯同位素内标后，经过硅藻土固相萃取柱净化、洗脱，洗脱液浓缩后，用气相色谱—质谱仪测定，内标法定量。
5 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1无水硫酸钠(Na2SO4)：450℃灼烧4h，冷却后贮于干燥器中备用。
5.2CLE-硅藻土固相萃取柱：4000 mg/12 mL。
5.3正己烷(C6H14): 色谱纯。
5.4乙酸乙酯(C4H8O2): 色谱纯。
5.5乙醚(C4H10O): 色谱纯。
5.6甲醇（CH3OH）: 色谱纯。
5.7氨基甲酸乙酯标准品（C3H7O2N，CAS：51-79-6）：纯度>99.0％。
5.8D5-氨基甲酸乙酯(C3H7O2N-d5)。
5.95%乙酸乙酯-乙醚溶液（V/V）。
5.10D5-氨基甲酸乙酯溶液：准确称取适量的D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液，使用时用甲醇稀释至1.0μg/mL。
5.11氨基甲酸乙酯标准溶液：准确称取适量的氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液，使用时用甲醇稀释至0.2μg/mL。
5.12氨基甲酸乙酯标准使用液：准确吸取0.2μg/mL氨基甲酸乙酯标准溶液 0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL，各加1.0μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液100μL，用甲醇定容至1.0 mL，得到浓度为20.0 ng/mL，40.0 ng/mL，80.0 ng/mL，120.0 ng/mL，160.0 ng/mL的标准使用液（含100.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）。
气质联用技术在白酒中氨基甲酸乙酯检测的应用实验
［ ６ ］ 李 维青． 白 酒 的香气与香 型［ Ｊ ］ ， 酿酒 ， ２ ０ ０ ７ 。 （ ２ ） ５ — ７
判 定 满意 。
关键 词 ： 气 相 色谱 一质 谱 仪 （ Ｇ Ｃ— ＭＳ ） ； 氨 基 甲酸 乙酯 （ Ｅ ｃ） ； 白酒 中 图分 类 号 ： ＴＳ ２ ６ ２ ． ３ ； Ｔ Ｓ ２ ０ ７ ． ３ 文献标识码 ： Ｂ
氨基 甲酸 乙酯 （ Ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ Ｃ ａ ｒ ｂ ａ ｍａ ｔ ｅ ， Ｅ Ｃ ） ， 又 称 为
中也 发现 有 微量 的存 在 ｌ ３ ｌ 。 食 品 中的 Ｅ Ｃ不是 人 为添
加的， 而是在食 品发酵过程 中 自然形成 的， 有一种 测 网在 ２ ０ ０ ８年将 Ｅ Ｃ列 为新增 检 测项 目，并 且 目前
收稿 日期 ： ２ ０ １ ６ － ０ ８ － ２ ８
作者简 介： 陈路露 ， 工程师 ， 主要从事仪 器分析检测 。
【 ７ 】 王敏 ， 张煜行 ， 李泽霞 ， 姜东 明， 等． 老 白干风味物 质 ＨＳ — Ｓ Ｐ ＭＥ — Ｇ Ｃ
—
Ｍ Ｓ 指纹图谱的建立ｌ Ｊ １ ． 酿酒科技 ， ２ ０ １ ５ ， （ １ ０ ） ： ３ ２ — ３ ４
Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｃｈ ｅ ｍ， ２ ０ ０１ ， ４ ９： ２ ９ ２ ４ — ２ ９ ２ ９
形成的复合香在老白干酒 中产生 了舒适的枣香。试
验 中显示 了 Ｇ Ｃ 一 ０技 术 的强 大优 势 ，表 明了人 鼻是 最佳 的检 测器 。下 一 步应 该 对衡 水老 白干酒 中呈 现
崇明老白酒酿造贮存过程中氨基甲酸乙酯变化及检测方法优化
（ Ｅ Ｃ ） ｗａ ｓ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｉ ｎ Ｅ Ｃ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ｎ Ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ ｍｉ ｎ ｇ ｉ ｒ ｃ ｅ ｗｉ ｎ ｅ ｄ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｓ ｔ ｅ ｒ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｓ ｔ ｏ ｒ ａ ｇ ｅ ． Ｏ ｐ ｔ ｉ ｍａ ｌ ｐ ａ ｒ ａ ｍｅ ｔ ｅ ｒ ｓ ｏｒ ｆ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ａ ｓ ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗｓ ： ａ ｄ ｊ ｕ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｐ Ｈ ｔ ｏ ９ ． ０ ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗｉ ｎ ｇ ａ ｄ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ
２ ． Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ｉ ａ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｉ ａ ｌ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｇ ｙ Ｃｏ ． Ｌ ｔ ｄ ． ， Ｓ ｈ ｎｇ ａ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ２ ３ ３ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
Ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ Ｐ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ Ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ Ｅ ｈｙ ｔ ｌ Ｃａ ｒ ｂ ｍ ａ ａ ｔ ｅ（ Ｅ Ｃ ） Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｉ ｔ ｏ ｎ
食品中氨基甲酸乙酯的测定(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品中氨基甲酸乙酯的测定1.范围本标准规定了啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯的气相色谱质谱法测定。
本标准适用于啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯的测定。
2.原理试样加D5-氨基甲酸乙酯内标后，经过碱性硅藻土固相萃取柱净化、洗脱，洗脱液浓缩后，用气相色谱质谱仪进行测定，内标法定量。
3.试剂和材料注：除非另有说明，所有试剂均为分析纯。
3.1试剂3.1.1无水硫酸钠。
3.1.2氯化钠。
3.1.3正己烷：色谱纯。
3.1.4乙酸乙酯：色谱纯。
3.1.5乙醚：色谱纯。
3.1.6甲醇：色谱纯。
3.1.7 碱性硅藻土固相萃取柱：4000 mg、12mL。
3.2试剂配制3.2.1无水硫酸钠：450℃烘烤4 h，冷却后贮于干燥器中备用。
3.2.2 5%乙酸乙酯/乙醚溶液:取5 mL乙酸乙酯，用乙醚定容到100 mL，混匀待用。
3.3标准品3.3.1氨基甲酸乙酯标准品（C3H7O2N）：纯度大于99.0％。
3.3.2 D5-氨基甲酸乙酯标准品。
3.4标准溶液配制3.4.1 D5-氨基甲酸乙酯贮备液（1.0 mg/mL）：准确称取0.01g （精确到0.0001 g）D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL，4℃保存。
3.4.2 2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL，4℃保存。
3.4.3 1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.05 g（精确到0.0001 g）氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL, 4℃保存。
3.4.4 10.0 μg/mL氨基甲酸乙酯中间液：准确吸取1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯标准贮备液1.0 mL，用甲醇定容至100 mL，4℃保存。
3.4.5 0.5 μg/mL氨基甲酸乙酯中间液：准确吸取10.0 μg/mL氨基甲酸乙酯中间液5.0 mL，用甲醇定容至100 mL，4℃保存。
白酒中氨基甲酸乙酯含量检测及在不同香型白酒中的含量分析
青睐。近年来，白酒中潜在的氨基甲 份样品。
萃取柱中，并静置 10 min。经 10 mL
酸乙酯愈加引人关注 [6-7]。早在 1985 年， 1.2 仪器和设备
正己烷淋洗后，用 15 mL5% 乙酸乙酯 -
加拿大规定了氨基甲酸乙酯的限量标
气相色谱 - 质谱仪（7890B-5977A， 乙醚溶液以约 1 mL/min 的流速进行
限量指标。本研究旨在通过对 2018 年 士梅特勒托利多）、氮吹仪（ORG， 至 1.00 mL， 过 0.22 μm 有 机 滤 膜，
从河南省各地市生产企业、超市、小 N-EVAP24）、固相萃取装置（安捷伦） 制成测定液，供 GC-MS 分析。
136 食品安全导刊 2019年6月 Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
Technology 科技 分析与检测
白酒中氨基甲酸乙酯含量检测及在不同香型 白酒中的含量分析
□ 姚晓洁 谷瑞丽 姬建生 杨森楠 夏 嘉 河南省口岸食品检验检测所
摘 要：采用 SPE 结合气相色谱 - 质谱联用（GC-MS）法对从河南省各地市抽取的 1 882 批白酒的 EC 进行检测。结 果表明，所检测的白酒中 EC 的检出率为 52.3%，最大值 1 680 μg/kg，平均含量为 49.9 μg/kg。7.6% 的白酒中 EC 含 量超过国际常用蒸馏酒的 EC 限量标准（150 μg/kg）。针对不同香型白酒进行分析，EC 平均含量最高的是酱香型白酒， 为 92.1 μg/kg；其次是董香型白酒，为 91.4 μg/kg；第三是陶香型白酒，为 84.0 μg/kg，之后依次是凤香型白酒 63.7 μg/kg，浓香型白酒 56.7 μg/kg。此研究期望能为我国食品安全部门制定白酒中 EC 的限量标准提供有效的参考。
GC-MS检测白酒中氨基甲酸乙酯方法的优化
标 准 品： 氨 基 甲 酸 乙 酯 标 准 品（C3H7O2N；CAS：5179-6）纯度＞ 99.0%；D5- 氨基甲酸乙酯标准品（C3H2D5NO2； CAS：73962-07-9）纯度＞ 99%。
