血清二氧化碳酶试剂法测定法-检验科生化室作业书

血清二氧化碳酶试剂法测定法

1.实验原理

使用磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)和稳定的NADH 类似物的酶检测终点法。 磷酸烯醇丙酮酸+HCO3-草酰乙酸+H2PO4-

草酰乙酸+NADH 类似物+H+苹果酸+NAD+类似物

上述反应会破坏下列平衡：

CO2+H2OH2CO3H++HCO3-

促使CO2向HCO3-的转换，由此可以检测出血清或血浆中总CO2的浓度。

在405nm 或415nm 波长处检测吸光度的下降，反映还原型的辅因子NADH 类似物的减少，和样品中的总二氧化碳浓度呈比例。

2.标本： 2.1病人准备：无特殊。

2.2类型：血清、肝素血浆。

3.标本存放：应尽快分离血清或血浆，并保存于2～8℃。不可将标本暴露于空气。分离的样品需密闭保存，防止二氧化碳的损失，并在收集后的最短时间内完成检测。

4.标本运输：常温条件下保存运输。

5.标本拒收标准：超时送检的、细菌污染的标本。

6.实验材料

6.1试剂申能CO2测定试剂盒（货号：109509910试剂6×100ml ）

PEPC ＋Mg 2+

MDH

6.1.1试剂组成

试剂（R）：

缓冲液pH7.5

磷酸烯醇丙酮酸(PEP) 12.5mmol/L

磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC) >400U/L

苹果酸脱氢酶(MDH) >4100U/L

NADH类似物0.6mmol/L

活化剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂适量

6.1.2试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。

6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5注意事项：应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCalBicarbonate标准品对自动分析仪进行校准。校准稳定期：10天。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3质控品：每批样品检测时，建议使用DiaSys公司提供的TruLabBicarbonate控制品进行内部质量控制。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪

8.操作步骤

8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件

9.检验结果的判断与分析

10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控（DR0061&62）做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11.计算方法：以TruCalBicarbonate标准品碳酸氢盐浓度校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。12.参考值范围[1]：成年人：22～29mmol/L

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13.临床意义[1,2]：二氧化碳检测用于血液酸-碱平衡的诊断。检测值的升高和降低表明代谢和呼吸系统酸-碱平衡失调。

14.操作性能

14.1线性范围：4～50mmol/L。

14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

14.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对92个样品进行CO2检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.96x+0.56mmol/L；r=0.984。

14.4灵敏度：本试剂的检测限为1mmol/L。

14.5病人结果可报告范围：4～50mmol/L

15.超出范围结果处理：本法对二氧化碳的检测范围为4～50mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释后，重新测定，结果乘以2。

16.病危报警值的处理

17.方法局限性

17.1本法对二氧化碳的检测范围为4～50mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释后，重新测定，结果乘以2。

17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，结合胆红素浓度≤860μmol/L，游离胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油三酯浓度≤15.8mmol/L时没有观察到干扰。

18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19参考文献

Muller-PlatheO.Acidbasebalanceandbloodgases.In:ThomasL,editor.Clin icallaboratorydiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;19

98.p.318-329.

NorrisKA,AtkinsonAR,SmithWG.Colorimetricenzymaticdeterminationof serumtotalcarbondioxideanalyser.ClinChem1975;21:1093-1101.

patent#5,801,006.

20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。