表 1 固相萃取仪萃取流程表
步骤 活化 上样 气推 暂停 淋洗 气推 洗脱 气推
溶剂
C6H14 / / /
C6H14 /
CH2Cl2 /
排出 有机废液 有机废液 有机废液
/ 有机废液 有机废液
收集 收集
流速（/ mL/min） 20 1 2 / 2 2 2 2
体积 /mL 5 2.5 1 / 10 15 15 15
准确量取 2.00 mL 酒样于 10 mL 玻璃试管中，称重并记 录酒样的质量 m（精确到 0.001 g）；加入 100.0 µLD5- 氨基 甲酸乙酯使用液（2.00 µg/mL），再加入 0.3 g 氯化钠（经过 640 ℃烘 2 h），超声溶解，再转移到萃取柱中。固相萃取 仪设置的样品制备流程见表 1
关键词：氨基甲酸乙酯；GC-MS；白酒
氨 基 甲 酸 乙 酯（Ethyl carbamate， 简 称 EC， 分 子 式 为 H2NCOOC2H5），又称尿烷，是食物在发酵或者存储过程中 天然产生的物质。氨基甲酸乙酯是一种可以引起肺肿瘤、淋 巴癌、肝癌、皮肤癌等疾病的可致癌物质。发酵食品中含有 氨基甲酸乙酯是食品安全的潜在危害 [1]，因此，对食品中氨 基甲酸乙酯含量的检测是对消费者健康安全的保障。氨基甲 酸乙酯是一种具有潜在致癌作用的化合物，存在于传统的发 酵食品中；乙醇对氨基甲酸乙酯的致癌性有促进作用 [2]，国 际癌症研究署在 1987 年将其归为 2B 类致癌物质，在 2007 年对其进行再次评估后改为 2A 类致癌物。加拿大卫生与防 疫部门规定蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的限量为 150 µg/L，我国 目前未对氨基甲酸乙酯出台相关的限量标准。目前，酒中 的氨基甲酸乙酯的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱 法。其中液相色谱法前处理操作复杂且效率不高；而气相色 谱 - 质谱法有着对样品的前处理损耗低、灵敏度高、分析 效率高等特点，在对氨基甲酸乙酯检测的应用中最为广泛。 本文对《食品安全国家标准 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 （GB 5009.223—2014）的 方 法 进 行 了 一 定 的 改 进， 更 换 了 GC-MS 的色谱柱 [3]，以及洗脱液 ， [4-5] 选择了稳定的萃取 方法 [6]，能够安全有效地对白酒中的氨基甲酸乙酯进行检测。 1 材料与方法 1.1 试剂及仪器
吉林食品安全地方标准饮料酒中氨基甲酸乙酯的测定气相色谱-质谱法
《吉林省食品安全地方标准 饮料酒中氨基甲酸乙酯的测定 气相色谱-质谱法》编制说明吉林省疾病预防控制中心二〇一三年八月一、研究背景氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbam ate,又叫Urethane)是一种具有遗传毒性及致癌性的物质,可导致肺癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌等疾病。
氨基甲酸乙酯被广泛用于工业涂料及动物麻醉[1]，它不仅是烟草叶及香烟的天然成分,也是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物，它广泛存在于发酵食品(如面包、酸牛奶、乳酪、酱油等)和酒(如葡萄酒、苹果酒、中国黄酒和口本清酒等)中。
不同的酒精饮品检出的氨基甲酸乙酯含量是不一样的，例如烈酒（特别是由樱桃、杏和梅等核果制造的烈酒）的含量一般较高，而啤酒的含量则偏低。
不同种类的酒精饮品的氨基甲酸乙酯含量差异很大（见图1）。
自从1943年,Nettle ship用实验证明了氨基甲酸乙酯具有致癌作用后，1971年Lofroth和 Gejvell 在发酵食品中发现了氨基甲酸乙酯，并测定了葡萄酒中的氨基甲酸乙酯含量。
人体摄取氨基甲酸乙酯主要是通过饮用酒，调查显示, 如果饮用氨基甲酸乙酯含量大于30×10-5g/L的酒，人饮用后易患癌的机率大大增加。
根据加利福尼亚环保机构的一项统计数据得知, 假设每个人的患癌症的几率为1×10-5, 可推断这个人氨基甲酸乙酯的摄入量大约为0.7μg/day[2]。
由此可见，氨基甲酸乙酯是危害人类健康的一个不容忽视的因素。
北美等国家法规规定了不同酒中所含氨基甲酸乙酯的数量及水平。
1985年,加拿大报道了某些酒中氨基甲酸乙酯含量高,同年加拿大的卫生与预防部门规定了各类酒中的氨基甲酸乙酯的限量标准: 如佐餐葡萄酒中氨基甲酸乙酯质量浓度不得超过30μg/L；强化葡萄酒100μg/L；蒸馏酒150μg/L；烈性酒、水果白兰地400μg/L。
美国食品和药品管理局规定1988年以后生产的佐餐葡萄酒（酒精度14% V/V）氨基甲酸乙酯质量浓度不得超过15μg/L，餐后甜葡萄酒60μg/L。
GC-MS测定白酒中氨基甲酸乙酯的不同预处理方法的比较
Liquor Using Gas Chromatography-mass Spectrometry
GUO Xue-wu, LI Yuan-zi, HUANG Shi-yong, DU Li-ping, CHEN Ye-fu, XIAO Dong-guang (Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology, Ministry of Education, Tianjin, Tianjin Industrial Microbiology Key Lab,
249
现代食品科技
Modern Food Science and Technology
2016, Vol.32, No.4
蒸馏）和储存过程中产生[1]，早在 20 世纪 40 年代， 1.3.1 标准系列溶液的配制
NETTLESHIP 实验证明了 EC 具有潜在致癌作用，可
分别用无水乙醇、甲醇配制 EC 与氨基甲酸丙酯
Key words: ethyl carbamate; pretreatment; extraction; analysis; gas chromatography-mass spectrometry; liquor
白酒，又称烧酒，它是以粮谷为原料，以酒曲为
收稿日期：2015-06-08 基金项目：国家 863 科技计划项目（2013AA102108）；天津市科技支撑计划 项目(15ZCZDNC00110) 作者简介：郭学武（1980-），男，博士，副研究员，研究方向：现代酿造技 术 通讯作者：肖冬光（1956-），男，教授，博导，研究方向：现代酿造技术
1.3.4 固相微萃取（SPME）
1 材料与方法
取试样 10 mL 于烧杯中，加水调节样品的酒精度 至 20%（酒度低于 20%的样品不用再稀释），然后取
白酒中氨基甲酸乙酯检测方法比较
氨基甲酸乙酯（Ethyl Carbamate，EC）又名尿烷 （Urethane），是一种在食品发酵和储藏过程中会自然 生成的污染物[1-2]，据动物实验都证明了其对肺癌、淋 巴癌、肝癌和皮肤癌等疾病有潜在致癌风险[3-4]。大 部分发酵食品均存在 EC 的污染 ，食 [5-6] 品添加剂联
合专家委员会评估从酒精饮料中的 EC 平均摄入 量是 80 ng/kg 体重·d，虽未超过致癌较低置信区间 基准剂量的 0.3 mg/kg 体重·d，但酒精饮料中 EC 含 量已经足够引起相关部门重视 。 [7-8] 2007 年欧洲食 品安全管理局的报告，人类在食物中摄入的 EC 约
摘 要： 建立并使用了高效液相色谱法（HPLC）与气相色谱-质谱联用法（GC-MS）两种白酒样品中
EC 的检测方法，两种方法定量分析的线性关系良好，相关系数在 0.997 以上。其中 HPLC 法检出限为
4.0 μg/L，回收率在 84.9 %～105.1 %之间，RSD＜6.84 %；GC-MS 法检出限为 1.3 μg/L，GC-MS 检测回收
Abstract: Two detection methods of EC in Baijiu including HPLC and GC-MS were compared. Both methods had good linear relationship of quantitative analysis with the correlation coefficients above 0.997. The detection limit of HPLC was 4.0 μg/L, its recovery rate was between 84.9 % to 105.1 %, and RSD was less than 6.84 %. The detection limit of GC-MS was 1.3 μg/L, its recovery rate was between 95.3 % to 104.7 %, and RSD was less than 4.26 %. The accuracy and repeatability of both methods could meet the requirements. HPLC had simpler pretreatment and its reagents had much lower toxicity. However, the accuracy and the stability of GCMS were better than HPLC, its detection limit was lower, its sampling time was shorter, and EC detection was faster. In consideration of the practical situations such as increasing EC detection tasks and the requirements of low detection limit etc., GC-MS is recommended for the detection of EC in Baijiu in practice. Key words: Baijiu; ethyl carbamate; high performance liquid chromatography; gas chromatography-mass spectrometer
白酒中的氨基甲酸乙酯概述
感谢聆听 敬请指正
•四、控制措施
(1) 增加窖内尿素与 Arg 降解微生物 大量研究表明, 浓香型酒醅中存在着 Arg 利用能力高的菌株，存在着降解尿素的 微生物,如解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等，存在着降解 EC 的微生物, 如解淀 粉芽孢杆菌; 降解淀粉芽孢杆菌，与脲酶混合添加至酒醅进行窖内发酵, 发酵结束 时酒醅中尿素和 EC 含量均下降; 经过模拟蒸馏后,EC 含量下降, 且对白酒风味没 有明显影响。
白酒中的氨基甲酸乙酯概述
目录
1、EC简介 2、研究现状
3、形成途径 4、控制措施
一、EC简介
氨基甲酸乙酯(Ethyl carbamate，EC)又称尿烷(Urethane)，它是食物在 发酵或贮存过程中天然产生的物质，普遍存在于发酵食品和酒类产品中。 EC的前体众多，有氰酸盐、尿素、瓜氨酸、N-氨基甲酰类化合物。 氨基甲酸乙酯(EC)是一种具有基因致癌作用的物质，可导致肺肿瘤、淋 巴癌、肝癌、皮肤癌等疾病。
•二、研究现状
我国不同香型成品酒 EC 平均含量最高的是芝麻香型白酒 (214.13 μg/L), 其 次 是 浓 香型白酒(191.89 μg/L), 再次是凤香型白酒(168.24 μg/L)。这 3 种香型白酒 EC 平均 含量均高于加拿大、巴西、日本等国家蒸馏酒 EC 限量标准(150 μg/L)。
按 EC 平均含量从高到低排序是: 芝麻香型、浓香型、凤香型、兼香型、豉香型、特 型、酱香型、药香型、老白干香型和清香型。所检测的单个酒样中, EC 含量最高的 是浓香型白酒, 达547.82 μg/L;EC 含量最低的是清香型白酒, 为 14.35 μg/L 。
•三、形成途径
国外蒸馏酒中EC 产生有 2 个机制: 一是酸性环境下,尿素与乙醇反应生成 EC; 二是通过氰化物氧化成异氰酸盐后与乙醇反应产生 EC, 氰化物主
气相色谱-质谱法测定白酒中氨基甲酸乙酯的分析
文章 编 号 ： １ ６ ７ １ — ９ ６ ４ ６（ ２ ０ １ ３ ）１ ２ ｂ 一 ０ ０ ６ ４ — ０ ２
气 相色谱 一质 谱法测定 白酒 中氨基 甲酸 乙酯 的分析
包志华 ，娜仁 高娃 ，马俊 华
（ １ ． 内蒙古商贸职业学院 ，内蒙古 呼和浩特 ０ １ ０ ０ ７ ０ ；２ ． 呼和浩 特市疾病预 防控制 中心 ，内蒙古 呼和浩特 ０ １ ０ ０ ７ ０ ） 摘要 ：探讨气相色谱 一质谱法测定 白酒中氨基 甲酸乙酯 的分析方法 。白酒 中氨基 甲酸 乙酯经过硅 藻土固相 萃取柱净化
第 ｌ ２ 期 （ 总第 ３ ３ ８ 期）
２ ０ １ ３年 ｌ ２月
农 产品加工 （ 学刊）
Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍｉ ｃ Ｐ ｅ ｉ ｒ ｏ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ｏ ｆ Ｆ ａ ｒ ｍ Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ Ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ ｇ
Ｎｏ ． １ ２ Ｄｅ ｃ ．
富集 ，再将洗脱液浓缩定容 ， 用气相 色谱 一质谱仪测定 ， 通过 目 标组分 的质谱 图和保 留时间与 目 标组 分的标 准将物质 的质谱 图和保 留时 间对照进行定性 ，内标法定量 。样 品加标 回收率为 ８ ７ ％～ １ １ ０ ％，相对标准偏差为 ０ ． ９ ５ ％～２ ． ３ ５ ％，检 出限为 ０ ． ２ ３ ｎ ｇ ／ ｍＬ 。结果 表明 ，利用 Ｄ Ｂ — Ｉ Ｎ Ｎ Ｏ ＷＡ Ｘ型毛细管色谱柱分 离 目标物效果好 ，采 用硅藻土萃取柱 富集净化
特香型白酒中氨基甲酸乙酯含量初探
特香型白酒中氨基甲酸乙酯含量初探肖美兰;林培;吴生文【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2016(000)012【摘要】The content of EC in Texiang base liquor in different fermenting period was measured by HPLC. Meanwhile, the effects of active carbon absorption technology on EC content in liquor were investigated. The experimental results suggested that active carbon absorption could remove EC but the removal effects were unsatisfactory.%采用高效液相色谱技术检测特香型白酒中氨基甲酸乙酯（EC）的含量，研究了不同发酵周期生产的基酒中EC的含量。
同时，研究了活性炭吸附过滤技术对白酒中EC含量的影响。
实验结果表明，活性炭吸附过滤对EC有一定的去除能力，但是效果不显著。
【总页数】2页(P77-78)【作者】肖美兰;林培;吴生文【作者单位】四特酒有限责任公司技术部，江西樟树331200;四特酒有限责任公司技术部，江西樟树331200;四特酒有限责任公司技术部，江西樟树331200【正文语种】中文【中图分类】TS262.3;TS261.4;TS261.7【相关文献】1.两种氨基甲酸乙酯检测方法的比较及阜阳市售瓶装白酒中氨基甲酸乙酯含量调查[J], 薛锡佳;杨牢记;吴宏萍;张夏子;时玉英;吴丽华;程伟;魏云2.白酒中氨基甲酸乙酯含量检测及在不同香型白酒中的含量分析 [J], 姚晓洁; 谷瑞丽; 姬建生; 杨森楠; 夏嘉3.芝麻香型与浓香型白酒固态发酵过程中氨基甲酸乙酯的形成研究 [J], 李拥军;陈雯;皮小弟;邬婷;周凯4.三种香型白酒中氨基甲酸乙酯的研究及聚类分析 [J], 卓俊纳;吴卫宇;陈静;苏占元;赵金松5.多种香型白酒中氨基甲酸乙酯残留含量的研究 [J], 黄松;黄小清;张辉;刘佳;王宇;谭锦萍;彭程因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酒类中氨基甲酸乙酯检测技术
Ionize
Mass analyze
MS1
Fragment
Collision Cell
MS/MS
Mass Inlet Inlet Inlet
Detect
analyze
MS2
液相-荧光法 (LC-FLD)
➢ 黄酒中氨基甲酸乙酯预防控制技术措施指南. ➢ 中华人民共和国国家标准. GB/T 34266-2017.
氨基甲酸乙酯 EC
➢ 无味、无色晶体或白色粉末 ➢ 水溶液是中性的 0.48 g/mL ➢ 1g的EC溶于
0.8mL 乙醇；0.9 mL 氯仿；1.5 mL 乙醚； 2.5mL 甘油 ; 32mL 橄榄油
EC理化性质
项目 沸点℃ 熔点℃ 相对密度（水为1） 蒸汽压Pa（25℃） 相对蒸汽密度（空气为1） 燃烧点℃ 表观状态 溶解度
6
AOAC 994.07
GB 5009.223-2014
3 气相色谱-质谱/质谱法（ＧＣ-ＭＳ/ＭＳ）
4 液相色谱-荧光法（ＬＣ- FLD ) GB/T 34266-2017
5 液相色谱-质谱/质谱法 （ＬＣ-ＭＳ/ＭＳ） APCI ESI
其它 傅立叶变换红外光谱法 核磁共振光谱偏最小二乘法 薄层色谱法 拉曼散射法 分光光度法 酶联免疫吸附法（ELISA）
GB/T 34266-2017
➢原料（大米、麦曲等） ➢发酵过程（工艺参数） ➢陈贮阶段（贮存时间和温度）
➢ Ethyl Carbamate Preventative Action Manual
SUMMARY
检测方法
1 气相色谱法（ＧＣ） AOAC 993.04
2
气相色谱-质谱法（ＧＣ-ＭＳ）
ESI
GC-MS法测定黄酒和食用酒精中的氨基甲酸乙酯
自上海源叶生物技术有限公司（纯度大于99.0% ）；
D5-氨基甲酸乙酯标准品（C3H2D5NO2, CAS73962-07-
9）:购自甄淮生物科技有限公司（纯度＞98.0% ） %
1.2.2 标准溶液配制
准确称取10 mg（精确至0.000 01 g）氨基甲酸乙
酯对照品,用甲醇溶解并定容至10 mL,配制成质量
但对于黄酒来说该方难较好的净况且二氯甲烷的毒性较强出于以上原因本文研究了便于有实验室使用的通用相萃取柱在酒中氨基甲中的应用与苏占元等19的研究相比洗液有2mln丙基乙二胺固相吸附剂primanysecondaryamincpsa料柱净化的前处理步骤221淋洗液对ec回收率和基质效应的影响正己烷和环己烷在上虽然没有太大差异但两种物质的明显因此作为淋洗液时对酒中部分物质的去除能力不同因此考察环己烷正己烷2种淋洗液对回收率和基的影响研究发现环己烷和正己烷均ec从固相萃取柱上洗脱下来
在于黄酒、葡萄酒、啤酒等酿造酒'2〕和食用酒精中，
而食用酒精又被广泛用于配制酒、白酒等产品中，是
目前我国酒类生产中使用最为广泛的原料％因此，研
究 酒和食用酒 中 EC
，
其中 EC 的
， 构的研究
酒行业的
'8
，一是科研机
已报道的黄酒及食用酒精中氨基甲酸乙酯的测
定方法有分光光度法、高效液相
(high perform-
标工作液％
分别精密移取 20、40&80&120&240&600、1 200 !
标准工作液（1.0 mg/L）置2.0 mL容量瓶中，再分别
精密加入200 !/同位素内标工作液（1.0 mg/L）,用
甲醇定容,得 10、20、40、60& 120、300、600 ^g/L 系
四川浓香型原酒中氨基甲酸乙酯含量分析及减控策略初探
_Manager'JournalSeptember 10,2019引言氨基甲酸乙酯（Ethyl carbamate ，EC ）是一种发酵食品（如烈酒、啤酒、面包、酱油和酸奶）中普遍存在的代谢污染物[1]。
1943年，Nettleship 等人首次报道EC 具有致癌作用[2]。
进一步研究表明，高残留的EC 可诱导肺癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌的发生，而乙醇对EC 的致癌性具有明显的促进作用[3-5]。
近年来，世界各国学者先后在蒸馏酒、黄酒和葡萄酒中检测出EC 。
其中，蒸馏酒和黄酒中的EC 含量较高，葡萄酒中EC 含量较低。
基于以上发现，世界卫生组织建议制定酒类饮料中EC 的限量标准。
其中，美国、法国、英国及日本等国家规定了含酒精的饮料中EC 限量标准，而我国目前还没有相关限量标准。
四川省是中国的产酒大省，素有川酒三分天下之美誉。
四川省的白酒主要有浓香型和酱香型两种类型，而浓香型白酒生产厂家占据比例较大。
浓香型固态白酒一般采用传统的酿造方法进行酿造，通过泥窖固态发酵，续糟配料，混蒸混烧，量质摘酒，原酒贮存及勾兑等工艺即可获得浓香型固态白酒。
本文测定了160份不同厂家生产的四川浓香型原酒中EC 含量，进一步分析不同原酒中EC 含量分布，探讨了浓香型原酒生产过程EC 可能生成的机制并提出了减控氨基甲酸乙酯的主要策略。
料材与方法材料与试剂160份浓香型原酒取自四川宜宾、泸州、成都和德阳等地大中型原酒生产企业生产的原酒（贮存期约半年）。
碱性硅藻土固相萃取柱（填料4000mg,柱容量12mL ）购自天津博纳艾杰尔科技有限公司。
D5-氨基甲酸乙酯购自上海安谱实验科技股份有限公司。
其他化学试剂如氨基甲酸乙酯、无水硫酸钠、氯化钠、正己烷、乙酸乙酯、乙醚及甲醇等购自上海麦克林生化科技有限公司。
仪器与设备GC-MS （7890B ，5977A ，带电子轰击源）为美国Aglient 公司产品；电子天平为德国RADWAG 公司生产；漩涡混合器为美国ThermoFisher 公司产品；氮吹仪及固相萃取装置为天津奥特赛恩斯仪器有限公司产品。
浓香型白酒中氨基甲酸乙酯形成途径解析
浓香型白酒中氨基甲酸乙酯形成途径解析氨基甲酸乙酯(EC)是一种具有潜在致癌作用的化合物,广泛存在于传统发酵食品中。
浓香型白酒中EC的存在严重影响了我国传统发酵食品的安全性,研究和阐释浓香型白酒中EC的形成途径对降低或消除白酒中的EC具有重要的学术意义和应用前景。
本论文对白酒生产的酒醅发酵过程、原酒蒸馏过程和原酒贮藏过程三个重要环节中EC的形成原因进行了研究。
主要研究结果如下:(1)分别对储酒0-12年的浓香型白酒原酒样品中乙醇、EC及其前体物质尿素、瓜氨酸和氰化物含量进行了检测,发现原酒中氰化物含量极低(小于20μg·L-1),储酒时原酒中EC含量增加与尿素和瓜氨酸含量降低呈相关性变化。
通过建立尿素-乙醇和瓜氨酸-乙醇的模拟原酒EC生成的快速反应体系,证实了原酒中EC的主要前体物质是尿素和瓜氨酸,氰化物在储酒阶段对原酒中EC 的形成不起主要作用。
(2)通过测定蒸酒原料中的EC及其前体物的含量,确定了出窖酒醅和拌入粮食的物料中均含有EC及其前体物尿素和瓜氨酸。
用于白酒生产的未经发酵的粮食中也含有EC的前体物尿素和瓜氨酸。
通过建立含有单一粮食的模拟粮醅蒸馏体系,考察5种粮食在蒸酒过程对EC生成的作用。
结果表明,高粱和小麦是用于白酒生产的5种粮食中对EC的形成起主要作用的原料。
(3)对浓香型白酒窖内发酵不同时间的酒醅中EC及前体物质含量的分析发现,酒醅中EC前体物尿素和瓜氨酸在发酵过程中均有增加,其中瓜氨酸含量增加显著,增幅达到63.9%。
采用高通量筛选技术,从酒醅中分离获得了四类积累瓜氨酸的菌株,分别属于芽孢杆菌属、乳球菌属、足球菌属和葡萄球菌属。
通过考察四类菌株在酒醅中积累瓜氨酸的能力及验证菌株精氨酸脱亚氨酶途径(ADI途径)的关键基因,证实了细菌通过ADI途径利用精氨酸生成瓜氨酸是酒醅中瓜氨酸含量增加的主要原因,解淀粉芽孢杆菌和嗜酸乳酸足球菌对酒醅中瓜氨酸的积累具有重要促进作用。
超高效液相色谱-高分辨质谱测定白酒中氨基甲酸乙酯含量
超高效液相色谱-高分辨质谱测定白酒中氨基甲酸乙酯含量熊晓通，胡峰*，尤小龙，尹艳艳，陈明学，程平言，钟方达（贵州茅台酒厂（集团）习酒有限责任公司，贵州习水564622）摘 要：利用氨基甲酸乙酯（ehthy carbamate，EC）源内裂解的特殊性质，在超高效液相色谱-高分辨质谱一级全扫描模式下，以EC母离子（m/z 90.05）及其子离子（m/z 62.02）作为定性离子，m/z 62.02作为定量离子，开发酱香型白酒中EC的一级子离子定量法，有效解决了一级母离子定量噪音较大、二级子离子定量响应较低的问题。
结果表明，在12.2～244 μg/L内线性相关系数大于0.999，检出限为0.95 μg/L，加标回收率在83.46%～106.79%之间，相对标准偏差为0.67%～3.54%。
该方法具有分析速度快、检出限低、准确度高等优点，适用于酱香型白酒中EC的监控。
关键词：氨基甲酸乙酯；源内裂解；Q Exactive Focus质谱；一级子离子定量；酱香型白酒。
Determination and Quantitation of Ethyl Carbamate in Chinese Baijiu by Ultra-high Performance LiquidChromatography-High Resolution Mass SpectrometryXIONG Xiaotong, HU Feng*, YOU Xiaolong, YIN Yanyan, CHEN Mingxue, CHENG Pingyan, ZHONG Fangda(Guizhou Maotai Distillery (Group) Xijiu Co. Ltd., Xishui 564622, China)Abstract: A new method for the quantitation of ethyl carbamate (EC) in Maotai-flavor Baijiu was developed using ultra-high performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry with primary daughter ions. Based on the fact that it has the special property of in-source fragmentation, EC was detected under the full scan model. The primary parent ion with m/z 90.05 was used as qualitative ion and its daughter ion with m/z 62.02 as both qualitative and quantitative ions considering that a great noise and low response values were achieved respectively when using the primary parent ion and the secondary daughter ion as quantitative ions. The calibration curve showed good linearity in the range of 12.2–244 μg/L with a correlation coefficient greater than 0.999. The limit of detection (LOD) was 0.95 μg/L. The recoveries of EC from spiked samples were 83.46%–106.79%, with relative standard deviations (RSD) of 0.67%–3.54%. Overall, the method was suitable for the quantitation of EC in Maotai-flavor Baijiu with the advantages of rapidity, low detection limit and high accuracy.Keywords: ethyl carbamate; in-source fragmentation; Q Exactive Focus mass spectrometry; primary daughter ion quantitation; Maotai-flavor BaijiuDOI:10.7506/spkx1002-6630-20191030-333中图分类号：TS261.1；TS201.3 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2021）08-0283-05引文格式：熊晓通, 胡峰, 尤小龙, 等. 超高效液相色谱-高分辨质谱测定白酒中氨基甲酸乙酯含量[J]. 食品科学, 2021, 42(8): 283-287. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191030-333. XIONG Xiaotong, HU Feng, YOU Xiaolong, et al. Determination and quantitation of ethyl carbamate in Chinese Baijiu by ultra-high performance liquid chromatography-high resolution mass spectrometry[J]. Food Science, 2021, 42(8): 283-287.(in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191030-333. 收稿日期：2019-10-30基金项目：贵州省科技重大专项（黔科合重大专项字（[2015]6012））；遵义市科技计划项目（遵市科合（2018）29号；遵市科合R&D（2019）4号）第一作者简介：熊晓通（1992—）（ORCID: 0000-0001-8067-4889），男，工程师，本科，研究方向为白酒食品风险监测及评估。
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文章编号:1002-8110（2019）01-0055-03
酿酒 LIQUOR MAKING
Vol.46. № .1 Jan.， 2019
白酒中氨基甲酸乙酯含量检测与分析
苏占元 1，郑若欣 1，杨晓军 1，赵金松 1,2,3*
（1.国家酒类及加工食品质量监督检验中心，四川 泸州 646000； 2.国家固态酿造工程技术研究中心，四川 泸州 646000； 3.四川理工学院，四川 自贡 643000）
3.Sichuan University of Science & Engineering SiChuan ZiGong 643000, China)
Abstract:Ethyl Carbamate (EC) is a gene carcinogen, and GC / MS method was used to detect the content of EC in three kinds of flavor liquor
and raw wine. The results showed that the content of EC in Luzhou-flavor liquor was 19.6μg/kg~288μg/kg, and the content of EC in
low-end liquor was lower than that in middle-high-end liquor. The content of EC in Maotai liquor was less than 100μg/kg, about
近年来白酒中潜在的氨基甲酸乙酯（EC）愈加引入关注[1-3]。研 对白酒的研究中还未提出相关含量分析更未形成限量标准。
究表明对于啮齿类动物，EC 是一种多位点致癌物，可导致肺 通过对几种典型香型白酒和原酒中氨基甲酸乙酯的含量跟
癌、淋巴癌、肝癌和皮肤癌等疾病，乙醇对 EC 的致癌性有促 踪分析，期望为建立白酒中氨基甲酸乙酯（EC）是一种基因致癌物，应用 GC/MS 方法对 3 种香型白酒和原酒中的氨基甲酸乙酯含
量进行检测分析。结果表明，浓香型白酒中 EC 含量范围为 19.6μg/kg~288μg/kg，其中低端白酒比中高端白酒
含量较低；酱香型白酒中 EC 含量均值小于 100μg/kg，小曲清香白酒中的 EC 含量为 25.5μg/kg~92.3μg/kg；
1.1 试剂和材料 碱性硅藻土固相萃取柱（10mL）：Agilent Technologies；正
己烷（色谱纯）：西陇化工股份有限公司；乙酸乙酯（色谱纯）： 西陇化工股份有限公司；乙醚（色谱纯）：西陇化工股份有限
收稿日期：2018-08-27 作者简介：苏占元（1986-），男，检测员，工作单位：国家酒类及加工食品质量监督检验中心，主要负责气相色谱和气质联用的分析检测工作。 * 通信作者：赵金松（1980-），男，博士，高级工程师，E-mai:zhjs0302@。
55
第一期
酿
酒
2019
公 司 ；乙 腈（色 谱 纯）：Fisher；氨 基 甲 酸 乙 酯 标 准 物 质（ethyl carbamate，C3H7NO2：纯度大于或等于 99.0%）。 1.2 仪器和设备
气 相 色 谱 - 质 谱 仪 （7890B-5977A，Agilent Technologies）；氮吹仪（N-EVAP111，Organomation Associates,Jnc.）；分 析天平（T200，江苏常熟双杰仪器公司）。 1.3 试验条件 1.3.1 色谱条件
(1.National Liquor and Processing Food Quality Supervision and Inspection Center，Luzhou 646000；
2.National Engineering Research Center of Solid-State Brewing, Luzhou 646000；
25.5μg/kg~92.3μg/kg in Xiaoqu Fen-flavor Liquor, the original wine in the old cellar was significantly higher than the new cellar, with the
storage time increased EC content gradually reduced.
Key words:Ethyl Carbamate; GC/MS; liquor; content analysis
白酒作为中国特有的传统产业，是中华民族传统文化的 量标准的做法，并适用于所有出口葡萄酒到美国的国家。欧
重要组成部分和重要载体。它以独特的酿造工艺和独特的酒 盟目前没有食品所含氨基甲酸乙酯最高限量的协调标准，但
进作用而酒精饮料类更是人类摄入的主要来源。目前众多国 参考依据。
家和众多组织机构针对 EC 的限量标准及控制做出了较多的 1 材料和方法
研究[4,5]。 加拿大是首个就多种酒精饮品制定 EC 最高限量的国
家，由每升 30μg(葡萄酒)至每升 400μg(水果白兰地)不等。 美国就当地生产的食品采取自愿制定氨基甲酸乙酯安全含
相比原酒中老窖明显高于新窖，随着贮存时间的增加 EC 含量逐渐降低。
关键词：氨基甲酸乙酯；GC/MS；白酒；含量分析
中图分类号：TS262.3；TS207.3
文献标识码：B
Determination and Analysis of Ethyl Carbamate in Liquor
SU Zhanyuan1，ZHENG Ruoxin1，YANG Xiaojun1，ZHAO Jinsong1，2，3*
体风味特征深受消费者的青睐，并被称为世界六大蒸馏酒之 有些成员国已制订出酒精饮品的氨基甲酸乙酯最高限量。近
一，是能够在世界范围内代言中国形象气质的一个重要文化 年来，韩国也制定了葡萄酒的氨基甲酸乙酯最高限量，为每
符号，素有国家名片之称。对白酒而言，健康与安全同样重要， 升 30μg。氨基甲酸乙酯在不同发酵食品中含量差异较大，针